新鲜采集的总合草苔虫Bugula neritina Linnaeus原料（10kg，干重），用95%乙 醇室溫浸提一周，共提取4遍(300L/次，4次），合并乙醇提取液，减压回收乙醇，得浸膏320g。 浸膏用90%甲醇悬浮分散，用正己烧萃取5次每次化，得正己烧萃取物56g，经体外抗癌活性 筛选无活性。含水甲醇层再加水使成80%甲醇水溶液，用αη4萃取（1L/次，5次），得αη4萃取 物9g(I巧0 =化g/mL，Ρ388)为活性部位。该活性部位经快速硅胶柱层析(200~300目）得活 性组分28护10(0.41旨，1050 = 2.4旨/1^，？388)。28护10经过56地3(16^1^-20凝胶柱层析，^ C出C12:MeOH( 1:1)洗脱，流速60血Λ，得到两个活性组分A(0.17g，IC50 = 0.3yg/血，P388)和 B(0.11g，IC50 = 0.8g/mL，P388)。对运两个活性组分分别进行两次凝胶柱层析，依次W Hexane-CH2Cl2-Me0H(4:5:1)和Hexane: CH2CI2: MeOH( 10:10:1)洗脱，分别得到纯度更高、活 性更强的两个组分 C(0.07g，IC50 = 0.1g/ml，P388WPD(0.05g，IC50 = 810-2g/mL，P388)〇C、 D两组分仍含有较多的绿色素，故将两者合并，进行0DS快速柱层析，W 50 %、80 %MeOH梯度 洗脱，得浅黄色总草苔虫内醋(BRYS)0.01克。
[0037] 实施例2.草苔虫内醋抗老年痴呆生物活性实验
[0038] 1实验材料
[0039] 1.1实验动物：ICR小鼠，雄性，6-8周龄，18-22g，大连医科大学，1.2试剂和药物：乙 酷胆碱醋酶(A化E)试剂盒(南京建成生物工程研究所），乙酷胆碱转移酶(ChAT)试剂盒(南 京建成生物工程研究所），谷脫甘肤过氧化物酶测试盒(南京建成生物工程研究所），微量还 原型谷脫甘肤试剂盒(南京建成生物工程研究所），乙酷胆碱试剂盒(南京建成生物工程研 究所），S0的式剂盒(南京建成生物工程研究所），丙二醒测试盒(南京建成生物工程研究所）， 维生素 E(大连天宇奥森制药有限公司），受试药物:实施例1得到的草苔虫总内醋(BRYS)。
[0040] 1.3仪器:酶标仪，离屯、机。
[0041 ] 2实验方法
[0042] 2.1实验方案：小鼠随机分为9组，每组小鼠6只。设对照组，草苔虫总内醋设： 0.0025mg/kg，0.005mg/kg，0.0 Img/kg组，抗衰老实验阳性药物组（维生素 E，VE)。BRYS和维 生素 E注射给药，共60天。末次给药Ih后，全部小鼠做水迷宫实验，持续一周，记录小鼠找到 平台的时间。水迷宫实验方法参见文献:王维刚等，Morris水迷宫实验在小鼠表型分析中的 应用，中国细胞生物学学报，2011，（ 1): 8-14。
[0043] -周后，按照各个试剂盒说明书处理样品，检测各项指标：
[0044] 乙酷胆碱醋酶(A化E)试剂盒，检测脑匀浆乙酷胆碱醋酶活力；
[0045] 乙酷胆碱转移酶(ChAT)试剂盒，检测乙酷胆碱转移酶含量；
[0046] 谷脫甘肤过氧化物酶测试盒，检测谷脫甘肤过氧化物酶活力；
[0047] 微量还原型谷脫甘肤试剂盒，检测谷脫甘肤含量；
[0048] 乙酷胆碱试剂盒，检测乙酷胆碱含量；
[0049] SOD试剂盒，检测血清SOD活力；
[0050] 丙二醒测试盒，检测丙二醒含量。
[0化1 ] 2.2实验数据检验:采用SPSS 13.0软件处理，数据进行t检验。 [0化2] 2.3实验结果:见表1-4.
[0化3] 表1小鼠水迷宫X±SD [0化4]
[0化6] 与模型组比较冲<0.05，*冲<0.01
[0化7] 表2小鼠10%脑匀浆中A化E的活力，证AT的含量，MDA含量X±SD [0化引
[0化9] 与模型组比较冲<0.05，*冲<0.01
[0060] 表3小鼠血清中SOD的活力，MDA、Ach、GSH含量，GSH-PX活力X±SD
[0061]
[0064] 2.4 结论
[00化]小鼠水迷宫实验，草苔虫总内醋(BRYS)与模型组相比，中浓度组和高浓度组能显 著缩短游泳时间；胆碱能神经元在学习记忆过程中起重要作用，乙酷胆碱(Ach)是胆碱能神 经元末稍释放的一种重要的中枢神经递质，胆碱醋酶(A化E)和乙酷胆碱转移酶(化AT)共同 维持Ach水平的稳定。(A化E)是乙酷胆碱的水解酶。A化E水平可W间接反映 Ach的变化。BRYS 与模型组相比，高浓度组对A化E和Adi有明显的改善作用(P<0.05)。脑组织乙酷胆碱转移酶 (化AT)，B肿S与模型组相比，高浓度组有较好的改善作用(P<0.05)。服各组脑组织丙二醒 (MDA)含量均有明显改善，其中高浓度组作用显著，差异有统计学意义(P<0.05)。血清超氧 化物歧化酶(SOD)对机体氧化与抗氧化平衡起关键的调控作用，可清除超氧阴离子自由基， 减少脂质过氧化反应，维持生物膜结构及其功能，保护细胞。BRYS可显著增加血清中SOD活 力(P<0.01)，升高血清还原型谷脫甘肤(G甜)和血清谷脫甘肤过氧化物酶(GSH-PX)水平。此 夕h草苔虫总内醋对体质量和脏器指数均无明显的影响，表明毒性较低。
[0066] W上实验结果表明，草苔虫总内醋具有显著的抗老年痴呆活性和较低的毒性，可 用于开发抗老年痴呆的药品。
[0067] W上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述 实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可作出种种的等同的 变型或替换，运些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。
【主权项】
1. 草苔虫总内酯在制备预防或治疗老年痴呆药物或保健品中的应用。2. 根据权利要求1所述的草苔虫总内酯在制备预防或治疗老年痴呆药物或保健品中的 应用，其特征在于，所述的草苔虫总内酯以总合草苔虫为原料，经常规方法提取纯化，得到 草苔虫总内酯。3. 根据权利要求1所述的草苔虫总内酯在制备预防或治疗老年痴呆药物或保健品中的 应用，其特征在于，所述的草苔虫总内酯中1^^〇8七31:;[114占60%以上。4. 根据权利要求1所述的草苔虫总内酯在制备预防或治疗老年痴呆药物或保健品中的 应用，其特征在于，所述的草苔虫总内酯的制备方法如下： 新鲜采集的总合草苔虫BugulaneritinaLinnaeus，用95%乙醇室温浸提，将乙醇提 取液，减压回收乙醇，得浸膏； 浸膏用90%甲醇悬浮分散，用正己烷萃取，弃去正己烷萃取物；含水甲醇层再加水成 80 %甲醇水溶液，用CC14萃取，得CC14萃取物； CC14萃取物经200~300目硅胶柱层析得活性组分;再经过S印hadexLH-20凝胶柱层析， 以CH2C12:MeOH为1:1洗脱，流速60mL/h，得到活性组分A和活性组分B; 对活性组分A和活性组分B分别进行两次凝胶柱层析，第一次以Hexane:CH2C12:MeOH为 4:5:1洗脱，第二次以Hexane:CH2C12:MeOH为10:10:1洗脱，分别得到活性组分C和活性组分 D； 活性组分C和活性组分D进行0DS快速柱层析，以50%、80%MeOH梯度洗脱，得草苔虫总 内酯。5. 根据权利要求1至4任一所述的草苔虫总内酯在制备预防或治疗老年痴呆药物或保 健品中的应用，其特征在于，所述的药物或保健品中，草苔虫总内酯作为唯一活性成份，或 包含草苔虫总内酯的组合物。6. 根据权利要求5所述的草苔虫总内酯在制备预防或治疗老年痴呆药物或保健品中的 应用，其特征在于，所述的药物中，草苔虫总内酯、包含草苔虫总内酯的药物组合物可以和 药剂学上的常规药用辅料制成药物制剂。7. 根据权利要求6所述的草苔虫总内酯在制备预防或治疗老年痴呆药物或保健品中的 应用，其特征在于，所述的药物制剂为片剂、颗粒剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、滴丸、注射 剂、粉针剂，或气雾剂。 8. Bryostatin 4在制备预防或治疗老年痴呆药物或保健品中的应用。9. 一种草苔虫总内酯的制备方法，其特征在于，所述的草苔虫总内酯的制备方法如下： 新鲜采集的总合草苔虫BugulaneritinaLinnaeus，用95%乙醇室温浸提，将乙醇提 取液，减压回收乙醇，得浸膏； 浸膏用90%甲醇悬浮分散，用正己烷萃取，弃去正己烷萃取物；含水甲醇层再加水成 80 %甲醇水溶液，用CC14萃取，得CC14萃取物； CC14萃取物经200~300目硅胶柱层析得活性组分;再经过S印hadexLH-20凝胶柱层析， 以CH2C12:MeOH为1:1洗脱，流速60mL/h，得到活性组分A和活性组分B; 对活性组分A和活性组分B分别进行两次凝胶柱层析，第一次以Hexane:CH2C12:MeOH为 4:5:1洗脱，第二次以Hexane:CH2C12:MeOH为10:10:1洗脱，分别得到活性组分C和活性组分 D； 活性组分C和活性组分D进行ODS快速柱层析，以50%、80%MeOH梯度洗脱，得草苔虫总 内酯。10.根据权利要求9所述的一种草苔虫总内酯的制备方法，其特征在于，用95%乙醇室 温浸提，95%乙醇的用量为新鲜采集的总合草苔虫原料的20-30倍;所述的正己烷萃取共5 次，每次正己烷的用量为4-5L;所述的CC14萃取共5次，每次CC14的用量为1-2L。
【专利摘要】本发明涉及医药技术领域，具体涉及草苔虫总内酯抗老年痴呆活性及其应用。本发明的草苔虫总内酯(BRYS)经小鼠水迷宫实验，能显著缩短游泳时间；对小鼠脑中的胆碱酯酶(AChE)和乙酰胆碱Ach有明显的改善作用。对乙酰胆碱转移酶(ChAT)和丙二醛(MDA)含量均有明显提高，作用显著，差异有统计学意义。可显著增加血清中SOD活力(P<0.01)，升高血清还原型谷胱甘肽(GSH)和血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平。此外，草苔虫总内酯对小鼠体质量和脏器指数均无明显的影响，表明毒性较低。实验结果表明，草苔虫总内酯具有显著的抗老年痴呆活性和较低的毒性，可应用于开发抗老年痴呆的药品。
【IPC分类】A23L33/10, A61K35/655, A61P25/28, A23L17/00
【公开号】CN105456298
【申请号】CN201510863912
【发明人】易杨华
【申请人】中国人民解放军第二军医大学
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2015年12月1日