[0030] 图I LPS诱导的RAW264.7细胞的NO释放水平 [0031] 图2 LPS诱导的RAW264.7细胞的PGE2释放水平
[0032]图3 LPS诱导的细胞形态改变。该图为通过倒置显微镜获得的LPS刺激8小时后的 培养细胞图像，获得的使用装备有摄像机倒置相差显微镜。形态改变的细胞进行计数用细 胞计数器(上图），图像用NIH图像分析软件（下图）捕获。与对照组相比较，#P<0.01，*P< 0.05〇
【具体实施方式】
[0033]实施例1刺参苷M的活性研究
[0034] 1 材料
[0035] 1.1药物与试剂
[0036]刺参苷M，按照现有文献技术分离，并经四大光谱鉴定，确证其结构。
[0038] 1.2二甲苯致小鼠耳肿法
[0039] 昆明种小鼠，雄性，按体质量随机分为6组:模型组（蒸馏水，10mL/kg)，吲哚美辛 1]1(1〇11161:11&〇;[111011^/1^阳性对照组，刺参苷]\1(缩写]\1呢）生药1〇11^、2〇11^和4〇11^/1^组，每组8 只。小鼠均ig给药，给药体积均为lOmL/kg，1次/d，连续给药5d。末次给药后Ih，每只小鼠左 耳廓两面均匀涂抹100 %二甲苯〇. 〇5mL致炎，右耳作对照。30min后脱颈椎处死小鼠，沿耳廓 基线剪下双耳，用直径8mm打孔器分别在左右耳的同一部位冲下圆形耳片，电子天平称质 量，以两耳片的质量差作为耳肿胀度，计算肿胀抑制率。
[0040] 耳肿胀度=左耳片质量一右耳片质量
[0041] 耳肿胀抑制率=(模型组肿胀度一给药组肿胀度)/模型组肿胀度X 100%
[0042] 1.3角叉菜胶致大鼠足跖肿胀法
[0043] SD大鼠，雌雄各半，分组及给药方法同上。大鼠均ig给药，给药体积均为IOmL/kg，1 次/d，连续给药5d。末次给药后30min，在每鼠右后足跖注射1 %角叉菜胶30μ1致炎。用容积 法分别测定各组大鼠致炎前及致炎后〇、2、4、6h的右后足跖容积，6h后处死大鼠，计算足肿 胀度。
[0044] 肿胀度=(致炎后足跖容积一致炎前足跖容积)/致炎前足跖容积
[0045] 1.5刺参苷M抗NO和PGE2生成测定
[0046] RAW264 · 7细胞株按常规方法复苏，培养于含10 %胎牛血清、1 %双抗的DMEM高糖培 养基中，置于95 %湿度、5 % C02、37°C的细胞培养箱中培养。倒置显微镜下观察细胞，取对数 生长期细胞，用〇 . 25 %胰蛋白酶消化后，以无酚红的DMEM高糖完全培养基制成细胞悬液。 1^￥264.7巨噬细胞被培养1811后，采用不同浓度的刺参苷1(0、50、100、200、30(^8/1^)处理 30min，加入LPS(lug/mL)再培养24小时。NO和PGE2的分别采用Griess法和酶免疫评价法。刺 参苷M处理的RAW264.7细胞和未加入LPS的细胞，培养8小时后，在显微镜下观察，并通过细 胞计数器计算形态改变的细胞数量。
[0047] 1.6统计学处理
[0048] 每组数据都以平均值土标准偏差Gi1?)表示，采用SPSS 11.0软件进行统计学处 理，组间比较采用单因素方差分析。
[0049] 2.结果
[0050] 2.1对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
[0051 ]与模型组相比，刺参苷M高、中剂量(40、20mg/kg)组均显著抑制二甲苯致小鼠耳廓 肿胀(P<〇.01)，且耳肿胀抑制率与剂量呈正相关；吲哚美辛l〇mg/kg对二甲苯致小鼠耳廓 肿胀也具有显著抑制作用（P<〇.01);刺参苷M高剂量作用强度与吲哚美辛相当，无统计学 差异(P>0.05)。结果见表1。
[0052] 表1刺参苷M对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(?±χ,η = 8)
[0054] 与模型组相比：*Ρ<〇·〇5,林Ρ<0·01
[0055] 3.2对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响
[0056]与模型组相比，刺参苷M高、中剂量(40、20mg/kg)组对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀 有明显抑制作用(P<〇.05)，且具剂量依赖性；吲哚美辛10mg/kg给药组也显著抑制角叉菜 胶所致大鼠足跖肿胀(P<〇.01)。刺参苷M高剂量组给药后4h及中剂量组给药后2h大鼠足肿 胀度与对照组大鼠足肿胀度相比，显著降低(P<〇〇5)。结果见表2。
[0057] 表2:刺参苷M对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响G± ^ ,n = 8)
[0059] 与模型组相比：*Ρ<〇·〇5,林Ρ<0·01
[0060] 3.3刺参苷M对NO和PGE2的抑制效应
[0061 ] 刺参苷M对调节炎症反应初步调查，通过测定LPS诱导的RAW264.7细胞NO和PGE2产 生效应，结果表明，刺参苷M能明显（P〈0.01)抑制LPS调节的NO产生，并且呈剂量依赖关系 (图1)。刺参苷M也能呈剂量依赖关系的调节LPS诱导的PGE2产生（图2)。相似的是，刺参苷M 能抑制LPS诱导的细胞形态改变，抑制率达90% (见图3)。
[0062]研究结果表明，本实验采用的二甲苯致小鼠耳肿胀和大鼠角叉菜胶足肿胀是以水 肿和渗出为主的急性炎症反应，实验结果表明刺参苷M能明显减轻二甲苯所致小鼠耳廓的 肿胀，能明显抑制角叉菜胶所致的大鼠足跖肿胀，而且呈一定的剂量依赖关系。刺参苷M能 够明显抑制炎症介质NO和PGE2的分泌和表达，并且也能够抑制RAW264.7细胞的形态学变化 以及C0X-2蛋白表达水平。
[0063]综上所述，刺参苷M对体内外炎症模型都具有明显的抑制作用，为进一步开发利用 提供了科学依据。但其抗炎作用机制还不清楚，有待进一步进行抗炎作用机制研究。
[0064]实施例2本发明药物制剂的制备
[0065] 取刺参苷M，加入适量淀粉、糊精混勾，制备颗粒，即得颗粒剂。
[0066] 实施例3本发明药物制剂的制备
[0067] 取刺参苷M，加入适量水、植物油和表面活性剂，混匀，制备外用乳剂。
【主权项】
1. 刺参苷Μ或其异构体或者它们药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物或者氘代物在制 备具有抗炎、消肿作用的药物中的用途。2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于:所述异构体为差向异构体。3. 根据权利要求2所述的用途，其特征在于:所述刺参苷Μ的差向异构体为刺参苷Ν。4. 根据权利要求要求1所述的用途，其特征在于:所述药物是抑制炎症反应的药物。5. 根据权利要求要求4所述的用途，其特征在于:所述药物是抑制脂多糖所致炎症反应 的药物。6. 根据权利要求要求1或5所述的用途，其特征在于:所述药物是抑制脂多糖所致细胞 形变的药物。7. 根据权利要求要求1或4所述的用途，其特征在于:所述药物是治疗或缓解与炎症反 应相关疾病的药物。8. 根据权利要求1~7任意一项所述的用途，其特征在于:所述药物为口服或外用制剂。9. 一种抗炎消肿的药物组合物，其特征在于:它是以刺参苷Μ或其异构体或者它们药学 上可接受的盐、水合物或溶剂合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制 备而成制剂。10. 根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于:所述制剂为口服或外用制剂。
【专利摘要】本发明提供了刺参苷M或其异构体或者它们药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物或者氘代物在制备具有抗炎、消肿作用的药物中的用途。本发明研究发现，刺参苷M对体内外炎症模型都具有明显的抑制作用，为进一步开发利用提供了科学依据。
【IPC分类】A61K31/704, A61P7/10, A61P29/00
【公开号】CN105434449
【申请号】CN201510886038
【发明人】张志锋, 吕露阳, 刘圆, 曾锐, 李姗, 罗培
【申请人】西南民族大学, 张志锋
【公开日】2016年3月30日
【申请日】2015年12月5日