系的代表性滞后曲线如图3所示。
[0113] 与仅接受膳食干预的患者相比，在接受他汀类药物的患者中观察到了较高的基线 游离PCSK9水平（图4)。与mAb316P治疗仅外加膳食干预治疗相比，同时接受他汀类药物治疗 时，祀标介导的mAb316P清除率有所上升(这是由于较高的游离PCSK9水平，其很可能反映了 较快的PCSK9生成速度）。在为期4周的给药时间内（第1天至第29天），这似乎影响了LDL-C下 降的持续时间，即相对于仅接受膳食干预，同时接受他汀类药物治疗时LDL-C下降的持续时 间较短;但是，在为期2周的给药时间内（第29天至第43天），却未观察到这种效应(图5)。
[0114] 在同时接受他汀类药物治疗的高胆固醇血症(非FH)患者中，每2周一次mAb316P给 药在第12周时导致LDL-C持续稳定的下降。相对于每4周一次给药，接受每2周一次给药的患 者第12周时LDL-C的反应更加一致（图6);每2周一次150mg相对于每4周一次300mg的变异系 数分别为16 %和49 %。
[0115] 结论
[0116] mAb316P、游离PCSK9及LDL-C水平之间有明显的动态关系。mAb316P治疗导致给药 后3天内游离PCSK9水平下降，给药后8-15天LDL-C下降达到最大幅度。
[0117] mAb316P清除率由于其与游离PCSK9的结合而加快（靶标介导的清除率）。游离 PCSK9水平较低时，由于靶标介导的清除率较低，疗效持续时间也较长。先前的研究显示，给 予他汀类药物会增加游离PCSK9的产生。在本文分析的研究中，与接受mAb316P加阿托伐他 汀治疗的患者相比，接受mAb316P治疗仅外加膳食干预的患者具有较低的基线游离PCSKMK 平和较高的mAb316P血浆浓度。
[0118] 在同时接受他汀类药物的患者中，与每4周一次的给药方案相比，每2周一次 mAb316P给药在给药时间结束时LDL-C的下降相对较一致。在每4周一次给药的方案中，患者 之间在靶标介导的清除率(及其他因素)方面的差异，似乎增加了给药后第2周和第4周之间 LDL-C最大下降幅度持续时间方面的差异，并因此导致给药4周后疗效方面的较大差异。每2 周一次给药时未观察到这些差异。
[0119] 实施例3A:抗PCSK9抗体降低血清残余脂蛋白组分、极低密度脂蛋白、甘油三酯及 脂蛋白（a)[Lp(a)]胆固醇的浓度
[0120] 引言
[0121]极低密度脂蛋白（VLDL)水平升高形成动脉粥样硬化血脂异常的部分症候，这容易 使患者出现早期动脉粥样硬化。残余胆固醇是VLDL脂肪分解产物，包括VLDL3和中等密度脂 蛋白（IDL，形成LDL的直接前体）。
[0122] 脂蛋白（a) [Lp(a)]由与富含胆固醇的脂蛋白之apo B组分共价结合的载脂蛋白 (a) [apo(a)]组成，该脂蛋白的大小与低密度脂蛋白（LDL)颗粒大致相同。Lp(a)代谢基本在 基因调控之下，其血浆浓度的90%以上受apo(a)基因（LPA)的定量和定性多态性的影响。Lp (a)水平升高被认为是心血管疾病的一个独立风险因素，且Lp(a)水平越高，风险越大。Lp (a)升高可因胆固醇沉积于内膜而促进动脉粥样硬化;此外，尽管Lp(a)缺乏蛋白酶活性，但 由于与纤维蛋白溶酶原具有高度同源性，也可促进血栓形成。在接受冠状动脉血管造影的 患者中，已证实高于30mg/dL的Lp(a)浓度与血管造影狭窄及重大冠状动脉事件的风险增加 相关。此外，已证实Lp(a)水平及基因型与主动脉瓣的钙化相关，提示它可能在发病机制中 起一定作用。
[0123] 此实施例的目的是检验这样一种假设，即作为抗前蛋白转化酶枯草溶菌素 9 (PCSK9)的完全人源单克隆抗体，mAb316P能降低VLDL和脂蛋白残粒的血清水平，有助于其 降低血清LDL-C和非HDL-C水平的能力，并证实mAb316P降低患者Lp (a)水平的活性。
[0124] 在原发性高胆固醇血症患者(研究A，n = 183;研究B，n = 92)或杂合子家族性高胆 固醇血症患者(研究C，η = 77)中进行了三项多中心、双盲、平行组、安慰剂对照临床试验。此 三项临床试验的设计和给药概要如表1所示。
[0125] 表1 :mAb316P临床试验的设计和给药概要
[0128] 在研究B中，所有患者在随机分组之前均接受阿托伐他汀(ATV)lOmg，并在安慰剂 组和一个mAb316P组随机治疗开始时又滴定增加至80mg ATV。
[0129] 正在接受阿托伐他汀或他汀类药物+/-依泽替米贝背景治疗的患者，每2周一次或 每4周一次(Q2W，Q4W)接受mAb316P 50-300mg皮下注射(SC)(取决于各研究）。所有三项试验 中均采取每2周一次(Q2W)mAb316P 150mg给药。
[0130] 在事后分析中，用垂直自动分析(VAP)法精细分离脂蛋白。VAP方法是一种简单、直 接的超速离心试验，它在一个垂直的转子中依照脂蛋白密度分离脂蛋白组分，该转子可使 每一类脂蛋白和每一亚类脂蛋白高度分离。然后刺穿试管底部，使用分光光度计在添加一 种酶促胆固醇试剂后测量每一层胆固醇。于第12周（研究A)、第8周（研究B)及第6周（研究 C)，相对于接受安慰剂的患者，使用AN⑶VA分析了每2周一次用mAb316P 150mg治疗的患者 的VLDL-C、VLDL1+2-C( "大而悬浮" VLDL颗粒中胆固醇的观察指标）、甘油三酯(TG)、VLDL3-C、 IDL-C以及总残余脂蛋白胆固醇水平(RLP-C; VLDL3-C+1DL-C)的百分比变化。
[0131] 此外，评估了这三项不同的2期研究中接受mAb316P 150mg(每2周一次）或安慰剂 的患者之基线和治疗过程中的Lp(a)水平。在所有2期研究中，Lp(a)水平都是在同一家实验 室使用同一方法测量的。汇总了三项研究中获得的修正后意向治疗人群的基线和治疗结束 时Lp(a)水平的数据(第8/第12周治疗中数值或最后可获得的治疗中数值结转）；并以治疗 组和研究为固定效应、以基线Lp(a)为协变量采用协方差分析，比较了接受mAb316P 150mg (每2周一次)和安慰剂的患者自基线的百分比变化。与这些探索性分析相关的p值仅为描述 目而提供，未针对多重性调整。使用线性回归法评估了Lp(a)和LDL-C自基线的百分比变化 之间的关系，并计算了Spearman相关系数。
[0132] 结果/结论
[0133] 在这3项研究中，与安慰剂相比，观察到mAb316P治疗减低了TG、VLDL-C以及残余脂 蛋白中胆固醇的含量。结果概括在表2和图7-9中。
[0136] 在heFH/非FH患者中，相对于背景降脂治疗(他汀类药物土依泽替米贝），mAb316P 降低了所有动脉粥样硬化性脂蛋白（LDL-C、IDL-C、VLDL-C及RLP亚组分)水平。因此，这一实 施例显示，除了显著地降低可用VAP分离的残余脂蛋白组分的胆固醇浓度，包括VLDL 3-C和 IDL-C以外，mAb316P还显著降低了血清TG和VLDL-C水平。
[0137] 汇总分析人群中接受mAb316P 150mg(每2周一次）的108名患者中的102名及接受 安慰剂的77名患者中的74名具备基线和治疗过程中的Lp(a)数据。基线水平如表3所示。
[0138] 表3:包括在汇总分析中的患者的基线Lp(a)水平
[0140] *具有基线和治疗结束时Lp(a)数据(第8/第12周治疗中数值或最后可获得的治疗 中数值结转)的修正后意向治疗人群患者。
[0141] 如表3所示，36名（35%)用mAb316P治疗的患者以及25名（33%)接受安慰剂的患者 基线Lp(a)>50mg/dL，根据欧洲动脉硬化学会指南，此水平被视为高风险临界值。
[0142] Lp(a)自基线的中位绝对和百分比下降概括于表4中。
[0143] 表4:Lp(a)自基线的变化
[0145] *与安慰剂相比，Ρ〈0·0001。
[0146] 如表4所示，与安慰剂（-0.3%)相比，接受mAb316P 150mg(每2周一次)治疗患者的 1^(3)自基线的中位百分比下降是-30.3%(?〈0.0001)。基线1^(&)较高的患者1^(3)自基线 的中位绝对下降也明显较高。总之，三项2期试验汇总数据的分析显示，与安慰剂相比，接受 11!八匕316?15〇11^(每2周一次）的患者1^(3)显著下降，包括基线1^(3)>5〇11^/北的患者。在由 于Lp(a)升高而视为有较高心血管疾病风险的患者中，Lp(a)下降百分比的数量级接近，因 此导致较大的Lp(a)绝对下降。
[0147] 实施例3B:抗PCSK9抗体降低血清载脂蛋白CII和CIII水平
[0148] 引言
[0149] 载脂蛋白（apo)CIII抑制脂蛋白脂酶（LPL)介导的VLDL甘油三酯分解代谢。Apo CII与VLDL和LPL活性的关系似乎较复杂，并可能取决于基线甘油三酯的水平。一般而言， Apo CII是重要的LPL活化剂。
[0150] LPL水解VLDL的甘油三酯部分及其残粒。在这一实施例中，研究了抗PCSK9抗体即 mAb316P通过影响血清载脂蛋白CII和CIII水平而降低VLDL-C及其残粒水平的能力。
[0151] 在原发性非家族性高胆固醇血症(非FH)患者(研究A，n= 183;研究B，n = 92)或杂 合子家族性高胆固醇血症(heFH)患者(研究C，η = 77)中进行了三项多中心、双盲、平行组、 安慰剂对照临床试验。取决于各研究，用mAb316P 50-150mg每2周一次(Q2W)或150-300mg每 4周一次(Q4W)治疗(接受阿托伐他汀或他汀类药物+/-依泽替米贝的）患者。所有三项试验 均采取每2周一次(Q2W)mAb316P 150mg给药。（见实施例3A，表1)。
[0152] 在事后分析中，用免疫分析法测量apo CII和CIII浓度。（使用从英国Randox Laboratories Limited购买的试剂盒[apo CII，产品编号LP3866;apo CIII，产品编号 LP3865]和Architect Ci8200分析仪[Abbott Laboratories，IL])。免疫分析法基于含有人 apo CII(或apo CIII)的样品与特异性抗apo CII(或CIII)血清形成不溶性复合物的反应， 该复合物的浓度可在340nm处采用比浊法测定。已验证这两种检测方法的分析性能。
[0153] 在第12周(研究A)、第8周(研究B)和第6周(研究C)，通过协方差分析比较安慰剂组 和接受mAb316P治疗的患者apo CII和apo CIII自基线的百分比变化。研究C包括第12周终 点，但分析时使用了第6周数据，因为第12周时有可用储存样本的患者数目比第6周时要少 (分别为75例和17例）。
[0154] 结果
[0155] 表5按照治疗组显示研究A、B和C中接受每两周一次mAb316P 150mg治疗的患者apo CII和CIII自基线的百分比变化。显示的数值是平均值（SD)，apo CIII除外（其以中位数 [IQR]显示）。数据来自第12周（研究A)、第8周（研究B)和第6周（研究C)。图13显示研究A中 apo CII(组A)和CIII(组B)的剂量响应变化。
[0156] 表5
[0157]
[0158] 所有剂量的mAb316P均降低了apo CII和CIII水平，但观察到明显的剂量反应(表 5,图13)。在所有三项研究中，与基线相比，mAb316P都降低了患者的apo CII水平(表5)。第 12周（研究A)、第8周（研究B)和第6周（研究C)时自基线平均下降幅度分别为21.4% (P〈 0.00001 )、29· 3% (P = O .0067)和9.4% (P = O .08) (P值为与安慰剂相比）。研究A、B和C显示 Apo CIII分别下降了24.7% (Ρ〈0· 00001 )、22.9% (P = O .017)和20.2% (P = O .019) (P值为 与安慰剂相比）。
[0159] 结论
[0160] 抗PCSK9抗体mAb316Ρ治疗与血清apo CII和CIII水平的显著下降相关。在非FH患 者中，apo CII和CIII都有近1:1的下降。在heFH患者中，apo CIII下降程度比apo CII高出 约两倍。apo CII和CIII的下降可能是清除率增加或VLDL颗粒产生/分泌减少的表现，VLDL 颗粒是这些载脂蛋白的已知载体。
[0161 ]实施例4:抗PCSK9抗体降低所有血清低密度脂蛋白组分胆固醇的浓度
[0162] 引言
[0163] 低密度脂蛋白（LDL-C)是由各种不同密度和脂化状态的LDL颗粒组成的。分析血脂 调节治疗对LDL颗粒组成的影响可有助于理解治疗的作用模式。此实施例的目的是检验这 样一个假设，即作为抗前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)的完全人源单克隆抗体，mAb316P 通过降低多种LDL组分来降低LDL-C水平。
[0164] 在原发性高胆固醇血症患者(研究A，n = 183;研究B，n = 92)或杂合子家族性高胆 固醇血症患者(研究C，n = 77)中进行了三项多中心、双盲、平行组、安慰剂对照临床试验。取 决于各研究，用mAb316P 50-150mg每2周一次（Q2W)或150-300mg(每4周一次(Q4W)治疗(接 受阿托伐他汀或他汀类药物+/_依泽替米贝的）患者。所有三项试验均采取每2周一次(Q2W) 11^316?15〇11^给药。（见实施例34，表1)。
[0165] 在事后分析中，用垂直自动分析(VAP)法精细分离脂蛋白。与安慰剂相比，使用 AN⑶VA评估了每2周一次接受mAb316P 150mg的患者之LDL1-CXu大而悬浮" LDL)、LDL2-C、 LDL3-C及LDL4-C("小而致密" LDL)水平自基线至第12周(研究A)、第8周(研究B)及第6周（研 究C)的百分比变化。LDL3-C和LDL 4-C组分分别分析，并在汇总分析中分析。之所以这样做是 因为LDL4-C通常以比LDL 3-4-C低得多的浓度存在。LDL4-C百分比下降的变化范围要大得多。 LDL3M-C之和代表了两种最小和最致密的LDL-C组分之和。
[0166] 结果/结论
[0167] 在这3项研究中，与安慰剂相比，观察到每2周一次接受mAb316P 150mg的患者所有 可用VAP分离的LDL亚组分之胆固醇含量均自基线显著下降。结果概括在表5和图10-12中。
[0170] 因此，这一实施例显示，PCSK9单克隆抗体(mAb