一种注射用奥沙利铂前体脂质体的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及含有杂环化合物的医药配制品，具体涉及奥沙利钼脂质体。
【背景技术】
[0002] 脂质体（liposome)或称类脂小球、液晶微囊，是一种革巴向药物载体。1971年，英国 Rymen等人开始将其用作药物载体。载药脂质体可通过渗透或被巨嗜细胞吞噬后载体被酶 类分解而释放药物，从而发挥作用。它具有类细胞结构，进入动物体内主要被网状内皮系统 吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺 和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的 毒性。
[0003] 脂质体进入人体后可被人体网状内皮系统吞噬，主要靶向在肝、脾等含网状内皮 系统丰富的器官，对其它部位革巴向性差，存在易被体内的蛋白等破坏而引起渗漏而影响疗 效等问题。
[0004] 当脂质体用键合的亲水性聚合物修饰时，它的物理、化学、生物学稳定性都大大提 高。在此技术中，脂质体的组成中含有聚乙二醇衍生化磷脂（PEG-DSPE)，其作用是阻止血浆 蛋白吸附于脂质体的表面，从而减少单核吞噬细胞的摄取，延长血循环的时间，使得脂质体 能够有效到达病变部位，因此可以更好的发挥疗效，减轻毒性。
[0005] 奥沙利钼（Oxaliplatin)是继顺钼和卡钼后的第三代钼类抗癌药，是一个稳定的 水溶性的钼类烷化剂，其化学名为[(1R，2R)-1，2-环己烷二胺-N，N i ][乙二酸（2-)-0， (V ]络钼，分子式为C8H14N204Pt，分子量397. 3。奥沙利钼对治疗死亡率最高的中、晚期 结（直）肠癌有很好的效果。作为进入临床肿瘤治疗尚属不久的第三代钼类新药，奥沙利钼 具有抗瘤作用确切、广谱的特点，对第一代（顺钼）和第二代（卡钼）无效或耐药的肿瘤也 有一定疗效，并且降低了前二代药物所常有的一些不良反应。奥沙利钼已在肿瘤的化疗上 突现其重要性。奥沙利钼难溶于一般的有机溶剂，在水中溶解度也不大。目前临床上使用 的是其冻干粉针剂。然而，作为抗肿瘤药物的奥沙利钼在作用于肿瘤细胞的同时，也会杀伤 正常细胞，对机体产生不同程度的毒副作用。同时，由于其体内的代谢较快、缺乏靶向性，因 此，寻找适合的载体，通过制剂学的手段，延长奥沙利钼在体内的滞留时间、提高靶向作用、 减少其毒副作用具有重大的临床意义。
[0006] 前体脂质体主要是通过冷冻干燥等形式除去脂质体溶液中的水分，形成脂质前 体，加水后重建成脂质体，可明显提高脂质体的稳定性，目前上市的脂质体制剂多是前体 脂质体。目前，对奥沙利钼脂质体制剂的研究并不多，对于奥沙利钼前体脂质体的专项 研究更少，中国专利CN1775216A公开奥沙利钼脂质体，其采用的处方及制备工艺均为常 规脂质体制备所用，文中未给出所制备的脂质体的载药量，奥沙利钼的包封率也较低较 低，不能满足注射需要，文中提到冷冻干燥，但未提及重建后药物包封率变化，未见授权； 中国专利200310124776. 6, 200710025130. 0中公开了奥沙利钼长循环脂质体，都是采用 PEG2000-DSPE使脂质体具有长循环特性，制备方法未见独特性。W0/2007/099377是用反 相胶束法提高奥沙利钼脂质体的包封率：先将阳离子型药物奥沙利钼与带负电荷的酸性 磷脂一二棕稠酞磷脂酞廿油（DPPG)制成共扼物反相胶束，进一步与空白脂质体混合，通 过膜融合，将药物一磷脂共扼物反相胶束包封于脂质体内，减少药物向外水相渗漏。制备 工艺复杂，难以重现；专利CN101897668也是采用反向胶束法制备奥沙利钼脂质体，且制 备材料采用天然蛋黄磷脂及胆固醇，一定程度上克服了 W0/2007/099377所采用的酸性磷 脂为合成磷脂，价格昂贵的缺点，包封率也较高；但是专利中采用的特定磷脂（磷脂以其 总重量计，其中磷脂酞胆碱或称卵磷脂，，简称PC的重量百分含量为75-90%，磷脂酞甘 油，简称PG和磷脂酸简称PA的重量百分含量之和为10-25)比较难以控制质量；美国专利 US2004022842A1中制备了奥沙利钼脂质体，并接上了 PEG-2000和配基运铁蛋白，提高了脂 质体的稳定性和靶向性；此外，杨美燕的博士论文《奥沙利钼长循环热敏脂质体研究》采用 冻融循环工艺试图提高脂质体的包封率，但结果仅将包封率提高至30,未能很好的解决包 封率低的问题；这些发明中都存在或是载药量、药物包封率低、或是工艺不具有可操作性所 导致的难以工业化生产的问题，尤其是以上所发明的均是脂质体液体制剂，由于药物易于 渗漏，其稳定性差的问题，难以满足临床要求。因此，本领域迫切需要提供一种价廉、工艺简 单、载药量、包封率、稳定性好的制备奥沙利钼脂质体的方法，开发高质量的奥沙利钼前体 脂质体可较好的解决以上问题。
[0007] 对于奥沙利钼，因其水溶性不好，且在一般常用的有机溶剂中不溶，在采用常规处 方及制备方法时，存在载药量低、包封率低、制成脂质体不稳定的缺点。制备的脂质体中药 物在存放过程中会渗漏出来，无法保证质量，难以满足临床要求。透过冷冻干燥制成前体脂 质体是解决稳定性的有效方法。但是，由于奥沙利钼水中溶解度较高，制备成的脂质体冷冻 干燥之后，药物以微晶的形式存在于前体脂质体中，在复溶重建过程中，药物往往会大量泄 漏到外水相去，使得复溶后脂质体的包封率急剧下降，往往重建后的药物包封率在50%以 下。
【发明内容】
[0008] 本发明所要解决的技术问题是提供一种注射用奥沙利钼前体脂质体的制备方法， 该方法所得到的奥沙利钼前体脂质体具有复溶后包封率高的优点。
[0009] 本发明解决上述问题的技术方案如下所述：
[0010] -种注射用奥沙利钼前体脂质体的制备方法，该方法由以下步骤组成：
[0011] a)将奥沙利钼溶于含有辅助溶剂的水溶液中，并使奥沙利钼在所述水溶液中的重 量浓度为〇. 8~1 %，得水相；其中，所述的助溶剂为丙二醇或甘油，该助溶剂在水液中的体 积浓度为30% ;
[0012] b)将磷脂类膜材和两亲膜稳定材料按3 : 1~5 : 1的重量比混合，再加入磷脂类 膜材重量〇~100%的膜流动调节剂胆固醇，得总膜材，将所得总膜材溶解于有机溶剂中， 得到所述总膜材在机溶剂中的重量浓度为1~4%的油相；其中，所述的两亲膜稳定材料为 胆固醇硫酸酯钠、胆固醇磷酸钠、胆固醇磺酸钠和十二烷基磺酸钠中的一种或两种以上；所 述的磷脂膜材为蛋黄磷脂、大豆卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和氢化卵磷脂中的一种 或两种以上；所述的有机述溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙醚或乙酸乙酯；
[0013] C)按按水相：油相=1:2~1:4体积比将步骤b)所得油相加入到步骤a)所得水 相中制成w/ο型乳剂；
[0014] d)挥去有机溶剂并采用透析方法除去游离药物，然后，加入粉针所需的辅料，且， 先在-5~5°C的条件下放置至奥沙利钼以结晶形态析出后，再冷冻干燥制得奥沙利钼前体 脂质体。
[0015] 本发明所述注射用奥沙利钼前体脂质体的制备方法，其中，所述的磷脂膜材优选 大豆卵磷脂；所述的有机述溶剂优选二氯甲烷。
[0016] 本发明所述方法得到的注射用奥沙利钼前体脂质体在使用时可用注射用水复溶， 也可用5%葡萄糖注射液进一步分散。
[0017] 所选冷冻干燥工艺特点是与常规冷冻干燥条件不同，冷冻前，将温度控制在-5~ 5°C 5小时以上，是使制剂中的奥沙利钼以结晶析出，这是根据奥沙利钼的溶解特性所设计 的。由于奥沙利钼在水中的溶解度较大，因此，尽管将其包封于脂质体内，采用冷冻干燥的 手段保证脂质体的稳定性，但是复溶时仍然会有药物从脂质体中扩散到外水相，从而使包 封率明显下降。为解决上述技术能题，本发明巧妙地利用奥沙利钼结晶水中溶解较慢的特 性，在冷冻干燥前先让挥去有机溶剂并除去游离药物的W/0型乳剂在-5°C~5°C温度下放 置至奥沙利钼以结晶形态析出，可将复溶后奥沙利钼的包封率提高到80%以上。
【附图说明】
[0018] 图1~3分别为实施例1的冷冻干燥步骤中所采用的三个不同冷冻干燥曲线，三 幅图中，纵坐标均表示温度，横坐标均表示时间。
[0019] 图4为实施例3的冷冻干燥步骤中所采用的冷冻干燥曲线，图中，纵坐标均表示温 度，横坐标均表示时间。
[0020] 图5为实施例4的冷冻干燥步骤中所采用的冷冻干燥曲线，图中，纵坐标均表示温 度，横坐标均表示时间。
[0021] 图6为实施例5的冷冻干燥步骤中所采用的冷冻干燥曲线，图中，纵坐标均表示温 度，横坐标均表示时间。
[0022] 图7奥沙利钼注射液组血药浓度-时间曲线。
[0023] 图8为奥沙利钼脂质体注射液组血药浓度-时间曲线。
【具体实施方式】
[0024] 实施例1
[0025] 1、处方：
[0026] 大豆卵磷脂 3,60 g 奥沙利怕 1 00 g 胆固醇 MO.g 胆固醇硫酸酯钠 LOOg 乳瑭 u)0()g 1:，2-丙二醇 30 mL
[0027] 2、奥沙利钼前体脂质体的制备：
[0028] a)将1，2-丙二醇与70ml水混合均匀，得浓度为30%的1，2-丙二醇的水溶液，再 将奥沙利钼加入以上溶液中超声溶解，得水相；
[0029] b)将大豆卵磷脂与胆固醇和胆固醇硫酸酯钠混合均匀，再将所得混合物溶解于 300mL的二氯甲烷中，得油相；
[0030] c)将步骤b)所得油相加入到步骤a)所得水相中超声乳化制成W/0型乳剂；
[0031] d)把制成的W/0型乳剂转移至梨形瓶中，置于旋转蒸发仪上于40°C下旋转蒸发除 去二氯甲烷，再通过挤压的方式过孔径为IOOnm的聚碳酸酯膜，然后把挤出后的脂质体进 行透析，得到蓝色乳光透明脂质体溶液；然后，加入乳糖混均，并且，先在-5~5°C的条件下 放置至奥沙利钼以结晶形态析出后，再装入西林瓶并采用图1所示的冷冻干燥曲线进行冷 冻干燥，即得奥沙利钼前体脂质体。
[0032] 3、冷冻干燥曲线对加水重建后包封率影响的实验
[0033] (1)将上述奥沙利钼前体脂质体的制备中的冷冻干燥过程分别按图1、图2和图3 所示的冷冻干燥曲线进行冷冻干燥，得到采用曲线1、曲线2和曲线3所对应的奥沙利钼前 体脂质体；
[0034] (2)实验结果曲线1、曲线2和曲线3所对应的奥沙利钼前体脂质体分别加水重建 检测包封率，结果分别如下表1~3所示。
[0035] 表1奥沙利钼脂质体样品按照曲线1冷冻干燥所得样品加水重建后指标