降低血浆中的Fibulin 3-1水平。血浆中的 門bulin 3-1水平可与骨关节炎评分正相关。运表明，在豚鼠模型中，門b 3-1是与骨关节炎 发生和发展有关的生物标志物，并且可用于评估处理效果。
[0158] 批内和批间变异系数均小于10%，所有生物标志物分析的稀释曲线与标准曲线均 呈平行关系。
[0159] 计算每个参数的结果(平均值±标准偏差）。对所有实验数据进行正态性检验，然 后利用Dunnett' S事后检验或皮尔逊相关系数进行参数方差分析(ANOVA) e*p<0.05;**< 0.01;**卸<0.001。橄揽苦巧、芦下和芦下+姜黄素处理可通过不同机制降低豚鼠的骨关节 炎评分，但与对照组相比，只有橄揽苦巧能减轻滑膜炎。
[0160] 实例3
[0161] 研究成骨细胞的胶原合成和维生素 D的增强作用。按照Declercq等人(2004年)所 描述的方法，通过酶促消化从新生Wistar大鼠的头骨中分离原代成骨细胞。在所有实验中， 在5%C02和37°C条件下，将细胞保持在含有10%加热灭活的胎牛血清和1%青霉素/链霉素 的a-最低必需培养基(a-MEM)中。然后将细胞W3500个细胞/孔的密度接种于胶原1包被的 96孔板中，或W3 X IO4个细胞/孔的密度接种于24孔板中，在a-MEM中培养2天直到细胞长 满。然后使细胞暴露于不同的条件:基本培养基(C-)，含有50yg/mL抗坏血酸、5mM0-甘油憐 酸盐的基本培养基(C+;优化培养基），添加 IiiM橄揽苦巧(OLP)和/或IiiM径基酪醇化Ty)和/ 或1Q-9M 1，25-二径基维生素 D3 (1，25 (OH) 2D3)的基本培养基。用二甲基亚讽(DMSO)溶解OLP 和HTy,用乙醇溶解1，25(0H)2D3dDMS0和乙醇在培养基中的最终浓度均为0.1%。每两天更 换一次培养基。
[0162] 9天后，利用Biocolor公司的Sircol测定法测量细胞胶原的含量。该Sircol胶原测 定法是一种定量染料结合方法，用于在体外培养过程中分析从哺乳动物组织和细胞中提取 的胶原。该染色试剂特异性结合到哺乳动物胶原（I至V型）中的[Gly-X-Y]n螺旋结构。
[0163] 图14示出了成骨细胞培养9天后的胶原合成情况，其中通过测定组合使用1，25 (0H)2D3、0LP和HTy刺激细胞后，每毫克总蛋白中产生的胶原微克数来表示胶原合成量。
[0164] 1，25(OH)2D3 = 1〇-9m 1,25-二径基维生素 D3
[0165] OLP =化M橄揽苦巧
[0166] HTY =IiiM 径基酪醇
[0167] C+ =优化培养基，用作阳性对照
[0168] 数据表示为平均值±均值标准误差(S次平行实验）。统计学分析:依次用Kruskal Wallis检验和Mann Whitney U检验(双尾检验），将结果与阴性对照(C-)进行统计学分析，* p<0?05;林p<0?Ol;*林p<0?OOlD
[0169] 如图14所示，向成骨细胞中添加1，25(0H)2D3、化P和HTy的组合并培养9天后，显著 刺激了成骨细胞的细胞胶原合成。 巧170] 实例4
[0171]研究成骨细胞的碱性憐酸酶活性和维生素 D的增强作用。按照Declercq等人(2004 年)所描述的方法，通过酶促消化从新生Wistar大鼠的头骨中分离原代成骨细胞。在所有实 验中，在5%C02和37°C条件下，将细胞保持在含有10%加热灭活的胎牛血清和1%青霉素/ 链霉素的O-最低必需培养基(O-MEM)中。然后将细胞W3500个细胞/孔的密度接种于胶原1 包被的96孔板中，或W3X IO4个细胞/孔的密度接种于24孔板中，在a-MEM中培养2天直到细 胞长满。然后使细胞暴露于不同的条件:基本培养基(C-)，含有50iig/mL抗坏血酸、5mM0-甘 油憐酸盐的基本培养基(C+;优化培养基），添加 IiiM橄揽苦巧(OLP)和/或IiiM径基酪醇化Ty) 和/或IQ-9M 1，25-二径基维生素 D3 (1，25 (OH) 2D3)的基本培养基。用二甲基亚讽(DMSO)溶解 OLP和HTy,用乙醇溶解1，25(0H)2D3dDMS0和乙醇在培养基中的最终浓度均为0.1%。每两天 更换一次培养基。
[0172] 在处理第0、5、9、12、15天时，对碱性憐酸酶(ALP)的酶活性进行动力学测量。用PBS 冲洗成骨细胞两次，然后置于干冰上冻结。然后通过冻融循环，并均化到20化L IM二乙醇胺 和0.24mM氯化儀缓冲液(pH 9.8) (ALP缓冲液）中，从而裂解细胞。将细胞裂解物（1化L)加入 200化溶于ALP缓冲液的6mg/mL对硝基苯憐酸盐(P-NPP)溶液。使用化rioSklan Flash酶标 仪测定405nm处的吸光度，具体条件是在30°C下，30分钟内每2分30秒测定一次。ALP活性表 示为每毫克蛋白每小时的p-NPP微摩尔数。根据化a壯ord的方法，利用如ick 8化的BioRad 蛋白测定法进行蛋白质测定。
[0173] 图15示出了培养9天后的碱性憐酸酶(ALP)活性，其中通过测定使用1，25(0H)2D3、 OLP和HTy的组合后，每毫克蛋白每小时的ALP微摩尔数来表示ALP活性。
[0174] C-=基本培养基，用作阴性对照
[0175] 1，25(OH)2D3 = 1〇-9m 1,25-二径基维生素 D3
[0176] OLP = IiiM 橄揽苦巧
[0177] HTY =IiiM 径基酪醇
[0178] C+ =优化培养基，用作阳性对照
[0179] 数据表示为平均值±均值标准误差。统计学分析:依次用Kruskal Wallis检验和 Mann Whitney U检验（双尾检验），将结果与阴性对照（C-)进行统计学分析，*p<0.05; **p< 0.01;***p<0.001。
[0180] 图15进一步表明，向成骨细胞中添加1，25(0H)2D3、0LP和HTy的组合并培养9天后， 显著刺激了成骨细胞的细胞胶原合成。图16至图19示出了在存在1，25(0H)2D3、橄揽苦巧 (OLP)和径基酪醇化yt)的情况下，所培养的成骨细胞的碱性憐酸酶(ALP)活性;其中则寸间 进程模式示出了单独或组合添加 W上物质的实验结果。
[0181] C-=基本培养基，用作阴性对照
[0182] 1，25(OH)2D3 = 1〇-9m 1,25-二径基维生素 D3
[0183] OLP =化M橄揽苦巧
[0184] HTY= IiiM 径基酪醇
[0185] C+ =优化培养基，用作阳性对照。
[0186] 数据表示为平均值±均值标准误差。统计学分析:依次用Kruskal Wal 1 iS检验和 Mann Whitney U检验（双尾检验），将结果与阴性对照（C-)进行统计学分析，*p<0.05; **p< 0.01;***p<0.001。
[0187] 从图16所示的数据可W看出，单独添加维生素 D3确实在第15天时诱导了AP活性的 小幅但却具有统计学上的显著性的增加，运表明存在成骨细胞活性、骨骼形成和/或软骨合 成代谢。同样，单独添加 HTy或化P也在第15天时导致了 AP活性的小幅增加，与添加维生素 D3 的效果相当(分别见各图）。
[0188] 组合使用HTy和化P还增加了成骨细胞活性(仍在第15天时），但不如组合使用维生 素 D和HTy或维生素 D和化P时的活性高。仍然，只有在第12天和第15天时才与对照组有统计 学上的显著差异。早期测定结果(第5天和第9天)与阴性对照并无统计学差异。
[0189] 因此，所示数据说明了添加维生素 D具有两种效果。首先，将维生素 D与HTy和化P中 的一者或两者一起添加可增加成骨细胞的响应。运可通过比较(例如）第15天的水平看出。 其次，将维生素 D与HTy和化P中的一者或两者一起添加可比对照组更早地引发成骨细胞的 活性。因此，结论是，添加维生素 D可导致更早和更强的响应。由此可W断定，添加维生素 D可 加强由OLP和/或HTy引发的骨骼形成和/或软骨合成代谢响应。
[0190]应当理解，对本文所述的目前优选的实施例作出的各种变化和修改对于本领域的 技术人员将是显而易见的。可在不脱离本发明主题的实质和范围、且不削弱其预期优点的 前提下作出此类变化和修改。因此，运些变化和修改旨在由所附权利要求书涵盖。
【主权项】
1. 一种治疗滑膜炎的方法，所述方法包括将包含治疗有效量的植物营养素的组合物施 用于患有滑膜炎的个体，所述植物营养素选自橄榄苦苷、芦丁、姜黄素以及它们的组合。2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述滑膜炎与选自狼疮、痛风、关节炎以及它们的 组合的病症相关。3. 根据权利要求2所述的方法，其中所述病症为关节炎，所述关节炎选自类风湿性关节 炎、骨关节炎、骨软骨炎、骨关节病以及它们的组合。4. 根据权利要求1所述的方法，其中所述植物营养素包含橄榄苦苷。5. 根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物还包含另外的生物活性化合物，所述生 物活性化合物选自槲皮素、羟基酪醇、维生素 D以及它们的组合。6. 根据权利要求1所述的方法，其中所述植物营养素从植物提取物中分离。7. -种预防滑膜炎的方法，所述方法包括将包含治疗有效量的植物营养素的组合物施 用于具有患滑膜炎风险的个体，所述植物营养素选自橄榄苦苷、芦丁、姜黄素以及它们的组 合。8. 根据权利要求7所述的方法，其中所述个体选自衰老的人和老年人。9. 根据权利要求7所述的方法，其中所述植物营养素从植物提取物中分离。10. 根据权利要求7所述的方法，其中所述组合物还包含另外的生物活性化合物，所述 生物活性化合物选自槲皮素、羟基酪醇、维生素 D以及它们的组合。11. 根据权利要求7所述的方法，其中所述组合物每天施用并持续至少一个月。12. -种用于治疗或预防滑膜炎的组合物，所述组合物包含治疗有效量的植物营养素， 所述植物营养素选自橄榄苦苷、芦丁、姜黄素以及它们的组合。13. 根据权利要求12所述的组合物，其中所述组合物为营养组合物。14. 根据权利要求13所述的组合物，其中所述营养组合物包含选自蛋白质、碳水化合 物、脂肪以及它们的组合的组分。15. -种治疗或预防滑膜炎继发的关节软骨退化的方法，所述方法包括将包含治疗有 效量的植物营养素的组合物施用于需要治疗或预防的个体，所述植物营养素选自橄榄苦 苷、芦丁、姜黄素以及它们的组合。
【专利摘要】本发明提供了用于治疗或预防滑膜炎的组合物。所述组合物包含治疗有效量的橄榄苦苷、芦丁、姜黄素中的至少一者，优选地至少包含橄榄苦苷。本发明还提供了用于治疗或预防滑膜炎的方法，所述方法包括施用这类组合物。所述组合物可另外包含槲皮素、羟基酪醇或维生素D中的一者或多者。
【IPC分类】A61K45/06, A61P19/02, A61K31/7048, A61K31/12
【公开号】CN105611935
【申请号】CN201480055101
【发明人】M·N·奥卡哈达, F·门布雷兹, 卡万 E·奥佛德
【申请人】雀巢产品技术援助有限公司
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2014年10月7日
【公告号】CA2923521A1, WO2015055468A1