后28化测定）。
[0029] 图6为常山碱百分含量随时间变化图。
[0030] 图7为本发明制备的常山碱盐酸盐百分含量随时间变化图。
【具体实施方式】
[0031] 下面通过实施例详细说明本发明，但运些实施例并非限制着本发明的范围。
[0032] 常山药材购自河北安国药材市场，经中国中医科学院中药研究所李春副研究员鉴 定为虎耳草科植物黄常山（Die虹oa febri化ga Lour.)的干燥根。
[0033] 实施例1常山碱盐酸盐的制备
[0034] 取常山药材粗粉，经70%乙醇热回流提取，提取液回收溶剂至无醇味后，先加入浓 盐酸调节抑值至2.5左右，然后加入氯仿萃取除去酸性杂质，萃余相中加入浓氨水调节pH值 至9.0左右，再加入氯仿萃取，氯仿萃取液回收溶剂得到常山总生物碱。
[0035] 向得到的常山总生物碱中加入无水乙醇溶解并过滤得溶液，向该常山总生物碱的 无水乙醇溶液中直接通入盐酸气体4小时，得到沉淀物。将该沉淀物用无水乙醇重结晶3次， 得到常山碱盐酸盐。经HPLC检测，其含量为96 % W上。常山碱盐酸盐元素分析结果见表1。
[0036] 表1常山碱和常山碱盐酸盐的元素分析结果
[0038] 核磁所用仪器为化uker Avance III 600-MVIR spectrometeH 内标为TMS，德国 化址er公司）。常山碱的氨谱如图1所示。
[0039] 实施例2常山碱和常山碱盐酸盐稳定性研究
[0040] 采用HPLC法测定常山碱和常山碱盐酸盐的稳定性。
[0041 ] 色谱条件如下:Agilent 1200高效液相色谱仪;色谱柱:YWG-Ci8(4.6mmX250mm，10 皿）；流动相：乙腊-水-S乙胺-冰醋酸(9:91:0.35:0.75);检测波长:225皿;柱溫:30°C;流 速：lmL/min。样品浓度为：1.0mg/mL进样量：10化。
[0042] 对照品溶液的制备:精密称取常山碱对照品（参考文献:张雅，李春，雷国莲.常山 化学成分的研究.中国实验方剂学杂志，2010,16(5) :77-79.制备)和如上制备的常山碱盐 酸盐(常山碱盐酸盐制备后放入减压干燥器中干燥24小时)各IOmg,分别加入甲醇溶解并定 容至两个IOmL容量瓶中，即得。
[0043] 在样品配置后0、1、2、4、8、12、288小时进样测定，依据相对峰面积计算常山碱 和常山碱盐酸盐的相对百分含量，得到的色谱图见图2-5。另外，W样品配置后放置时间为 横坐标，常山碱或常山碱盐酸盐的相对百分含量为纵坐标作图，结果见图6和7。常山总生物 碱中主要包含常山碱和异常山碱，二者为互变异构体，在通入盐酸蒸汽成盐的过程中，也有 极少量的异常山碱和盐酸形成异常山盐酸盐，因此在常山碱盐酸盐的HPLC测定中，可同时 看到常山碱盐酸盐和异常山碱盐酸盐两个色谱峰，二者的相对峰面积占总峰面积的比例分 别为 96.3%和 3.7%。
[0044] 结果表明，常山碱盐酸盐的稳定性明显高于常山碱，在测定时间288小时内（12 天），常山碱盐酸盐的质量分数几乎没有改变，而常山碱的质量分数下降了近一半。
[0045] 实施例3常山碱和常山碱盐酸盐水溶性研究
[0046] 取如上制得的常山碱盐酸盐研磨成细粉，在室溫下精密称定IOmg,加入50化去离 子水，每隔5分钟强力振摇30秒钟，30分钟内无目视可见的溶质颗粒，即完全溶解。按照2015 版《中国药典》中对于溶解度的规定，常山碱盐酸盐为易溶于水[易溶:系指溶质Ig(mL)能在 溶剂1~不到IOmL中溶解]。
[0047] 取常山碱研磨成细粉，在室溫下精密称定IOmg,逐渐加入去离子水，每隔5分钟强 力振摇30秒钟，直到加水近IOOmL时，常山碱才完全溶解，因此常山碱在水中的溶解度为极 微溶解[极微溶解:系指溶质Ig能在溶剂1000~不到1000 OmL中溶解]。
[0048] 实施例4常山碱和常山碱盐酸盐的抗追效价比较
[0049] 抗追实验方法：昆明小鼠，雄性，体重18-20g，北京维通利华实验动物繁育中屯、提 供。伯氏追原虫(Plasmodium berghei化173株，1983年由英国伦敦卫生与热带医学院医学 原虫系引进，本实验室低溫冷冻和血传交替进行保种。用化ters 4天抑制试验法评价常山 碱及常山碱盐抗追效价，通过小鼠体内追原虫接种获得感染追原虫红细胞，镜下对追原虫 感染红细胞进行计数，统计每毫升小鼠血液中含有追原虫感染红细胞数量，最后对实验模 型动物进行腹腔接种1 X IO7个被寄生红细胞，接种原虫后DO~D3连续给药4天，小鼠每天灌 胃给药1次，每次给药体积〇.2mL，D4每组动物定量取血，涂制薄血膜，甲醇固定。试验分追原 虫感染动物不同剂量的给药组(0.16mg/kg、0.26mg/kg、0.43mg/kg、0.72mg/kg、1.2mg/kg、 2mg/kg常山碱和0.16mg/kg、0.26mg/kg、0.43mg/kg、0.72mg/kg、1.2mg/kg、2mg/kg常山碱 盐)和不给药追原虫感染模型对照组(Omg/kg)，每组10只小鼠，分别进行Gierma染色，应用 光学显微镜进行镜检追原虫，放大倍率为1000倍。
[0050] 表2常山碱和常山碱盐抗追效价比较
[0052] 抗追药效实验结果表明，常山碱盐酸盐抗追效价由于其稳定性提升，其有效基团 转化为无效基团的数量大大减少，因此其抗追效价相比常山碱有显著提升。
[0053] 本发明通过简单可靠的制备工艺，得到了稳定性和水溶性均较常山碱大幅增加的 常山碱盐酸盐，其有利于被机体吸收并大幅增加常山碱的抗追活性，因此，有望开发成为抗 追新药。
【主权项】
1. 一种常山碱盐酸盐。2. 根据权利要求1所述的常山碱盐酸盐的制备方法，其包括将盐酸气体通入常山总生 物碱的乙醇溶液中，和用乙醇重结晶的步骤。3. 根据权利要求2所述的制备方法，其中常山总生物碱的乙醇溶液为常山总生物碱的 无水乙醇溶液。4. 根据权利要求2或3所述的制备方法，其中用50 %~100 %的乙醇进行重结晶。5. -种药物组合物，其含有治疗有效量的根据权利要求1所述的常山碱盐酸盐和一种 或多种药学上可接受的载体。6. 根据权利要求1所述的常山碱盐酸盐或根据权利要求5所述的药物组合物在制备预 防或治疗由疟原虫、鸡球虫、蓝氏贾第鞭毛虫引起的疾病的药物中的用途。7. 根据权利要求6所述的用途，其中所述疟原虫为多重耐药虫株。8. 根据权利要求6或7所述的用途，其中所述由疟原虫引起的疾病为疟疾。9. 根据权利要求1所述的常山碱盐酸盐或根据权利要求5所述的药物组合物在制备药 物中的用途，所述药物用于抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗心律失常、或降压。
【专利摘要】本发明涉及常山碱盐酸盐及其制备方法和医药应用。具体而言，本发明通过将盐酸气体通入常山总生物碱的乙醇溶液中得到了稳定性和水溶性均较常山碱增加的常山碱盐酸盐，该常山碱盐酸盐的抗疟活性增强，可以用作新的抗疟药物。
【IPC分类】A61P31/04, A61P9/06, A61P33/02, A61P31/12, C07D401/06, A61P33/06, A61P29/00, A61K36/185, A61P9/12, A61K31/517
【公开号】CN105535045
【申请号】CN201610069066
【发明人】叶祖光, 李春, 李思迪, 梁爱华
【申请人】中国中医科学院中药研究所
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年2月1日