一种单克隆抗体在治疗神经退行性疾病中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明术语生物医药领域，具体地，涉及一种单克隆抗体在神经退行性疾病中的 应用。
【背景技术】
[0002] 阿尔茨海默病（Alzheimer's disease，AD)是一种慢性渐进性的神经退行性疾病， 临床主要表现为认知功能不断下降，同时伴有多种行为异常，最终导致死亡。AD主要包括家 族性和散发性：前者发病早，与淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protein, APP)、早老 素 Upresenilin 1，PS 1)和早老素2(preSenilin 2，PS2)基因突变有关；后者病例多，多 数在65岁以后发病，与载脂蛋白E(Ap〇lip〇pr 〇tein E，Ap〇E)的多态性有关。AD目前在所 有死亡原因中居第六位，在65岁以上人群的死亡原因中居第五位。2010年，全球AD病例 有3600万；到2030年，可能会达到6600万；到2050年，可能会达到11500万。AD的发病 原因非常复杂，至今尚未确切阐明。
[0003] 目前临床上AD的主要治疗药物为多奈哌齐，该药为胆碱酯酶抑制剂，通过减少乙 酰胆碱的降解而发挥改善学习记忆的作用，只能够缓解AD病人的学习记忆损伤症状，并不 能减轻神经炎症、老年斑沉积等病理损伤。
[0004] 因此，本领域迫切需要开发一种疗效更好、副作用少的治疗神经退行性疾病的药 物。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种疗效更好、副作用少的治疗神经退行性疾病的药物。
[0006] 在本发明的第一方面，提供了一种单克隆抗体的用途，所述单克隆抗体用于制备 治疗神经退行性疾病的药物组合物，其中所述的单克隆抗体具有如SEQ ID N0. :1所示序 列。
[0007] 在另一优选例中，所述的药物组合物含有SEQ ID N0. :1所示序列的单克隆抗体， 和药学上可接受的载体。
[0008] 在另一优选例中，所述的神经退行性疾病选自下组：阿尔茨海默病、帕金森氏病和 脑中风等（Αβ诱导的学习记忆障碍、LPS诱导的学习记忆障碍）。
[0009] 在另一优选例中，所述的药物组合物中所述单克隆抗体的浓度为l-100mg/ml。
[0010] 在另一优选例中，所述单克隆抗体的施用剂量为0. l-100mg/kg。 toon] 在另一优选例中，所述的药物组合物还用于：（i)抑制炎症因子与受体结合和/或
[11] 抑制小胶质细胞的增殖和活化；和/或（iii)抑制炎症因子分泌。
[0012] 在另一优选例中，所述炎症因子选自下组：IL-l、IL-2、和IL-6。
[0013] 在另一优选例中，所述的药物组合物的剂型包括：注射剂、冻干粉。
[0014] 在另一优选例中，所述的药物组合物为注射剂，并优选地含有：
[0015] (i)治疗有效量的抗TNF-α抗体（即SEQ ID NO. : 1所示序列的单克隆抗体）；
[0016] (ii)含〇· 8-6. 2mg/ml组氨酸的缓冲体系；
[0017] (iii)渗透压调节剂；以及
[0018] (iv)表面活性剂，
[0019] 其中，所述制剂的pH为5. 5-6. 5。
[0020] 在另一优选例中，所述抗TNF- α抗体的浓度为40-60mg/ml。
[0021] 在另一优选例中，所述抗TNF-α抗体的浓度为45-55mg/ml，优选为48-52mg/ml， 最优选为50mg/ml。
[0022] 在另一优选例中，所述组氨酸的浓度为1. 6-5. Omg/ml，优选为3. 0-3. 8mg/ml。
[0023] 在另一优选例中，所述组氨酸的pH为5. 5-6. 5,优选为5. 8-6. 2。
[0024] 在另一优选例中，所述抗TNF-a抗体为单克隆抗体。
[0025] 在另一优选例中，所述单克隆抗体为全长抗体。
[0026] 在另一优选例中，所述单克隆抗体为IgGl抗体。
[0027] 在另一优选例中，所述单克隆抗体为人源化抗体。
[0028] 在另一优选例中，所述单克隆抗体为包含抗原结合区的抗体片段。
[0029] 在另一优选例中，所述抗体片段为Fab或F(ab' )2片段。
[0030] 在另一优选例中,所述单克隆抗体结合TNF- α。
[0031] 在另一优选例中，所述抗TNF-α抗体选自：阿达木单抗（adalimumab)、英夫利昔 单抗（infliximab)、戈利木单抗（Golimumab)。
[0032] 在另一优选例中，所述抗TNF-α抗体为SEQ ID NO. :1所示序列的单克隆抗体。
[0033] 在另一优选例中，所述制剂的pH为5. 8-6. 2,优选为5. 9-6. 1，最优选为6. 0。
[0034] 在另一优选例中，所述渗透压调节剂包括多元醇和氯化钠。
[0035] 在另一优选例中，所述多元醇为甘露醇或山梨醇。
[0036] 在另一优选例中，所述多元醇的浓度为8-20mg/ml，优选为10-15mg/ml。
[0037] 在另一优选例中，所述NaCl的浓度为2-10mg/ml，优选为4-8mg/ml，更优选为 5. 5-6. 5mg/ml 〇
[0038] 在另一优选例中，所述表面活性剂的浓度为0· 6-1. Omg/ml，优选为0· 8-1. Omg/ ml〇
[0039] 在另一优选例中，所述表面活性剂为聚山梨酯。
[0040] 在另一优选例中，所述聚山梨酯为聚山梨酯80。
[0041] 在另一优选例中，所述制剂具有下组的一种或多种特征：
[0042] (a)所述制剂在2-8 °C可保存至少2年；
[0043] (b)所述制剂适合皮下注射。
[0044] 在另一优选例中，所述制剂包括：
[0045] (a)40_60/ml抗TNF-α单克隆抗体（即SEQ ID N0. :1所示序列的单克隆抗体）；
[0046] (b) 0· 8-6. 2mg/ml 组氨酸；
[0047] (c) 8_20mg/ml 多兀醇；
[0048] (d) 2-10mg/mlNaCl ；
[0049] (e)0· 6_1· 0mg/ml 聚山梨酯，
[0050] 并且所述制剂的pH为5· 5-6. 5。
[0051 ] 在另一优选例中，所述药物组合物中不含柠檬酸。
[0052] 在另一优选例中，所述的单克隆抗体由CH0细胞表达，经纯化获得。
[0053] 在另一优选例中，所述治疗神经退行性疾病的治疗效果呈剂量依赖型。
[0054] 本发明第二方面提供了一种治疗神经退行性疾病的药物组合物，所述的药物组合 物含有安全有效量的SEQ ID N0. :1所示序列的单克隆抗体，和药学上可接受的载体。
[0055] 在另一优选例中，所述的药物组合物包括：
[0056] ⑴治疗有效量的抗TNF-α抗体（即SEQ ID NO. : 1所示序列的单克隆抗体）；
[0057] (ii)含0· 8-6. 2mg/ml组氨酸的缓冲体系；
[0058] α ?)渗透压调节剂；以及
[0059] (iv)表面活性剂，
[0060] 其中，所述制剂的pH为5. 5-6. 5。
[0061] 本发明的第三方面提供了一种治疗神经退行性疾病的方法，所述方法包括步骤： 将具有SEQ ID N0. :1所示序列的单克隆抗体或其药物组合物施用于需要的对象。
[0062] 在另一优选例中，所述的需要的对象为哺乳动物，例如人、非人灵长类、大鼠、小 鼠。
[0063] 本发明的第四方面提供了一种体外非治疗性的抑制炎症因子分泌的方法，所述方 法包括步骤：
[0064] 在SEQ ID NO. : 1所示单克隆抗体的存在下，培养细胞，从而抑制所述细胞分泌炎 症因子。
[0065] 在另一优选例中，所述的细胞包括小胶质细胞。
[0066] 在另一优选例中，所述炎症因子包括下组：IL_1、IL-2、和IL-6。
[0067] 本发明第五方面提供了一种体外非治疗性的抑制小胶质细胞的增殖和/或活化 的方法，所述方法包括步骤：
[0068] 在SEQ ID N0. :1所示单克隆抗体的存在下，培养小胶质细胞，从而抑制所述小胶 质细胞的增殖和/或活化。
[0069] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文（如实施例）中具 体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附图说明】
[0070] 图1显示了重组人抗肿瘤坏死因子-a单克隆抗体与TNF-a的结合动力学曲线。
[0071] 图2显示了重组人抗肿瘤坏死因子-a单克隆抗体与不同种类细胞因子的结合情 况比较。
[0072] 图3显示了重组人抗肿瘤坏死因子-a单克隆抗体对TNF-a与重组p55或p75 结合的抑制作用。
[0073] 图4显示了重组人抗肿瘤坏死因子-a单克隆抗体对TNF- a介导的细胞毒性的 中和作用。
[0074] 图5显示了重组人抗肿瘤坏死因子-a单克隆抗体对〇Αβ142诱导学习记忆 损伤小鼠在Υ迷宫中自发交替反应率的影响。###Ρ〈〇. 001，与saline组比较；*ρ〈0. 05， **ρ〈0· 01，与 οΑβ i 42组比较。
[0075] 图6显示了重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对〇Α β i 42诱导小鼠海马内小 胶质细胞活化的抑制作用。A :saline组；Β :〇Αβ i 42组；C :重组人抗肿瘤坏死因子-ct单 克隆抗体5mg/kg组；D :重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体15mg/kg组；E :重组人抗肿 瘤坏死因子-α单克隆抗体50mg/kg组；F:多奈哌齐5mg/kg组。###p〈0. 001，与saline组 比较；*ρ〈〇· 05, **ρ〈0· 01，***ρ〈0· 001，与 οΑβ i 42组比较。
[0076] 图7显示了重组人抗肿瘤坏死因子- α单克隆抗体对〇Αβ i 42诱导学习记忆损伤 小鼠海马内TNF-α水平的影响。###p〈〇. 〇〇1，与saline组比较；*p〈0. 05, #p〈0. 01，与 〇Αβ i 42组比较。
[0077] 图8显示了重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对LPS诱导学习记忆损伤小鼠 在Υ迷宫中自发交替反应率的影响。###Ρ〈〇. 001，与saline组比较；*#ρ〈0. 001，与LPS组 比较。
[0078] 图9显示了重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对LPS诱导小鼠海马内小胶质 细胞活化的抑制作用。A:saline组；B:LPS组；C:重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体 5mg/kg组；D :重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体15mg/kg组；Ε :重组人抗肿瘤坏死因 子- α单克隆抗体50mg/kg组；F :米诺环素50mg/kg组。###p〈0. 001，与saline组比较； ***p〈0. 001，与 LPS 组比较。
[0079] 图10显示了重组人抗肿瘤坏死因子-α单克隆抗体对LPS诱导学习