于高速搅拌法制备的不均一乳液(平均高出0.2个滴度)。
[0082]实施例15
[0083]采用孔径为0.5 μ m的微孔膜制备含口蹄疫病毒疫苗的油佐剂制剂，量取20mL含灭活口蹄疫病毒的溶液，作为水相(W)，量取60mL含乳化剂Span83(0.2% )和稳定剂单硬脂酸甘油酯(2.0% )的白油作为油相(0)，将水相(W)在机械搅拌下倒入油相(O)中，低速搅拌制备W/Ο预乳液，随后，将此预乳液转至快速膜乳化的储料罐中，在1.0OMPa的氮气压力下，反复过膜3次，得到平均粒径为0.59 μ m、PDI值为0.058的均一 W/Ο型油佐剂疫苗制剂。免疫后在7、28、35天的抗体水平均高于高速搅拌法制备的不均一乳液(平均高出0.3个滴度)。
[0084]实施例16
[0085]采用孔径为9.2 μ m的微孔膜制备含口蹄疫病毒疫苗的油佐剂制剂，量取20mL含灭活口蹄疫病毒的溶液，作为水相(W)，量取60mL含乳化剂(0.6% ) Span83和稳定剂单硬脂酸甘油酯(2.0% )的白油作为油相(0)，将水相(W)在机械搅拌下倒入油相(O)中，低速搅拌制备W/Ο预乳液，随后，将此预乳液转至快速膜乳化的储料罐中，在0.15MPa的氮气压力下，反复过膜3次，得到平均粒径为8.22 μ m、PDI值为0.072的均一 W/Ο型油佐剂疫苗制剂。免疫后在7、28、35天的抗体水平均高于高速搅拌法制备的不均一乳液(平均高出0.15个滴度)。
[0086]实施例17
[0087]采用孔径为2.8 μ m的微孔膜制备含猪蓝耳病病毒疫苗的油佐剂制剂，量取30mL含灭活猪蓝耳病病毒的溶液，作为水相(W)，量取60mL含乳化剂Span83和稳定剂单硬脂酸甘油酯的白油作为油相(0)，将水相(W)在机械搅拌下倒入油相(O)中，低速搅拌制备W/O预乳液，随后，将此预乳液转至快速膜乳化的储料罐中，在0.45MPa的氮气压力下，反复过膜5次，得到平均粒径为2.32 μ m、PDI值为0.060的均一 W/Ο型油佐剂疫苗制剂。免疫后在10、28、42天的抗体水平均高于高速搅拌法制备的不均一乳液(平均高出0.8个滴度)。
[0088]实施例18
[0089]采用孔径为2.8 μ m的微孔膜制备含猪蓝耳病病毒疫苗的油佐剂制剂，量取6mL含灭活猪蓝耳病病毒的溶液，作为水相(W)，量取60mL含乳化剂Span83和稳定剂单硬脂酸甘油酯的白油作为油相(0)，将水相(W)在机械搅拌下倒入油相(O)中，低速搅拌制备W/Ο预乳液，随后，将此预乳液转至快速膜乳化的储料罐中，在0.45MPa的氮气压力下，反复过膜3次，得到平均粒径为2.21 μ m、PDI值为0.050的均一 W/Ο型油佐剂疫苗制剂。免疫后在10、28,42天的抗体水平均高于高速搅拌法制备的不均一乳液(平均高出0.3个滴度)。
[0090]实施例19
[0091]采用孔径为2.8 μ m的微孔膜制备含猪蓝耳病病毒疫苗的油佐剂制剂，量取20mL含灭活猪蓝耳病病毒的溶液，作为水相(W)，量取60mL含乳化剂Span83和稳定剂单硬脂酸甘油酯的白油作为油相(0)，将水相(W)在机械搅拌下倒入油相(O)中，低速搅拌制备W/O预乳液，随后，将此预乳液转至快速膜乳化的储料罐中，在0.45MPa的氮气压力下，反复过膜3次，得到平均粒径为2.26 μ m、PDI值为0.055的均一 W/Ο型油佐剂疫苗制剂。免疫后在10、28、42天的抗体水平均高于高速搅拌法制备的不均一乳液(平均高出0.5个滴度)。
[0092]实施例20
[0093]采用孔径为0.5 μ m的微孔膜制备含鸡新城疫-禽流感二联疫苗的油佐剂制剂，量取20mL含灭活新城疫和禽流感病毒的溶液，作为水相(W)，量取60mL含Span80和稳定剂硬脂酸铝的白油作为油相(0)，将水相(W)在机械搅拌下倒入油相(O)中，低速搅拌制备W/Ο预乳液，随后，将此预乳液转至快速膜乳化的储料罐中，在2.5MPa的氮气压力下，反复过膜3次，得到的W/Ο型油佐剂疫苗制剂。所制备的乳液平均粒径为0.1234 μ m、PDI值为0.078，粒径均一性好。免疫后在10、28、42天的抗体水平均高于高速搅拌法制备的不均一乳液(平均高出0.6个滴度)。
[0094]申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细特征以及详细方法，但本发明并不局限于上述详细特征以及详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细特征以及详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明选用组分的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
【主权项】
1.一种W/0型疫苗油佐剂制剂，其特征在于，所述制剂为W/0型乳液，其中水相为含有抗原的溶液，油相包含白油、乳化剂和稳定剂；所述w/0型乳液的平均粒径在0.1-8.22 μ m之间，分散系数小于0.1。2.根据权利要求1所述的W/0型疫苗油佐剂制剂，其特征在于，所述W/0型乳液的平均粒径在0.59-8.22 μ m之间，优选0.59-5.0 μ m之间。3.根据权利要求1或2所述的W/0型疫苗油佐剂制剂，其特征在于，所述抗原选自禽流感灭活病毒、新城疫灭活病毒、猪圆环病毒和口蹄疫病毒中的I种或至少2种的组合。4.根据权利要求1-3任一项所述的W/0型疫苗油佐剂制剂，其特征在于，所述乳化剂为亲水亲油平衡值在3.5?6.0之间的表面活性剂； 优选地，所述乳化剂选自Span60、Span80和Span83中的I种或至少2种的组合。5.根据权利要求1-4任一项所述的W/0型疫苗油佐剂制剂，其特征在于，所述稳定剂选自硬脂酸、硬酯酸铝和单硬酯酸甘油酯中的I种或至少2种的组合。6.一种制备权利要求1-5任一项所述的W/0型疫苗油佐剂制剂的方法，包括以下步骤: (1)将含有抗原的溶液作为水相分散于包含白油、乳化剂和稳定剂的油相中，获得w/0型预乳液； (2)将所述W/0型预乳液转移至快速膜乳化的储料罐中，在0.1-2.5MPa压力下过微孔膜，得到所述W/0型疫苗油佐剂制剂。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(I)中水相与油相的体积比为1:1 ?1:10。8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述抗原选自禽流感灭活病毒、新城疫灭活病毒、猪圆环病毒和口蹄疫病毒中的I种或至少2种的组合； 优选地，所述乳化剂为亲水亲油平衡值在3.5?6.0之间的表面活性剂； 优选地，所述乳化剂选自Span60、Span80和Span83中的I种或至少2种的组合； 优选地，所述稳定剂选自硬脂酸、硬酯酸铝和单硬酯酸甘油酯中的I种或至少2种的组入口 ο9.根据权利要求6-8任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(I)中采用均质乳化、超声乳化、机械搅拌或磁力搅拌将所述水相分散于所述油相中，获得W/0型预乳液。10.根据权利要求6-9任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中微孔膜的孔径为 0.5-50 μ m,优选为 0.8-9.2 μ m ; 优选地，所述步骤(2)中过微孔膜反复进行，次数为3-5次。
【专利摘要】本发明涉及一种W/O型疫苗油佐剂制剂及其制备方法。所述制剂为W/O型乳液，其中水相为含有抗原的溶液，油相包含白油、乳化剂和稳定剂；所述W/O型乳液的平均粒径在0.1-8.22μm之间，分散系数小于0.1。所述方法通过将预乳液转移至快速膜乳化的储料罐中，在0.1-2.5MPa压力下过微孔膜，得到所述W/O型疫苗油佐剂制剂。本发明的W/O型疫苗油佐剂制剂尺寸均一、可控，乳液均一性的提高有利于乳滴稳定性增强，奥氏熟化过程比传统方法制备的乳液更慢，进而使其在注射进体内后，抗原突释低，而后期抗原持续释放，诱导快速、高效、持续的免疫应答水平。
【IPC分类】A61K39/39, A61K39/135, A61K39/17, A61K39/145, A61P37/04, A61K39/12, A61K9/107
【公开号】CN105148266
【申请号】CN201410239171
【发明人】马光辉, 王连艳, 苏志国, 刘媛, 杨婷媛, 周炜清
【申请人】中国科学院过程工程研究所
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2014年5月30日