一种高稳定性的香茅油纳米脂质体抗菌剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于抗菌剂及药物制剂或者化妆品领域，具体涉及一种高稳定性的香茅油 纳米脂质体抗菌剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 香茅草，又称柠檬草，为多年生草本，禾本科白茅属植物，产出暖性精油；主要成分 为柠檬醛、橙花烯、杏叶烯和牛二醇；香茅草性味辛、温，有疏风通络、和胃通气、醒脑催情的 功效；香茅油，有一定的防腐、抗菌、抗氧化的能力，此外，还具有抑制肿瘤、止痛、利尿、化 感等作用，对各种食源性病原菌有较好的抗菌效果，且安全、无毒副作用，在食用油脂加工 中应用广泛，可防止油脂氧化。
[0003] 国内有一些关于香茅油在医学应用的专利申请：CN1970054A公开了一种从香茅 油中提取抗癌提取物的方法及其组成和用途，CN103361179A-种柠檬草精油的提取方法， CN103651634A公开了香茅油驱蚊液、驱蚊凉席及其制备方法，CN101229989公开了一种从 香茅油副产物中制备高纯(6-榄香烯的方法。
[0004] 虽然香茅油在医学，食品和化妆品行业被广泛应用，具有较好的杀菌、增香等特 点，但是香茅油易挥发，暴露在空气中不稳定，所以要寻找有效地方法降低香茅油在使用过 程中的挥发程度，延长保存期。
[0005] 纳米脂质体能将香茅油包裹在内，并且纳米脂质体不会对香茅油的主要活性成分 造成破坏，纳米脂质体使香茅油中的活性成分与外界环境隔绝开来，可以降低香茅油挥发 性，延长保存期。但由于脂质体的缓释作用，包裹精油的脂质体保质期受限，所以，选用壳聚 糖和明胶制成稳定性高的多层脂质体，此外，纳米脂质体由于它们的亚细胞尺寸，能加强脂 质体的被动吸收机制，减少物质运输阻力，从而增强精油的抗菌等效果。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是公开一种高稳定性的香茅油纳米脂质体及其制备方法，通过将香 茅油包裹在多层纳米脂质体中，以实现减少香茅油在使用过程中的挥发，从而减少香茅油 的浪费，达到长效抗菌与高效利用的目的。
[0007] -种高稳定性的香茅油纳米脂质体，香茅油包裹在磷脂双分子层中，其特征在于： 磷脂双分子层为第一层纳米脂质体，还设有第二层纳米脂质体，第二层由壳聚糖组成。
[0008] 进一步地，所述的一种高稳定性的香茅油纳米脂质体，其特征在于：还设有第三层 纳米脂质体，第三层由明胶组成。
[0009] 进一步地，第二层纳米脂质体中壳聚糖的浓度为0? 2mg/mL。
[0010] 进一步地，第三层纳米脂质体中明胶的浓度为0. 4mg/mL。
[0011] 本发明由香茅油，大豆卵磷脂，胆固醇、表面活性剂，壳聚糖和明胶制成香茅油纳 米脂质体。
[0012] 大豆卵磷脂、胆固醇是构成脂质体的组要成分，胆固醇均有调节膜流动性的作用， 所以考察其两者的配比变化，对构成的脂质体分散性等参数有无影响；表面活性剂是增加 脂质体稳定性；香茅油浓度是根据包封率来确定的；醋酸盐溶液的PH是为了最佳溶解壳聚 糖；壳聚糖和明胶可以增加稳定性。
[0013] 本发明的制备方法是将香茅油，大豆卵磷脂，胆固醇混合于有机溶剂，减压蒸干形 成光滑的薄膜，加入水相介质和表面活性剂组成的混合溶液溶解薄膜并超声成乳、离心后 取上层液体过滤得到单层香茅油纳米脂质体，其特征在于：将单层香茅油纳米脂质体与壳 聚糖溶液搅拌均匀，通过离心和微孔滤膜过滤，得到粒径为纳米级的双层香茅油纳米脂质 体。
[0014] 进一步地，将双层香茅油纳米脂质体与明胶溶液搅拌均匀，通过离心和微孔滤膜 过滤，得到粒径为纳米级的多层香茅油纳米脂质体。
[0015] 进一步地，本发明的大豆卵磷脂和胆固醇的质量比例为5:1;表面活性剂、香茅油 与胆固醇的质量比为：1:3:4,此条件下可以得到最高的包封率。
[0016] 进一步地，表面活性剂为PVP，混合溶液中PVP的浓度为I. 0mg/mL。
[0017] 单层香茅油纳米脂质体与壳聚糖溶液的体积比为1:10 ;双层香茅油纳米脂质体 与明胶溶液的体积比为1:1 〇。
[0018] 本发明中所述的有机溶剂是氯仿。
[0019] 本发明中所用的水相介质是根据中国药典2000版标准配制的醋酸盐缓冲溶液， pH值 3. 5~4. 0。
[0020] 所述的壳聚糖溶液为壳聚糖的醋酸盐溶液，浓度为0.2mg/mL，醋酸盐溶液是根 据中国药典2000版标准配制的醋酸盐缓冲溶液，pH值3. 5~4. 0,优选3. 6,能够最佳溶解壳 聚糖。
[0021] 所述明胶溶液为明胶的醋酸盐溶液，浓度为0. 4mg/mL，醋酸盐溶液是根据中国药 典2000版标准配制的醋酸盐缓冲溶液，pH值3. 5~4. 0。
[0022] 本发明中脂质体的第一层是磷脂双分子层，即人工细胞膜层。
[0023] 本发明中脂质体的第二层由壳聚糖组成，浓度为0.2mg/mL。
[0024] 本发明中脂质体的第三层由明胶组成，浓度为0.4mg/mL。
【附图说明】
[0025] 图1为香茅油纳米脂质体的包封率。
[0026]图2为香茅油纳米脂质体的粒径与多分散系数roi。
[0027] 图3为多层香茅油纳米脂质体荧光显微图。
[0028] 图4为多层香茅油纳米脂质体原子力显微图。
[0029] 图5多层香茅油纳米脂质体对大肠杆菌的抗菌性能。
[0030]图6多层香茅油纳米脂质体对金黄色葡萄球菌的抗菌性能。
[0031] 表1为香茅油纳米脂质体的Zeta电位。
【具体实施方式】
[0032] 通过下面实例说明本发明的【具体实施方式】，但本发明的保护内容，不仅局限于此。
[0033] 实施例1多层香茅油纳米脂质体的包封率 1实验材料 大豆卵磷脂；BR;国药集团化学试剂有限公司。
[0034] 胆固醇；AR;国药集团化学试剂有限公司。
[0035] 三氯甲烷；AR;国药集团化学试剂有限公司。
[0036] 香茅油；AR;法国fIorihana精油。
[0037] PVP;GR;国药集团化学试剂有限公司。
[0038] 壳聚糖；BR;国药集团化学试剂有限公司。
[0039] 明胶；BR;国药集团化学试剂有限公司。
[0040] 2实验方法 1)单层香茅油纳米脂质体的制备 ①称取Ig大豆卵磷脂，〇.2g胆固醇和150mg的香茅油，加50mL氯仿使其溶解。
[0041] ②在旋转蒸发仪中蒸发至溶剂蒸干，蒸发温度为10~30 °C，圆底烧瓶内壁会形成 光滑的薄膜；然后将所得产品放入真空干燥箱中，30°C，真空状态下干燥24小时。
[0042] ③称取0. 05g的PVP于50mL醋酸盐缓冲液中，超声波条件下扩散，然后将PVP的 醋酸盐缓冲液加入圆底烧瓶中超声波条件下进行水化。
[0043] ④将水化后的混合液于细胞超微粉碎仪中以工作10s，间隙5s粉碎的频率30 min〇
[0044] ⑤将所得产品进行离心，4000rpm，15min，取上层液体。
[0045] ⑥将所得液体用0. 22ym滤膜进行过滤，得滤液，为单层香茅油纳米脂质体。
[0046] 2)双层香茅油纳米脂质体的制备 ①按照上述单层香茅油纳米脂质体的制备方法，制备含150mg香茅油的单层纳米脂质 体。
[0047] ②将单层香茅油纳米脂质体分散在含0.2mg/mL壳聚糖的醋酸盐溶液中混合均 匀；单层香茅油纳米脂质体与壳聚糖的醋酸盐溶液的体积比1 :1〇。
[0048] ③将所得混合液于细胞超微粉碎仪中以工作10s，间隙5s的频率粉碎30min。
[0049] ④将所得产品进行离心，4000rpm，15min，取上层液体。
[0050] ⑤将所得液体用0. 22ym滤膜进行过滤，得滤液，为双层香茅油纳米脂质体。
[0051] 3)多层香茅油纳米脂质体的制备 ①按照上述双层香茅油纳米脂质体的制备方法，制备含150mg香茅油的双层纳米脂质 体。
[0052] ②将双层香茅油纳米脂质体分散在含0.4mg/mL明胶的醋酸盐溶液中使其混合均 匀；双层香茅油纳米脂质体与明胶的醋酸盐溶液的体积比为1 :1〇。
[0053] ③将所得混合液于细胞超微粉碎仪中以工作10s，间隙5s的频率粉碎30min。
[0054] ④将所得产品进行离心，4000rpm，15min，取上层液体。
[0055] ⑤将所得液体用0. 22ym滤膜进行过滤，得滤液，为双层香茅油纳米脂质体。
[0056] 4)包封率的测定 用无水乙醇稀释香茅油，逐级稀释成浓度分别为0.l、〇. 2、0. 4、0. 6、0. 8mg/mL的标准 溶液，然后，分别吸取IyL标准溶液进行GC-MS分析，对其主要成分柠檬醛的谱峰面积进 行自动积分，绘制柠檬醛峰面积-香茅油精油浓度标准曲线；首先取ImL香茅油纳米脂质体 样品，13500rpm，离心3h，倒掉上清液，接着加入ImL乙醇破乳剂，超声3h，最后以10000rpm的转速离心15min，取上清液，用于GC-MS分析。制备好的脂质体样品，对精油主成分 的峰面进行自动积分，再根据步骤1中绘制的标准曲线，计算出脂质体中植物精油的含量。
[0058] 3香茅油纳米脂质体的包封率 包封率是评价脂质体制剂质量好坏的最重要的指标，也是脂质体能否发挥较普通制剂 高效、低毒等特点的关键；由图1可看出，单层香茅油纳米脂质体的包封率为31. 6%，双层香 茅油纳米脂质体的包封率为49. 1%，多层香茅油纳米脂质体的包封率最大，为81. 2%，因此 制备多层香茅油纳米脂质体可以明显提高脂质体的包封率。
[0059] 实施例2多层香茅油纳米脂质体的粒径与多分散系数roi 1实验材料 ①单层香茅油