环孢菌素t及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化合物制备及用途领域，具体涉及环孢菌素 T及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 我国草地农业发展缓慢，最直接的影响就是造成畜牧业发展也减速，因而致使每 年我国从国外进口的牧草以及购买婴儿奶制品的数量逐年上升。宄其原因主要是因为我国 缺少具有抗性的优异牧草品种，尤其是具有抗植物病原真菌的牧草。每年我国牧草由于植 物病原真菌的危害，造成大面积减产和生长缓慢，并且还影响奶制品的安全。虽然现阶段化 学合成的杀灭植物病原真菌药物在植物病害防治中起着不可代替的作用。但是，大家对农 药毒性和农药对环境的污染问题越来越重视，一些毒性高，残留长的杀菌剂品种，如有机氯 汞制剂(艾氏剂、六六六）等相继禁用。从微生物中寻找新的无毒、无污染、可持续利用的生 物源杀菌剂已成为当现代农药研宄开发的一个热点。
[0003] 微生物源杀菌剂是指利用微生物及其代谢产物来防治植物病原真菌。目前，该类 型杀菌剂已成为农药发展的主要趋势。我们知道禾草的很多草已成为具有抗菌活性的优异 牧草，如野大麦，中华羊茅等，然而其抗性特点来源于自身的内生真菌你为其宿主 提供的此利益。如果能从你中找到具有抑制植物病原真菌的代谢物，并且这些代谢 物对牲畜无毒，那么将这些内生真菌接种于普通的牧草中，使其成为具有抗性的优良牧草， 将解决我国缺乏具有抗植物病原真菌的优良牧草问题。同时这类微生物源杀菌剂不会对生 态环境产生污染，还具有可持续性，这将是抗菌药物研制与生产单位重要的工作方向。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了环孢菌素 T及其制备方法 和应用。
[0005] 为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：环孢菌素 T，结构式如式（I )所 示：
【主权项】
1. 环孢菌素T，其特征在于，结构式如式（I )所示：
2. 根据权利要求1所述的环孢菌素T，其特征在于，所述环孢菌素T是由青海的麦宾草 iaflgwiora?)中分离得到的foiico/a内生真菌的代谢产物。
3. 根据权利要求1所述的环孢菌素 T的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 先将内生真菌接种于马铃薯葡萄糖液体培养基，置于恒温箱摇 床上培养，培养温度为27°C，培养时间为7天，得到内生真菌悬浮液， 接种量为从马铃薯葡萄糖琼脂培养基挑取〇. 5 cm2的琼脂块； 2) 将步骤1)得到的摇床培养后内生真菌悬浮液，接种于100个 1000 mL的锥形瓶中，每瓶内含有100 g大米培养基，于27°C的恒温箱内培养30天；接种量 为每个锥形瓶接3. 0 mL悬浮液，悬浮液孢子浓度为I X IO6个孢子/mL ;每瓶大米培养基含 水量为160mL蒸馏水； 3) 以乙酸乙醋萃取步骤2)得到的培养内生真菌的大米培养基， 得到粗浸膏； 4) 将步骤3)得到的粗浸膏以氯仿-甲醇作溶剂过硅胶柱子，柱子规格为外径6cm，内 径5. 3cm，长45. 7cm，再以葡聚糖凝胶色谱分离得到环孢菌素T。
4. 根据权利要求3所述的环孢菌素T的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中，马铃薯 葡萄糖液体培养基的制备方法为：每200g 土豆，加入1000ml蒸馏水，煮开后再煮沸30min， 将煮液用纱布过滤于烧杯中，在滤汁中补足水分至l〇〇〇ml，重新倒入锅中，加入20g蔗糖即 可。
5. 根据权利要求1所述的环孢菌素 T在牧草抗性检测中的应用。
6. 根据权利要求1所述的环孢菌素T在抑制植物病原真菌中的应用。
7. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述植物病原真菌为细交链孢、小麦离蠕 孢病菌、燕麦镰孢病菌和新月弯孢霉。
【专利摘要】本发明公开了环孢菌素T，结构式如式（Ⅰ）所示，并提供了其制备方法和应用。本发明提供的环孢菌素T及其制备方法和应用，其有益效果为：（1）环孢菌素T对牲畜无毒，其来源Epichlo? bromicola是一种有益的内生真菌；（2）环孢菌素T具有广谱杀菌活性，用量低，防病效果优于阳性药物；（3）环孢菌素T是天然产物，可以通过对Epichlo? bromicola内生真菌大量发酵得到，具有可持续性；（4）Epichlo? bromicola内生真菌可接种于其它劣势牧草上，其具有培育抗植物病原真菌的优势牧草的潜质。
【IPC分类】A01P3-00, G01N33-68, C07K1-16, C07K7-64
【公开号】CN104877013
【申请号】CN201510298350
【发明人】宋秋艳, 高坤, 南志标, 田沛, 宋辉
【申请人】兰州大学
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年6月3日