C、5% CO2饱和湿度的细胞培养箱中培养。当细胞生长融合至80%时，倒出旧的培养基， 用PBS液轻洗细胞2~3次，再加入1ml左右0. 125 %胰酶，至37°C、5 % CO2培养箱孵育 2min，镜下见细胞皱缩变圆、细胞间隙增大时，吸弃胰酶，加入含10%胎牛血清的完全培养 液以终止胰酶的作用，用吸管反复轻轻吹打细胞，使之从瓶壁脱落成细胞悬液。细胞计数， 调整细胞密度为IX IO5个/ml，接种于96孔板每孔100 μ 1，置于37°C、5 % CO2条件下培养。 约24h后，用于实验。
[0153] 建立H2O2诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤模型血管内皮细胞以IO 4个/孔接种 于96孔培养板。用无血清培养基将H2O2配成0、75、150、300、600 μ mol/L剂量组，分别加 入96孔板中，每孔100 μ 1，分别作用12、24、48h后，将上清液弃掉，每孔加入100 μ 1培养 基和20 μ IMTT(5g/L)作用4h，将上清弃掉，每孔加150 μ 1二甲基亚砜，微孔振荡器上振荡 15min，570nm酶标仪下测定细胞吸光度值（Α)。细胞抑制率％=(空白组吸光度值一各组 吸光度值）（A) /空白组吸光度值（A) X 100 %。
[0154] 给药方法将细胞以2X IO5个/孔接种于6孔板，实验分为27组，正常对照组：每 孔给予2ml无血清培养基；模型组：每孔给予2ml终浓度为300 μ mol/LH202，作用24h ;本 发明组方一至二十三组：给予2ml终浓度为50mg/ml相应药物，孵育4h后，给予2ml终浓 度为300 μ mol/L H2O2作用24h。检测细胞中S0D、MDA的含量：消化收集各组细胞，每组加 Iml PBS，采取反复冻融的方法（一 80°冰箱15min，室温20min，如此重复5次），至细胞破 碎，内容物流出，3000r/min离心15min，吸取上清，进行BCA蛋白定量，然后按试剂盒说明书 进行MDA、SOD的含量测定。
[0155] 4.实验结果
[0156] 本发明药物对人静脉血管损伤的保护作用，见表8
[0157] 表8本发明药物对人静脉血管SOD、MDA的影响（? .? )
[0158]
CN 105012411 A ^ -n 16八丫 贝
[0159]
[0160] 注：各组与模型组比较*Ρ〈0· 05, #Ρ〈0· 01
[0161] 实验结果表明：各给药组较模型组SOD活性升高，MDA含量下降，且有统计学意义 (Ρ〈0· 05 或 Ρ〈0· 01)。
[0162] 5.结论实验证明本发明组方可以改善受损的静脉血管内皮细胞，提示可以用于治 疗心脑血管疾病。 具体实施例
[0163] 实施例1
[0164] 取大黄总蒽醌2. 5g，黄芪提取物4g，丹参总酚酸2. 6g，加 PEG-20050ml，再加注射 用水稀释至500ml，滤过，补充注射用水至800ml，调节pH值至6. 5-7. 0,加注射用水稀释至 1000 ml，用0. 22 μ m微孔滤膜滤过，分装，灭菌，得注射剂。
[0165] 实施例2
[0166] 取大黄总蒽醌2. 5g，黄芪提取物4g，红花苷2. 5g，加 PEG-20050ml，再加注射用 水稀释至500ml，滤过，补充注射用水至800ml，调节pH值至6. 5-7. 0,加注射用水稀释至 1000 ml，用0. 22 μ m微孔滤膜滤过，分装，灭菌，得注射剂。
[0167] 实施例3
[0168] 取大黄总蒽醌250g、黄芪提取物230g、丹参总酚酸260g，葡甲氨和精氨酸适量，加 入注射用水稀释至5L，搅拌直至溶解，滤过，滤液调pH值至5. 0-7. 0,用0. 22 μ m微孔滤膜 进行精滤；取甘露醇适量加注射用水配制成溶液，与上述滤液混匀，用〇. 22 μ m微孔滤膜滤 过，加注射用水稀释至10L，按单位制剂IOml的剂量分装，冷冻干燥，得冻干粉。
[0169] 实施例4
[0170] 取大黄总蒽醌250g、黄芪提取物230g、丹参总酚酸260g、葡甲氨和精氨酸适量，加 入注射用水稀释至5L，搅拌直至溶解，滤过，滤液调pH值至5. 0-7. 0,用0. 22 μ m微孔滤膜 进行精滤；取甘露醇适量加注射用水配制成溶液，与上述滤液混匀，用〇. 22 μ m微孔滤膜滤 过，加注射用水稀释至10L，按单位制剂IOml的剂量分装，冷冻干燥，得冻干粉。
[0171] 实施例5
[0172] 取大黄总蒽醌78g，黄芪提取物93. 75g，丹参总酚酸80g，预交化淀粉，微粉硅胶， 硬脂酸镁，滑石粉适量，分别过80目筛后，与药粉混合均匀，加适量的黏合剂制成软材，制 粒，颗粒于60°C干燥。加微粉硅胶、硬脂酸镁和滑石粉后混合均匀，压制成1000片。
[0173] 实施例6
[0174] 取大黄总蒽醌78g，黄芪提取物93. 75g，丹参总酚酸80g，预交化淀粉，微粉硅胶， 硬脂酸镁，滑石粉适量，分别过80目筛后，均匀混合，加适量的黏合剂制成软材，制粒；颗粒 在60°C干燥。加入羧甲淀粉钠、微粉硅胶、硬脂酸镁和滑石粉混合均匀，装胶囊，制成1000 粒。
[0175] 实施例7
[0176] 取大黄提取物1320g，黄芪提取物1584g，丹参总酚酸1584g，预交化淀粉，微粉硅 胶，硬脂酸镁，滑石粉适量，再加阿斯巴甜适量，制成软材，制粒，在60°C干燥后，检测合格 后，分装于药用聚乙烯塑料袋中，每袋5g，共制1000袋。
【主权项】
1. 一种治疗肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：按重量份计，含有大黄总蒽醌1-80 份，黄芪多糖和/或黄芪甲苷组成的黄芪提取物〇. 1-50份，丹参总酚酸1-30份或红花苷 1-30 份。2. 根据权利要求1所述一种治疗肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：大黄总蒽醌可 以用大黄素1-60份和/或大黄酸1-80份代替。3. 根据权利要求1或2所述一种治疗肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：黄芪提取 物可以用黄芪多糖5-50份和/或黄芪甲苷0. 1-10份代替。4. 根据权利要求1-3任一所述一种治疗肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：丹参总 酚酸可以用丹参酚酸B1-30份和/或丹参素1-30份代替。5. 根据权利要求1-4任一所述一种治疗肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：红花苷 可以用羟基红花黄色素A1-30份代替。6. 根据权利要求1-5任一所述一种治疗肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：药物组 合物还含有大黄酚和大黄素甲醚1-50份、大黄多糖1-30份。7. 根据权利要求1-6任一所述一种治疗肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：还含有 毛蕊异黄酮1-10份，毛蕊异黄酮苷1-10份、丹参酸酸A0. 5-5份。8. 权利要求1-7任一所述的药物组合物在制备用于治疗肾衰、肾病综合征或高血压肾 病的药物中的应用。9. 权利要求1-7任一所述的药物组合物在制备用于治疗肿瘤，心脑血管疾病或肝病的 药物中的应用。10. 根据权利要求1-7任一所述一种治疗肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：可以制 成固体形式、液体形式、气体形式或半固体形式的制剂。
【专利摘要】本发明涉及一种治疗肾脏疾病的组合物及其制药用途，该组合物含有大黄素和/或大黄酸组成的大黄总蒽醌，黄芪多糖和/或黄芪甲苷组成的黄芪提取物，丹参酚酸或红花苷以固定投药量组合用于治疗肾脏及其他疾病，组合物还可以含有大黄酚和大黄素甲醚或毛蕊异黄酮，毛蕊异黄酮苷，丹参酚酸B，羟基红花黄色素A治疗肾脏疾病。该组合物可以制成固体形式、液体形式、气体形式或半固体形式的制剂，经大量实验证实，它可用于治疗慢性肾衰、肾病综合征、心脑血管疾病和肿瘤疾病等。
【IPC分类】A61P9/10, A61K31/715, A61P35/00, A61K31/7048, A61K36/537, A61P1/16, A61P13/12, A61P9/00, A61K36/708
【公开号】CN105012411
【申请号】CN201410171382
【发明人】吴芳, 吕延英, 王光建, 赵兴, 詹芳, 王俊平, 贾诚, 曾艳龙
【申请人】西安世纪盛康药业有限公司
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2014年4月25日