管；（ii)初代或低传代脑微血管内皮细胞培养物；（iii)牛脑内皮细胞培养物 (BBEC);及（iv)永生脑内皮细胞，例如RBE4细胞系、RBEC1细胞系及TR-BBB13细胞系。
[0203] 业内已知可用作BBB模型的使用非大脑源细胞的活体外BBB模型包含 MDCK(Madin-Darby 犬肾）细胞及 CaCo-2 细胞。
[0204] 活体内BBB模型包含：（i)颈动脉注射技术，其中将测试化合物与经放射性标记的 参考化合物一起注射至动物的总颈动脉中且在注射后数秒分析脑；（ii)原位输注技术，其 涉及在对脑进行颈动脉输注后对脑内药物含量进行取样的较长实验时段；（iii)静脉内注 射技术，其中对股静脉或尾静脉插入导管且将测试化合物与血浆容量标记一起注射并在不 同时间点收集动脉血；及（iv)大脑内微透析，其涉及通过将灌注有生理溶液的透析纤维植 入脑中来对脑间隙液直接取样，进入脑间隙液的化合物藉此将渗透至生理溶液中且可藉助 适当技术（HPLC、毛细管电泳）进行分析。
[0205] 因此，本领域技术人员的直接任务是确定所给出化合物是否能够以治疗上有用或 生理上显著的量穿过血脑屏障。
[0206] 可用于确认多肽或偶联物能够穿过BBB的适宜活体外BBB运输分析的实例是牛脑 内皮细胞培养物（BBEC)。在BBEC模型中，自牛脑灰质分离细胞且然后通常在先前包覆有大 鼠尾胶原的表面上生长。为改良该模型，可将BBEC与初代星状细胞（通常来自新生大鼠） 或C6大鼠神经胶质瘤细胞共培养。图22绘示星状细胞与牛脑微血管内皮细胞的共培养。 这些共培养分析提供与活体内BBB明显相似之处。Cecchelli等人（参考文献6)阐述涉及 牛脑微血管内皮细胞与大鼠初代星状细胞的共培养的较佳BBEC分析。已显示，此分析提供 合法活体外BBB模型，其具有较强的活体内与活体外关联。在此模型（具体而言如参考文 献6的第168-172页所阐述）中且如图22中所绘示，在膜上培养牛脑内皮细胞并在培养皿 底部培养大鼠初代星状细胞。
[0207] 如图22中所显示，两个细胞群共享培养基，从而允许体液互换而无需直接细胞接 触。图22阐释在包覆有胶原的插入物（Millicell CM，0. 4-mm孔径，Millipore)上培养 的铺满牛脑内皮细胞的结构。牛脑微血管内皮细胞形成紧密堆积、非重叠且抑制接触的小 细胞单层。在这些培养条件下，牛脑微血管内皮细胞同时保留内皮（因子VIII相关抗原、 血管收缩素转化酶）及BBB特征。用于实施此BBB运输分析的试剂盒（"CT BovialOBBB Pack"）可自 Cellial (Lens, France ;www. cellial.com)购得。
[0208] 运输的渗透性及一般机制可通过业内已知的方法来阐明。例如，在参考文献6中， 将Ringer-HEPES(150mM NaCl、5.2mM KCl、2.2mM CaCl、0.2mM MgCl、6mM NaHC0、2.8mM葡萄 糖、5mM HEPES)添加至6孔板的下隔室中（2. 5ml/孔）。然后将一过滤器转移至6孔板的 含有Ringer的第一孔中，且将含有经标记或未经标记药物的Ringer置于上隔室中。在添 加药物后的不同时间，将过滤器转移至6孔板的另一孔中以最小化下隔室至上隔室的可能 通道。在37°C下在摇床上实施培育。振荡会最小化细胞单层表面上水性边界层的厚度且影 响亲脂性溶质的渗透性。自每一下隔室及储备溶液取一等份试样且通过HPLC (针对未经标 记药物）或在液体闪烁计数器中（针对经标记药物）测量每一样品中药物的量。渗透率计 算可如 Sif linger-Birnboim 等人，J Cell. Physiol. 132 ;111_117(参考文献 45)所阐述来 实施。
[0209] 可使用上文所阐述的分析或业内已知的另一适宜分析来确认本发明的多肽及偶 联物能够穿过血脑屏障。
[0210] 用于结合至LDLR的分析
[0211] 本发明的多肽及偶联物经设计以藉助其LA结构域结合至LDLR。不论多肽是否结 合至LDLR，皆可使用本领域技术人员所熟知的标准技术来测试LA结构域，例如免疫分析 (例如ELISA分析）、放射性配体结合分析、表面等离振子共振分析（例如Biacore?方法） 或具有及不具有测试多肽下的结构分析（例如X射线）。通常，本发明多肽结合至LDLR的 LA结构域，且解离常数（K d)为至少1微摩尔，例如至少l(T6M，Kd优选为1纳摩尔，例如至少 l(T 9M〇
[0212] 可在竞争分析中使用抗LDLR抗体来测试多肽或偶联物是否通过结合LDLR穿过 BBB。抗LDLR抗体与结合LDLR的多肽及偶联物竞争LDLR结合，且因此减少结合LDLR并通 过BBB的多肽或偶联物的量。因此，LDLR介导的BBB穿过可如上文所阐述通过在抗LDLR抗 体（其阻断与受体的结合）存在或不存在下实施BBB运输分析并比较BBB至肽及偶联物的 渗透率来确定。在抗LDLR抗体存在下穿过BBB的通道减少指示多肽或偶联物通过LDLR介 导穿过BBB。
[0213] 据阐述神经胶质瘤细胞在其表面上过表达LRP1 (LDLR)受体且此已通过使神经胶 质瘤细胞（U87MG)接触经Alexa 488标记的abeam LRP1抗体（1:500稀释）来确认。使用 DAPI实施配置并进行拍照。此可藉助共焦显微镜及牛内皮细胞（BBB试剂盒）来重复。因 此，神经胶质瘤细胞表达LRP1及包括例如神经胶质瘤细胞的活体外BBB模型。可在竞争分 析（如上文所阐述）中使用与神经胶质瘤细胞共培养的BBEC来确认多肽或偶联物是否通 过结合LDLR穿过BBB。
[0214] 本发明的多肽
[0215] 多肽包括通过肽键连接的两个或更多个氨基酸残基。术语"多肽"可与术语"肽" 及"蛋白质"互换使用。
[0216] 本发明多肽可呈多种形式，例如天然、融合、糖基化、非糖基化、脂化、非脂化、磷酸 化、非磷酸化、肉豆蔻酰化、非肉豆蔻酰化、单体、多聚体、微粒或变性。
[0217] 本发明多肽可通过多种方式来制备，包含重组表达、自细胞培养物纯化及化学合 成。重组表达的多肽是优选的，杂合及融合多肽是最优选的。
[0218] 本发明多肽可以下列形式提供：纯化或实质上纯化形式，即实质上不含其他多肽， 例如不含天然多肽，尤其不含其他宿主细胞多肽，且通常至少约50 %纯（以重量计）、且通 常至少约90%纯、即小于约50%、且优选小于约10% (例如5% )的组合物是由其他表达 的多肽构成。因此，组合物中的多肽是自表达该分子的整个有机体分离。
[0219] 本发明多肽通常是经分离或纯化。
[0220] 术语"多肽"是指任何长度的氨基酸聚合物。该聚合物可为直链或具有支链，其可 包括经修饰氨基酸，且其可杂有非氨基酸。该术语亦涵盖已经天然或通过干预修饰的氨基 酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或诸如与标记组份偶联等任何 其他操作或修饰。亦包含例如含有氨基酸（包含例如非天然氨基酸）之一或多种类似物的 多肽以及业内已知的其他修饰。多肽可作为单一链或缔合链出现。
[0221] 本发明多肽的变体优选包含多肽序列的个别取代、缺失或添加以使氨基酸经化学 相似的氨基酸取代。阐述功能相似的氨基酸的表已为业内所熟知。
[0222] 偶联物
[0223] 在一方面中，本发明提供连接至试剂的本发明多肽（即"调节子多肽"、"RAP多 肽"、"挠性多肽"或"刚性多肽";例如包括SEQ ID No. 2至16中的任一个）。连接至试剂的 此多肽称为偶联物，此为业内通用术语。本发明的偶联物能够穿过BBB。通常，该试剂是运 输穿过BBB的试剂，例如用于诊断或疗法中的试剂。
[0224] 该试剂通常为治疗剂或诊断剂。
[0225] 该试剂可为药物、多肽、酶、抗生素、抗癌剂、放射性试剂、抗体、细胞毒素、可检测 标记或抗血管生成化合物。
[0226] 在一些实施方案中，试剂为异源多肽，例如本发明提供含有本发明多肽及不同多 肽的融合蛋白。本领域技术人员将理解，在本发明多肽为较长多肽的片段时，"异源蛋白"并 非该较长多肽的交互序列。
[0227] 在一些实施方案中，试剂包括用作治疗和/或诊断剂的载体的纳米颗粒或是该纳 米颗粒的一部分。本发明多肽通常连接至纳米颗粒的表面。优选地，纳米颗粒为生物可 降解的。治疗剂或诊断剂通常溶解于、包埋于、囊封于或附接至纳米颗粒基质。生物可降 解的纳米颗粒、尤其那些经诸如聚（乙二醇）（PEG)等亲水性聚合物包覆者因其循环时段 延长且可祀向递送的具体位点而可用作药物递送装置（Mohanraj及Chen Trop. J. Pharm. Res. 5,561-573(2006))。使用纳米颗粒作为释放载体具有诸多优点。纳米颗粒的粒径及表 面特征可易于操作以达成治疗剂或诊断剂在全身通过后的被动及主动靶向二者。具体而 言，其在运输期间及在定位位点处控制并持续治疗剂的释放，从而改变治疗剂的器官分布 及治疗剂的随后清除以增加治疗功效并通过最小化与其他器官的相互作用来减少副作用。 受控释放及粒子降解特征可通过选择基质成份容易地调节。治疗剂或诊断剂的负载相对较 高且可将治疗剂或诊断剂纳入系统中而不发生任何化学反应；此是保持治疗剂或诊断剂活 性的重要因素。
[0228] 在一实施方案中，纳米颗粒是如共同待决申请案PCT/IB2012/052320中所阐述的 纳米颗粒，其中该纳米颗粒包括嵌段共聚物和任选地一或多种治疗剂或诊断剂，其中：
[0229] ⑴嵌段共聚物包括嵌段A及D;
[0230] (ii)嵌段A是由包括单体单元B及C的第一聚合物组成，其中B是总碳原子数 < 30的脂肪二羧酸，且C是二羟基或二氨基单体；且
[0231] (iii)嵌段D是由包括烃链的第二聚合物组成，该烃链含有酯或醚键且羟基数 彡10〇
[0232] 治疗剂或诊断剂可存在于纳米颗粒内或纳米颗粒表面上。治疗剂或诊断剂与纳米 颗粒之间的相互作用通常为非共价相互作用，例如氢键合、静电相互作用或物理囊封。然 而，在替代性实施方案中，治疗剂或诊断剂与纳米颗粒是通过共价键或连接体连接。
[0233] 在一些实施方案中，本发明提供本发明多肽偶联至一或多种试剂的多聚体。
[0234] 这些偶联物通常能够以治疗或诊断上有用的有效量或以生理上显著的量穿过 BBB。所需治疗剂或诊断剂的量将根据试剂、欲诊断或治疗的个体及病况而定，且可容易地 由本领域技术人员来确定。
[0235] 通常，本发明的偶联物保留本发明多肽穿过BBB的能力，S卩，与偶联试剂前的本发 明多肽相比，该偶联物具有至少 70 %、75 %、80 %、85 %、90 %、95 %、100 %、105 %、110 %、 115%、120%、125%、130%穿过888的能力。穿过888的能力可使用包含上文所列示的分 析在内的任何适宜BBB运输分析来评价。
[0236] 试剂为治疗剂的偶联物
[0237] 在一实施方案中，本发明多肽所连接的试剂为治疗剂。该治疗剂通常为药物。
[0238] 在某些实施方案中，治疗剂可是分子量通常小于1000道尔顿（dalton)的小分子 药物。在其他实施方案中，治疗剂可是诸如抗体或抗体片段、白介素、干扰素或其他蛋白质 的"生物制品"。
[0239] 在一实施方案中，本发明提供含有本发明多肽及异源（治疗）多肽的融合蛋白。
[0240] 典型治疗剂包含（i)化学治疗剂，其可作为微管蛋白抑制剂、有丝分裂抑制剂、拓 扑异构酶抑制剂或DNA嵌入剂发挥作用；（ii)蛋白毒素，其可以酶促方式发挥作用；（iii) 放射性同位素；（iv)抗生素；(v)镇痛药；(vi)抗精神病药物；及（vii)抗抑郁剂。在CNS 内、优选在脑中有活性的治疗剂较佳。这些治疗剂包含（i)精神作用药物，包含抗抑郁剂、 抗精神病药物、刺激剂、抗焦虑药及抑郁剂；及（ii)治疗脑肿瘤（例如脑瘤）的抗肿瘤药 物。
[0241] 试剂为诊断剂的偶联物
[0242] 在一实施方案中，本发明多肽所连接的试剂为诊断剂。诊断剂是可用于确定疾病、 病症、病况或病理的存在或程度的试剂；优选地，神经疾病是经诊断。典型诊断剂为x射线 造影制剂、放射性同位素、标记及染料。
[0243] 诊断剂通常包括以下各项或由其组成：染料、化学发光染料、放射性成像剂、金属 螯合络合物、标记（例如荧光标记、酶-底物标记）、抗体或其抗体片段。
[0244]如本文所使用的术语"标记"是指可附接至本发明多肽且起以下作用的试剂：（i) 提供可检测信号；（ii)与第二标记相互作用以更改由第一或第二标记提供的可检测信号， 例如FRET (荧光共振能量转移）；（iii)稳定与抗原或配体的相互作用或增加与其结合的亲 和力；（iv)藉助电荷、疏水性、形状或其他物理参数影响迀移率（例如电泳迀移率）或细胞 渗透率，或（V)提供捕获部分，以调节配体亲和力、抗体/抗原结合或离子错合。
[0245] 在一些实施方案中，诊断剂是异源多肽，例如本发明提供含有本发明多肽及异源 (诊断）多肽的融合蛋白。该异源多肽可经标记。异源多肽可为能够选择性结合至靶标的 抗体、抗体片段、受体或其他多肽，例如疾病病理学特征改变的蛋白质。例如，可使用选择性 结合至类淀粉斑的经标记抗体或片段来诊断阿尔茨海默病，同时可使用选择性结合至肿瘤 标记的经标记抗体或片段来诊断肿瘤的存在。
[0246] 本发明多肽至试剂的连接
[0247] 本发明多肽可通过业内已知的任何适宜方式连接（即偶联）至试剂。通常，连接 将通过化学偶联或（试剂为多肽时）通过表达包括本发明多肽及试剂的融合蛋白来实施。
[0248] 在一些实施方案中，本发明多肽经由"连接体"偶联至试剂。连接体具有至少两个 反应位点。连接体的一个反应位点结合至多肽的残基，且另一反应位点结合至试剂。连接 体是可用于将一或多种试剂连接至本发明多肽以形成偶联物的双官能基或多官能基部分。 偶联物可使用具有用于结合至试剂及本发明多肽的反应官能基的连接体方便地制备。在一 些例如偶联物包括本发明多肽及异源蛋白（即试剂）的实施方案中，连接体可是定位于本 发明多肽的C端及试剂N端的另一多肽序列，或反之亦然。在这些情形下，偶联物可通过表 达本发明多肽、异源蛋白（即试剂）及呈杂合或融合蛋白形式的多肽连接体方便地制备。
[0249] 在其他实施方案中，本发明多肽直接偶联至试剂（即本发明多肽并不经由连接体 偶联至试剂）。
[0250] 在一些实施方案中，试剂是异源多肽。在这些情形下，本发明多肽通常经由肽键偶 联至试剂。肽键可根据（例如）多肽化学领域中所熟知的液相合成方法（参见E. Schroder 及 K.Luibke，"The polypeptides"，第 1 卷，第 76-136 页，1965, Academic Press)来制备。
[0251] 本发明多肽与异源多肽之间的肽键（和任选地多肽连接体）可通过表达呈杂合或 融合多肽形式的偶联物来形成。
[0252] 包括本发明多肽及为异源多肽的试剂的偶联物可由式NH2-F_A- {-X-L-} n_B-G-C00H表不，其中：X是本发明多肽的氨基酸序列；L是可选连接体的氨基酸序列；A是 可选氨基酸序列；B是可选氨基酸序列；F是编码试剂的可选氨基酸序列；G是编码试剂的 可选氨基酸序列；n是1或更大的整数（例如2、3、4、5、6等）。通常，n为1、2或3。包括为 异源多肽的试剂的本发明偶联物包括F和/或G。F及G可为相同试剂或不同试剂。
[0253] 对于{-X-L-}的每一n实例，连接体氨基酸序列-L-可存在或不存在。例如，当n = 2时，杂合体可为……Xi-Li-Xp、…等。连接体氨基酸序列-L-通 常将较短（例如 20 个或更少氨基酸，即 20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、 4、3、2、1个）。实例包括有利于克隆的短多肽序列、多甘氨酸连接体（即包括Gly n，其中n = 2、3、4、5、6、7、8、9、10 或更大）及组氨酸标签（即 Hisn，其中 n = 3、4、5、6、7、8、9、10 或更 大）。那些本领域技术人员将明了其他适宜连接体氨基酸序列。可用连接体是GSGGGG(SEQ ID N0:17)或GSGSGGGG(SEQ ID勵：18)，其中617-561'二肽是自8&111111限制性位点形成，从 而有助于克隆及操作，且（Gly) 4四肽是典型多甘氨酸连接体。尤其用作最终1^的其他适宜 连接体是Leu-Glu二肽或SEQ ID N0:19。在一些实施方案中，例如当X仅通过肽键直接附 接至另一 X和/或B时，L不存在。
[0254] -A-是可选N端氨基酸序列。此通常将较短（例如40个或更少氨基酸，即40、39、 38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、 13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1个）。实例包含引导蛋白质输送的前导序列或有利于克 隆或纯化的短多肽序列（例如组氨酸标签，即His n，其中n = 3、4、5、6、7、8、9、10或更大）。 那些本领域技术人员将明了其他适宜N端氨基酸序列。若&缺少其自身N端甲硫氨酸， 则-A-优选为提供N端甲硫氨酸（例如Met-Ala-Ser)或单一 Met残基的寡肽（例如具有 1、2、3、4、5、6、7 或 8 个氨基酸）。
[0255] -B-是可选C端氨基酸序列。此氨基酸序列通常将较短（例如40个或更少氨基 酸，即 39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、 15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1个）。实例包含引导蛋白质输送的序列、有利于克 隆或纯化的短多肽序列（例如包括组氨酸标签，即His n，其中n = 3、4、5、6、7、8、9、10或更 大）或增强蛋白质稳定性的序列。那些本领域技术人员将明了其他适宜C端氨基酸序列。
[0256] 在一些实施方案中，试剂在穿过BBB后自本发明多肽释放。此可经由脑中的酶活 性或因应脑中的生理化学的差异来达成。
[0257] 本发明多肽的产生
[0258] 在一实施方案中，本发明提供用于产生本发明多肽及偶联物的方法，该方法包括 以下步骤：在诱导多肽表达的条件下培养经编码本发明多肽或偶联物的核酸转化的宿主细 胞。
[0259] 本发明可使用异源宿主来表达。异源宿主可为原核（例如细菌）或真核。其可为大 肠杆菌（E. coli)，但其他适宜宿主包含桥石短芽孢杆菌（Brevibacillus choshinensis)、 枯草杆菌（Bacillus subtilis)、霍乱弧菌（Vibrio cholerae)、伤寒沙氏杆菌（Salmonella typhi)、鼠伤寒沙氏杆菌（Salmonella typhimurium)、乳糖奈瑟球菌（Neisseria lactamica)、灰色奈瑟球菌（Neisseria cinerea)、分枝杆菌（Mycobacteria)(例如结核分 枝杆菌（M. tuberculosis))、酵母菌等。改变密码子通常有助于优化这些宿主中的表达效率 而不影响所编码的氨基酸。
[0260] 术语"重组宿主细胞"（或简称为"宿主细胞"）是指已引入重组表达载体的细胞。 应理解，这些术语不仅欲指具体个体细胞而且亦指该细胞的子代。术语"可操作地连接"是 指两个或更多个多核苷酸（例如，DNA)区段之间的功能性关系。通常，其是指转录调控序 列与转录序列的功能性关系。例如，若启动子或增强子序列刺激或调节编码序列在适当宿 主细胞或其他表达系统中的转录，则其可操作地连接至编码序列。通常，可操作地连接至所 转录序列的启动子转录调控序列与所转录序列在物理上邻接，即其为顺式作用。然而，诸如 增强子等一些转录调控序列无需与其所增强转录的编码序列在物理上邻接或定位接近。
[0261] 本发明亦提供用于产生本发明多肽或偶联物的方法，该方法包括以化学方式合成 多肽或偶联物的步骤。本发明的多肽及偶联物可采用那些本领域技术人员已知的有机化学 反应、条件及试剂通过若干途径来制备，包含：（1)使经修饰多肽的半胱氨酸基团与连接体 反应，以经由共价键形成多肽-连接体中间体，然后与活化试剂反应；及（2)使试剂的亲核 基团与连接体反应，以经由共价键形成试剂-连接体中间体，然后与经修饰多肽的半胱氨 酸基团反应。可藉助多种经修饰多肽、试剂及连接体采用偶联方法（1)及（2)来制备本发 明的偶联物。
[0262] 含有多肽及偶联物的药物组合物
[0263] 在另一方面中，本发明提供含有一或多种本发明的多肽和/或偶联物与药学上可 接受的载体、稀释剂或赋形剂一起调配的组合物，例如药物组合物。本发明的药物组合物可 任选地在组合疗法中施用，即与其他试剂组合施用。例如，组合疗法可包含本发明偶联物与 至少一种其他药物的组合。
[0264] 如本文所使用，"药学上可接受的载体"包含任何及所有溶剂、分散介质、包覆剂、 抗细菌及抗真菌剂、等渗剂及吸收延迟剂及生理上相容的类似试剂。优选地，载体适于静脉 内、肌内、皮下、肠胃外、脊柱或表皮施用（例如，通过注射或输注）。
[0265] 药物组合物优选无菌且在制造及储存条件下稳定。
[0266] 组合物可调配成溶液、微乳液、脂质体或其他适于高药物浓度的有序结构。载体可 为溶剂或分散介质，其含有（例如）水、乙醇、多元醇（例如，甘油、丙二醇及液体聚乙二醇 及诸如此类）及其适宜混合物。可（例如）通过使用包衣（例如卵磷脂）、在分散液情形下 通过维持所需粒径及通过使用表面活性剂来维持适当流动性。在许多情形下，优选将等渗 剂（例如糖、多元醇（例如甘露醇、山梨醇）或氯化钠）纳入组合物中。通过向组合物中纳 入延迟吸收试剂（例如，单硬脂酸盐及明胶）可使可注射组合物的吸收延长。
[0267] 根据施用途径，多肽或偶联物可包覆于材料中以尤其在施用后保护其免受活化。
[0268] 本发明的药物组合物可包含一或多种医药上可接受的盐。"医药上可接受的盐" 是指保留母体化合物的期望生物活性且不赋予任何不期望毒理学效应的盐（例如，参见 Berge，S.M.等人（1977)J.Pharm.Sci.66:1-19)。这些盐的实例为业内所知。
[0269] 为控制渗透性，可包含生理盐，例如钠盐。氯化钠（NaCl)是优选的，其可以介于 lmg/ml与20mg/ml之间、例如约10±2mg/ml的NaCl存在。其他可存在的盐包含氯化钾、磷 酸二氢钾、脱水磷酸二钠、氯化镁、氯化钙等。
[0270] 组合物通常将具有介于200m0sm/kg与400m0sm/kg之间、优选介于240-360m0sm/ kg之间的渗透压，且优选将介于290-310m0sm/kg范围内。
[0271] 组合物可包含一或多种缓冲液。典型缓冲液包含：磷酸盐缓冲液；Tris缓冲液；硼 酸盐缓冲液；琥珀酸盐缓冲液；组氨酸缓冲液（尤其含有氢氧化铝辅剂）；或柠檬酸盐缓冲 液。缓冲液通常将包含于5-20mM范围内。
[0272] 组合物的pH通常将介于5与8.1之间，且更通常介于6与8之间，例如介于6.5 与7. 5之间或7.0与7. 8之间。
[0273] 组合物通常不含麸质