次，合并上层清液。在上清液中加1〇μΙ内标地高辛（lOygAiL) 后过0泌is⑩HLB固相萃取小柱，小柱首先采用3.5mL甲醇活化，3.5mL去离子水平衡，然后 上样，再加1. OmL去离子水洗脱杂质，最后用1. OmL纯甲醇洗脱目标物。洗脱液40°C下氮气 吹干后，100 μL50%甲醇水溶液复溶待测。
[0092] 2. 3对照品溶液的制备
[009引用小鼠空白脑组织配制浓度分别为80,60,40, 20,10, Ing/mL标准工作液按步骤2中脑组织前处理方法处理后待测。
[0094] 2. 4人参皂巧Rg洽量测定标准曲线的建立
[0095] 液相色谱条件：AC卵IYTUPLC⑥邸ΗC18色谱柱（2.lmmX50mm，1. 7μL?，美国 Waters公司）；流动相A为乙腊（含Immol/L氨水），流动相Β为去离子水（含Immol/L氨 水）；脑组织样品干扰杂质成分比血浆样品简单一些，但脑组织中人参皂巧Rgi的含量极 低，所W选择洗脱比较强的梯度来洗脱样品，梯度洗脱：〇~Imin，28~35%A; 1~1. 5min， 35 ~75 %A; 1. 5 ~2. 5min，75 %A;2. 5 ~3min，75 ~28 %A;3 ~4min，28 %A。流速 0. 4mL/min，进样体积5μL柱溫35°C。
[0096] 质谱条件：ESI离子源，负离子模式检测；毛细管电压2.8kv，源溫150°C;脱溶剂气 流速为1000L/化，溫度为450°C;锥孔气流速50L/化，碰撞气流速0. 16mL/min;多反应监测 曲觀）采集模式。人参皂巧雌1定量离子对为799.5957〉637.4817(锥孔电压为52乂，碰撞 能量为22v)，人参皂巧R&定性离子对为799. 5957M75. 4191 (锥孔电压为52v，碰撞能量为 34v);内标地高辛的定量离子对为779. 6530〉649. 5557 (锥孔电压为66v，碰撞能量为32v)， 定性离子对为779. 6530M75. 4506 (锥孔电压为66v，碰撞能量为44v)。
[0097] 用小鼠空白脑组织配制浓度分别为80,60,40, 20,10, Ing/mL标准工作液按步骤2 中脑组织前处理方法处理后进行LC-MS/MS检测，每个标准工作液进样量5μL建立标准曲 线，计算人参皂巧Rgi线性回归方程。检出限实验、定量限实验、回收率实验、日内精密度和 日间精密度实验按常规质谱方法学考察方法实施。
[0098] 2. 5脑组织样品中人参皂巧Rgi含量测定
[0099] 按上述标准曲线色谱条件和质谱条件对经前处理的脑组织样品进行测定，进样量 为5 利用线性回归方程，计算脑组织样品中人参皂巧Rgl的含量。
[0100] 0)实验结果
[0101] 3.IRgi入脑量检测结果
[0102] 利用LC-MS/MS对Rgi组和Rg1+B族维生素联合组小鼠大脑组织中人参皂巧Rgi含 量进行检测。经检测得出各样品中人参皂巧Rgi浓度，并据脑组织重量换算成质量含量，经 定量分析发现人参皂巧Rgi入脑量较低，联合组小鼠大脑组织中Rgi含量极显著高于单一给 药的Rgi组（P< 0. 01即具有极显著差异），提高到了 6倍，如图4、图5与表2所示，图4为 Rgl组各脑组织样品Rgl总离子流色谱峰图；图5为Rgl+B族维生素组各脑组织样品Rgl总 离子流色谱峰图。同时结合Rgi入血量的检测数据能发现，Rgl+B族维生素组与Rg1组相比 入脑量与入血量的比例从14. 5%提升到了 3. 9%。
[0103] 表2B族维生素对人参皂巧Rgl入脑量的影响（?±没η= 10)
[0104]
[0105]注：与Rgl组相比*表示有显著差异（Ρ<0. 05)，**表示有极显著差异（Ρ<0. 01)
[0106] 3. 2线性关系考察
[0107] 用小鼠空白脑组织配制浓度分别为80,60,40, 20,10,Ing/mL标准工作液，按脑组 织前处理方法处理后进行LC-MS/MS检测，每个标准工作液进样量5μL建立标准曲线，计 算人参皂巧Rgl线性回归方程。测得人参皂巧Rg1在1~80ng/血范围内呈良好的线性关 系r= 0. 999055(η= 6)。
[010引 3. 3检出限和定量限实验
[0109] 将低浓度的标准工作液W小鼠空白脑组织提取液稀释经前处理后测得该方法检 出限为 0. 25ng/mL(S/N= 3)，定量限为 0. 8ng/mL(S/N= 10)。
[0110] 3. 4回收率实验
[0111] 利用小鼠空白脑组织进行50ng/mL，Wng/mL，2. 5ng/mL3个添加水平的回收实 验，经如上所述的脑组织前处理方法处理后，按本实验方法中的液相和质谱条件进行检测， 测得回收率为85 %~96%。
[0112] 3. 5日内精密度和日内精密度实验
[0113]进标准工作液5μ以连续重复进样6次，据峰面积计算RSD为2. 2%，可见日内精 密度良好。同一标准工作液连续Ξ天在同一时间内进样5μ以据峰面积计算RSD为4. 8%， 可见日内精密度也良好。
【主权项】
1. 一种人参皂苷组合物，其特征在于，包括：人参皂苷与维生素。2. 根据权利要求1所述的人参皂苷组合物，其特征在于，所述人参皂苷为人参皂苷 Rg1〇3. 根据权利要求1所述的人参皂苷组合物，其特征在于，所述维生素为B族维生素。4. 根据权利要求1任意一项所述的人参皂苷组合物，其特征在于，所述人参皂苷与维 生素的质量比为（20~300) : (40~775)。5. 根据权利要求1所述的人参皂苷组合物，其特征在于，所述维生素为维生素8i、维生 素B2、维生素B3、维生素B5、维生素B6、维生素B7、维生素B9与维生素B12中的一种或多种。6. 根据权利要求5所述的人参皂苷组合物，其特征在于，所述人参皂苷、维生素Bi、维 生素b2、维生素4、维生素4、维生素^、维生素&、维生素b9与维生素b12的质量比为（20~ 300) : (5 ~40) : (5 ~50) : (20 ~550) : (8 ~80) :2 ~50) : (0· 05 ~0· 5) : (0· 1 ~4): (0. 002 ~0. 15)。7. 根据权利要求5所述的人参皂苷组合物，其特征在于，所述人参皂苷、维生素Bi、维 生素b2、维生素4、维生素4、维生素^、维生素&、维生素b9与维生素b12的质量比为（50~ 300) : (5 ~40) : (5 ~50) : (20 ~550) : (8 ~80) : (2 ~50) : (0· 05 ~0· 5) : (0· 1 ~4): (0. 002 ~0. 15)。8. 根据权利要求5所述的人参皂苷组合物，其特征在于，所述人参皂苷、维生素Bi、维 生素b2、维生素4、维生素4、维生素^、维生素&、维生素b9与维生素b12的质量比为（150~ 300) : (15 ~30) : (10 ~40) : (45 ~400) : (8 ~80) : (5 ~50) : (0· 05 ~0· 5) : (0· 4 ~4): (0· 005 ~0· 15) 〇9. 权利要求1~8任意一项所述的人参皂苷组合物在制备治疗心血管疾病药物中的应 用。10. 根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述治疗心血管疾病药物包括药物赋 形剂或载体与人参皂苷组合物；所述治疗心血管疾病药物的制剂形式为液体制剂、片剂、栓 剂、颗粒剂、冲剂、胶丸、胶囊剂、缓释剂、滴丸剂、软膏剂或口崩制剂。
【专利摘要】本发明提供了一种人参皂苷组合物，包括人参皂苷与维生素。与现有技术相比，本发明利用维生素与人参皂苷联用，人参皂苷常以被动扩散透膜，生物利用度低，维生素是参与体内糖、蛋白质、脂肪和能量代谢的重要辅酶，其可通过影响细胞代谢从而提高人参皂苷的吸收，提高人参皂苷的生物利用度。
【IPC分类】A61K31/714, A61P9/00, A61K31/4188, A61K31/197, A61K31/525, A61K31/704, A61K31/51, A61K31/519, A61K45/06, A61K31/4415, A61K31/455
【公开号】CN105412933
【申请号】CN201610023908
【发明人】郑培和, 陈银彬, 王英平, 侯微, 肖盛元, 王佳, 郑斯文
【申请人】中国农业科学院特产研究所
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2016年1月14日