磁性尼莫地平脂质体及其制备方法
【专利说明】
[0001 ]技术领域本发明涉及一种药物的磁性脂质体及制备方法。
【背景技术】
[0002]帕金森病已经成为老年人第三大健康杀手，且年轻化趋势越来越严重。尼莫地平是二氢吡啶类Ca2+拮抗剂，可以阻止Ca2+进入细胞、抑制平滑肌收缩扩张血管，抑制脑内过氧化，减少自由基的产生，从而保护脑神经元，为帕金森病的预防、治疗、延缓提供了一条新的思路。但尼莫地平在水中极低的溶解度，不利于人体对该药物的吸收，生物利用率低，临床上用乙醇作溶剂极易对血管产生刺激性，限制了其药理作用的充分发挥。而且血脑屏障上皮细胞间的紧密连接使药物很难渗透大脑，极大的阻碍了药物进入大脑发挥药效，显著增加了临床对帕金森病治疗的难度。
[0003]近年来，脂质体作为一种载药系统被广泛研究，它可以提高药物的稳定性、减少用药量、增加药物水溶性和缓释性、易通过血脑屏障等。但由于脂质体靶向分布不足，其应用程度受到限制。磁性纳米材料(如:Fe304)由于小的粒径、生物相容性好和超顺磁性等优势在药物传输系统中得到广泛应用。因此，以脂质体为基础的靶向技术得到广泛研究。磁性脂质体载药系统可以在外界磁场作用下携带药物快速到达靶向位点，使靶部位达到较高药物浓度。因此，磁性脂质体载药尼莫地平有望在保护脑神经元、减少帕金森发病机率中发挥至关重要的作用。
[0004]在临床应用中，多采用尼莫地平的30%乙醇溶液注射给药，应用时往往需要稀释，导致尼莫地平析出，治疗中断，药品报废，存在安全性方面的隐患等。此外，目前磁性脂质体的制备主要是将磁性纳米粒子和药物一起包裹于脂质体中，导致药物相对空间变小，包封率低。而且将磁性粒子包封于脂质体，这就对磁性纳米粒子尺寸和性质有严格要求，极大限制了磁性脂质体的广泛应用。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种制备方法简单、重复性高、靶向性强，且易穿越血脑屏障到达脑组织的Fe304磁性尼莫地平脂质体及其制备方法。
[0006]本发明的方法主要是以乙醇注入法制备尼莫地平纳米脂质体;共沉淀法制备磁性纳米粒子，制备时在溶液中加入聚乙二醇-2000 (PEG-2000)，从而形成水溶性、单分散的聚乙二醇修饰的Fe3(k纳米粒子;将尼莫地平脂质体和聚乙二醇修饰的Fe304纳米粒子在特定条件下孵育，得到靶向性强，血脑屏障通过率高的磁性尼莫地平脂质体。
[0007]本发明的Fe304磁性尼莫地平脂质体是一种由聚乙二醇修饰的Fe304纳米粒子结合到载药脂质体表面，直径为100?200nm左右，形貌规则，并在脂质体表面有黑色磁性粒子，形成具有磁靶向且易通过血脑屏障的磁性纳米脂质体。
[0008]上述Fe304磁性尼莫地平脂质体的制备方法如下:
[0009](1)将尼莫地平、大豆卵磷脂和胆固醇按质量比1:20?30:2?8比例磁力搅拌溶于无水乙醇中，得到脂质乙醇溶液;按每毫升无水乙醇中加入上述三种混合物的量为11.5?19.5mg；
[0010](2)按脂质乙醇溶液与水化介质磷酸缓冲液的体积比为1:2?3，将步骤(I)获得的脂质乙醇溶液逐滴滴入40?50°C的水化介质磷酸缓冲液中，滴加过程中磁力搅拌器缓慢搅拌，得到脂质体悬液;所述水化介质磷酸缓冲液的浓度为0.1Μ、ρΗ值为6.5;
[0011](3)将步骤(2)的脂质体悬液旋蒸或搅拌I?2小时，去除无水乙醇，得到尼莫地平纳米脂质体溶液，4°C保存备用；
[0012](4)将FeSO4.7H20和FeCl3.6H20按摩尔比为1: 2的比例溶于超纯水中，加入聚乙二醇-2000，加入量为能形成Fe3O4的质量为10?20%，50°C水浴超声下滴加lmol/L NaOH溶液，直至溶液pH为11?12，将溶液置于80°C水浴熟化15min，磁分离，水和乙醇交替洗涤至溶液中无Cl—。将溶液50mT真空，-103°C冷冻干燥48h，即得固态聚乙二醇-2000修饰的Fe3O4纳米粒子；
[0013](5)将I?3mg Fe3O4纳米粒子溶于ImL超纯水中超声分散，再将该溶液与步骤(3)中脂质体溶液按1:1?3的体积比混勾，置于摇床20?30°C，100?12Ormp，孵育2?4h，即得磁性尼莫地平脂质体。
[0014]本发明与现有技术相比具有如下优点:
[0015]1、本发明主要解决了药物难以通过血脑屏障到达脑组织的问题。制备的磁性尼莫地平脂质体具有理想的形貌，包封率可达93%以上，具有较好的磁响应性，可在外磁场作用下通过血脑屏障，提高药物的靶向给药。所以本发明既提高了靶向脂质体中药物的稳定性又增加了药物靶向性，提高治疗效果。
[0016]2、所选材料均具有很高的生物相容性，产品可用于生物医学领域。
[0017]3、本发明在常温、常压及温和条件下完成，制备方法操作简单，反应易控制，重复性高，产率高。
【附图说明】
[0018]图1是本发明例I所得磁性尼莫地平脂质体透射电子显微镜TEM图。
[0019]图2是本发明例2所得磁性尼莫地平脂质体EDAX能谱图。
[0020]图3是本发明例3所得尼莫地平原药组和磁性尼莫地平脂质体组脑组织中药物含量图。
【具体实施方式】
[0021]实施例1
[0022]取2mg尼莫地平(购自南京泽朗生物科技有限公司)、40mg大豆卵磷脂(购自沈阳天峰生物制药有限公司)和4mg胆固醇(购自天津市大茂化学仪器供应站)磁力搅拌溶解于4mL无水乙醇中，即得脂质乙醇溶液。将脂质乙醇溶液逐滴滴入40°C的SmL水化介质磷酸缓冲液(Ο.ΙΜ,ρΗ 6.5，)中，滴加过程中磁力搅拌器缓慢搅拌，旋转蒸发Ih去除无水乙醇，得到尼莫地平纳米脂质体溶液，4°C保存备用；
[0023]将FeSO4.7H20和FeCl3.6H20按摩尔比为1: 2的比例溶于超纯水中，加入0.069g聚乙二醇-2000，50°C水浴超声下滴加lmol/L NaOH溶液，直至溶液pH为11。将溶液置于80°C水浴熟化15min，磁分离，水和乙醇交替洗涤至溶液中无Cl—，将溶液50mT真空，-103°C冷冻干燥48h，得到0.76g固态聚乙二醇-2000修饰的Fe3O4纳米粒子。
[0024]将ImgFe3(k纳米粒子溶于ImL超纯水中超声分散，再与上述尼莫地平纳米