草苔虫总内酯抗老年痴呆活性及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及医药技术领域，具体设及草苔虫总内醋的抗老年痴呆活性及其在医药 领域中的应用。
【背景技术】
[0002] 海洋苔薛动物俗称苔薛虫、海席子、假珊瑚及苔虫，属真体腔动物，是海洋底栖动 物的重要组成之一。其种类很多，大约有4000多种，最常见的是总合草苔虫。总合草苔虫 Bugula neritina Linnaeus在世界水域分布广泛，我国沿海从勸海到南海的西沙群岛的多 盐水域都有。该群体呈红褐色或紫褐色，呈草丛状，高40~150mm，每支有个虫两列，交互排 列。其群体常附着在海带、石花菜、贝类W及船底、码头、航标等水下设施上，影响海洋养殖 和国防、海洋交通，是海洋主要污损生物之一。直到1968年，美国亚利桑那州立大学化ttit 研究小组对海洋无脊椎动物和脊椎动物的广泛研究中，首次发现了总合草苔虫的抗癌活 性。经过十多年的努力，1982年化ttit研究小组成功地从采集于加利福尼亚海域的总合草 苔虫中分离得到第一个具有抗癌活性的单体bryostatin 1，并用X衍射法确定了它的结构， 是大环内醋类化合物。从此，该小组一直致力于总合草苔虫中具有抗癌活性大环内醋成分 的研究。目前为止，已从中得到20个活性单体，即b巧0S化tin 1~2(KLin册，Yi YH，Li WL, Yao XS'Wu HM.Chinese J.Marine Drugs 1998,65,l;Pettit GR.Fortschritte der Chemie Organischer Naturstoffe, 1991,57,153) cBryostatin 1 和bryostatin 4经美国 国立癌症研究所(NCI)的生物鉴定，已投入临床试验。此类化合物具有毒性低、活性强的特 点。它作用于蛋白激酶C(PKC)的新颖的作用机制，激发了研究者对其作用机制的广泛深入 的研究。鉴于草苔虫有限的天然资源和草苔虫内醋的微少含量，人们对其天然资源进行的 广泛的调查。
[0003] 老年痴呆症(主要为阿尔茨海默病)是一种进行性发展的致死性神经退行性疾病， 临床表现为认知和记忆功能不断恶化，日常生活能力进行性减退，并有各种神经精神症状 和行为障碍。运种病在任何年龄都能出现，但是通常在60-70之间出现。当被诊断出患有该 病时，大约还能存活3.3年。患病率研究显示，60岁人群的患病率为1 %，年龄每增加5岁，患 病率增加2倍。目前我国正加速进入老龄化社会，据有关专家预测，到2020年我国60岁W上 人口将达到4亿，老年痴呆症病人将有1000万人W上。最新报道，上海目前的老年痴呆症患 者就已有12万人。
[0004] 老年痴呆症是一组病因未明的原发性退行性脑变性疾病，多起病于老年期，潜隐 起病，病程缓慢且不可逆，临床上W智能损害为主。病理改变主要为皮质弥漫性萎缩，沟回 增宽，脑室扩大，神经元大量减少，并可见老年斑(SP)，神经原纤维结(NFT)等病变，胆碱乙 酷化酶及乙酷胆碱含量显著减少。老年痴呆症发病病因目前还不十分清楚，而且有多种亚 型，而发生病理变化的器官除大脑外还可能有其他器官。目前公认的发病机制主要有两种： 1.由于淀粉样前蛋白的异常导致蛋白成分漏出细胞膜，导致神经元纤维缠结和细胞死亡， 基因位于21号染色体。AD患者脑部乙酷胆碱明显缺乏，乙酷胆碱醋酶和胆碱一酷转移酶活 性降低，特别是海马和颠叶皮质部位。2.与载脂蛋白E(AP0-E4)的基因有关。
[0005] 由于老年痴呆症目前确切病因尚未得到充分阐明，治疗方法主要是通过药物作用 于不同的神经递质系统，增强中枢神经系统的高级活动，减轻疾病过程中出现的各种症状， 延缓痴呆的进一步发展。临床上常用的治疗主要通过抑制乙酷胆碱醋酶来提高患者体内乙 酷胆碱含量，改善老年痴呆症的临床症状。目前临床使用的治疗药物多为乙酷胆碱醋酶抑 审IJ剂(如他克林、多奈赃齐、卡己拉汀、力烂他敏、石杉碱甲），NMDA受体括抗剂(美金刚)和抗 氧化剂(司来吉兰、维生素 E、稱黑素、银杏提取物)等W认知功能障碍的药物治疗较多，但临 床疗效均不够确切、口服吸收差、不易透过血脑屏障、特异性不强、或毒副作用大、特别是治 标不治本等缺点。研究开发新型高效的抗老年痴呆的新药是目前医药保健中迫切需要解决 的课题。但目前在运一研究领域与国外同类研究还有较大差距。从天然产物中寻找发现抗 老年痴呆的化学成分是天然药物研究中的一个新的热点和发展方向。特别是海洋天然产 物，由于具有特殊的化学结构和生理活性，从中发现抗老年痴呆的化学成分将具有更广阔 的前景。
[0006] 有关草苔虫总内醋的抗老年痴呆活性，国内外尚未见有过报导。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供草苔虫总内醋及其制备方法;本发明的另一目的在于提供 草苔虫总内醋的新的医药用途。
[0008] 本发明的第一方面，提供了一种草苔虫总内醋，所述的草苔虫总内醋W总合草苔 虫为原料，经常规方法提取纯化，得到草苔虫总内醋。
[0009] 本发明所述的草苔虫总内醋，经高效液相层析分析，主要含有草苔虫内醋5、10、18 和4等10多种内醋成分，其中W草苔虫内醋4的含量最高。Bryostatin 4占草苔虫总内醋 60%W上(质量百分比）。
[0010] 较优的，总合草苔虫采集自我国南方海域。
[001。 本发明的第二方面，提供一种草苔虫总内醋的制备方法。
[0012] -种草苔虫总内醋的制备方法，其特征在于，所述的草苔虫总内醋的制备方法如 下：
[0013] 新鲜采集的总合草苔虫Bugula neritina Linnaeus,用95%乙醇室溫浸提，将乙 醇提取液，减压回收乙醇，得浸膏；
[0014] 浸膏用90%甲醇悬浮分散，用正己烧萃取，弃去正己烧萃取物;含水甲醇层再加水 成80 %甲醇水溶液，用αη4萃取，得αη4萃取物；
[0015] 0^4萃取物经200~300目硅胶柱层析得活性组分;再经过S邱hadex LH-20凝胶柱 层析，WC出Cl2: MeOH( 1:1)洗脱，流速60mL/h，得到活性组分A和活性组分B;
[0016] 对活性组分A和活性组分B分别进行两次凝胶柱层析，第一次W化xane:CH2Cl2: MeOH(4:5:1)洗脱，第二次WHexane: C出CI2:MeOH( 10:10 :1)洗脱，分别得到活性组分C和活 性组分D;
[0017] 活性组分C和活性组分D进行0DS快速柱层析，W50%、80%Me0H梯度洗脱，得草苔 虫总内醋。
[0018] 在本发明的一个优选实施例中，所述的草苔虫总内醋的制备方法，具体如下：
[0019] 新鲜采集的总合草苔虫Bugula neritina Linnaeus原料，用95%乙醇室溫浸提一 周，共提取4遍，合并乙醇提取液，减压回收乙醇，得浸膏。浸膏用90%甲醇悬浮分散，用正己 烧萃取5次，得正己烧萃取物，经体外抗癌活性筛选无活性，弃去。含水甲醇层再加水使成 80 %甲醇水溶液，用αη4萃取5次，得αη4萃取物，为活性部位。该活性部位经快速硅胶柱层 析（200~300目）得活性组分。再经过Se地adex LH-20凝胶柱层析，WC此Cl2:Me0H(l: 1)洗 脱，流速60mL/h，得到两个活性组分A和B。对运两个活性组分分别进行两次凝胶柱层析，依 次 WHexane-CH2Cl2-Me0H(4:5:1)和Hexane : CH2CI2:MeOH( 10 :10:1)洗脱，分别得到纯度更 高、活性更强的两个组分C和DX、D两组分仍含有较多的绿色素，故将两者合并，进行0DS快 速柱层析，W50%、80%MeOH梯度洗脱，得浅黄色总草苔虫内醋(BRYS)。
[0020] 所述的95%乙醇用量为原料的20-30倍(重量比）。
[0021] 所述的正己烧萃取5次，每次用量4-化。
[0022] 所述的αη4萃取5次，每次用量1-化。
[0023] 本发明的第Ξ方面，提供上述的草苔虫总内醋的新的医药用途。
[0024] 本发明提供了草苔虫总内醋在制备预防或治疗老年痴呆药物或保健品中的应用。
[0025] 本发明所述的草苔虫总内醋在制备预防或治疗老年痴呆药物或保健品中的应用 中，所述的药物或保健品中：草苔虫总内醋作为唯一活性成份，或包含草苔虫总内醋的组合 物。
[0026] 所述药物或保健品中，草苔虫总内醋的含量为0.1-99wt%，优选含量为0.5-90wt%。
[0027] 所述药物中，草苔虫总内醋、包含草苔虫总内醋的药物组合物可W和药剂学上的 常规药用辅料制成药物制剂。
[0028] 所述的药物制剂可W是片剂、颗粒剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸、注射剂、粉 针剂，或气雾剂等。
[0029] 本发明研究发现，草苔虫总内醋具备抗老年痴呆生物活性：
[0030] 雄性ICR小鼠随机分为9组，每组小鼠6只。设对照组，BOTS药物设:0.0025mg/kg， 0.005mg/kg，0.01mg/kg组，抗衰老实验阳性药物(维生素 E)。服和维生素 E注射给药，共60 天。末次给药Ih后，全部小鼠做水迷宫实验，持续一周，记录小鼠找到平台的时间。在小鼠水 迷宫实验中，草苔虫总内醋(BRYS)与模型组相比，中浓度组和高浓度组能显著缩短游泳时 间。一周后，按照试剂盒说明书处理样品，检测脑匀浆乙酷胆碱醋酶活力，乙酷胆碱转移酶 含量和血清SOD活力，丙二醒含量，谷脫甘肤过氧化物酶活力，乙酷胆碱含量，谷脫甘肤含 量。实验数据采用SPSS 13.0软件处理，数据进行t检验。实验结果显示，草苔虫总内醋有明 显的抗老年痴呆活性。此外，草苔虫总内醋对体质量和脏器指数均无明显的影响，表明毒性 较低。
[0031] W上实验结果表明，草苔虫总内醋具有显著的抗老年痴呆活性和较低的毒性，可 用于开发抗老年痴呆的药品。
[0032] 由于，在本发明的草苔虫总内醋中，W草苔虫内醋4的含量最高，B巧ostatin 4占 草苔虫总内醋60% W上。因此，本发明也提供了化yostatin 4在制备预防或治疗老年痴呆 药物或保健品中的应用。
[0033] 本发明寻找到了安全有效的抗老年痴呆的药品。
【具体实施方式】
[0034] 下面结合【具体实施方式】，进一步阐释本发明。下述实施例中所使用的实验方法如 无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料和试剂等，如无特殊说明，均可从商 业途径得到。运些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
[0035] 实施例1.草苔虫总内醋的提取纯化
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