少一种药物学上 可接受的载体或赋形剂。
[0046] 术语"药学上可接受的"表示所述物质不具有这样的特性，即考虑到将被治疗的疾 病或病症以及各自的施用途径，该特性将会使理性谨慎的医学从业者避免给患者服用该物 质。例如，对于可注射物来说，通常要求这样的物质是基本无菌的。
[0047] 在本文中，术语"治疗有效量"和"有效量"表示所述物质和物质的量对于预防、减 轻或改善疾病或病症的一种或多种症状，和/或延长接受治疗的对象的存活是有效的。
[0048] I.溶瘤病毒
[0049] 已有大量报道显示，在体外实验中，很多病毒会在多种肿瘤细胞中复制并引起肿 瘤细胞死亡，如辛德毕斯病毒、仙台病毒、柯萨奇病毒、单纯性疱疹病毒、细小病毒、腺病毒、 腺相关病毒、脊髓灰质炎病毒、新城疫病毒、水泡性口炎病毒、麻疹病毒、呼肠病毒、逆转录 病毒、牛痘病毒以及流感病毒。此外，已证明，这些病毒对治疗癌症动物模型有效。
[0050] 溶瘤病毒疗法对比传统疗法来说是一种创新性的治疗策略，溶瘤病毒疗法是基于 选择或者设计病毒选择性的在肿瘤细胞中复制并且引起肿瘤细胞死亡的理念。近年来，研 究者陆续发现一些溶瘤病毒利用肿瘤特异性的免疫缺陷来选择性的杀伤肿瘤细胞，其中包 括腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、水泡口炎病毒和单纯性疱疹病毒等。这些溶瘤病毒的临床 前研究也是令人鼓舞的，能够引起不同种类肿瘤退化。
[0051] 近年来，溶瘤病毒抗癌疗法的大规模随机临床试验正在进行，如在黑色素瘤转移 患者中开展的能够编码GM-CSF因子的减毒HSV-1病毒的III期临床试验；在头颈部肿瘤 复发患者人群中开展的检验呼肠病毒与紫杉醇和卡铂联用效果的II期临床试验；以及针 对Sorafenib治疗无效的肝癌患者开展的用于比较JX-594治疗效果和支持疗法治疗效果 的II期随机临床试验等。这些临床试验比较了溶瘤病毒疗法和其他传统的抗癌疗法之间 是否存在协同作用，也探索了转基因溶瘤病毒的免疫调节功能和刺激机体产生抗肿瘤免疫 反应功能对于肿瘤治疗的作用。
[0052] 在本发明中，溶瘤病毒可以是天然的或经改造的病毒。天然病毒例如是Ml病毒、 盖塔病毒、新城疫病毒等。经改造的病毒，在本发明中也称为"工程改造株"，是利用基因 工程等手段对病毒基因进行各种定向操作和改造，从而定向地改变和控制病毒的行为和功 能。对天然溶瘤病毒进行工程改造的目的，包括但不限于，减弱毒性、提高靶向性、改善效 力、增加安全性等。工程改造的手段包括但不限于基因突变（如定点突变）、敲除、外源片段 的插入、冗余片段的缺失等等。现有的大多数溶瘤病毒为经改造的病毒，例如HSV-1病毒、 腺病毒、牛痘病毒等。
[0053] 可利用溶瘤病毒进行抗癌治疗的癌症范围包括实体瘤或血液瘤。在本发明中，可 利用溶瘤病毒进行抗癌治疗的癌症范围选自肝癌、结直肠癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、前列 腺癌、胶质瘤、黑色素瘤、胰腺癌、鼻咽癌、肺癌、胃癌、卵巢癌和白血病。在本发明的一些实 施方式中，所述肿瘤为对溶瘤病毒不敏感的肿瘤。
[0054] II.Epac及其激动剂
[0055] cAMP (环磷酸腺苷）是细胞内重要的第二信使之一，由腺苷酸环化酶（AC)催化 ATP生成，可通过磷酸二酯酶降解。通过改变细胞内cAMP浓度，可调节细胞内多种细胞内信 号转导途径，从而调控蛋白活性、基因表达，实现其生理功能。前列腺素等许多分子结合到 细胞表面的G蛋白偶联受体，激活腺苷酸环化酶，催化三磷酸腺苷（ATP)产生cAMP，生成的 胞内环磷酸腺苷可以被磷酸二酯酶降解，从而使该信号通路去激活。cAMP下游主要由cAMP 依懒性蛋白激酶A (PKA)，cAMP依赖的鸟苷酸交换蛋白（Epac)和cAMP调控的离子通道组 成。
[0056] Epac是一种鸟苷酸交换蛋白，具有cAMP结合结构域和鸟苷酸交换结构域，可以被 细胞内第二信使cAMP激活，从而激活下游的Rap蛋白，发挥许多不同的生物学作用，如控制 肿瘤细胞的粘附、侵袭与转移。
[0057] 本发明意外地发现，激动Epac可以特异性地显著增强溶瘤病毒在肿瘤细胞中的 复制，从而使溶瘤病毒以更高的效率引起肿瘤细胞死亡。发明人发现，Epac直接或间接激 动剂对多种肿瘤细胞增加溶瘤病毒的复制。Epac直接或间接激动剂与溶瘤病毒处理肿瘤细 胞24、48和72小时，时间依赖性地显著增加溶瘤病毒在肿瘤细胞中的复制。因此，当Epac 激动剂与溶瘤病毒联用时，可以显著增强肿瘤治疗的效果。
[0058] 在本发明中，Epac激动剂按作用机制可分为Epac直接激动剂和Epac间接激动剂。 在本发明中，Epac直接激动剂是直接作用于Epac本身以激动其表达的化合物或化合物的 组合；Epac间接激动剂是指激活Epac配体从而激动Epac表达的化合物或化合物组合。
[0059] 因此，cAMP及其类似物为Epac直接激动剂，它们直接结合至Epac的cAMP结合结 构域，从而激动Epac的表达。
[0060] cAMP类似物是指能够模拟cAMP在该信号通路中的作用的任何化合物，在本发明 中其可选自以下cAMP类似物中的一种或多种的组合：双丁酰环磷酸腺苷（db - cAMP)、8 - (4 -硫代氯苯基）-3'，5' -环磷酸腺苷（8 - CPT - cAMP)、3'，5' -环硫代磷酸腺苷（Rp - cAMPS)、2' -氧代-(2 -氨乙甲酰基）-3'，5' -环硫代磷酸腺苷（Rp - 2' - AEC - cAMPS/ Rp - 2' - EDA - cAMPS)、8 - (6 -己二胺基）-3'，5' -环硫代磷酸腺苷（Rp - 8 - AHA - cAMPS)、 琼脂糖凝胶固定的8 - (6 -己二胺基）-3'，5' -环硫代磷酸腺苷〇^-8-六撤-(^10^- Agarose)、8 - (2 -乙二胺基）-3 '，5 ' -环硫代磷酸腺苷（Rp - 8 - AEA - cAMPS)、8 - (2 -乙二 胺基）-2' -氧代-甲基-3'，5' -环磷酸腺苷（8 - AET - 2' - 0 - Me - cAMP)、8 - (6 -己二胺 基）-2' -氧代-甲基-3'，5' -环磷酸腺苷（8 - AHA - 2' - 0 - Me - cAMP)、8 -苄硫基-2' - 氧代-甲基-3'，5' -环硫代磷酸腺苷（Sp - 8 - ΒηΤ - 2' - 0 - Me - cAMPS/〃S - 223〃）、8 - 苄硫基-3'，5' -环硫代磷酸腺苷（Sp - 8 - ΒηΤ - cAMPS/〃S - 220〃）、1 - N -氧基-3'，5' - 环磷酸腺苷（1 - NO - cAMP)、3'，5' -环磷酸腺苷（cAMP)、N - 6 - (2 -氨乙基）-3'，5' -环 硫代磷酸腺苷（Sp - 6 - AE - cAMPS)、8 - (2 - [DY - 547]-氨乙硫基）-3'，5' -环磷酸腺 苷、8 - (6 -己二胺基）-2 -氯-3'，5' -环磷酸腺苷（8 - AHA - 2 - Cl - cAMP)和 8 - (6 - 己二胺基）-3'，5' -环磷酸腺苷（8 - AHA - cAMP)。
[0061] Epac的间接激动剂例如是可以升高细胞内cAMP含量的试剂，例如腺苷酸环化酶 的激动剂或磷酸二酯酶的抑制剂等。
[0062] 腺苷酸环化酶激动剂可激动腺苷酸环化酶，促进由ATP生成cAMP，在本发明中，其 可选自佛司可林（Forskolin)。
[0063] 磷酸二酯酶抑制剂可抑制磷酸二酯酶对cAMP的降解，在本发明中其可选自： 3 -异丁基-1 -甲基黄噪呤（IBMX)、西洛司特（Cilomilast)、罗氟司特（Roflumilast)、 毛地黄黄酮（Luteolin)、二轻丙茶碱（Dyphylline)、略利普兰（Rolipram)、枸橡酸 西地那非（Sildenafil Citrate)、他达拉非（Tadalafil)、伐地那非三水合盐酸盐 (Vardenafil HC1 Trihydrate)、匹莫苯丹（Pimobendan)、GSK256066、PF - 2545920、阿 普斯特（Apremilast (CC - 10004))、西洛他挫（Cilostazol)、甲氛 P比酮（Milrinone)、 阿伐那非（Avanafil)、氨茶碱（Aminophylline)、双啼达莫（Dipyridamole)、多索茶碱 (Doxofylline)和 Deltarasin 中的一种或多种。
[0064] III.药物组合物及施用
[0065] 在本发明中，"药物组合物"是指包含化合物和溶瘤病毒的组合物，其中化合物和 溶瘤病毒以混合形式存在于组合物中。所述组合物一般将被用于人类对象的治疗。然而， 它们也可以被用于治疗在其它动物对象中的相似的或相同的病症。在本文中，术语"对象"、 "动物对象"和类似术语指人和非人类脊椎动物，例如哺乳动物，如非人类灵长类，竞技动物 和商业动物，例如马、牛、猪、绵羊、啮齿类动物，和宠物（如狗和猫）。
[0066] 合适的剂型，部分地取决于用途或给药的途径，例如经口、经皮、经粘膜、吸入 或通过注射（肠胃外）。此类剂型应当使该化合物/溶瘤病毒能够到达靶细胞。其它 因素在本领域中是熟知的，包括需要考虑的事项，诸如毒性和延迟化合物或组合物发挥 其效应的剂型。技术和配方一般可以在The Science and Practice of Pharmacy, 21stedition, Lippincott，Williams and Wilkins, Philadelphia, PA, 2005 (在此引入作为参 考）中找到。
[0067] 载体或赋形剂可以被用于生产组合物。所述载体或赋形剂可以被选择为促进化合 物的给药。载体的例子包括碳酸钙、磷酸钙、各种糖（例如乳糖、葡萄糖或蔗糖）、或淀粉类 型、纤维素衍生物、明胶、植物油、聚乙二醇和生理相容性溶剂。生理上相容性溶剂的例子包 括注射用水（WFI)无菌溶液、盐溶液和葡萄糖。
[0068] 可以通过不同的路径施用组合物或组合物的组分，包括静脉内、腹膜内、皮下、肌 内、经口、经粘膜、直肠、经皮或吸入。在一些实施方式中，优选注射剂或冻干粉针剂。对口服 而言，例如，化合物可以被配制为常规口服剂型，例如胶囊、片剂，以及液体制剂，例如糖浆、 酏剂和浓缩滴剂。
[0069] 对于吸入剂，可以将本发明的组合物或其组分配制为干粉或合适的溶液、悬浮液 或气雾剂。粉末和溶液可以用本领域已知的合适的添加剂配制。例如，粉末可以包括合适 的粉末基质（powder base)如乳糖或淀粉，溶液可以包括丙二醇、无菌水、乙醇、氯化钠和其 它添加剂如酸、碱和缓冲盐。可以经喷雾、栗、喷雾器或雾化器等通过吸入给予这种溶液或 悬浮液。。
[0070] 可以获得口服用途的药物制剂，例如通过将组合物或其组分与固体赋形剂组合， 任选研磨所形成的混合物，以及在加入合适的辅剂之后（如需要）加工颗粒的混合物，从 而获得片剂或糖衣丸。合适的赋形剂特别是，填料例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山 梨醇；纤维素制剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍树胶、甲基 纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠（CMC)和/或聚乙烯吡咯烷酮（PVP:聚维酮 (povidone))。如果需要，可以加入崩解剂，例如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸或它们 的盐，例如藻酸钠。
[0071 ] 作为选择，可以使用注射（肠胃外给药），例如肌内的、静脉内的、腹膜内的和/或 皮下的。对于注射而言，本发明的组合物或其组分被配制为无菌液体溶液，优选在生理相容 的缓冲液或溶液中，例如盐水溶液、Hank溶液或Ringer溶液。另外，组合物或其组分可以 被配制为固体形式，并在使用之前一刻被再溶解或悬浮。也可以生产冻干粉形式。
[0072] 给药也