3-2.69(m，2H)，2.55(dd，J=14.7,4.9Hz，2H)，2.02-1.78(m, 2H)，0.87/0.83(两个重叠的二重峰，J = 6.8,6.細z，12H).
[0416] 实施例 MD-20 至 MD-32
[0417] 实施例MD-20至MD-32使用如在实施例MD-19中阐述的一般操作制备。在如下实施 例中，在LC/MS条件MD-2下获得所有LC/MS数据。
[0420]
[0423] 向实施例 MD-19,步骤3(17.0111旨，0.036111111〇1)和特戊酸(36.4化，0.313臟〇1)在无水 NMP中的溶液中加入1-氨基环丙烷甲腊/1.0HC1 (35mg，0.295mmol)，随后加入DIEA(5化L， 0.298mmol)。将反应混合物用氮气冲洗，小屯、地封盖，并置于75°C沙浴保持化45min。将反 应混合物进一步在微波反应器中在l〇〇°C在高功率下加热比。将粗物质经制备性HPLC纯化， 采用W下条件:柱:X化idge C18，19x200mm，5-WI1颗粒;流动相A:含有10-mM乙酸锭的5:95乙 腊:水;流动相B:含有10-mM乙酸锭的95:5乙腊:水;梯度：20-60%8，历时15111111，然后5-111111 保持在100 % B;流速:20mL/min。得到纯的标题化合物(3.4mg)。LC/MS条件MD-2: [M+H] +661， [M-H]-659;Rt = 2.71min.
[0424] 实施例 mD-34
[04 巧]
[04%]向（15，1'5)-1，1'-(5,5'-([1，1'-联苯]-4,4'-二基)二（1护咪挫-5,2-二基））二 (2,2-二甲基丙-1-胺）/4.0肥1(参见专利申请￥02013106520;110111旨，0.183111111〇1)、来自实施 例MD-6，步骤b的物质（32.4mg，0.149mmol)和HATU(70mg，0.184mmol)在无水 CH2Cl2(3mL)中 的溶液中加入DIEAUOO化，0.573mmol)。将反应混合物用氣气短暂冲洗，小屯、地封盖并在室 溫揽拌1她。将粗物质经制备性LC/MS纯化，采用w下条件:柱:X化idge C18，19x200mm，5-ym 颗粒;流动相A:含有10-mM乙酸锭的5:95乙腊:水;流动相B:含有10-mM乙酸锭的95: 5乙腊： 水;梯度:40-80 % B，历时15min，然后5-min保持在100 % B;流速:20血/min。得到纯的标题化 合物（26.4mg)。LC/MS条件MD-l:[M+H]+855，Rt = 3.79min。lHNMR(600M监，DMS0-d6)δl2.12 (br.s.，2H)，7.94-7.50(m，12H)，4.89(d，J = 9.甜z，2H)，4.23(d，J = 6.細z，2H)，3.64-3.48 (m，4H)，3.03-2.77(m，4H)，2.50-2.29(m，4H)，1.66(dt，J=13.3,6.6Hz，2H)，1.18(t，J = 6.6Hz，6H)，0.95(s，18H)，0.83(d，J = 6.細z，12H).
[0427] 实施例 MD-35
[0428]
[0429] 向来自实施例MD-18，步骤c的物质（64mg，0.066mmo 1)在二氯甲烧(4mL)中的混悬 液中加入册AT 巧 0111旨，0.367111111〇1)、异下基胺（65.化1^，0.656111111〇1)、抓(：(95111旨，0.496111111〇1)和 DIEA(11扣L，0.658mmol)。将所得的溶液用氮气短暂冲洗，封盖并在室溫揽拌1她。加入额外 的邸(：（60111旨，0.313111111〇1)、0164(7化1^，0.401111111〇1)和异下基胺（20化1^，2.01111111〇1)，将反应混 合物用氮气短暂冲洗，小屯、地封盖并在室溫揽拌1她。将溶剂在溫和的氮气流下除去并将粗 产物经制备性LC/MS纯化，采用W下条件:柱:X化idge C18，19x200mm，5-WI1颗粒;流动相A: 含有10-mM乙酸锭的5 : 95甲醇：水;流动相B:含有10-mM乙酸锭的95 : 5甲醇：水；梯度：60-100%B，历时30min，然后5-min保持在100%B;流速：20mL/min。得到标题化合物（4.5mg)。 LC/MS条件MD-1: [M+扣 +6化；Rt = 3.32min.
[0430] 实施例 MD-36 至 MD-40
[0431] 实施例MD-36至MD-40使用在实施例MD-13中阐述的一般操作制备，除了使用来自 实施例MD-11，步骤C的物质。注意:在实施例MD-38和实施例MD-40中，将THF替代二氯甲烧用 作溶剂。对于W下实施例，在条件MD-1下获得所有LC/MS数据。
[0432]
[0433]
[0434] 实施例 MD-41 至 MD-54
[0435] 实施例MD-41至MD-54使用在实施例MD-19中阐述的操作制备，除了使用来自实施 例MD-18,步骤d的物质。注意:在其中试剂为盐的实施例中，将DIEA(8.3mole当量)加入至反 应混合物中。对于W下实施例，使用条件MD-1获得所有LC/MS数据。
[0438]
[0439] 实施例 MD-55
[0440]
[0441] 实施例MD-55，步骤a
[0442]
[0443] 按照在实施例MD-18,步骤d中所述的一般操作，除了使用来自实施例MD-1，步骤C 的物质（290mg，0.301mmol)，获得标题化合物，其为白色固体。4醒3(4001化，〔0(：13)88.02-7.84(m，4H)，7.81-7.65(m，4H)，7.57(s，2H)，3.60-3.37(m，4H)，2.86(dd，J=17.9,2.9Hz, 2H)，2.80-2.64(m，2H)，2.54-2.35(m，2H)，2.24-2.08(m，4H) eLC/MS条件MD-1; [Μ+ΗΓ 651.4，Rt 二3.18min.
[0444] 实施例55
[0445] 实施例MD-55使用在实施例MD-19中阐述的一般操作制备。LC/MS条件MD-1; [M+H] + 761.6, Rt = 3.3.60min.
[0446] 实施例 MD-56 至 MD-57
[0447] 实施例MD-56使用在实施例MD-19中阐述的一般操作制备，除了使用来自实施例 MD-55,步骤a的物质和N-异丙基环丙胺。应注意由于在胺前体中存在异丙基胺污染，因此还 分离了实施例MD-57。对于W下实施例，使用LC/MS条件MD-1获得Rt。
[0452]标题化合物按照在实施例MD-3中所述的一般操作制备。注意：在该实施例中，将 DIEA(200μ1^，1.15mmo 1)加入至反应混合物中。LC/MS条件MD-1: [M+扣 +903.5，Rt = 3.22min.
[0453] 实施例 MD-59 至 MD-60
[0454]
[0455] 在氮气下向干燥的微波小瓶中加入实施例MD-18，步骤d(20mg，0.042mmol)、特戊 酸(43.化L，0.371mmol)和无水NMP(700化）。将反应混合物用氮气冲洗，然后用N-(丙-2-基） 环丙胺(2化l，0.169mmol)处理。将反应混合物小屯、地封盖并置于75°C沙浴保持lOmin，然后 使用微波元件在130°C在高功率下加热化。将粗物质经制备性LC/MS纯化，采用W下条件得 到实施例MD-59和MD-60:柱:X化idge C18，19xmm，5-皿颗粒;流动相A:含有10-mM乙酸锭的 5:95甲醇:水;流动相B:含有10-mM乙酸锭的95:5甲醇:水;梯度:40-100%B，历时16min，然 后5-min保持在100%B;流速:20mL/min。应注意最终产物的来源可能是由于起始胺的污染。
[0456] 实施例MD-59: LC/MS条件MD-1: [M+扣+597.5，Rt = 3.22min.
[0457] 实施例MD-60: LC/MS条件MD-1: [M+扣+637.6，Rt = 3.36min.
[045引实施例MD-61
[0459]
[0460] 标题化合物根据在实施例MD-2中所述的一般操作制备。LC/MS条件MD-1:[M+H] + 789.5，Rt = 3.09min.
[0461] 实施例B1
[0465] 向2-(叔下基）丙二酸二乙醋（1.5g，6.94mmo 1)在乙醇（5mL)中的溶液中加入KOH (ο. 389g，6.94mmol)在乙醇（ImL)中的溶液。将反应混合物在室溫揽拌过夜。将易挥发组分 真空除去。将残留物用水稀释，用己烧萃取W除去杂质。将水层用1.5N HC1酸化并用乙酸乙 醋（25血x2)萃取，用水（15mL)和盐水(20mL)洗涂，经化2S化干燥，滤过并真空浓缩得到标题 化合物（0.9g)，其为无色胶状物质。lHNMR(CDCl3，δ = 7.2帥pm，400MHz):δ4.26(q，J = 4.80Hz，2H)，3.26(s，lH)，1.31(t J = 7.20Hz，3H)，1.14(s，9H).
[0466] 实施例Bl，步骤b
[0467]
[0468] 向1，1 '-([1，Γ-联苯]-4,4'-二基）二（2-漠乙酬）（1.052g，2.66mmol)在 DMF (10血）中的溶液中加入实施例61，步骤曰（1邑，5.31111111〇1)和0距4(5.571^，31.9臟〇1)。将反应 混合物在室溫揽拌化。将易挥发组分真空除去并将残留物用水稀释并用DCM(10mlx2)萃取， 经化2S化干燥并真空浓缩。将粗反应混合物经ISC0纯化(40g Redisep硅胶柱，34%乙酸乙 醋/己烧），得到实施例B1,步骤b(l .6g)，其为无色胶状物质。1册MR(Me0D,S = 3.34ppm, 400MHz):S8.09(dd，J = 1.6,4.8Hz，4H)，7.87(dd，J = 2.00,6.80Hz，4H)，5.43-5.56(m，4H)， 4.20(q，J = 7.20Hz，4H)，3.47(s，2H)，1.28(t，J = 7.20Hz，6H)，1.19(s，18H).
[0469] 实施例Bl，步骤c
[0470]
[0471 ] 向实施例Bl，步骤6(1.6邑111，1.637111111〇1)在二甲苯（2〇111〇中的溶液中加入乙酸锭 (2.52g，32.7mmol)和咪挫(0.669g，9.82mmol)。将反应混合物用氣气净化30min并在密封管 中在130°C揽拌过夜。将易挥发组分真空除去，用水稀释并用DCM萃取，经化2S(k干燥并真空 浓缩。将粗物质经ISC0纯化(40g Redisep硅胶柱，48%乙酸乙醋/己烧），得到二乙基实施例 B1，步骤C (0.49g)，其为黄色固体。LC/MS条件B-12: Rt = 2.54min，1h NMR(MeOD，δ = 3.34ppm， 400MHz):S7.81(dd J = 2.00,6.60Hz，4H)，7.70(dd J = 2.00,6.60Hz，4H)，7.44(s，2H), 4.33-4.16(m,4H),3.85(s,2H),1·37-1.21(m,6H),1.11(s,18H),LC/MS:[M+2H]" C21出巧rN3〇2的分析计算值:570.3;实测值571.0(M+1).
[0472] 实施例Bl，步骤d
[0473]
[0474] 向二乙基实施例B1，步骤c (0.49g，0.859mmo 1)在THF (5mL)和甲醇（5mL)混合物中 的溶液中加入KOH(ο. 482g，8.59mmo 1)在水(5mL)中的溶液。将反应混合物在室溫揽拌2天。 将易挥发组分真空除去，将水层用1.5N肥1酸化，用乙酸乙醋（10mlx2)萃取，用盐水洗涂， 经化2S化干燥并真空浓缩得到实施例B1，步骤d(0.35g)，其为黄色固体。LC/MS(条件B-12): Rt = 1.637min，1h NMR(DMS0-d6，δ = 2.50卵m，400MHz): δ7.88-7.52(m，8H)，7.47-7.26 (m， 2H)，3.28-3.14(m, 2H)，1.09-0.89(m, 18H) eLC/MS: [M+2H]+C2iH2i化化〇2的分析计算值： 514.2;实测值515.2(1+1).
[04巧]实施例B1
[0476] 向实施例Bl，步骤d(0.04g，0.063mmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入2-甲基丙-2-胺（0.023g，0.315mmol)、DIEA(0.088血，0.504mmol)和HATU(0.050g，0.132mmol)。在室溫揽 拌过夜后，将易挥发组分真空除去并将残留物溶于DCM(5mLx2)，用盐水洗涂，经化2S化干燥 并真空浓缩。将粗物质经反相HPLC纯化得到实施例B1，其为游离碱的形式，作为立体异构体 的混合物(5.9mg)eLC(条件32和35):〉98%均质性指数。1(：/^5(条件12):把=2.717111111丄(：/ MS: [M+H]+C42H日4化oOsS的分析计算值：624.4;实测值625.4。1h NMR(MeOD，δ = 3.34ppm， 400MHz):S7.81(d，J = 8.0Hz，4H)，7.71(d，J = 8.5Hz，4H)，7.42(s，2H)，3.50(s，2H)，1.37 (br.s.，1細），1.13(br.s.，1細）.
[0477]
[0478]
[0479]
[0480] 生物学活性
[0481] 伴随滴定相关第二化合物，使用不同量的NS5A祀向化合物可确定测试化合物的 NS5A协同抑制作用。据了解，NS5A祀向化合物与相关第二化合物当针对HCV变异体单独测试 时，基本上无活性或活性较弱，且仅当针对HCV变异体W组合产品形式测试时才恢复3倍或3 倍W上抑制的协同抑制效能。在一个实施方案中，可保持作为NS5A祀向化合物的化合物 BMS-790052恒定处于200nM的固定浓度，随后针对肥V变异体滴定测试化合物。在一个实施 方案中，肥V基因型株系可为基因型la,其在NS5A蛋白的氨基酸30处含有由谷氨酷胺至谷氨 酸组成的变化。测试化合物可选自上文所列的化合物或选自文献中所呈现的其它化合物。 本领域技术人员可容易地在如本领域中先前已展示的基于HCV复制子细胞的测定中测试化 合物，且可容易地测定特定化合物的50%抑制的有效浓度化C50)。
[0482] 为作说明，可在由NS5A蛋白中谷氨酷胺30变为谷氨酸的基因型-la变异体组成的 基于肥V复制子细胞的测定中滴定化合物P-55。单独滴定BMS-790052将得到约200nM的ECso 值，而单独滴定P-55将得到〉200nM的ECso值。在固定量的200nM BMS-790052存在下滴定P-55 所得到的P-55的ECso值为约2nM，展示组合产品的协同抑制作用>100倍。类似地，在固定量的 200nM P-55存在下滴定BMS-790052所得到的BMS-790052的ECso值为约2nM，展示组合产品的 相互协同抑制作用为约100倍(PCT/US2011/043785,2011年7月13日提交，表3)。可w类似方 式测试另外的化合物且确定增效剂活性的等级;下表中展示所选化合物针对基因型laQ^E 变异体的该等级。
[0483]
[0484] 应当理解的是，基因型并不限于基因型la变异体，而可涵盖肥V的所有基因型变异 体，包括但不限于如W02012/009394中所展示的化、2曰、3曰、4曰、5曰、6曰的版：￥变异体。还应当理 解的，协同作用并不限于BMS-790052或P-55组合产品，而可来源于本身对HCV变异体具有较 低效能或无效能的NS5A祀向化合物的其它组合产品。
[0485]
[0486]
[0487]
[0488] 本领域技术人员显而易见的是本公开并不限于前述说明性实施例，且其可在不脱 离其基本属性的情况下W其它特定形式实施。因此，需要在所有方面中将实施例视为说明 性而非限制性的，应参考所附权利要求而非前述实施例，且因此在权利要求的等效物的含 义和范围内的所有变化均欲包涵于其中。
【主权项】
1. 包含NS5A靶向化合物和NS5A增效剂的组合产品，所述组合产品当给药时，对含有单 独给药NS5A靶向化合物时产生抗性的突变的变异体产生协同抗HCV活性，其中所述NS5A增 效剂为式(I)化合物：或其药用盐，其中R1选自烷氧基、烷基、卤代烷基和羟基； R2为氢;或可选择地， R1和R2与它们所连接的碳原子一起形成二氧杂环戊基环，其中所述二氧杂环戊基环任 选取代有一或两个甲基； R1选自烷氧基、烷基、卤代烷基和羟基； R2'为氢;或可选择地， R1'和R2'与它们所连接的碳原子一起形成二氧杂环戊基环，其中所述二氧杂环戊基环任 选取代有两个甲基;且 R3和R3'独立地选自烷氧基、羟基和-NRaRb; RlPRb独立地选自氣、烷氧基幾基烷基、烷基、多环烷基、（多环烷基)烷基、环烷基、（环 烷基)烷基、羟基烷基、-NReRd、（ NReRd)烷基、（NReRd)羰基烷基、苯基烷基和吡喃基，其中所述 环烷基、所述(环烷基)烷基的环烷基部分和所述苯基烷基的苯基部分任选取代有一或两个 独立选自以下的基团：烷氧基、烷氧基烷基、氨基羰基、氰基、卤素、羟基和苯基;且其中所述 (NR eRd)烷基的烷基部分任选取代有羟基;或可选择地， RlPRb与它们所连接的氮原子一起形成选自以下的环：吗啉、哌啶和哌嗪，其中每个环 任选取代有一或两个选自以下的基团：烷氧基羰基、烷基、卤素、氧代和任选取代有卤素的 苯基;且 Rc^PRd中的个选自氣和烷基且另个选自氣、烷氧基幾基和烷基;或可选择地， RlPRd与它们所连接的氮原子一起形成噁唑烷酮环。2. 权利要求1的组合产品，其中所述式(I)化合物选自或其药用盐。3. 组合物，其包含权利要求1的组合产品和一种或多种药用载体。4. 权利要求3的组合物，其还包含一种或两种具有抗HCV活性的其它化合物。5. 权利要求4的组合物，其中所述其它化合物中的至少一种为干扰素或利巴韦林。6. 权利要求5的组合物，其中所述干扰素选自干扰素 α2Β、聚乙二醇化干扰素 α、聚乙二 醇化干扰素 λ、复合干扰素、干扰素 α2Α和成淋巴细胞样干扰素 τ。7. 权利要求4的组合物，其中所述其它化合物中的至少一种有效抑制选自以下的靶标 的功能以治疗HCV感染:HCV蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV 组装、HCV释出、HCV NS5A蛋白和頂PDH。8. 治疗患者的HCV感染的方法，其包括向所述患者给予治疗有效量的权利要求1的组合 产品或其药用盐。9. 权利要求8的方法，其还包括在所述组合产品或其药用盐之前、之后或同时给予一种 或两种具有抗HCV活性的其它化合物。10. 权利要求9的方法，其中所述其它化合物中的至少一种为干扰素或利巴韦林。11. 权利要求1 〇的方法，其中所述干扰素选自干扰素 α2Β、聚乙二醇化干扰素 α、聚乙二 醇化干扰素 λ、复合干扰素、干扰素 α2Α和成淋巴细胞样干扰素 τ。12. 权利要求9的方法，其中所述其它化合物中的至少一种有效抑制选自以下的靶标的 功能以治疗HCV感染:HCV蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV进入、HCV组 装、HCV释出、HCV NS5A蛋白和頂PDH。
【专利摘要】本公开大体上涉及抗病毒化合物，且更具体地涉及可抑制由丙型肝炎病毒(HCV)所编码的NS5A蛋白功能的化合物的组合产品、包含所述组合产品的组合物和抑制NS5A蛋白功能的方法。
【IPC分类】C07D295/00, A61K31/4178, A61K31/496, A61P31/14, C07D233/00, A61K31/421, A61K31/5377, C07D261/02, A61K31/4164
【公开号】CN105530933
【申请号】CN201480050800
【发明人】M·G·索尔尼尔, D·B·弗伦内松, M·贝莱玛
【申请人】百时美施贵宝公司
【公开日】2016年4月27日
【申请日】2014年7月15日
【公告号】EP3021845A1, US20160166545, WO2015009744A1