(1) 按照配比称量原料； (2) 先将纯化水加入真空乳化机中； (3) 再将称量好的壳聚糖混合均匀后放入真空乳化机中，在温度60°C下，搅拌lh，使壳 聚糖、纯化水充分溶解； (4) 过滤除去溶液中固体残留物； (5) 将壳聚糖溶液灌装于包装容器中，辐照灭菌后得产品；或将过滤后的溶液进行湿热 灭菌，之后在无菌车间进行灌装密封得到产品。
[0053] 抑菌试验 用以上实施例1制得的复合壳聚糖液体敷料进行抑菌试验，对照组为四组，分别是分 子量3000、5000、50000的浓度为0. 6%壳聚糖以及已上市销售的壳聚糖抗菌成膜喷剂。
[0054] 将活化后的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌接种至NB，白色念珠菌接种至SDB流体培 养基上，摇床培养24 h后，制成菌液备用。在培养皿内加入灭菌后的营养琼脂，沙氏葡萄糖 琼脂，待冷却凝固后分别加入菌液，涂布均匀。每个平皿中均匀地放置无菌的牛津杯3只。 分别取上述复合壳聚糖液体敷料及四组对照组溶液0.25 ml置于牛津杯中。然后放入培养 箱中37°C培养24 h，观察抑菌圈大小，测量抑菌圈平均直径并计算抑菌率。实验结果如表 1所示。
[0055] 表1复合壳聚糖液体敷料抑菌性能对比表
表1显示复合壳聚糖液体敷料对革兰式阴性菌大肠杆菌、革兰氏阳性菌金黄色葡萄球 菌及白色念珠菌的抑制率都强于对照组分子量3000、5000、50000的壳聚糖以及壳聚糖抗 菌成膜喷剂，证明复合壳聚糖经过多种不同分子量的组合既能增强其对某一种细菌的抑菌 能力，又能增强其抑菌的广谱性。
[0056] 抑制细菌生物膜实验 在模拟人口腔环境的人工口腔内形成4h血链菌生物膜，分别放入以上实施例1制得 的复合壳聚糖液体敷料及分子量3000、5000、50000的浓度为0. 6%壳聚糖，作用时间3、10、 30分钟，然后应用激光共聚焦扫描显微镜和死菌/活菌荧光染色技术相结合，通过对生物 膜厚度和细菌密度进行观测，比较其促进血链菌生物膜表面脱落的作用，对所得数据进行 方差分析。
[0057] 对生物膜厚度进行观测，复合壳聚糖液体敷料和分子量5000的壳聚糖作用效果 相当，作用3分钟时测量这两组厚度只有4h血链菌生物膜厚度的约1/6,作用30分钟则无 法测量数据，厚度太薄；而分量3000和5000的壳聚糖，作用3分钟时测量这两组厚度，分别 是4h血链菌生物膜厚度的约2/5和1/2,作用30分钟可以接近1/4。
[0058] 对生物膜细菌密度(细菌密度用断层扫描每层细菌所占的平均面积表示）进行观 测，复合壳聚糖液体敷料和分子量5000的壳聚糖作用效果相当，作用3分钟时测量这两组 细菌密度只有4h血链菌生物膜厚度的约1/3,作用30分钟则无法显示数据，密度太稀少； 而分量3000和5000的壳聚糖，作用3分钟时测量这两组细菌密度，分别是4h血链菌生物 膜细菌密度的1/2和4/5,作用30分钟都略低于1/2。
[0059] 结果说明四组壳聚糖对血链菌生物膜的脱落都有一定作用，而复合壳聚糖液体敷 料与分子量5000的壳聚糖作用效果最好。
[0060] 临床观察一 以上实施例1制得的复合壳聚糖液体敷料与湿润烧伤膏对II度烧伤创面疗效进行对 比研究，共观察创面小于30%的患者126例，分别用外用湿润烧伤膏(对照组)和复合壳聚糖 液体敷料(实验组）进行对比治疗，两组疗效及随访结果进行了多指标比较，并作组间差异 性t检验，观察结果见表2。
[0061] 表2 :复合壳聚糖液体敷料与湿润烧伤膏疗效比较
从临床观察来看，复合壳聚糖液体敷料与传统治疗方法比起来，有着无可比拟的优势： 几乎没有发热、创面感染、皮肤过敏等并发症；对于深II度创伤可以缩短一周的愈合时间； 更可以减少8倍疤痕，消除1/3的色素沉着。
[0062] 临床观察二 压疮是身体局部组织由于长期受压，血液循环障碍造成局部皮肤组织营养缺乏而引起 的组织坏死，是临床常见的并发症，属于难治性慢性溃疡。在对76例102处压疮用以上实 施例1制得的复合壳聚糖液体敷料(实验组）及庆大霉素(对照组）进行疗效比较研究，结果 见表3、表4。
[0063] 表3 :复合壳聚糖液体敷料与庆大霉素疗效比较
表4 :复合壳聚糖液体敷料与庆大霉素对各期压疮的治愈时间比较
两组实验结果表明，复合壳聚糖液体敷料对各期压疮，不论面积大小、病变严重程度均 有良好的疗效，II期、III期的压疮治愈率分别达100%和92. 9%。与对照组相比，复合壳聚糖 液体敷料组愈合时间显著缩短，只需要对照组一半的时间。
[0064] 以上所述，仅为本发明的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何 熟悉本领域技术的技术人员在本发明公开的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应 涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为 准。
【主权项】
1. 一种复合壳聚糖材料，其特征在于：所述的复合壳聚糖材料包括壳聚糖1、壳聚糖2、 壳聚糖3和壳聚糖4 ;以上四种壳聚糖的质量比为0. 1-3 :0. 1-3 :0. 1-3 :0. 1-3 ;所述的壳聚 糖1为分子量2000-4500范围低分子量壳聚糖；所述的壳聚糖2为分子量4501-10000范围 低分子量壳聚糖；所述的壳聚糖3为分子量10001-40000范围壳聚糖；所述的壳聚糖4为分 子量40001以上范围高分子量壳聚糖。2. 如权利要求1所述的复合壳聚糖材料，其特征在于：所述的复合壳聚糖材料还包括 基质，所述的复合壳聚糖材料是由以下质量百分比的成分组成： 壳聚糖1 0. 1-3%， 壳聚糖2 0. 1-3%， 壳聚糖3 0. 1-3%， 壳聚糖4 0. 1-3%， 基 质余量。3. 如权利要求1所述的复合壳聚糖材料，其特征在于：所述的复合壳聚糖材料可以制 成溶液剂、喷膜、凝胶剂、海绵、无纺布敷料、粉剂或栓剂。4. 如权利要求2所述的复合壳聚糖材料，其特征在于：所述的基质为纯化水、聚乙烯 醇、冰醋酸、三乙醇、甘油、卡波姆或混合脂肪酸甘油酯中的一种或几种。5. 如权利要求2所述的复合壳聚糖材料，其特征在于：所述复合壳聚糖材料的剂型为 溶液剂，其基质由纯化水、聚乙烯醇、冰醋酸、三乙醇胺组成。6. 如权利要求2所述的复合壳聚糖材料，其特征在于：所述复合壳聚糖材料的剂型为 凝胶剂，其基质由纯化水、甘油、卡波姆、冰醋酸、三乙醇胺组成。7. 如权利要求2所述的复合壳聚糖材料，其特征在于：所述复合壳聚糖材料的剂型为 溶液剂，所述的基质是纯化水；所述的复合壳聚糖材料是由以下质量百分比的成分组成： 壳聚糖1 0. 12%， 壳聚糖2 0. 18%， 壳聚糖3 0. 12%， 壳聚糖4 0. 18%， 纯化水余量。8. -种制备如权利要求6所述的复合壳聚糖材料的方法，其特征在于：在基质成分中 甘油的质量百分比为5%-30%，卡波姆的质量百分比为0. 5%-2. 0% ;所述的方法的具体步骤 如下： (1) 按照配比称量原料； (2) 先将纯化水加入真空乳化机中； (3) 加入冰醋酸，甘油后启动搅拌器，使纯化水、冰醋酸和甘油混合均匀； (4) 将称量好的壳聚糖混合均匀后放入真空乳化机中，继续搅拌10-60min，使壳聚糖 充分溶解； (5) 用三乙醇胺调节溶液pH值至6. 5-7. 5 ; (6) 过滤除去溶液中固体残留物，加入卡波姆，开启搅拌器、乳化器、真空开关后乳化 30-90min； (7) 将复合壳聚糖凝胶灌装于包装容器中，辐照灭菌后得产品。9. 一种制备如权利要求7所述的复合壳聚糖材料的方法，其特征在于：所述的方法的 具体步骤如下： (1)按照配比称量原料； 先将纯化水加入真空乳化机中； (3)再将称量好的壳聚糖混合均匀后放入真空乳化机中，在温度30-60°C下，搅拌l_3h，使壳聚糖、纯化水充分溶解； 过滤除去溶液中固体残留物； 将壳聚糖溶液灌装于包装容器中，辐照灭菌后得产品；或将过滤后的溶液进行湿热灭 菌，之后在无菌车间进行灌装密封得到产品。10. 如权利要求1-7任一项所述的复合壳聚糖材料在用于制备烧烫伤、外伤、压力、手 术、感染原因引起的各种皮肤、软组织及粘膜创面的制品中的用途。
【专利摘要】本发明公开了一种复合壳聚糖材料及其制备方法和用途，复合壳聚糖材料包括壳聚糖1、壳聚糖2、壳聚糖3和壳聚糖4；质量比为0.1-3：0.1-3：0.1-3：0.1-3；壳聚糖1为分子量2000-4500壳聚糖；壳聚糖2为分子量4501-10000壳聚糖；壳聚糖3为分子量10001-40000壳聚糖；壳聚糖4为分子量40001以上壳聚糖。本发明配方合理，制备方便，具有广谱抑菌、抑制细菌生物膜、加快损伤愈合并减少疤痕等优点，可以用于烧烫伤、外伤、压力、手术、感染等原因引起的各种皮肤、软组织及粘膜创面，起到保护创面、控制感染、消除炎症、止血、止痛、维持伤口愈合环境、促进伤口愈合并减少疤痕的作用。
【IPC分类】A61K9/08, A61L15/24, A61L15/44, A61P17/00, A61P7/04, A61K9/06, A61P31/04, A61P29/00, A61L15/28, A61P17/02, A61K31/722
【公开号】CN105326853
【申请号】CN201510867401
【发明人】穆小静, 曾令飞, 谭鐔
【申请人】湖北依耀生物医疗有限公司, 杨昌顺
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2015年12月2日