316P)治疗显著地降低了可用VAP分 离的LDL组分之胆固醇浓度。先前显示的mAb316P所导致的LDL-C下降在所有LDL-C亚组分中 均得到证实。
[0171 ]实例5:抗PCSK9抗体对脂蛋白颗粒浓度的影响 [0172]背景
[0173]低密度脂蛋白颗粒(LDL-P)和高密度脂蛋白颗粒(HDL-P)的胆固醇含量在不同个 体之间可以有很大差异。例如，一个人可能有较大的富含胆固醇的LDL-P颗粒，而另一个人 却有较小的胆固醇贫乏的LDL-P颗粒。因此，血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂 蛋白胆固醇(HDL-C)水平的测量结果与血液循环中LDL-P和HDL-P颗粒的数量往往无关。
[0174] 流行病学研究显示，动脉粥样硬化心血管疾病的风险与LDL-C和LDL-P两者都有 关。但在上述测量结果不一致的患者人群（例如糖尿病或代谢综合症患者）中，显示出该风 险往往与LDL-P(而非LDL-C)更相关。因此，许多专家小组和共识声明都主张在高风险患者 的管理中附加 LDL-P作为治疗标靶。
[0175] 核磁共振(NMR)技术可精确地测量血液循环中脂蛋白颗粒的数量，以确定LDL-P水 平非一致性升高的需强化治疗的患者。
[0176] 已证实抗PCSK9抗体mAb316P可使接受稳定剂量阿托伐他汀治疗的患者在12周期 间LDL-C下降达72.4%，并且在安慰剂组和mAb316P治疗组之间，不良事件发生率类似。 mAb316P使载脂蛋白B下降达56%，与LDL-C的变化成正比。迄今为止，尚没有有关mAb316P对 高胆固醇血症患者脂蛋白颗粒数目的影响的报告。
[0177 ]本实施例评估了 mAb 316P对脂蛋白颗粒的浓度及大小的影响。
[0178] 方法
[0179] 针对LDL-C 2 100mg/dL的患者，开展了一项随机、双盲、II期试验的子研究，除每天 接受阿托伐他汀(每天1〇、20或4〇11^)的稳定治疗外，患者还接受安慰剂(11 = 31)或11^&316? 150mg皮下注射(SC)每2周一次(Q2W)(n = 28)。使用过夜禁食12小时后采集的样本测试了血 脂和脂蛋白。采用LipoScience公司（Raleigh,NC)的LipoProfile-3演算法，用NMR光谱仪测 量了脂蛋白颗粒数据。根据分光计上显示的独特的脂质甲基WR信号的振幅，量化了 LDL-P 和HDL-P亚类，并根据其甲基NMR信号的振幅，从每个亚类的直径与其相对质量百分比乘积 的总和，推算出LDL和HDL大小的加权平均值。
[0180] 各亚类的估计直径范围如下：
[0181] VLDL-P:小VLDL-P = 29至42nm;中 VLDL-P = 42至60nm;大VLDL-P>60nm;
[0182] LDL-P:小LDL-P = 18至20.5nm;大LDL-P = 20.5至23nm;中等密度脂蛋白颗粒（IDL-P)=23 至 29nm;
[0183] HDL-P:小HDL-P = 7 · 3至8 · 2nm;中HDL-P = 8 · 2至9 · 4nm;大HDL-P = 9 · 4至14nm〇
[0184] 总VLDL-P、LDL-P及HDL-P分别等于VLDULDL及HDL各亚类的颗粒数浓度之总和。分 析的终点是自基线至第12周LDL-P、VLDL-P及HDL-P浓度的百分比变化。
[0185] 进行统计检验时，转换了所有非正态分布的变量，但未转换的变量则列入本文的 表格中。对于连续正态分布的变量报告了平均值(标准差[SD])，而对于非正态分布的变量 则报告了中位数（内四分位间距[IQR])。对于分类变量报告了计数和百分比。为了确定治疗 组是否与安慰剂组有显著差异，进行了Fisher精准检验(Fisher's exact test)并报告了 相关P值。为了确定各治疗组是否与安慰剂组有显著差异，进行了 t检验并报告了相关P值。 为了确定安慰剂组与治疗组相比自基线至第12周的百分比变化是否有显著差异，以基线值 作为协变量进行了协方差分析。
[0186] 结果
[0187] 表7显示与安慰剂相比，每2周一次mAb316P 150mg皮下注射之前和之后脂蛋白颗 粒的浓度。
[0188] 表7:安慰剂（n = 31)和每2周一次mAb316P 150mg(n = 28)的脂蛋白颗粒浓度 (nmol/L)。*与安慰剂相比，P〈0 · 05; ?ΙΡ〈0 · 0001
[0191] 与安慰剂(下降1%)相比，mAb316P使LDL-P平均值下降了63%(?〈0.0001);与安慰 剂（上升33%)相比，mAb316P使VLDL-P中位数下降了 36%(?〈0.0001)。与安慰剂（上升1%) 相比，mAb316P使HDL-P水平上升了11 % (P〈0.05)。所有颗粒亚类的变化都呈现出类似趋势。
[0192] 结论
[0193] mAb316P显著降低了 LDL-P及其他脂蛋白颗粒水平，其方式与先前报告的对LDL-C 和载脂蛋白B的影响类似。
[0194] 实施例6:离子迀移率分析法测定的抗PCSK9抗体对脂蛋白亚组分的影响
[0195] 背景
[0196] 2期临床试验已证实mAb316P(也称为Alirocumab)显著降低低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C)的水平。LDL-C与心血管疾病(CVD)的风险密切相关，根据颗粒大小和密度而定义的 LDL亚组分也与心血管疾病的风险以不同程度相关联。脂蛋白亚组分分析可为心血管疾病 风险评估及个别患者中观察到的降脂治疗效果提供更多信息。
[0197] 方法
[0198] 在LDL-C水平2 lOOmg/dL的高胆固醇血症患者中开展了一项2期随机、双盲临床试 验，其中31名患者接受安慰剂，27名患者每两周一次(Q2W)接受alirocumab 150mg(lmL皮下 自动注射）。此外，患者还接受稳定的阿托伐他汀（10-40mg/天)治疗。在此项子研究中，采用 离子迀移率分析法在基线和第12周时测量了脂蛋白亚组分。
[0199] 结果
[0200]自基线至第12周的脂蛋白亚组分和血脂指标变化列于表8A(安慰剂治疗组）和表 88(11^&316?治疗组）。
[0201] 表8A:安慰剂
[0204]表8B:mAb316P 150mg Q2W
[0207] 表8A和表8B分别显示安慰剂组和mAb316P 150mg Q2W组脂蛋白亚组分和血脂参数 自基线到第12周的变化。与安慰剂相比，经mAb316P治疗后，极低密度脂蛋白（VLDL) +中间密 度脂蛋白（IDL)+总LDL下降了48.7% (Ρ〈0·0001)、VLDL下降了51.4% (Ρ〈0· 0001)、IDL下降 了52.3 % (Ρ〈0.0001)、总LDL下降了49.8% (Ρ〈0.0001)。其他亚组分也出现类似的变化趋 势。HDL水平未见显著变化。与其他LDL亚组分相比，微小LDL出现十分显著的下降百分比(Ρ〈 0.0001)。
[0208] 结论
[0209] 离子迀移率测定表明，在稳定阿托伐他汀治疗的基础上加用mAb316P后，LDL亚组 分水平显著下降，这与先前报告的mAb316P对LDL-C的效果类似。
[0210] 本发明之范围将不受本文所述特定实施例的限制。事实上，除了本文所述之实施 例外，对于本发明所属领域普通技术人员而言，基于上述说明和附图，本发明之各种修改形 式也将变得很明显。这些修改形式也属于所附的权利要求。
【主权项】
1. 一种降低患者血清残余胆固醇水平的方法，该方法包括选择血清残余胆固醇水平升 高的患者，并给该患者施用一种含PCSK9抑制剂的药物组合物。2. 如权利要求1所述之方法，其中在施用该药物组合物之后，患者血清残余胆固醇水平 自基线下降至少约35%至约45%。3. -种降低患者血清VLDL水平的方法，该方法包括选择血清VLDL水平升高的患者，并 给该患者施用一种含PCSK9抑制剂的药物组合物。4. 如权利要求3所述之方法，其中在施用该药物组合物之后，患者血清VLDL水平自基线 下降至少约20%至约28%。5. -种降低患者血清VLDL1+2-C水平的方法，该方法包括选择血清VLDL1+2-C水平升高的 患者，并给该患者施用一种含PCSK9抑制剂的药物组合物。6. 如权利要求5所述之方法，其中在施用该药物组合物之后，患者血清VLDL1+2-C水平自 基线下降至少约20%至约32%。7. -种降低患者血清VLDL3-C水平的方法，该方法包括选择血清VLDL3-C水平升高的患 者，并给该患者施用一种含PCSK9抑制剂的药物组合物。8. 如权利要求7所述之方法，其中在施用该药物组合物之后，患者血清VLDL3-C水平自基 线下降至少约20%至约27%。9. 一种降低患者血清IDL-C水平的方法，该方法包括选择血清IDL-C水平升高的患者， 并给该患者施用一种含PCSK9抑制剂的药物组合物。10. 如权利要求9所述之方法，其中在施用该药物组合物之后，患者血清IDL-C水平自基 线下降至少约50%至约56%。11. 一种降低患者至少一种低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)亚组分之血清浓度的方法，该 方法包括选择血清中至少一种LDL-C亚组分水平升高的患者，并给该患者施用一种含PCSK9 抑制剂的药物组合物。12. 如权利要求11所述之方法，其中所述LDL-C亚组分是LDU-C。13. 如权利要求12所述之方法，其中在施用该药物组合物之后，患者血清中LDLi-C水平 自基线下降至少约65%至约78%。14. 如权利要求11所述之方法，其中所述LDL-C亚组分是LDL2-C。15. 如权利要求14所述之方法，其中在施用该药物组合物之后，患者血清中LDL2-C水平 自基线下降至少约75%至约85%。16. 如权利要求11所述之方法，其中所述LDL-C亚组分是LDL3-C。17. 如权利要求11所述之方法，其中所述LDL-C亚组分是LDL4-C。18. 如权利要求11所述之方法，其中所述LDL-C亚组分是LDL3+4-C。19. 如权利要求18所述之方法，其中在施用该药物组合物之后，患者血清中LDL3+4-C水 平自基线下降至少约45%至约70%。20. 如权利要求1至19中任何一项所述之方法，其中所述PCSK9抑制剂是与PCSK9特异性 结合的抗体或其抗原结合片段。21. 如权利要求20所述之方法，其中所述药物组合物包含20mg至200mg所述PCSK9抑制 剂。22. 如权利要求21所述之方法，其中所述药物组合物包含50mg至150mg所述PCSK9抑制 剂。23. 如权利要求22所述之方法，其中所述药物组合物包含50mg所述PCSK9抑制剂。24. 如权利要求22所述之方法，其中所述药物组合物包含75mg所述PCSK9抑制剂。25. 如权利要求22所述之方法，其中所述药物组合物包含lOOmg所述PCSK9抑制剂。26. 如权利要求22所述之方法，其中所述药物组合物包含150mg所述PCSK9抑制剂。27. 如权利要求20至26中任何一项所述之方法，其中所述抗体或其抗原结合片段包含 选自序列号为90/92和218/226的HCVR/LCVR氨基酸序列对的重链和轻链⑶R序列。28. 如权利要求27所述之方法，其中所述抗体或其抗原结合片段包含具有序列号为 220、222、224、228、230和232的重链和轻链CDR氨基酸序列。29. 如权利要求28所述之方法，其中所述抗体或其抗原结合片段包含具有序列号为218 的氨基酸序列的HCVR，以及具有序列号为226的氨基酸序列的LCVR。30. 如权利要求27所述之方法，其中所述抗体或其抗原结合片段包含具有序列号为76、 78、80、84、86和88的重链和轻链〇)1?氨基酸序列。31. 如权利要求30所述之方法，其中所述抗体或其抗原结合片段包含具有序列号为90 的氨基酸序列的HCVR，以及具有序列号为92的氨基酸序列的LCVR。32. 如权利要求20所述之方法，其中所述抗体或其抗原结合片段及包含这样的重链和 轻链CDR氨基酸序列的抗体与PCSK9上同一表位结合，所述重链和轻链CDR氨基酸序列具有 序列号 220、222、224、228、230和232;或序列号76、78、80、84、86和88。33. 如权利要求20所述之方法，其中所述抗体或其抗原结合片段在与PCSK9结合时，与 包含这样的重链和轻链CDR氨基酸序列的抗体竞争，所述重链和轻链CDR氨基酸序列具有序 列号 220、222、224、228、230和232;或序列号76、78、80、84、86和88。34. 如权利要求20所述之方法，其中所述抗体或其抗原结合片段在与PCSK9结合时显示 pH依赖性特征。35. 如权利要求34所述之方法，其中所述抗体或其抗原结合片段在中性pH条件下与 PCSK9的结合亲和力比在酸性pH条件下为高。36. 如权利要求1至35中任何一项所述之方法，其中患者在该药物组合物施用之时或即 将施用之前，正在接受治疗性他汀类药物的治疗。37. 如权利要求36所述之方法，其中所述治疗性他汀类药物治疗包括选自下列的他汀 类药物：西立伐他汀（cerivastatiη)、阿托伐他汀（at〇rvastatiη)、辛伐他汀 (8；[111￥38七31：；[11)、匹伐他汀（卩；^3￥38七31：；[11)、瑞舒伐他汀（1'0811￥38七31：；[11)、氟伐他汀 (fluvastatin)、洛伐他汀（lovastatin)和普伐他汀(pravastatin)。38. 如权利要求36所述之方法，其中所述他汀类药物是阿托伐他汀。39. 如权利要求1至35中任何一项所述之方法，其中患者在该药物组合物施用之时，未 接受治疗性他汀类药物治疗。
【专利摘要】本发明提供了一些降低患者血清中各种脂蛋白组分的方法。本发明之方法包括降低患者血清残余胆固醇和/或一种或多种LDL-C亚组分的血清浓度。本发明之方法包括选择显示出血清脂蛋白水平升高的患者，并给该患者施用一种含PCSK9抑制剂的药物组合物。在某些实施例中，所述PCSK9抑制剂是一种抗PCSK9抗体，例如本文称为mAb316P的示范性抗体。
【IPC分类】A61K39/395, A61K45/06, A61P9/00, A61P3/06
【公开号】CN105473161
【申请号】CN201480030575
【发明人】G·斯维尔戈尔德, W·J·萨赛拉, R·C·波尔蒂
【申请人】瑞泽恩制药公司
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2014年5月30日
【公告号】CA2913550A1, EP3003361A2, US20140356371, WO2014194168A2, WO2014194168A3