2mm);中VLDL-P(直径为42至60nm);大VLDL-P(直径为>60nM);小LDL-P(直径 为18至20 · 5nm);大LDL-P(直径为20 · 5至23nm);以及IDL-P(直径为23至29nm)的血清浓度。 [0043]患者人群
[0044]本发明之方法可用于降低患者血清中残余胆固醇及其他脂蛋白组分G^^nVLDL-C、VLDLi-C、VLDL2-C、VLDLi+2-C、VLDL 3-C、IDL-C、LDLi-C、LDL2-C、LDL3-C、LDLfC、LDL 3M-C 等） 的水平。在某些情况下，患者是除显示出一种或多种上述血清脂蛋白水平升高外基本健康 的患者。例如，在治疗时患者也许未显示出心血管、血栓性疾病或其他疾病或病症的其他任 何风险因素。然而，在其他一些情况下，患者被选中是根据其被诊断为患有某种因血清中残 余胆固醇水平升高或其他脂蛋白或脂蛋白亚组分水平升高而引起或与其相关的疾病或病 症，或具有罹患这种疾病或病症的风险。例如，在本发明之药物组合物给药之时或之前，患 者可能被诊断为患有心血管疾病或病症或被确定有罹患这类疾病或病症的风险，例如冠状 动脉疾病、急性心肌梗塞、无症状颈动脉粥样硬化、中风及外周动脉闭塞性疾病等。在某些 情况下，所述心血管疾病或病症是高胆固醇血症。例如，如果患者被诊断为患有高胆固醇血 症或被确定有罹患高胆固醇血症的风险，例如杂合子家族性高胆固醇血症(heFH)、纯合子 家族性高胆固醇血症(hoHl)、常染色体显性高胆固醇血症(ADH，例如与PCSK9基因中一种或 多种功能增益突变相关的ADH)，以及有别于家族性高胆固醇血症(非FH)的高胆固醇血症， 就有可能被选中而以本发明之方法治疗。
[0045] 在其他一些情况下，在本发明之药物组合物施用之时或之前，患者可能被诊断为 患有动脉疾病如脑血管闭塞性疾病、外周血管疾病、外周动脉疾病等，或被确定有罹患这些 疾病或病症的风险。在某些实施方案中，患者被选中是根据其被诊断为同时患有两种或多 种上述疾病或病症，或有同时罹患这些疾病或病症的风险。
[0046] 在另一些情况下，将以本发明之方法治疗的患者是根据下列一种或多种因素选择 的:年龄(例如超过40、45、50、55、60、65、70、75或80岁）、种族、性别（男性或女性）、锻炼习惯 (例如经常锻炼、不锻炼）、其他原有病症(例如II型糖尿病、高血压等），以及目前用药状态 (例如目前服用他汀类药物[例如西立伐他汀（c e r i V a s t a t i η )、阿托伐他汀 (atorvastatin)、辛伐他汀（simvastat in)、匹伐他汀（pi tavastatin)、瑞舒伐他汀 (rosuvas tat in )、氟伐他汀（f luvas tat in)、洛伐他汀（lovas tat in)及普伐他汀 (pravastatin)等]、β受体阻断剂、烟酸等）。本发明还包括一些降低患者血清残余胆固醇 和/或其他脂蛋白亚组分水平的方法，用于对常规他汀类药物治疗不耐受、无反应或反应不 足的患者。可在用本发明之方法治疗之前，在一种或多种此类因素的基础上选择/筛选(例 如通过问卷、诊断评估等)潜在的患者。
[0047] PCSK9抑制剂
[0048] 本发明之方法包括给患者施用含PCSK9抑制剂的治疗组合物。本文所用的术语 "PCSK9抑制剂"是在体外或体内与人PCSK9结合或与其相互作用并抑制PCSK9正常生物功能 的任何药剂。PCSK9抑制剂类别的非限制性实例包括小分子PCSK9拮抗剂、肽基PCSK9拮抗剂 (例如"肽抗体"分子），以及与人PCSK9特异性结合的抗体或抗体的抗原结合片段。
[0049]本文所用的术语"人前蛋白转化酶枯草溶菌素9"，或"人PCSK9"或"hPCSK9"，是指 含有序列754所示核酸序列和序列755所示氨基酸序列或其生物活性片段的PCSK9。
[0050]本文所用的术语"抗体"意指由四条多肽链即两条重(H)链和两条轻(L)链以二硫 键相互连接而组成的免疫球蛋白分子及其多聚体(例如IgM)。每条重链均包含一个重链可 变区（本文中缩写为HCVR或Vh)和一个重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域，ChI、C H2和 Ch3。每条轻链均包含一个轻链可变区（本文中缩写为LCVR或Vl)和一个轻链恒定区。该轻链 恒定区包含一个结构域(Cd) Jh和Vl区可进一步分为称为互补决定区(CDR)的高变区，其与 较保守的称为框架区(FR)的区域混杂。每个Vh和Vl均由三个CDR和四个FR组成，从氨基端到 羧基端按以下顺序排列:FRl、CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本发明的不同实施例中，抗 PCSK9抗体(或其抗原结合部分）的FR可能与人类种系序列相同，或可能经过天然或人工修 饰。氨基酸共有序列可根据两个或两个以上CDR的并排分析而定义。
[0051] 本文所用的术语"抗体"还包括完整抗体分子的抗原结合片段。本文所用的抗体的 "抗原结合部分"、抗体的"抗原结合片段"等术语，包括与抗原特异性结合而形成复合体的 任何天然产生的、可以酶促方式获得的、合成的或基因改造的多肽或糖蛋白。抗体的抗原结 合片段可以利用任何适宜的标准技术，例如蛋白水解消化或涉及编码抗体可变区和恒定区 (可选）的DNA之操纵和表达的重组基因改造技术，从例如完整的抗体分子产生。此类DNA是 已知的及/或很容易从例如市售来源、DNA库(包括例如噬菌体-抗体库)获得，或可以合成。 该DNA可以测序且以化学方法或分子生物学技术加以操纵，例如将一个或多个可变区和/或 恒定区排列成一种适宜的构型，或引入密码子、产生半胱氨酸残基、修饰、添加或删除氨基 酸等。
[0052] 抗原结合片段的非限制性实例包括：（i)Fab片段；（ii)F(ab'）2片段；（iii)Fd片 段；（iv)Fv片段；（V)单链Fv(scFv)分子；（vi)dAb片段；以及(vii)由模拟该抗体高变区（例 如一个孤立的互补决定区⑶R，如⑶R3肽)或FR3-⑶R3-FR4构型约束肽的由氨基酸残基组成 的最小识别单位。本文所用的"抗原结合片段"这一术语还包括其他工程改造分子，如结构 域特异性抗体、单域抗体、结构域删除的抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体、双抗体、三聚抗体、 四聚抗体、微型抗体、纳米抗体（例如单价纳米抗体、二价纳米抗体等）、小模块免疫药物 (SMIP)及鲨鱼可变IgNAR域。
[0053] 抗体的抗原结合片段通常包含至少一个可变区。可变区可以是任何大小或具有任 何氨基酸组成，且通常包含至少一个邻近一个或多个框架序列或位于其中的CDR。在含有与 Vl区相关联之Vh区的抗原结合片段中，该Vh区和Vl区的相对位置可为任何适宜的排列。例 如，该可变区可以是二聚化的且含有Vh-V h、Vh-Vl或Vl-Vl二聚体。或者，抗体的抗原结合片段 可含有一个单一的Vh区或Vl区。
[0054] 在某些实施例中，抗体的抗原结合片段可含有与至少一个恒定区共价连接的至少 一个可变区。在本发明之抗体的抗原结合片段内可发现的可变区和恒定区的非限制性示范 性构型包括：（i) Vh-ChI; (i i) Vh-Ch2 ; (i i i) Vh_Ch3 ; (i V) Vh-ChI_Ch2 ; (V) Vh-ChI-Ch2_Ch3 ; (Vi) Vh-Ch2-Ch3 ； (V i i) Vh-Cl ； (v i i i) Vl-Ch I ； (i x) Vl-Ch2 ； (x) Vl-Ch3 ； ( x i) Vl-Ch I -Ch2 ； ( xi i) Vl-Ch1-Ch2-Ch3; (xiii)VL-CH2-CH3;以及(xiv)VL-CL。在可变区和恒定区的任何构型中，包括上 述任何示范性构型中，该可变区和恒定区可直接相互连接或可籍由一个完整或部分铰链区 或连接区连接。铰链区可含有至少2个(例如5、10、15、20、40、60个或以上)氨基酸，其在一个 单一肽分子中相邻的可变区和/或恒定区之间形成一种柔性或半柔性连接。此外，本发明之 抗体的抗原结合片段可包含上述可变区和恒定区任何构型的同二聚体或异二聚体(或其他 多聚体），该可变区和恒定区以非共价键相互连接并/或与一个或多个单一 Vh区或Vl区（例如 通过二硫键)连接。
[0055] 如同完整的抗体分子，抗原结合片段可以是单特异性或多特异性（例如双特异 性）。一个抗体的多特异性抗原结合片段通常包含至少两个不同的可变区，其中每个可变区 都能够特异性地与另一个抗原或同一抗原的不同表位结合。对于任何多特异性抗体形式， 包括本文所公开的示范性双特异性抗体形式，均可用本领域内可利用的常规技术，使其适 应于涉及本发明之抗体的抗原结合片段的用途。
[0056] 抗体的恒定区对于抗体固定补体和调控细胞依赖性细胞毒性的能力是很重要的。 因此，可根据是否需要由抗体调控细胞毒性来选择抗体的同型。
[0057] 本文所用的术语"人源抗体"意在包括含有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变 区和恒定区的抗体。本发明之人源抗体仍可包括并非由人类种系免疫球蛋白序列编码的氨 基酸残基（例如通过体外随机诱变或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变所引入的突 变），例如可在CDR中尤其是在CDR3中包括这样的氨基酸残基。但是，本文所用的术语"人源 抗体"并不意图包括这样的抗体，其中衍生自另一哺乳动物物种如小鼠的CDR序列被嫁接到 人类框架序列上。
[0058]本文所用的术语"重组人源抗体"意在包括所有以重组方法制备、表达、产生或分 离的人源抗体，例如用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体(将在下文中进一步 说明）；从重组的、组合的人源抗体库分离的抗体(将在下文中进一步说明）；从人类免疫球 蛋白基因转基因动物(例如小鼠）分离的抗体(参阅例如Tay I or et a I. (1992) Nuc I. Ac i ds Res. 20:6287-6295);或者以其他任何涉及将人类免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列 的方法所制备、表达、产生或分离的抗体。这类重组人源抗体含有衍生自人类种系免疫球蛋 白序列的可变区和恒定区。但在某些实施例中，这类重组人源抗体经受体外诱变(或当使用 人类Ig序列转基因动物时，经受体内体细胞诱变），从而使得该重组抗体Vh区和Vl区的氨基 酸序列成为这样的序列:它们虽然衍生自人类种系Vh序列和I序列并与其相关联，但也许并 不天然地存在于体内人类种系抗体库之中。
[0059] 人源抗体可以两种与铰链异质性相关的形式存在。在第一种形式中，免疫球蛋白 分子包含一个分子量约为150_160kDa的稳定四链构建物，其中两个二聚体由一个重链间二 硫键连接在一起。在第二种形式中，该二聚体不是由重链间二硫键连接在一起，而是形成了 一种由共价偶联的轻链和重链(半抗体)组成的分子量约为75-80kDa的分子。这些形式的分 离一直极为困难，甚至在亲和纯化之后也是如此。
[0060] 第二种形式在各种完整IgG同型中的出现频率是由于但不限于与抗体铰链区同型 相关的结构差异。人类IgG4铰链的铰链区内单个氨基酸替换可将第二种形式(Angal et al. (1993)Molecular Immunology 30:105)的出现频率显著地降低到利用人类IgGl铰链时 通常观察到的水平。本发明包括在铰链区、Ch2区或Ch3区中含有一个或多个突变的抗体;所 述突变可能是合乎需要的，例如在生产中用于提高所需抗体形式的产率。
[0061] 本文所用的"单离抗体"意为从其自然环境的至少一个组分中识别、分离和/或收 集的抗体。例如，从生物体的至少一个组成部分或从抗体自然存在或自然产生的一种组织 或细胞分离或移除的抗体，就是一种符合本发明目的之"单离抗体"。"单离抗体"也包括重 组细胞内的原位抗体。单离抗体是经过至少一个纯化或分离步骤的抗体。依照某些实施例， 单离抗体可以基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。
[0062] "特异性结合"或类似术语意为抗体或抗原结合片段与在生理条件下相对稳定的 抗原形成复合体。确定抗体是否与抗原特异性结合的方法是本领域内众所周知的，包括例 如平衡透析、表面等离子共振等方法。例如，如本发明之背景下所用的术语与PCSK9"特异性 结合"的抗体包括与PCSK9或其部分结合的抗体，经表面等离子共振技术测量，其Kd小于约 ΙΟΟΟηΜ、小于约500nM、小于约300nM、小于约200nM、小于约ΙΟΟηΜ、小于约90nM、小于约80nM、 小于约70nM、小于约60nM、小于约50nM、小于约40nM、小于约30nM、小于约20nM、小于约I OnM、 小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、小于约InM或小于约O . 5nM。但是，与人类 PCSK9特异性结合的单离抗体对于其他抗原，如源自其他(非人类)物种的PCSK9分子，可具 有交叉反应性。
[0063]与衍生该抗体的相应种系序列相比，可用于本发明之方法的抗PCSK9抗体在重链 和轻链可变域的框架区和/或CDR区可包含一个或多个氨基酸替换、插入和/或缺失。通过将 本文所公开的氨基酸序列与从例如公共抗体序列数据库可获得的种系序列相比，可以轻易 地证实这类突变。本发明包括涉及使用衍生自本文所公开的任何氨基酸序列的抗体及其抗 原结合片段的方法，其中一个或多个框架区和/或CDR区内的一个或多个氨基酸突变为衍生 该抗体的种系序列的相应残基，或突变为另一个人类种系序列的相应残基，或突变为相应 种系序列残基的保守氨基酸替换(这类序列变化在本文中统称为"种系突变"）。本发明所属 领域中普通技术人员可从本文公开的重链和轻链可变区序列开始，很容易产生多种包含一 个或多个单个种系突变或其组合的抗体及其抗原结合片段。在某些实施例中，上述Vh和/或 W区内的所有框架和/或CDR残基均回复突变为在衍生该抗体的原始种系序列中发现的残 基。在其他一些实施例中，只有某些残基被回复突变为原始种系序列，例如，仅在FRl的前8 个氨基酸或FR4的后8个氨基酸中发现的突变残基，或仅在CDR1、CDR2或CDR3中发现的突变 残基，被回复突变为原始种系序列。在其他一些实施例中，一个或多个框架和/或CDR残基被 突变为一个不同种系序列（即不同于最初衍生该抗体的种系序列的种系序列）的相应残基。 此外，本发明之抗体可在框架区和/或CDR区内含有两个或多个种系突变的任何组合，例如， 其中某些残基分别突变为一个特定种系序列的相应残基，而其他某些不同于原始种系序列 的残基则保持不变或突变为一个不同种系序列的相应残基。获得含有一个或多个种系突变 的抗体和抗原结合片段之后，就很容易测试其一种或多种所需的特性，例如改善结合特异 性、提高结合亲和力、改善或增强拮抗或对抗性生物学特性(视情况而定）、降低免疫原性 等。以此一般方式所获的抗体和抗原结合片段的使用均包括在本发明之范围内。
[0064]本发明还包括涉及使用含有本文所公开的任何HCVR、LCVR和/或⑶R氨基酸序列之 变体的抗PCSK9抗体的方法，该氨基酸序列含有一个或多