用于治疗泌尿系统症状和疾病的木质植物衍生的杂多糖的制作方法_3

文档序号:9382027阅读:来源:国知局
寡糖和单聚糖。
[0052] 水溶性杂多糖,仍携带大部分的乙酰基基团,也可以从机械浆碾磨厂的工艺用 水中被回收(Thornton et al. 1994, J. Wood Chem. Technol. 14, 159-175 ; WillfSr et al. 2003, Tappi J. 2:11,27-32 ;Xu et al. 2007, Cellulol.Chem.Technol. 51,51-62)。用乙 醇沉淀提供了具有与由木材的热水提取获得的非常相似的组成的杂多糖产品。然而,来自 机械浆水的富含GGM的半纤维素的产率相当低,只有在木材基础上的约1 %。
[0053] 在一些实施方式中,所述杂多糖组合物是从木质植物(如软木或硬木)获得的水 提取物,其中GGM构成提取物的总碳水化合物含量的至少50%。在一些其他实施方式中, GGM可以构成提取物中总碳水化合物含量的至少80%,特别是如果在生产方法中使用乙醇 沉淀。在一些进一步的实施方式中,提取物可以包含具有二至十个糖单元的寡糖,主要具有 甘露糖、葡萄糖和/或半乳糖单元,和/或单糖,如甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯 糖。所述寡糖可以通过水解从木材获得和纯化。另一方面,如果需要的话,该提取物可以通 过本领域技术人员公知的方法由所述寡糖和/或单糖纯化。
[0054] 应当理解的是,术语"提取物(extract)"是指一种可通过提取获得的组合物。因 此,提取剂(extractant)(即提取的试剂),如水或乙醇的含量,可以在所述组合物中变化。 在一些实施方式中,提取物可以以干燥形式(例如粉末)提供。
[0055] 根据本发明的杂多糖组合物可以用于治疗人或动物受试者中的至少一种泌尿系 统的或LUT症状,包括但不限于储尿症状,如增加的白天尿频、夜尿症、尿失禁、不自主漏尿 和尿急;排尿症状,如断续尿流、缓慢尿流、尿流分叉或喷洒、延长的排尿踌躇、排尿费力和 终末尿滴沥;排尿后症状,如膀胱排空不完全的感觉和尿后滴沥;以及腹痛,如急性的或慢 性的骨盆疼痛、泌尿生殖器疼痛、膀胱疼痛、尿道痛、外阴疼痛、阴道疼痛、阴囊疼痛和会阴 疼痛。疼痛症状可能与其他的LUT症状相关联或可能不与其相关联。
[0056] 另外,本发明的杂多糖组合物可用于治疗泌尿系统的疾病,如与LUT相关联的疾 病或病症,无论人或动物受试者是否患有如上所述的LUT症状。LUT疾病的非限制性实例包 括下列膀胱和前列腺疾病:泌尿慢性骨盆疼痛综合征(UCPPS),包括间质性膀胱炎/膀胱疼 痛综合征和慢性非细菌性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征、出血性膀胱炎、膀胱过动症、良 性前列腺增生症和前列腺癌。杂多糖组合物还可用于治疗其他泌尿系统的癌症,如膀胱、肾 和睾丸的癌症。不受任何假设的限制,所述杂多糖组合物在抑制雄激素敏感的前列腺癌细 胞增殖中可以是特别有效的。
[0057] 在一些实施方式中,待使用本发明的杂多糖组合物治疗的泌尿系统疾病不是细菌 感染,如尿道感染。
[0058] 根据本发明的各种实施方式的杂多糖组合物可以例如被配制成药物组合物、食品 或动物饲料添加剂、食品或动物饲料产品、天然产品或保健品。
[0059] 对于例如可以被配制成药片、片剂、锭剂、混悬剂、可分散粉末或颗粒剂、胶囊、糖 浆剂或酏剂的药物组合物,口服给药途径是最优选的。活性化合物的所需量可以取决于待 治疗的具体病症。医学和制药领域的技术人员已知的任何一种药学上可接受的固体或液体 载体可以在药物制剂中使用。
[0060] 对于药物组合物的给药的量和疗程可以通过治疗LUT相关的症状和障碍的临床 领域的普通技术人员容易地确定。一般地,剂量取决于考虑因素:如待治疗患者的年龄、性 别和一般健康状况;同时联合治疗的种类,如果有的话;治疗的频率和所需效果的性质;组 织损伤的程度;症状的持续时间;以及其他变量。所期望的剂量可以在一个或多个施用中 给药以获得所需的结果。如果期望的话,根据本发明实施方式的药物组合物可以以单位剂 型被提供。
[0061]用于配制本发明的药物制剂的手段和方法对于本领域技术人员来说是已知的,并 且可以以一种本是已知的方式被制造,例如,通过常规的混合、造粒、溶解、冻干或类似的工 -H- 〇
[0062] 在本发明的食品添加剂中,用于食品可接受的任何无毒性的载体可以与本发明的 杂多糖组合物混合。根据本发明的食物产品(食品)特别是功能性食品、营养补充剂、营 养品、药用食品(pharmafood)、营养食品(nutraceutical)、保健食品、特制食品(designer food)或任何食物产品。例如,根据本发明的功能性食品可以是例如饼干、面包、蛋糕、糖果、 发酵乳产品或谷物的形式。
[0063] 本领域技术人员显而易见的是,随着技术的进步,本发明的构思可以以各种方式 来实现。本发明及其实施方式不限于下面描述的实施例,但可以在权利要求的范围内变化。
[0064] 实施例
[0065] 所有的动物实验经国家动物实验委员会(the National Committee for Animal Experiments)的批准而实施。
[0066] 实施例1.通过富含GGM的杂多糖组合物来抑制前列腺癌细胞增殖
[0067] 在前列腺癌细胞系,即LNCaP细胞系中测试源自挪威云杉木材的纯化的(通过在 乙醇中沉淀)富含GGM的热水提取物(如在实施例2的方法1中)对细胞增殖的效果,所 述细胞系是雄激素敏感的人类前列腺腺癌细胞系。
[0068] 为此,在培养箱中在37°C下在存在5%二氧化碳的情况下在细胞培养瓶中使用由 细胞系提供者(ATCC)推荐的培养基培养细胞。在铺板后48小时,将富含GGM的提取物以 不同的浓度(范围从最终的细胞培养基的1 %到IX 10 4% )加入到细胞中。对于每一个浓 度,使用六个平行孔。在化学疗法中使用的两种已知的化合物,即吉西他滨和Ara-C,被用作 阳性对照(IOOnM)。
[0069]在孵育3或5天后,根据制造商的操作指南使用WST-I试剂(Roche)来测量细 胞的增殖。这种类型的增殖测定是基于活细胞的减少WST-I试剂对黄色甲臜化合物的能 力,其量与增殖率成比例,并且可以通过分光光度法测量。简言之,将10 y 1的WST-I加入 到每个孔中,并在37°C下在二氧化碳的存在下将细胞孵育2小时。孵育后,使用Wallac Victor2multilabel counter (多标记计数仪)测量每个孔在450nm处的吸光度。
[0070]采用Sigmastat?软件包进行统计分析。使用ANOVA进行对比,而使用 Student-Newman-Keuls法作为事后检验。所有结果表示为平均值和标准偏差。与PBS相 比,*** = P〈〇. 〇〇1,与 PBS 相比,** = P〈0. 005,与 PBS 相比,* = P〈0. 05。
[0071] 结果表明,富含GGM的软木提取物浓度依赖性地降低了癌细胞增殖(图1)。使用 另一种前列腺癌细胞系,即PC-3细胞系获得类似的结果,该PC-3细胞系是来源于骨转移前 列腺癌的雄激素非依赖性细胞系。
[0072] 实施例2.富含GGM的杂多糖组合物对LUT症状和骨盆疼痛的体内作用
[0073] 慢性非细菌性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征(CP/CPPS)的体内模型是用来研究 前列腺发炎和与排尿相关联的变化的确定的工具。前列腺炎的症状包括与排尿的变化相关 联的泌尿生殖器和/或骨盆的疼痛,如尿前踌躇、断续尿流、尿流弱、尿急和尿频。这些症状 可以通过激素暴露而被实验地模拟。实验性研究表明,在完整的成年雄性大鼠的结合睾丸 激素和雌二醇处理后的六周内前列腺发炎的逐步发展。当使用相应的激素处理超过13周 时,动物发展出类似人类慢性前列腺发炎的更高级别的炎症。此外,激素处理(治疗)诱导 可见的排尿梗阻如降低的尿流速率、增加的排尿次数、以及减少的排尿量。排尿梗阻与前列 腺腺体炎症有关。
[0074] 在上述的用于与前列腺发炎相关的激素诱导的排尿变化的动物模型中测试口服 给药的富含GGM的针叶树提取物的影响。该研究单独重复两次以获得结果的构造。
[0075] 在研究开始时,雄性Wistar大鼠被植入睾丸激素(T)和雌二醇(E2)植入物。对 于T,每日释放的激素量为830 yg并且对于E2S 83 yg。总激素暴露时间为18周。
[0076] 富含GGM的杂多糖产品通过两种不同的方法从挪威云杉提取:
[0077] 提取
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