br>[0120] 实例 1
[0121] 用于测定26- [ [ [3-[[⑵-[1- (2-氨基-5-氯-4-噻唑基）-2-[ [(6R，7R) -2-羧 基-8-氧代-3-(吡啶基甲基）-5-硫杂-1-氮杂二环[4. 2. 0]辛-2-烯-7-基]氨基]-2-氧 代亚乙基]氨基]氧基]-丙基]氨基]羰基]-26-脱羧万古霉素样品的纯度的HPLC方法
[0122] 使用具有由色谱数据软件（Empower软件，沃特斯公司（Waters Corporation)，马 萨诸塞州米尔福德市（Milford，MA)，01757)控制的光二极管阵列检测器（安捷伦1100或 1200HPLC系统；安捷伦科技公司，加利福尼亚州圣塔克拉拉市，95051)的HPLC系统来分析 测试样品的 26- [ [ [3- [ [ (Z) - [ 1- (2-氨基-5-氯-4-噻唑基）-2- [ [ (6R，7R) -2-羧基-8-氧 代-3-(吡啶基甲基）-5-硫杂-1-氮杂二环[4. 2. 0]-辛-2-烯-7-基]氨基]-2-氧代亚 乙基]氨基]氧基]丙基]氨基]羰基]-26-脱羧万古霉素和其降解产物。所有溶剂均是 HPLC级且购自霍尼韦尔柏狄克与杰克森（Honeywell Burdick&Jackson)(密歇根州马斯基 根，49442)。磷酸（85% w/w)和磷酸二氢钠是HPLC级且购自福禄克（Fluka)(西格玛奥德 里奇，密苏里州圣路易斯市，63103)。所有试剂均未经进一步纯化即使用。
[0123] 在分析前通过0. 2 ym聚二氟亚乙烯（PVDF)过滤器过滤测试样品并弃除第一个 lmL。HPLC分析条件汇总于表A中。
[0124] 表 A
[0125] HPLC分析条件
[0126]
[0127] 具体样品组份的滞留时间显示于表B中。
[0128] 表B
[0129] HPLC滞留时间
[0130]
[0131]
[0132] 基于化合物的积分峰面积（曲线下面积或AUC)以所有积分峰的百分比来确定测 试样品纯度。通过与参考标准品比较来确定测试样品中化合物的浓度（分析值）。
[0133] 实例 2
[0134] 用于测定残余溶剂的GC方法
[0135] 使用配备有顶空自动进样器（安捷伦7694顶空进样器）的气相色谱系 统（安捷伦GC6890,安捷伦科技公司，加利福尼亚州圣塔克拉拉市，9505)来测定 26- [ [ [3- [ [ (Z) - [1- (2-氨基-5-氯-4-噻唑基）-2- [ [ (6R，7R) -2-羧基-8-氧代-3-(吡啶 基甲基）-5-硫杂-1-氮杂二环[4. 2. 0]-辛-2-烯-7-基]氨基]-2-氧代亚乙基]氨基] 氧基]丙基]氨基]羰基]-26-脱羧万古霉素测试样品中的残余溶剂。使用DB-624GC柱 (30m 长度 X 0? 53mm ID X 3 y m)(安捷伦，部件编号 125-1334)。
[0136] 通过将1-丁醇（4mL)添加到1L容量瓶中来制备内标溶液。添加DMS0(800mL)并 将混合物充分混合，且然后添加额外DMS0以使总体积为1L。
[0137] 将每一测试样品（50mg)转移到20mL顶空小瓶中且添加内标溶液（lmL)并将所得 混合物剧烈地搅动直到样品溶解。
[0138] 从已知纯度的市售溶剂在内标溶液中制备浓度为2mg/mL的参考标准品。通常将 所有参考标准溶剂合并成一个参考标准溶液，所述参考标准溶液是以一式三份制备。对于 每一参考标准重复，将lmL溶液添加到20mL顶空小瓶中并进行卷边密封（crimp sealed)。
[0139] GC分析条件汇总于表C中。
[0140] 表 C
[0141] GC分析条件
[0142]
[0143]
[0144] 典型溶剂相对于1-丁醇内标的GC滞留时间显示于表D中。1-丁醇通常在约 19. Omin时洗脱出来。
[0145] 表 D
[0146] 与1- 丁醇相比的相对GC滞留时间
[0147]
[0148] 通过比较样品的峰面积与参考标准品的峰面积来确定测试样品中残余溶剂的量。
[0149] 实例 3
[0150] 3-溴丙基氨基甲酸叔丁基酯的制备
[0151] 向维持在10°C或略微低于10°C的温度下的氢氧化钠（105g，2.625mol)于水 (1. 15L)中的溶液中添加二碳酸二-叔丁基酯（229g，1.05mol)于庚烷（1.03L)中的溶液。 用庚烷（125mL)冲洗含有二碳酸二-叔丁基酯溶液的烧瓶，并将冲洗液添加到反应混合物 中。将所得混合物冷却到l〇°C或略微低于10°C的温度下，并以使内部反应温度维持低于约 20°C的速率逐滴添加3-溴丙基胺氢溴酸盐（251g，1. 15mol)于水（250mL)中的溶液。用水 (20mL)冲洗含有3-溴丙基胺氢溴酸盐溶液的烧瓶并将冲洗液添加到反应混合物中。完成 添加后，使反应混合物缓慢地升温到室温（约22°C )并在室温下继续搅拌约2h。中断搅拌 并使混合物静置30min。将下部水层与有机层分离并弃除。向有机层中添加饱和氯化钠水溶 液（250mL)并将所得混合物搅拌5min。使混合物静置30min且分离出下方水层并弃除。将有 机层浓缩到约350mL体积且将此浓缩溶液冷却到5 °C并在5 °C下搅拌4h。通过真空过滤来收 集所得沉淀物以提供呈白色结晶固体形式的标题化合物（211g，产率84% )。浓缩滤液并将 经浓缩溶液冷却到5°C且在5°C下搅拌4h。通过真空过滤来收集所得额外沉淀物以提供额 外量的标题化合物（17g，产率6. 8% )。4 NMR(400MHz, DMS0-d6) S 虫 NMR(400MHz, DMS0-d6) S 3. 50 (t, J = 6. 8Hz, 2H)，3. 03 (q, J = 6. 8Hz, 2H), 1. 91 (m, J = 6. 8Hz, 2H), 1. 38 (s, 9H)。
[0152] 实例 4
[0153] (2Z) -2- (2-氨基噻唑-4-基）-2- (3-N-叔丁氧基羰基氨基丙氧基亚氨基）乙酸乙 酯的制备
[0154] 向2-氨基-a-(羟基亚氨基）-4_噻唑乙酸乙酯（139. 9g，650mmol)、3-溴丙基 氨基甲酸叔丁基酯（209. 0g，877. 5mmol)和粉末状碳酸钾（157. 2g，1137. 5mmol)的混合物 中添加DMF(550mL)和水（24. 4mL)。在30°C下将所得混合物搅拌约llh。将反应混合物冷 却到室温并添加乙酸乙酯（2.3L)和水（1.7L)且将所得混合物搅拌5min。使混合物静置 60min且分离出下层（水层）并弃除。添加碳酸氢钠水溶液（10wt. %，600mL)并将所得混 合物搅拌5min。使混合物静置60min且分离出下层（水层）并弃除。添加氯化钠水溶液 (10wt. %，600mL)并将所得混合物搅拌5min。使混合物静置60min且分离出下层（水层） 并弃除。将有机层浓缩到约600mL体积。将己烷（250mL)逐滴添加到浓缩液中并在0°C下 轻微搅拌lh以形成沉淀物。通过真空过滤来收集沉淀物，得到呈灰白色结晶固体形式的标 题化合物（232g，产率 96 % )。虫 NMR (400MHz, DMS0-d6) S 7. 25 (s, 2H)，6. 89 (s, 1H)，6. 82 (b rs, 1H), 4. 26 (q, J = 8Hz, 2H), 4. 08 (t, J = 6. 4Hz, 2H), 2. 97 (q, J = 6. 4Hz, 2H), 1. 72 (m, J = 6. 4Hz, 2H), 1. 37 (s, 9H)，1. 26 (t, J = 8Hz, 3H)。
[0155] 视需要，可将产物重结晶。在60°C下将若干批粗材料（1. 0kg，纯度91. 2% )溶解 于乙酸乙酯（2L)中并缓慢地添加庚烷（1L)。在搅拌的同时将所得溶液加热到60°C并保持 lh，在此时间期间形成沉淀物。然后使混合物缓慢地冷却到室温。在干燥氮下通过真空过 滤来收集沉淀物，用庚烷与EtOAc的混合物（1L，3:1)洗涤并在真空下干燥过夜，得到标题 化合物（770g，纯度98. 3% )。
[0156] 实例 5
[0157] (2Z)-2-(2-氨基噻唑-4-基）-2-(3-N-叔丁氧基羰基氨基丙氧基亚氨基）乙酸的 制备
[0158] 向（2Z)-2-(2-氨基噻唑-4-基）-2-(3-N-叔丁氧基羰基氨基丙氧基亚氨 基）乙酸乙酯（232.0g，622.9mm 〇l)于无水乙醇（1.63L)中的溶液中逐滴添加氢氧化钠 (29. 9g，747. 4mmol)于水（748mL)中的溶液。在35°C下将所得混合物加热约8h。然后将混 合物冷却到约_5°C并逐滴添加三氟乙酸（约10mL)直到混合物的pH为约6. 0。然后在真 空下浓缩混合物以去除大部分挥发性组份并添加无水乙醇（500mL)。再次浓缩所得混合物 以通过共沸去除水。通过添加无水乙醇（500mL)随后浓缩再次重复此程序，得到标题化合 物，其未经任何进一步分离或纯化即用于下一反应中。
[0159] 实例 6
[0160] (2Z) -2- (2-氨基-5-氯噻唑-4-基）-2- (3-N-叔丁氧基羰基氨基丙氧基亚氨基） 乙酸三乙胺盐的制备
[0161] 将乙酸乙酯（2.0L)添加到（2Z)-2-(2-氨基噻唑-4-基）-2-(3-N-叔丁氧基羰 基氨基丙氧基亚氨基）乙酸（约213g，627mmol)于甲醇（200mL)中的混合物中以形成浆 液。添加N-氯琥珀酰亚胺（108.0g，815mm 〇l)并在室温下将所得混合物搅拌3h。添加水 (2. 5L)、氯化钠（514g)和三氟乙酸（93mL，1254mmol)并将所得混合物搅拌15min。使混合 物静置lh且然后分离出下方水层并弃除。在真空下将有机层浓缩到约500mL体积。添加 乙腈（1.0L)并在真空下浓缩混合物。此通过再次添加乙腈（1.0L)并在真空下将混合物浓 缩到约600mL体积来重复。然后通过硅藻土（西莱特（Celite))过滤混合物。添加三乙 胺（350mL，2508mmol)并将混合物冷却到0°C，此时形成沉淀物。通过真空过滤来收集沉淀 物，用乙腈（165mL)冲洗，并在室温和真空下干燥，得到呈浅棕色结晶固体形式的标题化合 物（224g，产率79%)。4匪1?(4001抱，]^011-(1 4)8 4.15(^ = 6.4抱，211)，3.18(111，811)，1. 86 (m，2H)，1. 43 (s，9H)，1. 30 (t，J = 7. 9Hz，9H)。
[0162] 实例 7
[0163] 1- [ [ (6R，7R) -7- [ [ (2Z) - (2-氨基-5-氯-4-噻唑基）[(3-N-叔 丁氧基羰基氨 基丙氧基）亚氨基]乙酰基]氨基]_2_駿基_8_氧代_5_硫杂-1-氮杂二环[4. 2. 0] 辛-2_稀_3_基]甲基]P比啶鐵盐酸盐的制备
[0164] 在20°C下，向（2Z)-2-(2-氨基-5-氯噻唑-4-基）-2-(3-N-叔丁氧基羰基氨基 丙氧基亚氨基）乙酸三乙胺盐（44. 88g，93. 5mmol)于二甲基乙酰胺（300mL)中的混合物 中添加二硫双（苯并噻唑）（32. 7g，98. 2mmol)。添加三苯基膦（25. 8g，98. 2mmol)(轻微 放热）并在室温下将所得混合物搅拌30min，在此时间期间反应混合物变成红棕色透明溶 液。将反应混合物冷却到〇°C并添加二异丙基乙胺（14.8mL，85mm 〇l)。将所得混合物搅 拌约5min，且然后添加1- [ [ (6R，7R) -7-氨基-2-羧基-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂二环 [4. 2. 0]辛-2-烯-3-基]甲基]吡啶鑰氯化物单盐酸盐（7-PYCA) (34. 00g，85. Ommol)。 在〇°C下将所得混合物搅拌16h