专利名称：一种辅助降血糖多肽药物的生产工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种以普兰林肽为主药的辅助降血糖多肽药物的生产工艺，尤其涉及普兰林肽的一种固相片段合成法及其冻干粉针剂制剂工艺。
背景技术：
普兰林肽O^amlintide)是胰淀粉样多肽的一种合成类似物，也是至今为止继胰岛素之后第二个获准用于治疗I型糖尿病的药物。临床研究发现，当普兰林肽与胰岛素合用时，可能导致患者体重适度减轻。胰淀粉样多肽是一种由37个氨基酸残基构成的多肽激素，在餐后由胰腺β细胞释放，具有多种生理功能，如减慢食物(包括葡萄糖)在小肠的吸收速度，通过抑制高血糖素减少肝糖的产生，减少患者食欲，协助机体调节血糖水平等等。不过，天然胰淀粉样多肽在溶液中并不稳定，易水解，具有粘稠性大、易凝集的特点，因而不适合用于治疗。普兰林肽是经筛选、合成出的一种稳定的胰淀粉样多肽类似物。普兰林肽与胰淀粉样多肽的氨基酸序列差异表现在前者第25位(丙氨酸)、观位(丝氨酸)和四位(丝氨酸)由脯氨酸所替代。研究证实，普兰林肽可以延缓葡萄糖的吸收，抑制胰高血糖素的分泌，减少肝糖生成和释放，因而具有降低糖尿病患者体内血糖波动频率和波动幅度，改普总体血糖控制的作用。普兰林肽的结构如下
权利要求
1. 一种固相片段合成普兰林肽的方法，其片段划分方法为 其片段I-Rink Amide MBHA树脂为2937Fmoc-Pro-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-RinkAmide MBHA 其片段II-CTC树脂为1728Fmoc-Val-His (Trt) -Ser (tBu) -Ser (tBu) -Asn (Trt) -Asn (Trt) -Phe-Gly-Pro-Ile-Leu -Pro-Chlorotrityl Chloride 其片段III-CTC树脂为
2.一种固相片段合成普兰林肽的方法，其技术方案包括以下步骤1)以氨基树脂为载体，合成片段I-氨基树脂为AA29-AA37-RinkAmide MBHA树脂；2)以羟基树脂为载体，合成片段II-羟基树脂为AA17-AA28-CTC树脂；3)以羟基树脂为载体，合成片段III-羟基树脂为AA1-AA16-CTC树脂，并进行固相环化；4)制备片段II-片段I-RinkAmideMBHA树脂；5)制备片段III-片段II-片段I-RinkAmide MBHA树脂；6)切割，得到普兰林肽粗肽；7)精制，得到普兰林肽纯品。
3.权利要求2所述的方法，其RinkAmide MBHA树脂的替代度为0. 2 0. 4mmol/ g ；其 2-Chlorotrityl Chloride 树脂(CTC 树脂)的替代度为 0. 8 1. 2mmol/g ；其保护氨基酸分另O 是 Fmoc-Tyr (tBu)，Fmoc-Thr (tBu)，Fmoc-Asn (Trt)，Fmoc-Ser (tBu)， Fmoc-Gly, Fmoc-Val,Fmoc-Pro,Fmoc-Leu,Fmoc-Ile,Fmoc-Phe,Fmoc-Hi s(Trt),Fmoc-Ala, Fmoc-Arg (Pbf)，Fmoc-Gln (Trt)，Fmoc-Cys (Acm)，Fmoc-Lys (Boc)；其缩合试剂为 TBTU/ HOBt/DIEA ；其保护氨基酸以及缩合试剂的投料量是2 5倍当量。
4.权利要求2所述的方法，其合成2，7两个半胱氨酸的二硫桥键的环化试剂是12，溶剂为DMF。
5.权利要求1或要求2所述的方法，其片段II-片段I-RinkAmideMBHA树脂为1728Fmoc-Val-His (Trt) -Ser (tBu) -Ser (tBu) -Asn (Trt) -Asn (Trt) -Phe-Gly-Pro-Ile-Leu -Pro-
6.权利要求5所述的方法，其CTC树脂的裂解试剂是1%TFA/DCM;其RinkAmide MBHA 树脂的裂解试剂是按TFA EDT Water = 95 2. 5 2. 5的体积比配制而成。
7.—种普兰林肽冻干粉针剂，其特征在于所述制剂由主药普兰林肽、赋形剂、抑菌剂与 PH调节剂组成；其主药普兰林肽的浓度优选0. l-20mg/ml。
8.权利要求7所述制剂，其赋形剂选自甘露醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖、氯化钠、山梨醇等； 优选1-10% w/v甘露醇和1-10% w/v乳糖。
9.权利要求7所述制剂，其防腐剂选自间甲酚、三氯叔丁醇、苯甲酸、山梨酸、乙醇、甘油、苯甲醇、丙酸钙、脱氢乙酸钠、丙酸钙、双乙酸钠、乳酸钠等；优选0. l-50mg/ml间甲酚和 0. 03-2% w/v三氯叔丁醇
10.权利要求7所述制剂，其pH值调节剂选自醋酸、醋酸钠、盐酸、硫酸、乳酸、苹果酸、 枸橼酸、磷酸、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠等，调节PH为2. 0至6. 0之间；优选用醋酸和醋酸钠调PH为3. 0-5. 0。
全文摘要
本发明涉及以普兰林肽为主药的一种辅助降血糖多肽药物的生产工艺，本发明提供了一种新的合成片段划分方法，包括片段I-氨基树脂为AA29-AA37-RinkAmide MBHA，片段II-CTC树脂为AA17-AA28-Chlorotrityl Chloride，片段III-CTC树脂为AA1-AA16-ChlorotritylChloride。该方法具有反应操作简单、后处理容易、收率高、成本低等特点。本发明同时公开了一种普兰林肽冻干粉针剂，其主要原料组成为主药普兰林肽，赋形剂，pH值调节剂和抑菌剂。该粉针剂具有分散度高，稳定性好等优点。
文档编号C07K14/00GK102180943SQ20101059456
公开日2011年9月14日 申请日期2010年12月16日 优先权日2010年12月16日
发明者姚志勇, 支钦, 李新宇 申请人:深圳市健元医药科技有限公司