专利名称：细胞增殖用组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于细胞增殖的组合物，其有效地发挥嘌呤核酸-相关物质的细胞增殖的作用。此外，本发明涉及一种增强嘌呤核酸-相关物质的细胞增殖作用的方法。本发明也涉及一种通过有效地发挥嘌呤核酸-相关物质的细胞增殖作用来促进细胞增殖的方法。
背景技术：
众所周知，嘌呤核酸相关的物质诸如腺苷酸、腺苷酸磷酸及其盐，当用于皮肤时显示出增湿的效果，其通过增加角质细胞层的游离氨基酸数目，以及，此外，刺激更新由此来阻止皮肤的干燥和衰老以及改善粗糙皮肤的状况。为了获得这些效果，人们已经研究了将嘌呤核酸-相关的物质应用到外用制品，诸如化妆品，药物或半-药物制剂中。已知嘌呤核酸-相关的物质具有促进细胞增殖的作用(LifeSciences，Vol.64，No.18，pp.1661-1674，1999)，且假定细胞-增殖促进作用与上述的不同作用有关。
然而，由于这些嘌呤核酸-相关的物质具有高度的亲水性，其很难经皮肤进行吸收。
为了克服这些缺点，许久以来，人们已经寻找到一种当应用于皮肤等时能更有效地发挥嘌呤核酸-相关物质的细胞-增殖促进作用的方法。
发明概述本发明的一个目的是提供一种通过有效地发挥嘌呤核酸-相关物质的促进细胞增殖作用的方法。更具体地，本发明的目的是提供一种增强嘌呤核酸相关物质的细胞-增殖促进作用并由此有效地增殖细胞的组合物。本发明的另一个目的是提供一种增强嘌呤核酸-相关物质的细胞增殖促进作用的方法。本发明的再一个目的是提供一种有效地发挥嘌呤核酸-相关物质的细胞增殖促进作用，来由此促进细胞增殖的方法。
本发明人进行了充分的研究来发展一种用于增强嘌呤核酸-相关物质的细胞增殖促进作用的方法，并且发现上述的目的可通过混合使用嘧啶核酸-相关物质与嘌呤核酸-相关物质来实现。本发明基于上述的发现已经得以发展。
更具体地，本发明涉及下列用于细胞增殖的组合物项1.用于包含嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质的用于细胞增殖的组合物。
项2.根据项1的用于细胞增殖的组合物，其中嘌呤核酸相关物质为选自腺嘌呤核酸-相关物质的至少一种且嘧啶核酸相关物质为选自尿嘧啶核酸-相关物质的至少一种。
项3.根据项1或2的用于细胞增殖的组合物，其中嘌呤核酸相关物质为腺苷一磷酸或其盐且嘧啶核酸相关物质为尿苷一磷酸或其盐。
项4.根据1到3任一项的用于细胞增殖的组合物，其中组合物含有按重量计至少0.01％比例的嘌呤核酸相关物质。
项5.根据1到3任一项的用于细胞增殖的组合物，其中组合物含有按重量计0.01％到10％比例的嘌呤核酸相关物质。
项6.根据1到5任一项的用于细胞增殖的组合物，其中按组合物中的每重量份嘌呤核酸相关物质计，组合物含有0.01到100重量份比例的嘧啶核酸相关物质。
项7.根据1到6任一项的用于细胞增殖的组合物，其用于皮肤或粘膜的外用组合物。
项8.根据1到7任一项的用于细胞增殖的组合物，用于化妆品或外用的药物或半药物。
项9.根据1到8任一项的用于细胞增殖的组合物，用于选自抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤漂白，抗沉降，抗无光泽，抗皱，毛发生长，抗皮屑，美甲以及伤口愈合的目的。
项10.根据1到8任一项的用于细胞增殖的组合物，用于选自抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤漂白，抗沉降，抗无光泽，抗皱，毛发生长，美甲以及伤口愈合的目的。
项11.根据1到8任一项的用于细胞增殖的组合物，其用于抗皱的目的。
本发明也涉及下列用于增强细胞增殖促进作用的方法项12.通过利用嘌呤核酸相关物质与嘧啶核酸相关物质结合用于增强嘌呤核酸相关物质的细胞增殖促进作用的方法。
项13.根据项12的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中嘌呤核酸相关物质为选自腺嘌呤核酸-相关物质的至少一种且嘧啶核酸相关物质为选自尿嘧啶核酸-相关物质的至少一种。
项14.根据项12或13的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中嘌呤核酸相关物质为选自腺嘌呤，腺苷，腺苷磷酸，次黄嘌呤，肌苷，次黄嘌呤核苷酸，及其盐的至少一种，且嘧啶核酸相关物质为选自尿嘧啶，尿嘧啶核苷，尿嘧啶核苷磷酸，脱氧尿苷，脱氧尿苷磷酸，及其盐的至少一种。
项15.根据12到14任一项的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中嘌呤核酸相关物质是腺苷一磷酸或其盐，且嘧啶核酸相关物质是尿苷一磷酸或其盐。
项16.根据12到15任一项的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中该方法包括按每重量份嘌呤核酸相关物质计，使用0.01到100重量份比例的嘧啶核酸相关物质。
项17.根据12到16任一项的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中该方法包括加入嘧啶核酸相关物质到含有嘌呤核酸相关物质的组合物中。
项18.根据项17的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中组合物含有按重量计至少0.01％比例的嘌呤核酸相关物质。
项19.根据项17或18的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中组合物含有按重量计0.01％到10％比例的嘌呤核酸相关物质。
项20.根据17到19任一项的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中组合物是用于皮肤或粘膜的外用组合物。
项21.根据17到20任一项的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中的组合物是化妆品或用于外用的药物或半药物。
项22.根据17到21任一项的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中组合物用于选自抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤漂白，抗沉降，抗无光泽，抗皱，毛发生长，抗皮屑，美甲以及伤口愈合的目的。
项23.根据17到21任一项的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中组合物用于选自抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤美白，抗松弛，抗无光泽，抗皱，毛发生长，美甲以及伤口愈合的目的。
项24.根据17到21任一项的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中组合物用于抗皱的目的。
此外，本发明涉及下列用于促进细胞增殖的方法项25.通过将嘌呤核酸相关物质与嘧啶核酸相关物质结合施用于皮肤或粘膜促进细胞增殖的方法。
项26.根据项25的促进细胞增殖的方法，其中嘌呤核酸相关物质为选自腺嘌呤核酸-相关物质的至少一种且嘧啶核酸相关物质为选自尿嘧啶核酸-相关物质的至少一种。
项27.根据项25或26的用于促进强细胞增殖的方法，其中嘌呤核酸相关物质为选自腺嘌呤，腺苷，腺苷磷酸，次黄嘌呤，肌苷，次黄嘌呤核苷酸，及其盐的至少一种，且嘧啶核酸相关物质为选自尿嘧啶，尿嘧啶核苷，尿嘧啶核苷磷酸，脱氧尿苷，脱氧尿苷磷酸，及其盐的至少一种。
项28.根据25到27任一项的用于促进细胞增殖的方法，其中嘌呤核酸相关物质是腺苷一磷酸或其盐，且嘧啶核酸相关物质是尿苷一磷酸或其盐。
项29.根据25到28任一项的用于促进细胞增殖的方法，其中该方法包括按每重量份嘌呤核酸相关物质，使用0.01到100重量份比例的嘧啶核酸相关物质。
项30.根据25到29任一项的用于促进细胞增殖的方法，其中该方法包括将含有嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质的组合物施用于皮肤或粘膜。
项31.根据项30的用于促进细胞增殖的方法，其中组合物含有按重量计至少0.01％比例的嘌呤核酸相关物质。
项32.根据项31的用于促进细胞增殖的方法，其中组合物含有按重量计0.01％到10％比例的嘌呤核酸相关物质。
项33.根据30到32任一项的用于促进细胞增殖的方法，其中组合物是用于皮肤或粘膜的外用组合物。
项34.根据30到33任一项的用于促进细胞增殖的方法，其中的组合物是化妆品或外用的药物或半药物。
项35.根据25到34任一项的用于促进细胞增殖的方法，其中组合物用于选自抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤美白，抗松弛，抗无光泽，抗皱，毛发生长，抗皮屑，美甲以及伤口愈合的目的。
项36.根据25到34任一项的用于促进细胞增殖的方法，其中组合物用于选自抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤美白，抗松弛，抗无光泽，抗皱，毛发生长，美甲以及伤口愈合的目的。
项37.根据25到34任一项的用于促进细胞增殖的方法，其中组合物用于抗皱的目的。
此外，本发明应用于下列实施方案的方式中项38.嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质在用于制备细胞增殖的组合物中的应用。
项39.嘧啶核酸相关物质在增强嘌呤核酸相关物质的细胞增殖促进作用中的应用。
项40.嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质在促进细胞增殖中的应用。
项41.嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质在抗皱作用中的应用。
附图的简要说明附
图1表明，在实验实施例1中，当与尿苷一磷酸二钠结合使用时，腺苷一磷酸二钠在人角质细胞中的细胞增殖促进作用被增强。横坐标表示与腺苷一磷酸二钠一起使用的尿苷一磷酸二钠的浓度(W/V％)。纵座标表示每一试验样品的细胞数目相对于比较试验样品的细胞数目的相对比率(浓度比)，其中比较试验样品组的细胞数目设置为1。比较试验样品的制备没有向含有腺苷一磷酸二钠的溶液加入尿苷一磷酸二钠。
本发明的最佳实施方式(1)用于细胞增殖的组合物本发明的用于细胞增殖的组合物除嘌呤核酸相关物质之外含有嘧啶核酸相关物质。
可用于本发明的嘌呤核酸-相关物质为当施用于皮肤或粘膜时显示出生理学功能的那些。实例包括那些可加入到化妆品，外用药物和半药物(quasi-medical drug)中的各种嘌呤核酸-相关物质。那些水溶性的或亲水性的为优选的。嘌呤核酸-相关的物质的实例包括腺嘌呤核酸-相关物质诸如腺嘌呤，腺苷酸，腺苷酸磷酸(例如，腺苷酸2’-单磷酸，腺苷酸3’-单磷酸，腺苷酸5’-单磷酸，腺苷酸5’-二磷酸，腺苷酸5’-三磷酸酯，环腺苷酸，腺苷酸基琥珀酸，烟酰胺腺嘌呤单二核苷酸(NMN)，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)，黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)等)，腺嘌呤的代谢产物，腺苷酸，或腺苷磷酸(例如，次黄嘌呤，次黄苷，次黄嘌呤核苷酸等等)，及其盐；且鸟嘌呤核酸相关物质诸如鸟嘌呤，鸟嘌呤核苷，鸟苷一磷酸(例如，鸟嘌呤核苷3’-单磷酸，鸟嘌呤核苷5’-单磷酸，5′-二磷酸和鸟嘌呤核苷5-三磷酸等等)，及其盐。
其中，上述的腺嘌呤核酸相关物质可被合适地用作本发明中的嘌呤核酸相关物质。这些物质中优选的为腺苷一磷酸，其代谢产物，及其盐，且尤其优选的为腺苷一磷酸，及其盐。腺苷一磷酸是优选的作为可用于本发明的腺苷磷酸且腺苷酸5′-一磷酸(AMP)是尤其优选的。
盐的实例包括碱金属盐，诸如钠盐，钾盐等；碱土金属盐，诸如钙盐，镁盐，钡盐等；碱性氨基酸盐，诸如精氨酸，赖氨酸等；铵盐，诸如铵盐，三环己基铵盐等；不同种类的链烷醇胺盐，诸如单乙醇胺盐，二乙醇胺盐，三乙醇胺盐，一异丙醇胺盐，二异丙醇胺，以及三异丙醇胺盐等。其中优选的为碱金属盐，诸如钠盐等。碱金属盐的特定实例包括腺苷一磷酸钠和腺苷一磷酸二钠。
这些嘌呤核酸-相关的物质可单独使用或以两种或多种种类的组合形式用于本发明的细胞增殖组合物中。
嘌呤核酸相关物质可以按重量计至少0.01％的比例加入到用于细胞增殖的组合物中。优选的按重量计至少1％且更优选的为按重量计至少3％。考虑到本发明的作用，对加入嘌呤核酸相关物质到细胞增殖的组合物中比例的上限没有一般的限制。该比例可依赖用于细胞增殖的组合物的目的进行变化，且通常合适地选自按重量计0.01％到10％的范围，且更优选地按重量计3％到6％，以及可考虑其它结合使用的其它组分、用途等进行调整。
可用于本发明中的嘧啶核酸相关物质不受限制，且其实例包括可如同嘌呤核酸相关物质一样加入到化妆品、外用药物及半药物中的各种嘧啶核酸相关物质。那些水溶性的或亲水性的为优选的。嘧啶核酸相关物质的特定实例包括尿嘧啶核酸相关物质，诸如尿嘧啶，尿嘧啶核苷，尿苷磷酸〔尿苷一磷酸(尿苷5’-一磷酸，尿苷3’-一磷酸以及尿苷2’-一磷酸)，尿苷二磷酸，尿苷三磷酸，环状尿苷一磷酸等〕，脱氧尿苷，脱氧尿苷磷酸[5’-脱氧尿苷二磷酸(dUDP)，5′-脱氧尿苷单磷酸(dUMP)等等]，及其盐；胞嘧啶核酸相关物质，诸如胞嘧啶，胞嘧啶核苷，磷酸胞苷[胞嘧啶核苷一磷酸(CMP)(胞嘧啶核苷5’-一磷酸，胞嘧啶核苷3’-一磷酸，胞嘧啶核苷2’-一磷酸)，胞苷三磷酸(CTP)，胞苷二磷酸(CDP)]，脱氧胞苷，脱氧胞苷磷酸(5’-脱氧胞苷三磷酸(dCTP)，5’-去氧胞二磷酸(dCDP)，5’-脱氧胞苷酸(dCMP)及其盐；胸腺嘧啶核酸相关物质，诸如胸腺嘧啶，胸苷，胸苷磷酸[胸苷一磷酸(dTMP)，胸苷二磷酸(dTDP)，胸苷三磷酸(dTTP)等]，乳清酸，乳清酸核苷5’-磷酸，及其盐。
可使用任意的嘧啶核酸相关物质，而不必考滤其含有每一上述组分的纯度。可使用的嘧啶核酸相关物质为含有上述组分的植物提取物，诸如十字花科植物提取物(特别是，种子提取物)，豆科植物提取物等。
上述的尿嘧啶核酸相关物质优选地用作嘧啶核酸相关物质。优选的为尿苷，尿苷磷酸，及其盐其代谢产物，且尤其优选的为尿苷磷酸，及其盐。尤其优选使用尿苷一磷酸，特别是尿苷5’-一磷酸(UMP)作为尿苷磷酸。
上述提到的盐的实例包括钠盐，钾盐及其类似碱金属盐；钙盐，镁盐，钡盐及其类似碱土金属盐；精氨酸，赖氨酸及其类似碱性氨基酸盐；铵盐，三环己基铵盐及其类似铵盐；多种的链烷醇胺盐，诸如单乙醇胺盐，二乙醇胺盐，三乙醇胺盐，一异丙醇胺盐，二异丙醇胺，以及三异丙醇胺盐等。其中优选的为碱金属盐，诸如钠盐等。碱金属盐的特定实例包括尿苷一磷酸钠和尿苷一磷酸二钠。
这些嘧啶核酸相关物质可单独使用或以两种或多种种类的组合形式用于本发明的细胞增殖组合物中。
嘧啶核酸相关物质加入到本发明用于细胞增殖的组合物中的比例不受上述作用的限制，且可为合适地选自范围使得相对于含于组合物中的每重量份嘌呤核酸相关物质，嘧啶核酸相关物质为0.01到100重量份的比例，优选地0.01到10重量份，且更优选的0.01到1重量份。
考虑到嘌呤核酸相关物质的比例，细胞增殖组合物中的嘧啶核酸相关物质的比例可合适地选自按重量计0.0001％到50％的范围，优选地按重量计0.0001％到10％，且更优选地按重量计0.0001％到1％。
上述嘌呤核酸相关的物质和嘧啶核酸相关物质的联合使用产生了本发明的促进细胞诸如皮肤细胞，皮肤附器(毛发，皮脂腺，指甲等)，或粘膜细胞等增殖作用的组合物。
因此，本发明的组合物可广泛的用于化妆品或外用药物或半药物来作为用于细胞增殖的组合物或用于促进细胞增殖的组合物。更具体地，本发明的组合物可被用作化妆品或外用药物或半药物来用于抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤美白，抗皱，抗松弛，抗无光泽，毛发生长，抗皮屑，美甲以及伤口愈合的目的。优选的其中这些是用于抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤漂白，抗皱，抗松弛，抗无光泽，毛发生长，美甲以及伤口愈合目的的各种外用药物试剂。
尤其地，本发明的组合物可有效地显示出抗皱作用，且因此用作抗皱的外用药物试剂。
本发明的组合物是优选地用于皮肤的外用试剂。用于皮肤的外用试剂包括各种具有毛发修复或毛发生长作用的毛发护理产品诸如毛发修复和毛发生长试剂，此外，香波，嗽洗以及洗液(包括补剂和液体)。
本发明的组合物可以任意不受限制的形式施用于皮肤或粘膜，诸如水溶液，增溶的形式，乳化的形式，分散的粉剂，水/油双层型等。特定的实例包括溶液，油剂，洗剂，擦剂，乳剂，悬浮液，乳膏剂，油膏等。化妆品的实例包括洗剂；润肤剂乳浊液，乳状洗剂，滋养乳剂，清洗乳剂，以及类乳剂；润肤乳膏剂，按摩霜，清洁霜，化妆品乳膏剂，以及类乳膏剂等等。毛发护理产品的实例包括毛发滋补剂，头油，洗发液，气雾剂(气喷的)，摩丝，香波，嗽洗剂，液体等。
本发明的用于细胞增殖的组合物，在本发明的作用没有削弱的范围内，根据需要可含有各类公认的适用于皮肤或粘膜类化妆品以及外用药物/半药物的外用组合物中的组分。这些组分的实例包括润湿剂，UV吸收剂，UV分散剂，维生素，植物提取物，收敛剂，消炎试剂(消炎的试剂)，增白剂，细胞活化剂，血管扩张剂，血液循环促进剂，皮肤功能促进剂，以及表面活性剂，着色剂(色素，颜料)，芳香剂，防腐剂，杀菌剂(抗菌药物)，增稠剂，抗氧化剂，螯合剂，制冷剂，除臭剂等等。也可依据上述不同的形式来使用已知的基体或载体。
上述组分的实例包括离子表面活性剂，诸如高等脂肪酸的盐，烷基磺酸盐，聚氧乙烯烷基醚硫酸盐，烷基醚磷酸盐，N-酰基氨基酸盐，酰基N-甲基氨基乙磺酸盐等；阳离子表面活性剂，诸如烷基三甲铵氯化物，二烷基二甲基铵化氯等。两性表面活性剂，诸如烷基二甲基氨基乙酸甜菜碱，烷基酰胺二甲基乙酸甜菜碱，2-烷基-N-羧基-N-羟基咪唑啉甜菜碱等；非离子型表面活性剂，诸如聚氧化乙烯-基体，多元醇酯-基体，环氧乙烷/氧化丙烯阻断共聚物等。任意高分子量的表面活性剂或天然的表面活性剂可被使用而不受限制。
防腐剂的实例包括乙基p-羟基苯酸酯，水杨酸，山梨酸等。增稠剂的实例包括苍耳烷树胶，羧甲基纤维素钠，羧基乙烯基聚合物等。螯合剂的实例包括乙二胺四乙酸、磷酸、柠檬酸等的钠盐。
本发明的用于细胞增殖的组合物可作为化妆品或外用药物或半药物直接施用于或喷雾到皮肤或粘膜。可根据使用者(人)的年龄，性别，预定用途，皮肤患处的状况等施将组合物用于皮肤或粘膜每日5或6次。本发明用于细胞增殖的组合物的单剂量的量没有限制，且例如，可合适地调整使得施用于皮肤或粘膜的组合物的量在到0.5到10mg/cm2的范围内。
如上所述，嘧啶核酸相关物质与嘌呤核酸相关物质的联合使用可增强嘌呤核酸相关物质的细胞增殖促进作用。
相应地，本发明提供了嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质在制备细胞增殖组合物中的应用。
(2)用于增强嘌呤核酸相关物质的细胞增殖促进作用的方法本发明提供了用于增强嘌呤核酸相关物质的细胞增殖促进作用的方法。该方法可通过利用嘌呤核酸相关物质与嘧啶核酸相关物质结合来实施。
可用于本发明的嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质包括前面所描述的物质。嘌呤核酸相关物质的优选实例为腺嘌呤核酸相关的物质。尤其优选的腺嘌呤核酸相关物质为腺苷磷酸，及其代谢产物，和它们的盐，且尤其优选的为腺苷磷酸及其盐。腺苷磷酸的特定实例包括腺苷一磷酸，尤其是腺苷酸5’-一磷酸(AMP)。嘧啶核酸相关物质的优选的实例包括尿嘧啶核酸-相关的物质。其中优选的尿嘧啶核酸-相关物质为尿苷，尿苷磷酸，及其盐，且尤其优选的为尿苷磷酸及其盐。尿苷磷酸的特定实例包括尿苷一磷酸，尤其是尿苷5’-一磷酸(UMP)。
混合嘧啶核酸相关物质相对于嘌呤核酸相关物质的比例为0.01到100重量份/重量份嘌呤核酸相关物质，优选地0.01到10重量份，且更优选地0.01到1重量份。
本发明的方法用于制备施用嘌呤核酸相关物质于皮肤或粘膜的组合物。更具体地，本发明的方法用于制备取决于嘌呤核酸相关物质的细胞增殖促进作用显示出抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤美白，抗皱，抗松弛，抗无光泽，毛发生长，抗皮屑，美甲以及伤口愈合等作用的组合物。优选地，组合物根据本发明的方法来制备且显示出抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤美白，抗皱，抗松弛，抗无光泽，毛发生长，美甲以及伤口愈合等作用。尤其优选的为显示出抗皱作用的组合物。根据本发明，嘧啶核酸相关物质与嘌呤核酸相关物质的混合使用增强了嘌呤核酸相关物质的细胞增殖促进作用，且因此具有如上所述的优异作用的组合物可被制备。
为制备这样的组合物，优选将嘧啶核酸相关物质加入到含有嘌呤核酸相关物质的组合物中，通常以按重量计0.01％的比例，优选地按重量计1％或更多，且更优选地按重量计3％或更多，使得嘧啶核酸相关物质相对于嘌呤核酸相关物质的比例为如上面所述的。在不低于上述范围下限的范围内，生成物组合物中的嘌呤核酸相关物质的量没有限制，但优选地选自按重量计0.01％到10％的范围，更优选地按重量计1％到10％，且更优选地按重量计3％到6％。考虑到上述嘧啶核酸相关物质相对于嘌呤核酸相关物质的比例，嘧啶核酸相关物质的比例可合适地选自按重量计0.0001％到50％的范围，优选地按重量计0.0001％到10％，且更优选地按重量计0.0001％到1％。
如上所述，嘧啶核酸相关物质与嘌呤核酸相关物质的联合使用可增强嘌呤核酸相关物质的细胞增殖促进作用。相应地，本发明也提供了用于增强嘌呤核酸相关物质的细胞增殖促进作用的嘧啶核酸相关物质的应用。
(3)用于促进细胞增殖的方法本发明也提供了一种用于促进细胞增殖的方法。该方法可通过将嘌呤核酸相关物质与嘧啶核酸相关物质相结合施用于皮肤或粘膜来实施。
可用于本发明的嘌呤核酸-相关的物质和嘧啶核酸相关物质包括前面描述的物质。此种嘌呤核酸相关物质的优选实例为腺嘌呤核酸相关的物质。优选的腺嘌呤核酸相关物质为腺苷磷酸，及其代谢产物，和它们的盐，且尤其优选的为腺苷磷酸及其盐。腺苷磷酸的特定实例包括腺苷一磷酸，尤其是腺苷酸5’-一磷酸(AMP)。嘧啶核酸相关物质的优选的实例包括尿嘧啶核酸-相关的物质。优选的这样的尿嘧啶核酸相关物质为尿苷，尿苷磷酸，及其盐，且尤其优选的为尿苷磷酸及其盐。尿苷磷酸的特定实例包括尿苷一磷酸，尤其是尿苷5’-一磷酸(UMP)。
与嘌呤核酸相关物质一起使用的嘧啶核酸相关物质的比例为0.01到100重量份/重量份的嘌呤核酸相关物质，优选地为0.01到10重量份，且更优选地为0.01到1重量份。
在嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质可共同存在于皮肤或粘膜上的限度内，本发明的方法，对将嘌呤核酸相关物质嘧啶核酸相关物质结合施用于皮肤或粘膜(在下文，称为“皮肤或类似物”)的方式没有限制。例如，含有嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质的组合物可被施用于皮肤或类似物，或嘌呤核酸相关物质或含有相同物质的组合物以及嘧啶核酸相关物质或含有相同物质的组合物可依次以任意期望的顺序施用于皮肤等或类似物。上述两种物质可通过例如，涂敷或喷雾施用于皮肤等。
本发明方法的一个优选的实施方案包括涂敷或喷雾含有嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质在皮肤或类似物上的方式。优选含有嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质的组合物包括在上述(1)中描述的用于细胞增殖的组合物。
本发明的方法可增强用于增强嘌呤核酸相关物质促进细胞增殖的细胞增殖促进作用。相应地，本发明的方法可用于抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤美白，抗皱，抗松弛，抗无光泽，毛发生长，抗皮屑，美甲以及伤口愈合等目的。优选地，本发明的方法用于抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤美白，抗皱，抗松弛，抗无光泽，毛发生长，美甲以及伤口愈合等目的。尤其是，由于通过促进细胞增殖有效地显示抗皱作用，本发明的方法具有用于抗皱目的的用途。
上述两种物质施用于皮肤等的频率和施用量不受限制。例如，可根据使用者(人)的年龄，性别，预定用途，皮肤患处的状况等将它们每日一到六次以合适的量施用于皮肤或类似物。更具体地，当本发明的方法通过利用上述(1)描述的用于细胞增殖的组合物实施时，单一剂量的量可进行合适地调整使得施用于皮肤等的组合物的量在0.5到10mg/cm2的范围内。
如上所述，嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质的混用可促进细胞增殖。相应地，本发明也提供了嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质促进细胞增殖的应用。另外，本发明提供了嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质显示抗皱作用的应用。
实施例通过参考实施例和制剂实施例对本发明进行进一步的详述。然而，本发明的范围不受这些实施例的限制。在下面的实施例和制剂实施例中，除非另作说明，百分比全部为按重量计。
实施例1离体培养人角质细胞的细胞增殖促进作用初级培养的人角质细胞(Kurabo Industries，Ltd.生产的)培养在10-cm皮氏培养皿中，且收集亚融合状态的培养细胞然后保存在冰冻状态。利用那些冷冻保存的细胞进行下面的实验。
1.将冷冻保存的细胞溶于HuMediaKG2液体培养基(KuraboIndustries，Ltd.生产的)，调整细胞浓度为500000个细胞/ml。50μl由此获得的含有细胞的溶液被注入到实验平皿的每个孔中来调整细胞浓度为2500个细胞/50μl/孔。
2.利用灭菌的磷酸盐缓冲液制备不同浓度的腺苷一磷酸二钠溶液和尿苷一磷酸二钠溶液，然后过滤，继之进行灭菌。加入无菌HuMediaKG2液体培养基(Kurabo Industries，Ltd.生产的)来制备含有具有不同稀释系数的受试者溶液的培养基。
3.6小时后，将细胞注射到平皿微孔中，其证实了人角质细胞粘附于微孔。将如上所述制备的包含具有不同稀释系数(每个250μl)的受试溶液的培养基加到每一孔中来试验样品(每个为总300μl)。试验样品在5％CO2下37℃培养2天。试验样品含有通过混合尿苷一磷酸二钠与腺苷一磷酸二钠溶液制备的不同浓度的溶液，其中300μl试验样品中包含的腺苷一磷酸的浓度被调整为0，0.0001，0.001，0.01，0.1，和1w/v％，使得尿苷一磷酸二钠的浓度基于尿苷一磷酸的浓度进行计算被调整为0，0.000001(1E-06)，0.00001(1E-05)，0.0001，0.001，0.01和0.1w/v％。
4.开始培养2天后，利用基于吸光率增长的WST-1试剂(TaKaRa生产)测定人角质细胞的增殖。更具体地，从每孔培养的试验样品(300μl)中移取200μl，在每一残余的100μl中加入WST-1试剂，然后搅拌，且产物在恒温箱中在5％CO2中37℃反应2小时。反应完全后，测定450nm的测定波长和690nm的对照波长处的吸光率并利用多扫描斜率来评价测定的细胞增殖存在的吸光率及其程度。将10μl的WST-1试剂加到100μl的HuMediaKG2液体培养基(Kurabo Industries Ltd.生产的)中来形成空白溶液。
结果显示于图1中。在图1中，横坐标表示每一尿苷一磷酸二钠(UMP 2Na)样品的浓度，且纵座标表示相对于与尿苷一磷酸二钠共同使用的每一腺苷一磷酸二钠样品(具体地，腺苷一磷酸(AMP)的浓度)浓度的细胞数目。附图1显示了细胞数目相对于比较试验样品的细胞数目(纵座标)的相对比率(浓度比)，其中比较试验样品组的细胞数目设置为1。比较样品是通过不加入尿苷一磷酸二钠到含有腺苷一磷酸二钠(0，0.0001，0.001，0.01，0.1和1w/v％)的溶液中来制备的。
图1表明通过将作为嘧啶核酸相关物质的尿苷一磷酸二钠混入到嘌呤核酸相关物质的腺苷一磷酸二钠中，增强和促进了腺苷一磷酸二钠的细胞增殖促进作用。
制剂实施例1洗液(pH6.5)腺苷一磷酸二钠 3.0(％)尿苷一磷酸二钠 0.1聚氧化乙烯氢化的蓖麻油 0.7乙醇5.0甘油2.0防腐剂 0.2芳香剂 适当量pH调节剂适当量纯化的水平衡量合计100.0％制剂实施例2乳状洗液(pH6.5)腺苷一磷酸二钠 1.5(％)尿苷一磷酸二钠 0.01聚羧乙烯0.3十甘油基单豆蔻酸2.0角鲨烷 5.0乙醇1.0甘油6.0防腐剂 0.2pH调节剂适当量纯化的水平衡量合计 100.0％
制剂实施例3毛发修复剂腺苷一磷酸二钠10.0(％)尿苷一磷酸二钠1.0水杨酸0.1乙醇 20.0甘油 2.0防腐剂0.2芳香剂适当量pH调节剂 平衡量合计 100.0％工业实用性根据本发明的用于细胞增殖的组合物，由于嘌呤核酸相关物质的细胞增殖促进作用被通过嘧啶核酸相关物质而增强，本发明的用于细胞增殖的组合物在用于皮肤的化妆品和外用制剂(药物和半药物)中是有用的，也即有效地用于抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤美白，抗皱，抗松弛，抗无光泽，毛发生长，抗皮屑，美甲，伤口愈合等。
本发明用于增强嘌呤核酸相关物质的细胞增殖促进作用的方法，当与嘧啶核酸相关物质结合使用时，嘌呤核酸相关物质的细胞增殖促进作用可被增强。由此，本发明的方法实现了制备具有少量的嘌呤核酸相关物质显示出优异的细胞增殖促进作用，以及显示出优异的抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤美白，抗皱，抗松弛，抗无光泽，毛发生长，抗皮屑，美甲，伤口愈合等的组合物。
此外，根据本发明用于促进细胞增殖的方法，细胞增殖可被有效地促进，且由此可提供给皮肤和粘膜抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤美白，抗皱，抗松弛，抗无光泽，毛发生长，抗皮屑，美甲以及伤口愈合等作用。
权利要求
1.一种包含嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质的用于细胞增殖的组合物。
2.根据权利要求1的用于细胞增殖的组合物，其中嘌呤核酸相关物质为选自腺嘌呤核酸相关物质的至少一种且嘧啶核酸相关物质为选自尿嘧啶核酸相关物质的至少一种。
3.根据权利要求1的用于细胞增殖的组合物，其中嘌呤核酸相关物质为腺苷一磷酸或其盐且嘧啶核酸相关物质为尿苷一磷酸或其盐。
4.根据权利要求1的用于细胞增殖的组合物，其中组合物含有按重量计至少0.01％比例的嘌呤核酸相关物质。
5.根据权利要求1的用于细胞增殖的组合物，其中组合物含有按重量计0.01％到10％比例的嘌呤核酸相关物质。
6.根据权利要求1的用于细胞增殖的组合物，其中以组合物中含有的每重量份嘌呤核酸相关物质计，组合物含有0.01到100重量份比例的嘧啶核酸相关物质。
7.根据权利要求1的用于细胞增殖的组合物，其用于选自抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤美白，抗松弛，抗无光泽，抗皱，毛发生长，抗皮屑，美甲以及伤口愈合的目的。
8.根据权利要求1的用于细胞增殖的组合物，其用于选自抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤美白，抗松弛，抗无光泽，抗皱，毛发生长，美甲以及伤口愈合的目的。
9.根据权利要求1的用于细胞增殖的组合物，其用于抗皱的目的。
10.一种通过利用嘌呤核酸相关物质与嘧啶核酸相关物质相结合增强嘌呤核酸相关物质的细胞增殖促进作用的方法。
11.根据权利要求10的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中嘌呤核酸相关物质为选自腺嘌呤核酸-相关物质的至少一种且嘧啶核酸相关物质为选自尿嘧啶核酸-相关物质的至少一种。
12.根据权利要求10的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中嘌呤核酸相关物质为选自腺嘌呤，腺苷，腺苷磷酸，次黄嘌呤，肌苷，次黄嘌呤核苷酸，及其盐的至少一种，且嘧啶核酸相关物质为选自尿嘧啶，尿苷，尿苷磷酸，脱氧尿苷，脱氧尿苷磷酸，及其盐的至少一种。
13.根据权利要求10的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中嘌呤核酸相关物质是腺苷一磷酸或其盐，且嘧啶核酸相关物质是尿苷一磷酸或其盐。
14.根据权利要求10的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中该方法包括按每重量份嘌呤核酸相关物质计，使用0.01到100重量份比例的嘧啶核酸相关物质。
15.根据权利要求10的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中该方法包括将嘧啶核酸相关物质加入到含有嘌呤核酸相关物质的组合物中。
16.根据权利要求15的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中组合物含有按重量计至少0.01％比例的嘌呤核酸相关物质。
17.根据权利要求15的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中组合物含有按重量计0.01％到10％比例的嘌呤核酸相关物质。
18.根据权利要求15的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中组合物为用于皮肤或粘膜的外用组合物。
19.根据权利要求15的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中组合物用于选自抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤美白，抗松弛，抗无光泽，抗皱，毛发生长，抗皮屑，美甲以及伤口愈合的目的。
20.根据权利要求15的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中组合物用于选自抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤美白，抗松弛，抗无光泽，抗皱，毛发生长，美甲以及伤口愈合的目的。
21.根据权利要求15的用于增强细胞增殖促进作用的方法，其中组合物用于抗皱的目的。
22.一种通过将嘌呤核酸相关物质与嘧啶核酸相关物质结合施用于皮肤或粘膜促进细胞增殖的方法。
23.根据权利要求22的促进细胞增殖的方法，其中嘌呤核酸相关物质为选自腺嘌呤核酸-相关物质的至少一种且嘧啶核酸相关物质为选自尿嘧啶核酸-相关物质的至少一种。
24.根据权利要求22的促进细胞增殖的方法，其中嘌呤核酸相关物质为选自腺嘌呤，腺苷，腺苷磷酸，次黄嘌呤，肌苷，次黄嘌呤核苷酸，及其盐的至少一种，且嘧啶核酸相关物质为选自尿嘧啶，尿苷，尿苷磷酸，脱氧尿苷，脱氧尿苷磷酸，及其盐的至少一种。
25.根据权利要求22的促进细胞增殖的方法，其中嘌呤核酸相关物质是腺苷一磷酸或其盐，且嘧啶核酸相关物质是尿苷一磷酸或其盐。
26.根据权利要求22的促进细胞增殖的方法，其中该方法包括按每重量份嘌呤核酸相关物质计，使用0.01到100重量份比例的嘧啶核酸相关物质。
27.根据权利要求22的促进细胞增殖的方法，其中该方法包括将含有嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质的组合物施用于皮肤或粘膜。
28.根据权利要求27的促进细胞增殖的方法，其中组合物含有按重量计至少0.01％比例的嘌呤核酸相关物质。
29.根据权利要求27的促进细胞增殖的方法，其中组合物含有按重量计0.01％到10％比例的嘌呤核酸相关物质。
30.根据权利要求27的促进细胞增殖的方法，其中组合物为用于皮肤或粘膜的外用组合物。
31.根据权利要求27的促进细胞增殖的方法，其中组合物为化妆品或外用的药物或半药物。
32.根据权利要求22的促进细胞增殖的方法，其中组合物用于选自抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤美白，抗松弛，抗无光泽，抗皱，毛发生长，抗皮屑，美甲以及伤口愈合的目的。
33.根据权利要求22的促进细胞增殖的方法，其中组合物用于选自抗衰老，增湿，抗粉刺，皮肤美白，抗松弛，抗无光泽，抗皱，毛发生长，美甲以及伤口愈合的目的。
34.根据权利要求22的促进细胞增殖的方法，其中组合物用于抗皱的目的。
35.嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质在制备用于细胞增殖的组合物中的应用。
36.嘧啶核酸相关物质在增强嘌呤核酸相关物质的细胞增殖促进作用中的应用。
37.嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质在促进细胞增殖中的应用。
38.嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质在防皱作用中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种有效发挥嘌呤核酸相关物质的细胞增殖促进作用的方法，和一种含有嘌呤核酸相关物质和嘧啶核酸相关物质的用于细胞增殖的组合物。此外，本发明提供了通过利用嘌呤核酸相关物质与嘧啶核酸相关物质相结合来增强嘌呤核酸相关物质的细胞增殖促进作用的方法。更进一步的，本发明提供了一种用于促进细胞增殖的方法，其中该方法包括将嘌呤核酸相关物质与嘧啶核酸相关物质相结合施用于皮肤或粘膜。
文档编号A61Q19/00GK1646078SQ03808030
公开日2005年7月27日 申请日期2003年4月3日 优先权日2002年4月9日
发明者河村光章, 篠原茂生 申请人:大塚制药株式会社