包含PI3Kβ抑制剂和RAF抑制剂以克服癌细胞抵抗的抗肿瘤组合物的制作方法
【专利说明】包含P13K13抑制剂和RAF抑制剂从克服癌细胞抵抗的抗肿 瘤组合物 阳001] 本发明设及用于治疗抵抗至少一种RAF抑制剂的患者的PI3K0抑制剂与RAF抑 制剂的组合、其药物用途W及当给药至患者时监测所述组合功效的方法。
[0002] 憐酸肌醇3-激酶（P13K)是设及诸如细胞周期、细胞运动和细胞调亡等诸多细胞 功能的信号传导分子。PI3K是产生活化若干祀蛋白的第二信使分子的脂质激酶，其包括丝 氨酸/苏氨酸激酶，例如PDKl和AKT(也称为P邸）。PI3K分为S个种类且种类I包含称为 PI3Ka、PI3K0(PI3Ke)、PI3K5 和PI3K丫的四种不同PI3K。 阳00引 2-{2-[牌)-2-甲基-2, 3-二氨-IH-日引噪-1-基]-2-氧代乙基}-6-(吗 嘟-4-基）喀晚-4(3H)-酬（下称化合物（I))是PI3K0同工型的一种选择性抑制剂。在 使用此化合物处理之后，具有活化PI3K/AKT通道的癌细胞（例如缺失PTEN的肿瘤细胞 (憐酸酶及张力蛋白同源基因，还被认为是在多种晚期癌症基因1中突变的憐酸酶及张力 蛋白同源体））通常经由抑制AktW及Akt下游效应子的憐酸化、抑制肿瘤细胞增殖和肿 瘤细胞死亡诱导来产生应答。若干研究显示PI3K0同工型是设及PTEN-缺失肿瘤的致肿 瘤性的PI3K同工型（V.Cedal等人，J.Med.Chem. 2012, 55,4788-4805 和V.Cedal等人， Bioo;rganics&MedicinalQiemistryLetters，22,（2012)6381-6384 ;V.Ce;rtal等人，JMed Chem. 57(2014) :903-20)。
[0004] RAF激酶参与RAS-RAF-MEK-E服信号转导级联，其还称作丝裂原活化蛋白激酶 (MPK)级联。RAF激酶家族的S个成员是A-RAF、B-RAF和C-RAF。使用RAF激酶抑制剂处 理的癌细胞通常经由抑制MEK和E服的憐酸化、下调细胞周期蛋白D、诱导Gl停止来产生应 答，且最终发生细胞调亡。因此，RAF已成为极受关注的用于研发癌症疗法的祀点。 W化]1-丙烷横酷胺，N-巧-[[5-(4-氯苯基）-IH-化咯并巧，3-b]化晚-3-基]幾 基]-2, 4-二氣苯基](下称化合物（II)是RAF激酶的抑制剂。此化合物（下称化合物 (II)，还称为PLX-4032或威罗菲尼（Vemurafenib))是可口服利用的小分子，其经研发用于 治疗具有活化BRAF突变的癌症。更具体地，其针对具有BRAFV600E突变的黑素瘤细胞系 具有明显抗肿瘤效应，但针对具有野生型BRAF并非如此。具有BRAFV600E突变的黑素瘤 代表超过50%的黑素瘤。它们结构性活化丝裂原活化蛋白激酶（MAPK)通路，促进细胞增殖 并预防调亡。
[0006] 在一项近期的威罗菲尼I期临床试验中，81%的具有BRAF突变黑素瘤的患者通过 实体瘤治疗响应评价标准巧esponse Evaluation Criteria in Solid Tumors) (RECIST) 确认经历了至少30%的肿瘤收缩，并且在两名患者中具有完全响应（FI址erty KT等人， N.化gl J Med363:809-819,2010)。
[0007] 然而，尽管存在此类有希望的响应，但已出现了威罗菲尼抵抗。
[0008] 药物抗性是癌症化疗失败的主要原因。抗性可为先前存在的（固有抗性）或由药 物诱导的（获得性抗性）。获得性抗性出现在对于治疗的瞬态响应后，其通常复发。对于祀 向激酶抑制剂的获得性抗性的基因机制通常是影响祀向激酶的突变或祀向信号通路内可 补偿或旁路祀向肿瘤蛋白抑制的其它基因的改变。
[0009] 已研究了癌细胞对于RAF抑制剂的固有抗性。据显示，虽然PTEN表达状态不能 预测对于威罗菲尼生长抑制效应的敏感性，但PTEN缺失/BRAF突变黑素瘤细胞系相比于 表达PTEN的细胞系显示出显著更少的调亡化imH.T.Paraiso等人，CancerRes. 2011; 71:2750-2760)。BRAF突变和PTEN表达沉默的共同出现在人类黑素瘤中相对常见（约 20-30% )O
[0010] 然而，RAF抑制剂抵抗中设及若干机制。事实上，一些BRAF突变/PTEN缺失黑素 瘤细胞系对于RAF抑制剂敏感而一些其它细胞系对RAF抑制剂不敏感。
[0011] 造成对威罗菲尼固有抗性或获得性抗性的机制仍在研究之中。
[0012] 现有数据显示MAPK通路的再活化通过出现BRAF的截短过活形式，NRAS(成神经 细胞瘤RAS病毒致癌基因同源物）或MEK中的继发突变。例如，已确认了在相应预治疗肿 瘤中不存在的在下游激酶MEKl中密码子1221处的活化突变。所述MEKl"2"突变显示出 在体外增加激酶活性并赋予对于RAF抑制的强力抵抗（Ni化ilWagle等人，JClin化COl 29:3085-3096, 2011)。虽然MAPK再活化出现在许多复发病例中，但增加的PI3K信号转导 出现在其它病例中。
[0013] 此外，已描述了在抵抗RAF或MEK抑制剂的黑素瘤中，采用RAF或MEK抑制剂治疗 后TORCl(TOR复合体1)活性仍然维持，尽管在一些情况下强烈抑制了MAPK信号转导。如 通过减少的pS6 (核糖体蛋白S6,当憐酸化时还称作pS6)所测量的响应RAF或MEK抑制剂 的TORCl抑制可有效预测BRAF突变黑素瘤细胞中通过RAF抑制剂诱导的细胞死亡。
[0014] 在体内小鼠模型中，MAPK抑制后的TORCl活性抑制对于调亡诱导和肿瘤响应而 言是必需的。在治疗之前和启动RAF抑制疗法之后获得自具有BRAF突变黑素瘤的患者的 成对活检中，pS6抑制预测了显著改善的无进展生存期（PFS)。可通过连续细针穿刺活检 实时监测此pS6变化，量化pS6成为有价值的生物标记W指导BRAF突变黑素瘤治疗（Ryan B.Corcoran等人，Sci.Transl.Med. 5:196ra98, 2013)。
[0015] 因此，存在对于癌症治疗，特别是黑素瘤治疗的需求，其克服对于RAF抑制剂的抵 抗。还存在提供癌症例如黑素瘤的治疗的需求，所述治疗更有效地抑制肿瘤细胞增殖并增 强肿瘤细胞调亡。还存在最小化对于患者的毒性的需求。
[0016] 特别需要与其它祀向疗法组合使用的RAF抑制剂疗法，其会导致更高效率且不会 实质上增加，或甚至维持或降低通常使用的RAF抑制剂的剂量。
[0017] 还存在提供生物标记W监测癌症治疗功效的需求。
[0018] 本发明的一个目标是提供针对具有抵抗至少一种RAF抑制剂的癌细胞的患者的 治疗。
[0019] 本发明的一个目标是提供针对具有抵抗至少一种RAF抑制剂的癌细胞的患者的 治疗，其克服了对所述至少一种RAF抑制剂的抵抗。
[0020] 本发明的一个目标是提供一种组合，其用于治疗具有抵抗至少一种RAF抑制剂的 癌细胞的患者。
[0021] 本发明的一个进一步目标是提供一种试剂盒W治疗具有抵抗至少一种RAF抑制 剂的癌细胞的患者。
[0022] 本发明的一个目标是提供一种药物W治疗具有抵抗至少一种RAF抑制剂的癌细 胞的患者。
[0023] 本发明的另一目标是提供一种治疗具有抵抗至少一种RAF抑制剂的癌细胞的患 者的方法。
[0024] 本发明的一个目标是提供一种生物标记W及监测治疗具有抵抗至少一种RAF抑 制剂的癌细胞的患者的功效的方法。
[00巧]因此，本发明设及PI3K0抑制剂与RAF抑制剂的组合，其用于治疗具有抵抗至少 一种RAF抑制剂的癌细胞的患者。
[00%] 本发明还设及包含用于其如上所述用途的上述组合的试剂盒，用于同时、分开或 相继给药。
[0027] 本发明还设及包含本发明所述组合的药物组合物，其用于治疗具有抵抗至少一种 RAF抑制剂的癌细胞的患者。
[0028] 本发明还设及一种治疗方法，其包括给药上述组合至具有抵抗至少一种RAF抑制 剂的癌细胞的患者。
[0029] 本发明还设及生物标记W及使用所述生物标记W监测当给药至具有抵抗至少一 种RAF抑制剂的癌细胞的患者时如上所述组合的功效的方法。
[0030] 令人惊奇地，发明人发现RAF抑制剂连同PI3K0抑制剂的组合克服了癌细胞对至 少一种RAF抑制剂的抵抗，特别是在RAF抑制剂抵抗性黑素瘤细胞中，例如对至少一种RAF 抑制剂不敏感的人黑素瘤A2058细胞系。
[0031] 甚至更惊奇地，如上定义的组合显示出对抵抗至少一种RAF抑制剂的细胞系的协 同效应。
[0032] 在一个实施方案中，协同效应理解为组合的效应大于其个体组分的预期加 和效应。更特别地，可通过如R. Straetemans中所述的射线方法设计测定协同效应 度iometrical Journal,47,2005,299-308)。
[0033] 在另一实施方案中，协同效应还可理解为组合的效应大于两个个体组分中的一个 的最佳效应。
[0034] 在另一实施方案中，可根据T.H. CORBETT等人，定义协同为：若组合在治疗上优 于W其最优剂量使用的一种或另一种组分，则所述组合显示治疗协同化H. COR邸TT等人， Cancer Treatment Reports,66,1187(1982))。根据此定义，为证明组合的功效，可能需要 比较所考虑研究中的组合的最大耐受剂量与各单独成分的最大耐受剂量。此功效的量化可 通过例如计算logi。细胞杀灭或任意其它已知方法。
[0035] 在一个实施方案中，关于W下效应中的一项可获得根据本发明的协同：
[0036] -抗增殖活性讯/或
[0037] -促调亡活性。
[0038] 在一个实施方案中，关于S6憐酸化抑制可获得增强效应。"增强效应"或"增强抑 审IJ"是指组合的抑制效应大于两个个体组分中的一个的最佳抑制效应。
[0039] 在一个实施方案中，关于W下效应中的一项可获得根据本发明的协同： 柳4〇]-肿瘤生长抑制（肿瘤停滞）；和/或
[0041]-部分肿瘤消退讯/或；
[00创-完全肿瘤消退。
[0043] 可在对于至少一种RAF抑制剂敏感或具有抗性的细胞系中获得此一或多个效应。
[0044] 本发明的一个优势是提供了用于具有显示RAF抑制剂抵抗的肿瘤（其治疗可能性 很少）的患者的新疗法。
[0045] 本发明的另一优势在于由于如上所述的组合协同效应，可需要更少的各活性成分 剂量W克服RAF抑制剂抵抗和/或可减小药物毒性。
[0046] 在根据本发明各目标的一个实施方案中，PI3K0抑制剂是对PI3K0呈现抑制 效应的化合物。更具体地，它们通常对PI3K0呈现抑制效应而对其它PI3K同工型（即 P13Ka、PI3K5和PI3K丫）具有适中的或无抑制效应。
[0047] 在一个实施方案中，它们选择性针对PI3K0同工型。"选择性PI3K0抑制剂"可 理解为PI3K0抑制剂优先于其它同工型P13Ka、PI3K5和PI3K丫而影响特定PI3K0同工 型的能力。PI3K0选择性抑制剂可具有辨别运些同工型的能力，并从而实质上影响PI3K0 同工型。在一个实施方案中，所述选择性PI3K0抑制剂不是pan-PI3K抑制剂。此PI3K0 同工型选择性相比于pan-PI3K抑制剂可呈现出更好的安全特性（safetyprofiles)。
[0048] 更特别地，在生化和细胞测定中，选择性PI3K0抑制剂可祀向PI3K0同工 型