专利名称：二苯基乙烯化合物的新型杂环类似物的制作方法
相关申请的参考本申请是2002年10月8日提交的U.S.专利申请No.10/265,902的部分继续申请，U.S.专利申请No.10/265,902是2001年4月27日提交的U.S.专利申请系列No.09/843,167的部分继续申请，U.S.专利申请No.09/843,167是2001年2月20日提交的U.S.专利申请No.09/785,554的部分继续申请，U.S.专利申请No.09/785,554是2000年6月9日提交的U.S.专利申请No.09/591,105的部分继续申请，U.S.专利申请系列No.09/591,105是1999年4月6日提交的U.S.专利申请No.09/287,237的部分继续申请。
背景技术：
本申请涉及通过将二苯基乙烯化合物及其衍生物与噻唑烷或恶唑烷中间体化学偶合形成的新型化合物。这些化合物有效地提供各种有用的药理学效果。例如，化合物用于降低II型糖尿病动物模型中的血糖，血清胰岛素和甘油三酯的水平。
另外，这些化合物用于治疗与胰岛素耐受性有关的病症，如多囊性卵巢综合征，以及高脂血症，冠心病和周围血管疾病，并且还用于治疗炎症和免疫性疾病，尤其是由细胞因子和环氧合酶如TNF-α、IL-1、IL-6和/或COX-2介导的那些疾病。
I型和II型糖尿病的起因仍然是未知的，尽管基因和环境似乎都是主要因素。胰岛素依赖性I型和非胰岛素依赖性II型是已知类型。I型是自身免疫疾病，对其应负责的自身抗原仍然未知。I型的患者需要通过胃肠外或皮下摄取胰岛素得以存活。然而，II型糖尿病，更普遍的形式，是由于身体不能制造足够数量的胰岛素或不能适当地使用产生的胰岛素导致的代谢紊乱。虽然胰岛素分泌和胰岛素耐受性被认为是主要的缺陷，但是，机理中涉及的精确遗传因素仍是未知。
患糖尿病的患者通常具有一个或多个如下缺陷
由胰脏产生的胰岛素较少；由肝脏分泌的葡萄糖过多；骨骼肌的葡萄糖摄取降低；葡萄糖载体中的缺陷；胰岛素受体的脱敏。
除胰岛素的胃肠外或皮下使用以外，使用约4类口服降糖药。
表1
1，罗西格列酮 2，匹格列酮
3，曲格列酮4，二甲双胍如上表所示，目前用于糖尿病治疗的每种药剂都具有某些缺点。因此，对识别和开发用于糖尿病治疗的新药剂，特别地可以口服给药的水溶性药剂具有持续兴趣。
上表中所列的噻唑烷二酮类近年来在II型糖尿病的治疗中得到更广泛地使用，其显示出作为对抗″胰岛素耐受性″的胰岛素敏化剂的特定用途，胰岛素耐受性中的一个条件是患者要对胰岛素的效果具有较少的反应。然而，已知的噻唑烷二酮对相当数量的患者人群是无效的。此外，在此类别中由FDA批准的第一种药物曲格列酮，由于肝毒性的问题而退出市场。因此，对非毒性，更广泛有效的胰岛素敏化剂有持续需求。
采用噻唑烷二酮的药物组合物和方法在U.S.专利Nos.6,133,295，6,133,293，6,130,216，6,121,295，6,121,294，6,117,893，6,114,526，6,110,951，6,110,948，6,107,323，6,103,742，6,080,765，6,046,222，6,046,202，6,034,110，6,030,973，RE36,575， 6,011,036，6,011,031，6,008,237，5,990,139，5,985,884，5,972,973等中有所描述。
如上所示，本发明也涉及免疫性疾病或炎症，尤其是对如由细胞因子或环氧合酶介导的疾病的治疗。免疫系统的主要元素是和巨噬细胞或抗原递呈细胞，T细胞和B细胞。其它免疫细胞如NK细胞，嗜碱粒细胞，肥大细胞和树状突细胞的作用是已知的，但其在主要免疫学病症中的作用并不明确。巨噬细胞是两种炎症的重要介质并且对T细胞刺激和增殖提供必要的″帮助″。最重要地，巨噬细胞制造为有效的促炎症反应分子并且也对T细胞提供帮助的IL1，IL12和TNF-α。此外，巨噬细胞的活化导致酶，如环氧合酶II(COX-2)，诱生型一氧化氮合酶(NOS)的诱导和具有损害正常细胞能力的自由基的产生。许多因素活化巨噬细胞，包括细菌产物，超抗原和干扰素γ(IFNγ)。值得相信的是，活化过程包括磷酸化酪氨酸激活酶(PTKs)和其它未确定的细胞激活酶。
巨噬细胞吸收和破坏抗原至小片段。然后使这些片段与主要组织兼容性复合物II(MHC II)联合。由T细胞受体识别这个抗原片段和MHC II的复合物。与适当的共同刺激信号联合，这个受体一配体的相互作用导致T细胞的活化和增殖。根据活化巨噬细胞所使用抗原的途径，其剂量和条件，免疫应答可导致B细胞帮助和抗体的产生或者细胞参与应答的发展。由于巨噬细胞是免疫应答发展的标记，改进其功能，特别地其细胞因子分泌情况的药剂可能确定免疫应答的方向和效力。
细胞因子是在介导免疫应答中起重要作用的由免疫细胞分泌的分子。细胞因子的产生可以导致其它细胞因子的分泌，改变的细胞功能，细胞分裂或分化。炎症是身体对损伤或感染的正常反应。然而，在如类风湿性关节炎的炎性疾病中，病理学炎症性过程可导致发病率和死亡率。细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在炎性应答中起中心作用并且已经定向为炎性疾病中的介入点。TNF-α是由活化巨噬细胞和其它细胞释放的多肽激素。在低浓度下，通过活化粒细胞和促进其到炎症血管外部位的迁移，TNF-α参与到保护性炎性应答中(Moser等人，J ClinInvest，83444-55，1989)。在更高浓度下，TNF-α可以用作有效热原并且诱导其它致炎细胞因子的产生(Haworth等人，Eur J Immunol，212575-79，1991；Brennan等人，Lancet，2244-7，1989)。TNF-α还刺激急性相蛋白质的合成。在类风湿性关节炎中，对约1％成年美国人口的慢性和渐进炎性疾病的TNF-α介导细胞因子的级联具有影响，该级联导致关节的损伤和破坏(Arend等人，Arthritis Rheum，38151-60，1995)。TNF-α的抑制剂，包括溶解性TNF受体(依那西普)(Goldenberg，ClinTher，2175-87，1999)和抗TNF-α抗体(英夫利昔单抗)(Luong等人，AnnPharmacotherapy，34743-60，2000)，其近来由美国食品和药物管理局(FDA)批准为类风湿性关节炎治疗的药剂。
在许多其它病症和病况中也涉及到TNF-α升高的水平，包括恶病质(Fong等人，Am J Physiol，2568659-65，1989)，败血症性休克综合征(Tracey等人，Proc Soc Exp Biol Med，200233-9，1992)，骨关节炎(Venn等人，Arthritis Rheum，36819-26，1993)，如节段性回肠炎和溃疡性结肠炎的免疫性肠炎(Murch等人，Gut，32913-7，1991)，贝切特疾病(Akoglu等人，J Rheumatol，171107-8，1990)，川崎病(Matsubara等人，ClinImmunol Immunopathol，5629-36，1990)，脑型疟(Grau等人，N Engl JMed，3201586-91，1989)，成人呼吸窘迫综合征(Millar等人，Lancet2712-4，1989)，石棉沉着病和硅肺(Bissonnette等人，炎症，13329-39，1989)，肺结节病(Baughman等人，J Lab Clin Med，11536-42，1990)，哮喘(Shah等人，Clin Exp Allergy，251038-44，1995)，艾滋病(Dezube等人，J Acquir Immune Defic Syndr，51099-104，1992)，脑膜炎(Waage等人，Lancet，1355-7，1987)，牛皮癣(Oh等人，J Am Acad Dermatol，42829-30，2000)，移植物抗宿主反应(Nestel等人，J Exp Med，175405-13，1992)，多发性硬化症(Sharief等人，N Engl J Med，325467-72，1991)，全身性红斑狼疮(Maury等人，Int J Tissue React，11189-93，1989)，糖尿病(Hotamisligil等人，Science，25987-91，1993)和动脉粥样硬化(Bruunsgaard等人，Clin Exp Immunol，121255-60，2000)。
可以从以上引用的参考文献看出TNF-α的抑制剂可以有效用于治疗很种疾病。抑制TNF-α的化合物在U.S.Pat.Nos.6,090,817，6,080,763，6,080,580，6,075,041，6,057,369，6,048,841，6,046,319，6,046,221，6,040,329，6,034,100，6,028,086，6,022,884，6,015,558，6,004,974，5,990,119，5,981,701，5,977,122，5,972,936，5,968,945，5,962,478，5,958,953，5,958,409，5,955,480，5,948,786，5,935,978，5,935,977，5,929,117，5,925,636，5,900,430，5,900,417，5,891,883，5,869,677等中有所描述。
白细胞介素-6(IL-6)是另一种显示作用的多效性和重复性的致炎细胞因子。IL-6参与到免疫应答，炎症和血细胞生成中。其是肝急性相反应的有效诱导物以及在由糖皮质激素的负控制下的下丘脑-垂体-肾上腺轴的强大刺激剂。IL-6促进生长激素的分泌但抑制促甲状腺激素的释放。在几种炎性疾病中均可以看到IL-6的升高水平，以及建议将IL-6细胞因子亚科的抑制作为改进类风湿性关节炎治疗的策略(Carroll等人，Inflamm Res，471-7，1998)。此外，IL-6牵涉动脉粥样硬化的渐进和冠心病的发病(Yudkin等人，动脉粥样硬化，148209-14，1999)。也可以在与撤销对加压素分泌的管制有关的类固醇药物停用综合症、状态中，和与增加的骨吸收相关的骨质疏松症中看到IL-6的超量产生，如在甲状旁腺功能亢进和性一类固醇缺乏的情况下(Papanicolaou等人，Ann Intern Med，128127-37，1998)。
由于在几种疾病状态中都显示出IL-6的过度产生，所以极为需要开发抑制IL-6分泌的化合物。抑制IL-6的化合物在U.S.Pat.Nos.6,004,813；5,527,546和5,166,137中有所描述。
环氧合酶是在前列腺素生物合成中促进速率控制步骤的酶，其是炎症和疼痛的重要介质。酶是以至少两种不同的异构体出现的，环氧合酶-1(COX-1)和环氧合酶-2(COX-2)。在胃粘膜，血小板和其它细胞中构成性地(constitutively)表达COX-1异构体并且包含在哺乳动物体内内环境稳定的维持状态中，包括保护消化道的整体性。另一方面，不通过构成性地表达COX-2异构体但其是通过各种药剂，如细胞因子、分裂素、激素和生长因子诱导的。特别地，在炎性应答期间诱导COX-2(DeWitt DL，Biochim Biophys Acta，1083121-34，1991；Seibert等人，Receptor，417-23，1994.)。阿司匹林和其它常规非甾体类抗炎药(NSAIDs)是COX-1和COX-2的非选择性抑制剂。它们可有效降低炎性痛和肿胀，但由于其阻碍COX-1的保护作用，而产生胃肠病理学上不所需的副作用。因此，选择性抑制COX-2但不抑制COX-1的药剂优选用于炎性疾病的治疗。近来，选择性抑制COX-2的二芳基吡唑磺酰胺(塞来考昔)已经由FDA批准来用于治疗类风湿性关节炎(Luong等人，Ann Pharmacother，34743-60，2000；Penning等人，J Med Chem，401347-65，1997)。也可以在许多癌症和癌前期病变中表达COX-2，并且存在如下固定的证据选择性COX-2抑制剂可用于治疗和预防结肠直肠癌、乳腺癌和其它癌症(Taketo MM，J Natl Cancer Inst，901609-20，1998；Fournier等人，J Cell Biochem Suppl，3497-102，2000；Masferrer等人，Cancer Res，601306-11，2000)。在1999年塞来考昔由FDA批准来作为对具有家族性腺瘤息肉病的患者进行通常护理的辅助物，该病况在未治疗的情况下通常会导致结肠直肠癌。
选择性抑制COX-2的化合物在U.S.Pat.Nos.5,344,991，5,380,738，5,434,178，5,466,823，5,474,995，5,510,368，5,521,207，5,521,213，5,536,752，5,550,142，5,552,422，5,604,260，5,639,780，5,643,933，5,677,318，5,691,374，5,698,584，5,710,140，5,733,909，5,789,413，5,811,425，5,817,700，5,849,943，5,859,257，5,861,419，5,905,089，5,922,742，5,925,631，5,932,598，5,945,539，5,968,958，5,981,576，5,994,379，5,994,381，6,001,843，6,002,014，6,004,950，6,004,960，6,005,000，6,020,343，6,034,256，6,046,191，6,046,217，6,057,319，6,071,936，6,071,954，6,077,850，6,077,868，6,077,869和6,083,969中有所描述。
细胞因子IL-1β也参与炎性应答中。其刺激胸腺细胞的增殖，成纤维细胞生长因子的活性，和来自滑膜细胞的前列腺素的释放。
细胞因子IL-1β的升高或未调节的水平与许多炎性疾病和其它疾病状态有关，包括但不限于成人呼吸窘迫综合征(Meduri等人，Chest1071062-73，1995)，变应性变态反应(Hastie等人，细胞因子8730-8，1996)，阿耳茨海默病(O′Barr等人，J Neuroimmunol 10987-94，2000)，厌食症(Laye等人，Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 279893-8，2000)，哮喘(Sousa等人，Thorax 52407-10，1997)，动脉粥样硬化(Dewberry等人，Arterioscler Thromb Vasc Biol 202394-400，2000)，脑肿瘤(Ilyin等人，Mol Chem Neuropathol 33125-37，1998)，恶病质(Nakatani等人，Res Commun Mol Pathol Pharmacol 102241-9，1998)，癌瘤(Ikemoto等人，Anticancer Res 20317-21，2000)，慢性关节炎(van denBerg等人，Clin Exp Rheumatol 17S105-14，1999)，慢性疲劳综合征(Cannon等人，J Clin Immunol 17253-61，1997)，CNS创伤(Herx等人，JImmunol 1652232-9，2000)，癫痫(De Simoni等人，Eur J Neurosci122623-33，2000)，纤维化肺病(Pan等人，Pathol Int 4691-9，1996)，暴发性肝功能衰竭(Sekiyama等人，Clin Exp Immunol 9871-7，1994)，龈炎(Biesbrock等人，Monogr Oral Sci 1720-31，2000)，肾小球肾炎(Kluth等人，J Nephrol 1266-75，1999)，格-巴二氏综合征(Zhu等人，Clin ImmunolImmunopathol 8485-94，1997)，热痛觉过敏(Opree等人，J Neurosci206289-93，2000)，出血和内毒素血症(Parsey等人，J Immunol1601007-13，1998)，免疫性肠炎(Olson等人，J Pediatrgastroenterol Nutr16241-6，1993)，白血病(Estrov等人，Leuk Lymphoma 24379-91，1997)，白血病性关节炎(Rudwaleit等人，Arthritis Rheum 411695-700，1998)，全身性红斑狼疮(Mao等人，Autoimmunity 2471-9，1996)，多发性硬化症(Martin等人，J Neuroimmunol 61241-5，1995)，骨关节炎(Hernvann等人，骨关节炎Cartilage 413942，1996)，骨质疏松症(Zheng等人，Maturitas2663-71，1997)，帕金森氏病(Bessler等人，Biomed Pharmacother53141-5，1999)，POEMS综合征(Gherardi等人，Blood 832587-93，1994)，未足月分娩(Dudley，J Reprod Immunol 3693-109，1997)，牛皮癣(Bonifati等人，J Biol Regulhomeost Agents 11133-6，1997)，再灌注损伤(Clark等人，J Surg Res 58675-81，1995)，类风湿性关节炎{Seitz等人，JRheumatol 231512-6，1996)，败血症性休克(van Deuren等人，Blood901101-8，1997)，系统性脉管炎{Brooks等人，Clin Exp Immunol106273-9，1996)，颞下颌关节疾病(Nordahl等人，Eur J Oral Sci106559-63，1998)，结核病(Tsao等人，Tuber Lung Dis 79279-85，1999)，病毒性鼻炎(Roseler等人，Eur Arch OtorhinolaryngolSuppl 1S61-3，1995)，和由劳损、扭伤、创伤、手术、感染或其它疾病过程导致的疼痛和/或炎症。
由于IL-1β的过度产生与许多疾病状况相关，理想的是开发抑制IL-1b的产生或活性的化合物。抑制IL-1β的方法和组合物在U.S.专利Nos.6,096,728，6,090,775，6,083,521，6,036,978，6,034,107，6,034,100，6,027,712，6,024,940，5,955,480，5,922,573，5,919,444，5,905,089，5,874,592，5,874,561，5,874,424，5,840,277，5,837,719，5,817,670，5,817,306，5,792,778，5,780,513，5,776,979，5,776,954，5,767,064，5,747,444，5,739,282，5,731,343，5,726,148，5,684,017，5,683,992，5,668,143，5,624,931，5,618,804，5,527,940，5,521,185，5,492,888，5,488,032等中有所描述。
从以上内容可以发现，尽管存在广泛的先前努力以提供抑制例如，TNF-α、IL-1、IL-6、COX-2或其它被认为会引起免疫应答，炎症或炎性疾病，如关节炎的药剂的化合物，但是对有效治疗或抑制这样疾病的新的和改进的化合物仍有需求。本发明的主要目的是提供对这样的治疗以及对例如，胰岛素耐受性，高脂血症，冠心病，多发性硬化症和癌症的治疗均有效的化合物。
发明概述本发明的一个方面，是提供如下通式1的化合物
其中Z是 或 或 其中n，m，q和r单独表示0～4的整数，条件是n+m≤4和q+r≤4；p和s单独表示0～5的整数，条件是p+s≤5；a，b和c表示可以存在或不存在的双键；当双键存在时，可以为E或Z构型，当双键不存在时，获得的立体中心可以具有R-或S-构型；
R和R′单独是H、C1-C20线性或支化烷基、C2-C20线性或支化烯基、-CO2Z′，其中Z′是H、钠、钾、或其它药物上可接受的反荷离子如钙、镁、铵、氨基丁三醇、四甲基铵等；-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、卤素、取代的C1-C20线性或支化烷基或取代的C2-C20线性或支化烯基，其中R单独表示C1-C20线性或支化烷基、线性或支化烯基或芳烷基-(CH2)x-Ar，其中x是1～6；-CONR2″″，其中R″″单独是H、可任意取代的C1-C20烷基、可任意取代的C1-C20烷氧基，优选可任意取代的C1-C6烷氧基(例如甲氧基、乙氧基或丙氧基)、可任意取代的C2-C20烯基、或可任意取代的C6-C10芳基或其中NR2″″表示环状部分如吗啉、哌啶、哌嗪等；R″单独是H、C1-C20线性或支化烷基、C2-C20线性或支化烯基、-CO2Z′，其中Z′是H、钠、钾、或其它药物上可接受的反荷离子如钙、镁、铵、氨基丁三醇、四甲基铵等；-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、卤素、取代的C1-C20线性或支化烷基或取代的C2-C20线性或支化烯基，其中R单独表示C1-C20线性或支化烷基、线性或支化烯基或芳烷基-(CH2)x-Ar，其中x是1～6；A，A′和A″各自单独是H、C1-C20酰氨基、C1-C20酰氧基、C1-C20烷酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷氧基、C1-C20烷氨基、C1-C20烷羧氨基、羧基、氰基、卤素、羟基；B，B′和B″单独是H、C1-C20酰氨基、C1-C20酰氧基、C1-C20烷酰基、C1-C20烯酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷氧基、C1-C20烷氨基、C1-C20烷羧氨基(alkylcarboxylamino)、芳酰基、芳烷酰基、羧基、氰基、卤素、羟基、硝基；可任意取代的，线性或支化C1-C20烷基或C2-C20烯基；或A和B共同地，A′和B′共同地，或A″和B″共同地结合以形成亚甲二氧基或亚乙二氧基团；X和X′单独是-NH、-NR、O或S。
本发明的进一方面，是提供通式1的如下优选化合物
其中Z是 或 n，m，q和r单独表示0～4的整数，条件是n+m≤4和q+r≤4；p和s单独表示0～5的整数，条件是p+s≤5；a，b和c表示可以存在或不存在的双键；当双键存在时，可以为E或Z构型，当双键不存在时，获得的立体中心可以具有R-或S-构型；R和R′各自单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、-CONR2″″、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；
R″单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R单独表示线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、或-(CH2)x-Ar，其中x表示1～6的整数和Ar表示芳基；R″″单独表示氢原子、可任意取代的C1-C20烷基、可任意取代的C1-C20烷氧基、可任意取代的C2-C20烯基、可任意取代的C6-C10芳基；或NR2″″表示环状部分；Z′表示氢原子或药物上可接受的反荷离子；A，A′和A″各自单独表示氢原子、C1-C20酰氨基、C1-C20酰氧基、C1-C20烷酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷氧基、C1-C20烷氨基、C1-C20烷羧氨基、羧基、氰基、卤素、或羟基；B，B′和B″各自单独表示C2-C20烯酰基、芳酰基、芳烷酰基、硝基、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、或可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；或A和B共同地，A′和B′共同地，或A″和B″共同地，单独表示亚甲二氧基或亚乙二氧基团；和X和X′单独表示＞NH、＞NR、-O-、或-S-。
B)
其中Z是 或 或 n，m，q和r单独表示0～4的整数，条件是n+m≤4和q+r≤4；p和s单独表示0～5的整数，条件是p+s≤5；a，b和c表示可以存在或不存在的双键；当双键存在时，可以为E或Z构型，当双键不存在时，获得的立体中心可以具有R-或S-构型；
R单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、-CONR2″″、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R′单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、-CONR2″″、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R″单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R单独表示线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、或-(CH2)x-Ar，其中x表示1～6的整数和Ar表示芳基；R″″单独表示氢原子、可任意取代的C1-C20烷基、可任意取代的C1-C20烷氧基、可任意取代的C2-C20烯基、可任意取代的C6-C10芳基；或NR2″″表示环状部分；Z′表示氢原子或药物上可接受的反荷离子；A，A′和A″各自单独表示氢原子、C1-C20酰氨基、C1-C20酰氧基、C1-C20烷酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷氧基、C1-C20烷氨基、C1-C20烷羧氨基、羧基、氰基、卤素、或羟基；B，B′和B″各自单独表示C2-C20烯酰基、芳酰基、芳烷酰基、硝基、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、或可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；
或A和B共同地，A′和B′共同地，或A″和B″共同地，单独表示亚甲二氧基或亚乙二氧基团；和X和X′单独表示＞NH、＞NR、-O-、或-S-。
这些化合物用于治疗糖尿病，高脂血症和其它与胰岛素耐受性有关的疾病，如冠心病和周围血管疾病，并且还用于治疗或抑制炎症或炎性疾病如炎性关节炎和例如，由细胞因子或环氧合酶如TNF-α、IL-1、IL-6和/或COX-2引起的胶原血管病。所述化合物还用于治疗或预防由细胞因子和/或环氧合酶介导的其他疾病，如癌症。
因此，本发明还提供治疗糖尿病和相关疾病的方法，该方法包括对患有糖尿病或相关病况的患者使用治疗有效量的通式1所述化合物的步骤。另外，本发明提供通过对需要这样治疗的患者使用有效量的通式1所述的化合物，来治疗炎症或炎性疾病或由细胞因子和/或环氧合酶介导的疾病的方法。来自此说明书的其它用途也是显然的。
本发明还提供包含治疗有效量的一种或多种通式1所述的化合物以及与其一起的药物上或生理学可接受的载体，来用于此处设想治疗的药物组合物。
附图简述
图1A和1B分别显示使用本发明化合物15天的db/db(自生糖尿病)雄性小鼠的血糖水平和体重。
图2A和2B显示使用本发明化合物超过15天的ob/ob(遗传学肥胖和自生糖尿病)雄性小鼠的血糖水平和体重。
图3A和3B分别为使用本发明化合物超过20-25天的db/db小鼠和ob/ob小鼠的血糖水平。
图4显示在使用一定剂量化合物之后的72小时内db/db雄性小鼠体中的血糖水平。
图5A，5B，5C和5D显示在使用本发明化合物治疗的db/db小鼠血清中甘油三酯水平，游离脂肪酸水平，glyc-Hb水平和来普汀水平。
图6A，6B，6C和6D是显示使用本发明化合物治疗的ob/ob小鼠血清的血清胰岛素水平，甘油三酯水平，游离脂肪酸水平和Glyc-Hb水平。
图7A和7B显示在使用本发明化合物治疗21天之后对小鼠体内肝酶的测定。
图8显示在3T3-L1细胞中对于本发明化合物的葡萄糖摄取。
图9显示在对LPS-诱导TNF生产的抑制方面，本发明化合物与罗西格列酮的比较。
图10是在对LPS-诱导IL-6生产的抑制方面，本发明化合物与罗西格列酮的比较。
图11是在对LPS-诱导IL-1-β生产的抑制方面，本发明化合物与罗西格列酮的比较。
图12A和12B显示在对LPS-诱导COX-2活性的抑制方面，本发明化合物(图12A)与罗西格列酮(图12B)的比较。
图13A，13B，13C和13D说明通过使用本发明化合物对胶原诱导关节炎的抑制。
图14说明通过使用本发明化合物对试验性变应性脑脊髓炎(EAE)的抑制。
图15.在刺激RAW 264.7细胞中NF-kB的活化。
图16A.使用化合物11和罗西格列酮后，db/db小鼠血糖降低百分比的比较。16B.动物的体重。
图17A.使用化合物11后，ob/ob小鼠的血糖降低百分比。17B.动物的体重。
图18.在14天的治疗之后，db/db小鼠体内的血清情况。
图19.在ob/ob小鼠体内化合物11对葡萄糖水平的剂量响应。
图20.A.在使用增加化合物11或载体浓度的治疗之后，分化3T3-L1脂肪细胞中测量的体外葡萄糖摄取。B.在载体、罗西格列酮或化合物11存在，增加胰岛素的浓度的情况下，分化3T3-L1脂肪细胞中测量的葡萄糖摄取。
图21.在糖尿病动物中化合物11的体内抗高血糖活性。
图22.在ob/ob小鼠中化合物11对罗西格列酮的体内抗高血糖活性。
图23.在3T3-L1细胞中化合物11对罗西格列酮的体内脂肪形成活性。(A)累积甘油三酯的定量测量。(B)由油红O的甘油三酯累积的定量评定。
图24.根据化合物11和罗西格列酮的PPRE-Luc Reporter的PPARγ-介导转活的诱导。
图25.化合物11对HepG2细胞中体外糖原合成的影响影响。A.在没有胰岛素的情况下，根据化合物11的来自葡萄糖的糖原合成的剂量依赖性刺激。B.化合物11-刺激糖原合成中的时间依赖性的增加。
C.亚胺环己酮阻断由化合物11诱导的糖原合成。
优选实施方案的描述根据通式1的优选化合物是5-(4-(4-(1甲酯基-2-(3，5-二甲氧基苯基)-乙烯基)-苯氧基)-苄基)-2，4-噻唑烷二酮，以下称为化合物11。然而，认为本发明也设想出根据通式1的其它化合物的供给和使用。
根据本发明的化合物可以与生理学可接受的媒介或载体结合以提供药物组合物，如形式为含有各种填料和粘结剂的片剂或胶囊的冻干粉末。如由本领域技术人员选择和按经验确定的那样，组合物中化合物的有效剂量可以在较宽范围内变化。
如先前所示，本发明的化合物用于糖尿病的治疗，该病症特征为升高的血糖水平的存在，即血糖过高病症如糖尿病，包括I型和II糖尿病，以及其它与血糖过多相关的病症如肥胖症，增加的胆固醇，如高甘油三酸酯血症的高脂血症，肾相关病症等。化合物还用于治疗与胰岛素耐受性和/或高胰岛素血症有关的病症，该病症包括除糖尿病以外的雄激素过多病况如多囊性卵巢综合征(Ibanez等人，J.ClinEndocrinol Metab，853526-30，2000；Taylor A.E.，Obstetgynecol ClinNorth Am，27583-95，2000)，冠心病如动脉粥样硬化和脉管再狭窄，和周围血管疾病。另外，本发明的化合物还用于治疗炎症和免疫性疾病，该病症包括由与致炎细胞因子相关的发信号途径介导的疾病，如类风湿性关节炎和其它炎性关节炎，多发性硬化症，免疫性肠炎，牛皮癣，牛皮癣性关节炎，强直性脊柱炎和其它椎关节炎，以及接触性和特应性皮炎。
“治疗”表示使用一定的数量本发明的化合物，该数量至少足以例如，降低患有血糖过多病症的患者的血糖水平或抑制或预防患有炎性或免疫性疾病的患者体内的致炎细胞因子等应答的发展。在糖尿病的情况下，通常使用足够数量的化合物以降低血糖水平，游离脂肪酸水平，胆固醇水平等至可接受的范围内，其中可接受的范围表示为正常平均血糖水平等水平的正负10％，通常为正负5％，或足以减轻症状和/或降低与这些参数升高水平相关的并发症的危险。可以使用本化合物治疗各种患者以降低如家畜，野生动物或稀有动物，宠物，以及人的血糖水平。可以使用任何常规给药技术对患有血糖过多病症的患者使用本化合物，该技术包括静脉内、皮内、肌内、皮下、口服等。然而，优选是口服每日剂量。输送到宿主的剂量必须依赖于输送化合物的途径，但一般为约0.1-500mg/kg人体重或典型地为约1-50mg/kg人体重。当本发明的化合物用于治疗炎性或免疫性疾病时，一般也设想使用相似的给药类型和剂量。
本发明的化合物可用于配方中，该配方使用肠内、或胃肠外给药的可接受的药物载体，例如，水、醇、明胶、阿拉伯胶、乳糖、淀粉酶、硬脂酸镁、滑石、植物油、聚亚烷基二醇等。可以采用固体形式配制化合物，如作为片剂、胶囊、糖衣丸和栓剂，或以液体形式配制，如溶液、悬浮液和乳液。还可以经由皮肤或由局部施加来输送制品。
根据本发明的代表性化合物可以由以下方案1～11公开的方法合成，其中方案1说明例示化合物10，11和14的制备；方案2说明例示化合物17和18的制备；方案3说明例示化合物22和23的制备；方案6说明例示化合物40，41和42的制备；方案7说明例示化合物46，47，49和50的制备；方案8说明化合物54的合成；方案9说明化合物58和59的制备；和方案4，5，10和11更为普遍地描述合成方法。
方案1 a试剂和条件(a)乙酸酐，Et3N，6h，130℃，47％；(b)MeOH，H2SO4，20h，回流，97％；(c)4-氟苯甲醛，NaH，DMF，18h，80℃，77％；(d)2，4-噻唑烷二酮，哌啶，苯甲酸，甲苯，5h，回流，86％；(e)Pd/C(10％)，HCOONH4/AcOH，48h，回流，49％；(f)NaBH4，EtOH，1h，25℃，定量的；(g)PBr3，CH2Cl2，25℃，1h，99％；(h)BuLi，2，4-噻唑烷二酮，THF，0℃，45min，15％；(i)含水NaOH，MeOH，15h，25℃，73％。
方案2 a试剂和条件(a)Pd/C(10％)，H2，18h，25℃，定量的；(b)4-氟苯甲醛，NaH，DMF，18h，80℃，69％；(c)2，4-噻唑烷二酮，哌啶，苯甲酸，甲苯，2h，回流，81％；(d)Pd/C(10％)，H2(60psi)，34h，25℃，38％。
方案3 a试剂和条件(a)乙酸酐，Et3N，24h，125℃，13％，；(b)MeOH，H2SO4，18h，回流，35％；(c)4-氟苯甲醛，NaH，DMF，18h，80℃，74％；(d)2，4-噻唑烷二酮，哌啶，苯甲酸，甲苯，5h，回流，91％；(e)Pd/C(10％)，甲酸铵，乙酸，20h，回流。
方案4
方案5
方案6
方案7
方案8
方案9
方案10
方案11
参考方案1，醛5和酸6可以在乙酸酐和三乙胺中缩合以形成不饱和酸7。在提供化合物8的酸酯化之后，由酚羟基形成带有对氟苯甲醛的醚9。然后醛9与噻唑烷二酮缩合以提供化合物10以及由氢气将化合物10中杂环以外的键还原形成目标化合物11。
在方案4中将方案1的步骤一般化。通式2b，3b，4b，6b，7b和8b分别对应方案1中的通式5，6，7，9，10和11。
方案5显示三环产物35和36的通用合成。醛或酮32与33缩合以形成双环化合物34。将化合物34与杂环二酮缩合以形成可以任意氢化为36的三环产物35。
方案10显示其中R＝R′＝H的化合物的通用合成。醛或酮62与杂环二酮缩合以形成可以任意氢化为产物64的双环化合物63。64与可任意取代的醛偶合得到三环化合物65。65的Wittig反应导致芪衍生物66的形成。
方案11显示联苯产物69和70的通用合成。可任意取代的羟基联苯67与可任意取代的醛或酮偶合得到68。醛或酮68与杂环二酮缩合以形成可以任意氢化为产物70的化合物69。
在通式1中，C1-C20线性或支化烷基表示如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、异戊基、新戊基等的基团。C2-C20线性或支化烯基表示如乙烯基、丙烯基、正丁烯基、包括含有多个不饱和部位的基团的异丁烯基，如1，3-丁二烯等的不饱和基团。卤素基团包括氯、氟、溴、碘。取代的C1-C20线性或支化烷基或取代的C2-C20线性或支化烯基表示烷基或烯基可以由如下基团取代如卤素、羟基、羧基、氰基、氨基、烷氧基等。C1-C20酰氨基或酰氧基表示与酰基(RCO)键合的氧或氨基，其中R可以是氢、C1-C20线性或支化烷基或者C2-C20线性或支化烯基。烯基为-C＝C-，其中R可以是氢、C1-C20线性或支化烷基或者C2-C20线性或支化烷基。烷氧羰基表示基团ROCO-，其中R可以是氢、C1-C20线性或支化烷基或者C2-C20线性或支化烯基。C1-C20烷羧氨基表示基团RCON(R)-，其中R可以单独为氢、C1-C20线性或支化烷基或者C2-C20线性或支化烯基。羧基是基团HO2C-，以及烷酰基是基团RCO-，其中R是线性或支化碳链。基团芳酰基是Ar-CO-，其中Ar是如苯基、萘基、取代苯基等的芳族基团。芳烷酰基是基团Ar-R-CO-，其中Ar是如苯基、萘基、取代苯基等的芳族基团，和R是线性支化烷基链。
如先前所示，其中a，b或c表示双键的本发明的化合物可以具有E或Z构型。另一方面，当a，b或c不存在，即存在单键时，获得的化合物可以是R-和/或S-立体异构体。本发明设想这样立体异构体的外消旋混合物以及单独，分离的立体异构体。可以通过使用旋光折分剂得到单独的立体异构体。作为选择地，可以使用已知构型的光学纯开始材料由立体有择合成获得所需对映体。
以下参考方案1来描述化合物11，即5-(4-(4-(1-甲酯基)-2-(3，5-二甲氧基苯基)-乙烯基)-苯氧基)-苄基)-2，4-噻唑烷二酮(也称为3-(3，5-二甲氧基-苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代-噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}-丙烯酸甲酯)的制备。
3，5-二甲氧基苯甲醛5与4-羟苯基乙酸6的帕金缩合得到唯一地为E-异构体的α-苯基取代的肉桂酸7。通过与报导化合物的1HNMR比较确认双键的几何学(Pettit等人，J Nat Prod 51517-27，1998)。7的酯化及随后与4-氟苯甲醛的缩合得到9。在带有水共沸脱除的苯甲酸哌啶鎓存在下，醛9与2，4-噻唑烷二酮的诺文格尔(Knovenagel)缩合得到良好收率的10。
主要的挑战是为了生产化合物11，17和18的双键选择性氢化。镁/甲醇对10的还原是非选择性的并且得到产物混合物。锌-乙酸的还原可以得到极性产物的混合物。在1，4-二恶烷中通过使用作为催化剂的10％碳载钯的氢化得到比例为6∶4的11和18的混合物。仅通过在C-18二氧化硅上的反相色谱可能从此混合物中分离化合物。可以采用几种方式克服这些问题。使用作为氢给体的甲酸铵在钯催化剂的存在下对10的氢化(Hudlicky，ACS Monograph 18846-7，1996；Ram和Ehrenkaufer，Synthesis 91-5，1988)产生最小量的过度还原产物18，并且有可能通过来自甲醇的重复结晶进行高纯度的11分离。在此方案的优选变化形式中，铂催化剂替代钯，并且从二氯甲烷中再结晶粗产物；采用这些改进方式明显降低所需催化剂的数量和反应时间，同时相当程度上改进总体的收率。在制备11的另一个尝试中，醛9还原成醇12，其在用PBr3处理时以高收率得到溴代化合物13。溴代化合物与由BuLi产生的2，4-噻唑烷二酮阴离子缩合以低收率得到11。
由于分子中2，4-噻唑烷二酮部分对催化剂的毒害，难以由钯催化的氢从10或11中以良好收率化合成18，获得的混合物包含作为少量产物的18。为解决此问题(如方案2所示)，首先通过使用作为催化剂的10％碳载钯将8定量还原成15，随后与4-氟苯甲醛和2，4-噻唑烷二酮偶合得到良好收率的17。采用碳载钯催化剂的更长时间的17还原和通过反应的催化剂更新中途，及随后由C-18反相硅胶的色谱精制，以产生适当收率的18。
在方案3中描述制备23，11的相应Z-异构体的合成策略。7与乙酸酐和三乙胺的延长加热(Kessar等人，IndianJ Chem 20B1-3，1981)得到13％收率的相应Z-异构体19。感兴趣地，用于生产22的2，4-噻唑烷二酮与21的反应显示肉桂酸双键的最小异构化和分别生成E-和Z-异构体的比例为1∶7的混合物。在没有进一步的精制的情况下进行反应以及通过介体HPLC精制最终产物以得到23。
实施例1通用方法。在Mel-Temp熔点设备上测量熔点以及其是未校正的。在JEOL Eclipse(400MHz)或Nicolet NT 36(360MHz)光谱仪中记录1HNMR和13C NMR光谱并且将其以TMS的百万分之一份(ppm)低磁场进行说明。在Nicolet Impact 410 FT-IR分光光度计上记录红外光谱。用HP 1100 MDS 1964A质谱分光光度计的Fison VG Platform II记录质谱。在Beckman DU650分光光度计上记录UV光谱。在Merck硅胶F254预涂敷板上进行TLC。用于柱色谱的硅胶是用于快速色谱的‘Baker’硅胶(40mm)。
3-(3，5-二甲氧基苯基)-2-(4-羟苯基)-丙烯酸(7)。向3，5-二甲氧基苯甲醛，5，(500g，3.0mol)和4-羟苯基乙酸，6，(457g，3.0mol)的混合物中加入乙酸酐(1.0L，10.60摩尔)和三乙胺(420mL，3.0mol)。在130-140℃下搅拌6h之后，将混合物冷却到室温。将浓HCl(1L)以多于50min的时间缓慢加入到反应混合物中，同时将温度保持在20-30℃。将获得的淡黄色沉淀过滤并用水洗涤。将固体溶于3N NaOH(5L)并搅拌1h并过滤。用浓HCl将滤液酸化到pH为1，同时保持25-30℃的温度。将沉淀的产物过滤并用水洗涤以得到粗产物，将粗产物从MeOH-H2O中再结晶和在40℃下干燥6h以得到7(428g，47％)mp 225-227℃(lit.226-228℃)17；1HNMR(360MHz，DMSO-d6)δ12.48(br s，1H)，9.42(s，1H)，7.59(s，1H)，6.95(d，J＝8.0Hz，2H)；6.76(d，J＝8.0Hz，2H)，6.35(t，J＝2.2Hz，1H)，6.27(d，J＝2.2Hz，2H)，3.56(s，6H)；MS(EI)m/z 229[M]-。
3-(3，5-二甲氧基苯基)-2-(4-羟苯基)-丙烯酸甲酯(8)。在氩气下将甲醇(3.0L)加入到充分干燥的7(427.5g，1.42mol)中。向此搅拌的悬浮液中加入浓硫酸(100mL)并且在回流，氮气条件下加热20h。在减压，30℃下蒸发甲醇。在乙酸乙酯(3.0L)中吸收残余物并用水(2×1.0L)，饱和含水NaHCO3(2×1.0L)，盐水(2×1.0L)洗涤。将有机相通过无水硫酸镁干燥，过滤和蒸发溶剂。将获得的残余物在高真空下充分干燥为白色固体，(433.6g，97％)mp 106-108℃；1HNMR(360MHz，CDCl3)δ7.72(s，1H)，7.06(d，J＝7.9Hz，2H)；6.77(d，J＝7.9Hz，2H)，6.33(t，J＝2.2Hz，1H)，6.26(d，J＝2.2Hz，2H)，5.74(s，1H)，3.81(s，3H)，3.60(s，6H)；MS(EI)m/z315[M]+。
3-(3，5-二甲氧基苯基)-2-[4-(4-甲酰基苯氧基)-苯基]-丙烯酸甲酯(9)。在氩气下，将8(433.0g，1.37mol)溶于干燥DMF(1.4L)并向此物质中加入氢化钠(60.4g，1.51mol)。向获得的橙色溶液中加入4-氟苯甲醛(185.0mL，1.71mol)并在80℃下加热18h。将反应混合物冷却到室温，使用乙酸乙酯(3.0L)稀释并用水(3×1.0L)，然后盐水(1×1.0L)萃取。将有机层通过无水硫酸钠干燥，过滤和蒸发溶剂。将残余物在甲醇(3.0L)中悬浮和搅拌过夜。将固体过滤以及在真空，40℃下干燥以得到为淡黄色固体的9(445g，77％)mp 108-110℃；1HNMR(360MHz，CDCl3)δ9.94(s，1H)，7.86(d，J＝8.6Hz，2H)；7.80(s，1H)，7.28(d，J＝8.6Hz，2H)，7.11(重叠的d，J＝9.0Hz，2H)，7.08(重叠的d，J＝9.0Hz，2H)，6.36(t，J＝2.2Hz，1H)，6.25(d，J＝2.2Hz，2H)，3.83(s，3H)，3.63(s，6H)。
3-(3，5-二甲氧基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基亚基甲基)-苯氧基]-苯基}-丙烯酸甲酯(10)。向9(352g，0.82mol)的无水甲苯搅拌悬浮液(2.5L)中，按顺序加入2，4-噻唑烷二酮(98.6g，0.84mol)，苯甲酸(134g，1.10mol)和哌啶(107.4g，1.26mol)并在回流温度下加热且借助于Dean-Stark设备脱水5h。将甲苯(1.0L)从反应混合物中脱除并在4℃下冷却过夜。过滤分离的固体和在减压下蒸发母液至干燥。将获得的残余物再溶于MeOH-乙醚(1∶1，3.0L)的混合物中。在4℃下静置过夜时，溶液可产生更多的固体。将从两个批次得到的固体结合并在真空烘箱中，40℃下干燥过夜以得到为黄色固体的10(362.5，96％)mp 106-108℃；mp 225-226℃；1HNMR(360MHz，DMSO-d6)δ12.53(br s，1H)，7.78(s，1H)，7.73(s，1H)，7.63(d，J＝9.2Hz，2H)；7.25(d，J＝9.2Hz，2H)，7.13(重叠的d，J＝8.3Hz，2H)，7.08(重叠的，d，J＝8.6Hz，2H)，6.42(t，J＝2.2Hz，1H)，6.27(d，J＝2.2Hz，2H)，3.73(s，3H)，和3.59(s，6H)；MS(EI)m/z 518[M]+。
5-(4-(4-(1-甲酯基-2-(3，5-二甲氧基苯基)-乙烯基)-苯氧基)-苄基)-2，4-噻唑烷二酮，所谓的3-(3，5-二甲氧基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}-丙烯酸甲酯(化合物11)。将化合物10(30g，58mmol)溶于温的二恶烷(900mL)中，将其转移到2L氢化瓶并向此物质中加入10％Pd-C(～50％水，15g)以及在Parr氢化器中，60psi下氢化24h。此时间之后，加入另外15g的Pd-C并且继续另一个24h的氢化。通过赛力特(Celite)床过滤催化剂和蒸发溶剂。在乙腈(500mL)中吸收残余物并且将其吸附到C-18二氧化硅上(50g)。将吸附的材料放置在包含C-18反相硅胶(400)的柱子的顶部。将柱子用H2O中的CH3CN(45％，2L)，H2O中的CH3CN(50％，2L)，H2O中的CH3CN(55％，2L)洗脱来洗脱不需要的馏分。由H2O中的60％CH3CN的洗脱液开始收集所需化合物的馏分。在其HPLC纯度的基础上混合馏分。在减压下蒸发乙腈。通过冻干除去水份。产量12g(40％)。白色固体m.p.126-128℃.1H NMR(DMSO-d6)δ12.01(br，1H)，7.73(s，1H)，7.28(d，J＝8.6Hz，2H)，7.19(d，J＝8.6Hz，2H)，7.02(d，J＝8.6Hz，2H)，6.96(d，J＝8.6Hz，2H)，6.40(t，J＝2.2Hz，1H)，6.27(d，J＝2.2Hz)，4.92(dd，J＝9.2和4.4Hz，1H)，3.73(s，3H)，和3.57(s，6H)，3.37(dd，J＝14.8和4.3Hz，1H)和3.12(dd，J＝14.8和9.4Hz，1H)，IR(KBr)ν最大3200，2950，2850，1700，1600，1500，1150，和850cm-1；EIMSm/z 518，[M-H]-265，249，和113。
3-(3，5-二甲氧基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}-丙烯酸甲酯(11)。向10(599g，1.16mol)的冰乙酸溶液(11.5L)中，加入甲酸铵(4.0kg，62.9mol)并搅拌30min。将碳载钯(10％，干燥，300g)在冰乙酸(500mL)中的淤浆加入到烧瓶中(注意在大规模反应中放热可能成为问题；需要将氧气严格排除)和在120℃下加热24h，随后在室温下搅拌48h。通过Celite床过滤获得的混合物。将滤液缓慢倾入剧烈搅拌的水(12L)中并将分离的固体过滤和干燥。使获得的固体在热甲醇中淤浆化两次，随后在甲醇中淤浆化一次而精制以得到为白色固体的纯11(296g，49.2％)mp 126-128℃.1H NMR(DMSO-d6)δ12.01(brs，1H)，7.73(s，1H)，7.28(d，J＝8.6Hz，2H)，7.19(d，J＝8.6Hz，2H)，7.02(d，J＝8.6Hz，2H)，6.96(d，J＝8.6Hz，2H)，6.40(t，J＝2.2Hz，1H)，6.27(d，J＝2.2Hz)，4.92(dd，J＝9.2和4.4Hz，1H)，3.73(s，3H)，3.57(s，6H)，3.37(dd，J＝14.8和4.3Hz，1H)和3.12(dd，J＝14.8和9.4Hz，1H)，IR(KBr)ν最大3200，2950，2850，1700，1600，1500，1150，和850cm-1；EIMSm/z 518，[M-H]-265，249，和113。
3-(3，5-二甲氧基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}-丙烯酸甲酯(11)。将化合物10(20g，38.6mmol)，甲酸铵(150g，2.38mol)，10％Pt/C(dry，4g)和乙酸(660mL)混合加入到装配有回流冷凝器，温度计和机械搅拌器的圆底烧瓶中。将反应器抽空并用氮气净化三次，然后加热到稳态回流(约124℃)。反应在15h内完成并使反应通过搅拌冷却到室温。冷却之后，将混合物通过Celite(5g)垫过滤和将滤饼用新鲜乙酸(2×100mL)洗涤。将母液和洗涤物混合并浓缩。然后用二氯甲烷(400mL)稀释残余物，并将混合的有机物用水(400mL)和5％碳酸氢盐(400mL)萃取两次。然后将有机部分干燥和通过硅胶(30g)倾注以及用二氯甲烷(2×100mL)洗涤。混合和浓缩洗涤物。用乙醇稀释残余物，使残余物冷却到60℃并加入种晶。在50℃下将此淤浆搅拌约30min，然后使其冷却到室温以得到HPLC测定为98.1％的化合物11(12.85g，64％)。
3-(3，5-二甲氧基苯基)-2[4-(4-羟基甲基苯氧基)-苯基]-丙烯酸甲酯(12)。在室温下，将化合物9(5.0g，11.9mmol)悬浮在无水乙醇(60mL)中并加入硼氢化钠(0.23g，6.1mmol)，同时伴有足够的搅拌。反应在1h内完成，蒸发溶剂并将残余物溶于乙酸乙酯。用水(50mL)，盐水(25mL)萃取有机层，通过无水硫酸镁干燥，过滤和蒸发溶剂以得到为白色固体的标题化合物12(5.1g，100％)mp 93-95℃；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.72(s，1H)，7.35(d，J＝8.8Hz，2H)，7.19(d，J＝8.8Hz，2H)，7.02(d，J＝8.4Hz，2H)，7.00(d，J＝8.4Hz，2H)，6.41(t，J＝2.4Hz，1H)，6.29(d，J＝2.0Hz，2H)，5.18(t，J＝6.4Hz，1H)，4.49(d，J＝4.8Hz，2H)，3.73(s，3H)，3.57(s，6H)；MS(EI)m/z 315[M]+.
2-[4-(4-溴甲基苯氧基)-苯基]-3-(3，5-二甲氧基苯基)-丙烯酸甲酯(13)。在温度下，采用良好的搅拌将PBr3溶液(4.8mL在CH2Cl2中的1.0M)滴加到溶于CH2Cl2(20ml)的12(5.0g，11.9mmol)中。1h之后，用水(2×60mL)和盐水(20mL)萃取溶液。将有机相通过无水硫酸镁干燥，通过小硅胶床(20g)干燥和蒸发溶剂。在高真空，室温下将获得的粘性糖浆干燥48h以得到标题化合物(5.7g，99％)mp 79-81℃；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.73(s，1H)，7.49(d，J＝8.4Hz，2H)，7.22(d，J＝8.4Hz，2H)，7.07(d，J＝8.4Hz，2H)，7.00(d，J＝8.4Hz，2H)，6.42(t，J＝2.4Hz，1H)，6.28(d，J＝2.0Hz，2H)，4.73(d，J＝4.8Hz，2H)，3.68(s，3H)，3.58(s，6H)；Anal.(C25H23BrO5)C计算值61.12；发现值62.26；H计算值4.80；发现值4.88。
3-(3，5-二甲氧基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}-丙烯酸甲酯(11)。将2，4-噻唑烷二酮(2.83g，24.2mmol)溶于干燥THF(170mL)中并在氩气下冷却到0℃。滴入丁基锂(在己烷中的1.6M，30mL，48.0mmol)。在0℃下持续搅拌0.5h。在氩气下，将13(5.7g，11.8mmol)溶于干燥THF(30mL)中并采用快速搅拌通过注射器快速加入到以上悬浮液中。在用含水HCl(5％，40mL)骤冷之前，将温度保持在0℃下45min。加入另外的H2O(40mL)并用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。将有机层混合，用盐水洗涤，通过无水硫酸镁干燥，过滤和蒸发溶剂。通过硅胶，用己烷-乙酸乙酯(3∶2)作为洗脱溶剂由快速色谱得到标题化合物11(0.93g，15％)。由此方法制备的化合物11的1H NMR与上述从化合物10开始的合成途径生产的化合物11的那些相同。
3-(3，5-二甲氧基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基丙烯酸(14)。将含水氢氧化钠(2N，33.7mL，67.4mmol)加入到11(10g，19.27mmol)的搅拌，冷却到10℃以下的甲醇悬浮液(50mL)中并在室温下搅拌15h。将获得的淡黄色溶液冷却到10℃并用含水HCl(5％，115mL)酸化。将分离的固体过滤和用水(3×30mL)洗涤，通过乙醇再结晶得到为白色固体的14(7.14g，73％)3-(3，5-二甲氧基苯基)-2-(4-羟苯基)-丙酸甲酯(15)。向8(6.28g，20.0mmol)的乙醇悬浮液(200mL)中加入碳载钯(10％，潮湿，0.63g)并在H2，大气压，室温下搅拌18h。将催化剂通过赛力特床过滤和在减压下蒸发溶剂以得到为白色固体的15(6.32g，100％)mp 63-65℃；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.15(d，J＝8.7Hz，2H)，6.74(d，J＝8.7Hz，2H)，6.29(t，J＝2.4Hz，1H)，6.25(d，J＝2.4Hz，2H)，3.78(t，J＝8.7Hz，1H)，3.72(s，6H)，3.62(s，3H)，3.31(dd，J＝13.5和8.4Hz，1H)，2.93(dd，J＝13.5和6.9Hz，1H)；MS(EI)m/z 317[M]+.
3-(3，5-二甲氧基苯基)-2-[4-(4-甲酰基苯氧基)-苯基]-丙酸甲酯(16)。在氩气下，向氢化钠(在油中的60％，0.25g，6.3mmol)的DMF悬浮液(2mL)中加入在干燥DMF(3mL)中的15(2.0g，6.3mmol)。向获得的黄色溶液中，加入4-氟苯甲醛(0.68mL，6.3mmol)并在80℃下加热18h。将反应混合物冷却到室温，加入水(20mL)并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将有机层通过无水硫酸钠干燥，过滤和蒸发溶剂。将粗产物的乙酸乙酯溶液通过小硅胶床过滤以得到为油的16(1.83g，69％)1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.91(s，1H)，7.84(d，J＝8.7Hz，2H)，7.33(d，J＝8.7Hz，2H)，7.04(d，J＝5.4Hz，2H)，7.01(d，J＝5.4Hz，2H)，6.30(t，J＝2.1Hz，1H)，6.25(d，J＝2.1Hz，2H)，3.86(t，J＝7.8Hz，1Hz)，3.76(s，6H)，3.66(s，3H)，3.36(dd，J＝12.6和8.1Hz，1H)，2.97(dd，J＝13.5和7.5Hz，1H)；MS(EI)m/z 421[M]+.
3-(3，5-二甲氧基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基亚基甲基)-苯氧基]-苯基}-丙酸甲酯(17)。向16(1.81g，4.3mmol)的无水甲苯搅拌悬浮液(25mL)中，按顺序加入2，4-噻唑烷二酮(0.56g，4.74mmol)，苯甲酸(0.68g，5.60mmol)和哌啶(0.60mL，6.03mmol)并在回流温度下加热及使用Dean-Stark设备脱除水2h。在减压下蒸发溶剂到干燥。将获得的残余物由硅胶色谱精制，用己烷-乙酸乙酯洗脱(1∶1)以得到17(1.82g，81％)mp 104-106℃；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.53(brs，1H)，7.76(s，1H)，7.60(d，J＝8.7Hz，2H)，7.35(d，J＝8.7Hz，2H)，7.07(d，J＝4.8Hz，2H)，7.03(d，J＝4.8Hz，2H)，6.33-6.28(m，3H)，4.01(t，J＝7.5Hz，1Hz)，3.6-6，(s，6H)，3.56(s，3H)，3.22(dd，J＝13.8和8.4Hz，1H)，2.90(dd，J＝13.5和7.2Hz，1H)；MS(EI)m/z 520[M]+，Anal.(C28H25NO7S)C计算值64.73；发现值65.89；H计算值4.85；发现值5.08，N计算值2.70；发现值2.56。
3-(3，5-二甲氧基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}-丙酸甲酯(18)。将17(1.6g，3.08mmol)溶于二恶烷(45mL)中，在氢化瓶中转移和加入碳载钯(10％，1.0g)。氢化在65psi下进行34h。在此时间之后，加入另外的碳载钯(10％，0.6g)并使氢化持续另一个18h。将催化剂通过Celite床过滤和蒸发溶剂。将残余物由柱色谱在反相硅胶(C-18)上使用乙腈-水(1∶1)混合物精制来洗脱为白色固体的18(0.60g，38％)mp 125-128℃；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.04(brs，1H)，7.31(d，J＝8.4Hz，2H)，7.25(d，J＝8.4Hz，2H)，6.92(d，J＝8.6Hz，4H)，6.30(d，J＝2.0Hz，2H)，6.29(t，J＝2.0Hz，1H)，4.90(dd，J＝9.2和4.4Hz，1H)，3.98(t，J＝8.0Hz，1H)，3.67(s，6H)，3.56(s，3H)，3.37(dd，J＝13.6和4.0Hz，1H)，3.21(dd，J＝14.0和8.8Hz，1H)；3.11(dd，J＝14.0和9.2Hz，1H)；MS(EI)m/z 522[M]+。
Z-3-(3，5-二甲氧基苯基)-2-(4-羟苯基)-丙烯酸(19)。将E-3-(3，5-二甲氧基苯基)-2-(4-羟苯基)-丙烯酸，7(10.0g，33.3mmol)溶于乙酸酐(40mL，0.42摩尔)和三乙胺(40mL，0.29摩尔)的混合物中并在125℃下加热24h。将混合物冷却到室温。加入乙酸乙酯(150mL)，进一步冷却到5℃，用浓HCl(30mL)酸化并在此温度下搅拌90min。分离有机层和用乙酸乙酯(100mL)萃取水层。将结合的有机层用水(2×50mL)洗涤并用含水NaOH(5M，3×70mL)萃取。将含水碱性层用冰乙酸(65mL)酸化到pH为5.2并在0℃下搅拌30min。过滤分离的固体和将母液用浓HCl(90mL)酸化和在5℃下搅拌1h。将分离的固体过滤，用冷水(2×50mL)洗涤并在45℃下干燥6h以得到19(1.3g，13％)mp 135-137℃；1HNMR(400Mz，DMSO-d6)δ13.28(br，1H)，9.70(br，1H)，7.32(d，J＝10.4Hz，2H)，6.81(s，1H，重叠的)，6.79(d，J＝9.7Hz，2H)，6.67(d，J＝2.5Hz，2H)，6.64(t，J＝2.5Hz，1H)，和3.73(s，6H)；MS(EI)m/z 299[M]-Z-3-(3，5-二甲氧基苯基)-2-(4-羟苯基)-丙烯酸甲酯(20)。在氩气下，将浓硫酸(10滴)加入到充分干燥19(0.60g，2.0mmol)的搅拌甲醇悬浮液中并在回流下加热18h。在减压下蒸发甲醇，在乙酸乙酯(20mL)中吸收残余物并用水(20mL)，饱和含水NaHCO3(10mL)和盐水(10mL)洗涤残余物。将有机层在无水硫酸镁上干燥，过滤和蒸发溶剂。将获得的粗产物由色谱通过硅胶精制并用己烷-乙酸乙酯(7∶3)洗脱以得到为白色固体的20(0.24g，35％)1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.26(d，J＝8.4Hz，2H)，6.82(s，1H)，6.76(d，J＝8.4Hz，2H)，6.45(d，J＝2.0Hz，2H)，6.34(t，J＝2.0Hz，1H)，4.97(s，1H)，3.73(s，3H)，3.72(s，6H)。
Z-3-(3，5-二甲氧基苯基)-2-[4-(4-甲酰基苯氧基)-苯基]-丙烯酸甲酯(21)。在氩气下，将20(0.60g，1.9mmol)溶于干燥DMF(4mL)中并向此物质中加入氢化钠(在油中的60％，0.09g，2.28mmol)。向获得的橙色溶液中，加入4-氟苯甲醛(0.25mL，2.28mmol)并在80℃下加热18h。将反应混合物冷却到室温，加入水(10mL)以及用乙酸乙酯(3×20mL)萃取混合物。由通过硅胶的色谱精制蒸发之后获得的粗产物并用己烷-乙酸乙酯(4∶1)的混合物洗脱以得到为白色固体的21(0.59g，74％)1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.93(s，1H)，7.86(d，J＝8.8Hz，2H)，7.49(d，J＝8.8Hz，2H)，7.10(重叠的d，J＝8.8Hz，2H)，7.08(重叠的d，J＝8.8Hz，2H)，6.96(s，1H)，6.53(dd，J＝2.8Hz，2H)，6.43(t，J＝2.0Hz，1H)，3.80(s，3H)，3.79(s，6H)。
Z-3-(3，5-二甲氧基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基亚基甲基)-苯氧基]-苯基}-丙烯酸甲酯(22)。向21(0.53g，1.3mmol)的无水甲苯悬浮液(10mL)中，按顺序加入2，4-噻唑烷二酮(0.15g，1.30mmol)，苯甲酸(0.21g，1.69mmol)和哌啶(0.19g，1.95mmol)并在回流温度下加热同时借助于Dean-Stark设备连续脱除水5h。蒸发甲苯以及通过硅胶的色谱精制残余物和用己烷-乙酸乙酯(1∶1)洗脱以得到在NMR分析的基础上比例为7∶1的22和10的混合物1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.53(brs，1H)，7.79(s，1H)，7.65(d，J＝8.8Hz，2H)，7.54(d，J＝8.8Hz，2H)，7.18(重叠的d，J＝8.8Hz，2H)，7.16(重叠的d，J＝8.8Hz，2H)，7.17(重叠的s，1H)，6.57(d，J＝2.0Hz，2H)，6.50(t，J＝2.0Hz，1H)，3.79(s，3H)，和3.75(s，6H)。
Z-3-(3，5-二甲氧基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}-丙烯酸甲酯(23)。向22(0.60g，1.6mmol)的乙酸溶液(15mL)中加入碳载钯(10％，300mg)和甲酸铵(4.3g，55.8mmol)(注意在大规模反应中放热可能成为问题；需要将氧气严格排除)并在120℃下加热20h。通过Celite床过滤催化剂和在减压下蒸发乙酸。将水(50mL)加入到残余物中并过滤分离的固体。使用以15mL每分钟的速率运行的IntersilODS-3介体柱(250×4.6mM，5μn)，由介体HPLC用包含甲酸(0.05％)的甲醇∶乙腈∶水(3∶3∶2)分离纯Z-异构体mp 65-66℃；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.05(br s，1H)，7.48(d，J＝9.2Hz，2H)，7.29(d，J＝8.4Hz，2H)，7.13(s，1H)，7.03(重叠的d，J＝8.8Hz，2H)，7.01(重叠的d，J＝8.4Hz，2H)，6.56(d，J＝2.0Hz，2H)，6.49(t，J＝2.0Hz，1H)，4.90(dd，J＝9.2和4.4Hz，1H)，3.77(s，3H)，3.75(s，6H)，3.38(dd，J＝14.8和4.8Hz，1H)和3.13(dd，J＝14.4和9.2Hz，1H)；MS(EI)m/z 300[M]+.
参考附图，如图1A所示，将化合物11以单次口服剂量(50mg/kg体重)对db/db雄性小鼠给药15天。观察到血糖水平基本上降低。与使用载体而没有活性成分治疗的对照组相比，治疗组中的体重没有增加，图1B。
将化合物以单次口服剂量(50mg/kg体重)对ob/ob小鼠口服给药。如图2A所示，血糖水平下降62％，并且如图2B所示，与db/db小鼠相似，在对照组和治疗组之间没有显著的体重增加。这与由已知与体重的增加有关的噻唑烷二酮类型化合物治疗的糖尿病动物相反。参见Okuno等人，J.Clin.Invest.，101，1354-1361(1998)和Yoshioka等人，Metabolism，42，75-80(1993)。通过在15天之后停止两个模型中的治疗，显示出葡萄糖水平的增加，如图3A和3B所示。在图4中显示药物影响的时间过程。单次剂量化合物在db/db小鼠中的口服给药对24小时及其以上均有效。
还需测量甘油三酯水平。脂肪酸和甘油的酯的甘油三酯，在血浆中不自由地循环而与蛋白质结合并且作为称为脂蛋白质的大分子复合物而被输送。用McGowan等人，Clin Chem 29538-42，1983所描述的带有改型的酶方法测量甘油三酯，以确定db/db和ob/ob小鼠中的甘油三酯水平。其显示出与治疗10天之后的对照组(图6B)相比，在使用化合物治疗15天之后db/db小鼠中甘油三酯水平下降24％(图5A)以及在ob/ob小鼠中，甘油三酯降低65％。
在脂酰辅酶A合酶(Wako Chemicals USA)存在下，使用辅酶A来酶测量游离脂肪酸(FFA)。与对照动物相比，使用化合物治疗的db/db和ob/ob小鼠中的游离脂肪酸水平明显更低。用化合物治疗15天之后显示的db/db小鼠中FFA水平下降34％(图5B)。在治疗10天之后，与对照组相比，ob/ob小鼠中FFA降低33％(图6C)。
血液中糖血红蛋白(GHb)的百分比反映平均血糖浓度。其是总体糖尿病控制的量度并可用于监测平均血糖水平。在红细胞中连续发生血红蛋白的糖基化。但由于反应是非酶且不可逆的，细胞中糖血红蛋白的浓度反映出在其生命期间通过细胞看到的平均血糖水平。使用带有硼酸盐的亲合色谱进行测定，如由Abraham等人，J.Lab.Clin.Med.，102，187(1983)所述。与对照组相比，用化合物治疗15天之后的db/db小鼠(图5C)中存在的GHb水平下降0.7％且治疗14天之后的ob/ob小鼠中存在的GHb水平降低1.3％(图6D)。由ELISA遵循标准过程测量血液胰岛素水平。用化合物治疗10天之后显示ob/ob小鼠中血清胰岛素下降58％(图6A)，因此，说明其具有用作胰岛素敏化剂的能力。
肥胖被认为是各种成人疾病如糖尿病和心脏病的明显关键的因素。从对ob/ob小鼠的研究识别来普汀(肥胖基因产品)，其中由于该基因中的变异而缺乏来普汀(Zhiang等人，Nature，372，425(1994)。来普汀是约16kDa的蛋白质，其在脂肪组织中表达，并且通过抑制食欲和刺激代谢作用而促进体重减轻。目前值得相信的是来普汀在肥胖症综合征中起关键作用。在根据实验的db/db小鼠中，由ELISA，遵循标准过程测量来普汀水平。用化合物治疗15天之后，与对照组相比，在血清来普汀水平中存有23°/a的增加(图5D)。
在用试验化合物治疗(口服，50mg/kg)21天之后，测定ob/ob小鼠血清中的肝酶谷氨酸草酰乙酸转氨酶/天冬氨酸氨基转移酶(AST/GOT)和谷氨酸丙酮酸转移酶/丙氨酸氨基转移酶(ALT/GPT)。也使用曲格列酮进行试验。发现在几种肝病症或肝坏死中这些酶的水平有所升高。在图7A中，与未治疗的小鼠或与使用曲格列酮治疗的小鼠相比，小鼠中的AST水平未升高。相似地，图7B显示与未治疗的小鼠或与使用曲格列酮治疗的小鼠相比，ALT水平未升高。
参考图8在3T3-L1中的葡萄糖摄取，在使用试验化合物的治疗之后，测量分化的脂肪细胞。根据Tafuri，Endocrinology，137，4706-4712(1996)的方法进行测定。将血清饥饿的细胞使用试验化合物在不同浓度下治疗48小时，然后在37℃，没有葡萄糖介质的情况下洗涤和孵育30分钟，然后加入14C-脱氧葡萄糖和在孵育下监测摄取30分钟。在洗涤之后，将细胞溶解(0.1％SIDS)和计数。如图8所示，在试验化合物的指示浓度下，存有的葡萄糖摄取增加为基底水平的3.5到4倍。
参考图9，在37℃下的包含10％FBS的RPMI-1640中，使用化合物11或罗西格列酮(0.1，1，10，50或100pM)将RAW细胞预孵育1小时。在1小时之后，加入LIPS(0.1pg/ml)并孵育细胞另外6小时。然后收集，整分和在-70℃下冷冻细胞上清液，并且将等分试样用于ELISA测定TNF-α浓度。化合物11是比罗西格列酮更好的TNF-α抑制剂。
参考图10，在37℃的包含10％FBS的RPMI-1640中，使用化合物11或罗西格列酮(0.1，1，10，50或100pM)将RAW细胞预孵育1小时。在1小时之后，加入LIPS(0.1pg/ml)和孵育细胞另外6小时。然后收集，整分和在-70℃下冷冻细胞上清液，并将等分试样用于ELISA测定IL-6浓度。化合物11是比罗西格列酮更好的IL-6抑制剂。
参考图11，在37℃的包含10％FBS的RPMI-1640中，使用化合物11或罗西格列酮(0.1，1，10，50或100pM)将RAW细胞预孵育1小时。在1小时之后，加入LIPS(0.1pg/ml)和孵育细胞另外6小时。然后收集，整分和在-70℃下冷冻细胞上清液，和将等分试样用于ELISA测定IL-1b浓度。化合物11比罗西格列酮更好地抑制IL-1b。
参考图12A和12B，在37℃的包含10％FBS的RPMI-1640中，使用化合物11或罗西格列酮(0.1，1，10，50或100pM)将RAW细胞预孵育1小时。在1小时之后，加入LIPS(0.1pg/ml)并且孵育细胞另外6小时。然后收集，整分和在-70℃下冷冻细胞上清液，并将等分试样用于ELISA测定COX-2和COX-1活性。化合物11，而非罗西格列酮，抑制COX-2的活性(如通过对50ml样品中PGE2产生的测量)。没有一种化合物抑制COX-1活性。
由于转录因子NF-kB与致炎细胞因子应答中许多基因的活化进行协调，因此其在炎性疾病的发展中起关键作用。由抑制性蛋白质IkB的磷酸化作用活化NF-kB。为检验化合物11对LPS-刺激的IkB磷酸化作用的影响，将RAW 264.7与仅载体，作为正控制的15-脱氧-Δ12，14-前列腺素J2(15dPGJ2)(3pM)，化合物11(3，10或30pM)，或罗西格列酮(3，10或30mM)在37℃下预孵育1hr。然后在37℃下，使用或不用LPS(10mg/mL)加IFN-γ(10U/mL)治疗细胞5min或15min。随后溶解细胞，并且在4-20％聚丙烯酰胺凝胶上通过电泳分离细胞溶解产物(27mg/泳道)，将其吸到硝基纤维素膜上并且使用抗磷酸基IkB抗体探针。结果揭示化合物11，并非罗西格列酮显示出IkB磷酸化作用的剂量依赖性抑制。
为进一步确认化合物11抑制NF-kB活化的能力，测量LPS刺激的细胞中游离p65(活化的)NF-kB的产生。在37℃下的5×105/孔的6-孔板上，在10％FBS完全培养基中播种RAW细胞。将细胞用0.5％FBS培养基洗涤2次且然后在37℃下，用10mM的化合物11，罗西格列酮，或15dPGJ2预处理1hr。预处理之后，在37℃下，将细胞用0.5％FBS培养基孵育或用1pg/ml LPS刺激15min。在用冷PBS洗涤3次之后，溶解细胞以产生全细胞溶解产物。测定蛋白质浓度且通过使用商业ELISA试剂盒，将全细胞溶解产物的5mg蛋白质用于测定每种样品的NF-kB p65活性(Active Motif，Carlsbad，CA)。在此ELISA中，用包含NF-kB交感结合部位的寡核苷酸涂敷微孔板。在加入细胞溶解产物之后，使用抗-p65抗体检测DNA-结合的转录因子。测定每个样品的两个孔和确定每个样品两个ELISA读数的平均值。通过随后向每个孔中加入的20pmol野生型交感寡核苷酸检查结合的特异性。
如图15所示，化合物11和15dPGJ2都抑制NF-kB的活化。通过对比，罗西格列酮，PPAR-γ的强激动剂，并不抑制p65转录因子的产生。
图13A-D说明由化合物11治疗的胶原诱导关节炎的抑制。在准备DBA/1Lac小鼠的完全佐剂中由胶原的皮内给药(100mg/小鼠)7周诱导关节炎。在第21天，用在不完全佐剂中加强剂量(100mg/小鼠)对小鼠进行皮下供给免疫。两天以后，当关节炎评分约为1时，将动物分成两组。一组每日口服50mg/kg剂量化合物1117天。第二组接收10％PEG水溶液和用作载体治疗组。在药物给药24小时之后，在不同的时间间隔下监测体重(图13A)，临床评分(图13B)，受影响的关节(图13C)和手掌厚度(图13D)。如图所示，当与载体治疗组相比时，由化合物11治疗的小鼠显示出明显更低的临床评分，受影响的关节和手掌厚度。在载体和治疗组之间没有体重的变化。
实验性变应性脑脊髓炎(EAE)是中枢神经系统的自身免疫脱髓鞘炎性疾病。EAE显示人类多发性硬化症(MS)的许多临床和病理学表现，并用作MS试验潜在治疗剂的动物模型(Scolding等人，Prog Neurobiol，43143-73，2000)。图14说明化合物11的EAE抑制。基本上根据Owens和Sriram的方法诱导SJL-/J小鼠体内的活性EAE(Neurol Clin，1351-73，1995)。在第0和第7天，用弗罗因德(Freund’s)完全佐剂中的400pg每种鼠脊髓匀浆对幼小鼠进行皮下免疫。然后用50μg或200μg化合物11或仅用载体的每天皮下注射对小鼠进行治疗。根据指示的数字等级对麻痹评级。如图14中所示的临床评分剧烈降低所证明的那样，使用200mg剂量化合物11的治疗在改进EAE中高度有效。从以上内容显然出，如由化合物11表示的根据本发明的化合物，不仅仅降低血糖水平，甘油三酯水平，游离脂肪酸水平，糖血红蛋白和血清胰岛素，而且在升高来普汀水平的同时不显示体重或肝毒性的增加。化合物还体外抑制TNF-α，IL-6，IL-1-β的产生和COX-2的活性，并且如由图13A-13D和14所示，化合物可分别用于抑制关节炎以及潜在治疗多发性硬化症。以上展示的性能说明本发明化合物应该用于治疗与胰岛素耐受性有关的病症，高脂血症，冠心病和周围血管疾病和用于治疗炎症，炎性疾病，免疫性疾病和癌症，特别地是由细胞因子和环氧合酶介导的那些疾病。
尽管参考以上化合物11的制备和用途例示本发明，理解本发明具有与由通式1表示的化合物范围一致的更广泛的应用。这包括，例如，化合物10，其不仅仅用作制备所示的化合物11的中间体，而且展示其自身与化合物11活性一致的有用生物活性。
由如下实施例说明代表本发明范围的其它化合物的合成。
实施例23-(3，5-二甲氧基苯基)-2-{4-14-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基}}}苯基}-丙烯酰胺(24)可以由如下结构式表示的化合物24 以下从化合物14制备化合物24。向具有搅拌棒的清洁干燥烧瓶中加入化合物14(0.423g，0.837mmol)和干燥的DMF(10mL)。然后随着搅拌，加入羰二咪唑(0.271g，1.67mmol)和在通过油起泡器排放的同时，将反应加热1h到60℃。然后将反应混合物冷却到0℃并加入甲醇中的2M氨(2.1mL，4.2mmol)。通过使用10％柠檬酸(10mL)，乙酸乙酯(50mL)，和水(40mL)分隔混合物来对反应进行加工。然后按顺序用水(2×30mL)，盐水(1×20mL)清洗有机相并用无水MgSO4干燥。有机物的浓缩提供粗产物。通过使用包含1％乙酸的乙酸乙酯-己烷(1∶1)到包含1％乙酸的乙酸乙酯-己烷(3∶2)梯度洗脱由硅胶色谱精制粗产物。浓缩适当的成分得到200mg(47％)为固体的白色-淡黄色伯酰胺。分析1H NMR，400MHz(DMSO-d6)δ12.06(br，1H)，7.40(s，1H)，7.34(br，1H)，7.27(d，J＝8.4Hz，2H)，7.18(d，J＝8.8Hz，2H)，7.05(d，J＝9.2Hz，2H)，6.98(d，J＝8.4Hz，2H)，6.93(br，1H)，6.36(m，1H)，6.20(s，1H)，6.19(s，1H)，4.91(dd，J＝4.0Hz，1H)，3.57(s，6H)，3.12(dd，J＝9.2Hz，1H)。
实施例33-(3，5-二甲氧基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5基甲基)-苯氧基]-苯基}-N，N-二甲基丙烯酰胺(25)由如下结构式表示的化合物25 制备如下向具有搅拌棒的清洁干燥烧瓶中加入化合物14(0.422g，0.835mmol)和干燥的DMF(1mL)。然后随着搅拌，加入羰二咪唑(0.271g，1.67mmol)和在通过油起泡器排放的同时，将反应加热1h到60℃。然后将反应混合物冷却到0℃并加入THF中的2M二甲胺(2.1mL，4.2mmol)溶液。通过使用10％柠檬酸(10mL)，乙酸乙酯(50mL)，和水(40mL)分隔混合物来对反应进行加工。然后按顺序用水(2×30mL)，盐水(1×20mL)清洗有机相并用无水MgSO4干燥。有机物的浓缩提供粗产物。通过使用包含1％乙酸的乙酸乙酯-己烷(1∶1)洗脱由硅胶色谱精制粗产物。成分的浓缩得到381mg(86％)为固体的淡白色叔二甲基酰胺。分析1H NMR，400MHz(DMSO-d6)δ11.97(br，1H)，7.29(d，J＝8.8Hz，2H)，7.27(d，J＝8Hz，2H)，6.99(d，J＝8.8Hz)，6.95(d，J＝8.8Hz，2H)，6.57(s，1H)，6.35(m，1H)，6.29(s，1H)，6.28(s，1H)，4.91(dd，J＝4.4Hz，1H)，3.58(s，6H)，3.12(dd，J＝9.2Hz，1H)，3.05(br，3H)，2.91(s，3H)。
实施例43-(3，5-二甲氧基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}-N-甲氧基，-N-甲基丙烯酰胺(化合物26)结构可以如下所示的化合物 制备如下向具有搅拌棒的清洁干燥烧瓶中加入化合物14(0.450g，0.890mmol)和干燥的DMF(1mL)。然后随着搅拌，加入羰二咪唑(0.29g，1.78mmol)和在通过油起泡器排放的同时，将反应加热1h到60℃。然后将反应混合物冷却到0℃并加入N-甲基-N-甲氧基羟基胺盐酸盐(0.434g，4.45mmol)以及加入三乙胺(0.62mL)并搅拌过夜。通过使用10％柠檬酸(10mL)，乙酸乙酯(50mL)，和水(40mL)分隔混合物来对反应进行加工。然后按顺序用水(2×30mL)，盐水(1×20mL)清洗有机相并用无水硫酸镁干燥。有机物的浓缩提供粗产物。通过使用乙酸乙酯-氯仿(1∶5)洗脱由硅胶色谱精制粗产物。成分的浓缩得到400mg(82％)为固体的淡白色叔N-甲基-N-甲氧基酰胺。分析1H NMR，400MHz(DMSO-d6)δ12.06(br，1H)，7.27(d，J＝9.2Hz，2H)，7.26(d，J＝8.8Hz，2H)，7.00(d，J＝8.8Hz)，6.95(d，J＝8.4Hz，2H)，6.57(s，1H)，6.35(m，1H)，6.29(s，1H)，6.28(s，1H)，4.91(dd，J＝4.4Hz，1H)，3.58(s，6H)，3.12(dd，J＝9.2Hz，1H)，3.05(br，3H)，2.91(s，3H)。
实施例5在方案6中说明此实施例所示的合成。
2-(4-乙酰氧基苯基)-3-对甲苯基丙烯酸(37)。向(4-羟苯基)乙酸(18.3g，120.3mmol)和4-甲基苯甲醛{12.0g，100mmol}的250mL乙酸酐溶液的混合物中加入碳酸钾(11.9g，121.2mmol)。在将其冷却到室温之前将反应混合物在80℃下搅拌16h。向混合物中加入100mLH2O，使pH为1的5％HCl水溶液和200mL乙酸乙酯。然后将混合物加热到80℃直到蒸发所有的乙酸乙酯。将沉淀物过滤并用水和己烷洗涤。将滤饼从甲苯中再结晶，过滤，用己烷洗涤和在真空下干燥以得到淡黄色粉末(20.16g，68.1％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.62(br s，1H)，7.74(s，1H)，7.19(d，J＝8.8Hz，2H)，7.13(d，J＝8.8Hz，2H)，7.01(d，J＝8.0Hz，2H)，6.94(d，J＝8.4Hz，2H)，2.29(s，3H)，2.23(s，3H).
2-(4-羟苯基)-3-对甲苯基丙烯酸(38)。向化合物37(20.16g，68.1mmol)的100mL THF溶液中加入100mL氢氧化锂(5.7g，237.5mmol)水溶液。在室温下搅拌反应16h，其后加入5％HCl水溶液至pH为1。将黄色固体过滤和从甲苯中再结晶，用己烷洗涤和在真空下干燥以得到白色固体(14.27g，82.5％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.46(br s，1H)，9.47(br s，1H)，7.63(s，1H)，7.02(d，J＝8.0Hz，2H)，6.97(d，J＝8.4Hz，2H)，6.93(d，J＝8.4Hz，2H)，6.74(d，J＝8.8Hz，2H)，2.22(s，3H)。
2-[4-(4-甲酰基苯氧基)-苯基]-3-对甲苯基丙烯酸(39)。向38(7.27g，28.6mmol)和碳酸钾(8.68g，62.9mmol)的200mL N，N-二甲基乙酰胺溶液中加入4-氟苯甲醛(3.9mL，36.4mmol)。在氩气下，将反应混合物加热1.5h到190℃，然后冷却到室温。加入5％HCl水溶液到pH为1以使产物分离出来，如油。将大约50mL乙酸乙酯加入到混合物中，搅拌该混合物16h。将固体收集和从甲苯中再结晶，用己烷清洗和在真空下干燥以得到黄色粉末(8.1g，79.0％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.71(s，1H)，9.94(s，1H)，7.97(d，J＝8.8Hz，2H)，7.76(s，1H)，7.25(d，J＝8.4Hz，2H)，7.18(d，J＝6.8Hz，2H)，7.16(d，J＝6.4Hz，2H)，7.07(d，J＝8.0Hz，2H)，6.98(d，J＝8.4Hz，2H)，2.25(s，3H)。
2-{4-[4-(2，4--二氧代噻唑烷-5-亚基甲基)-苯氧基]-苯基}-3-对甲苯基丙烯酸(40)。向39(4.0g，11.2mmol)，噻唑烷-2，4-二酮(1.31g，11.2mmol)，和苯甲酸(1.64g，13.4mmol)的100mL甲苯溶液中加入哌啶(1.66mL，16.8mmol)。在氩气下将混合物用Dean Stark设备在回流中剧烈回流1.5h然后冷却到室温。加入5％HCl到pH为1。将固体过滤，从甲苯中再结晶，过滤，和在真空下干燥之前用己烷洗涤以得到黄色固体(定量的)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.70(br s，1H)，12.59(br s，1H)，7.80(s，1H)，7.75(s，1H)，7.67(d，J＝8.8Hz，2H)，7.22(d，J＝9.2Hz，2H)，7.18(d，J＝7.6Hz，2H)，7.12(d，J＝9.2Hz，2H)，7.07(d，J＝8.0Hz，2H)，6.99(d，J＝8.0Hz，2H)，2.25(s，3H)。
2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}-3-对甲苯基丙烯酸(41)。向40(1.0g，2.2mmol)和甲酸铵(8.32g，132mmol)的25mL冰乙酸溶液中加入5％Pd/C(1.0g)。将混合物回流7.5h，冷却到室温并通过Celite过滤。在真空中浓缩混合物，然后加入到200mL水中。将产物过滤和用己烷洗涤。将固体从甲苯中再结晶，冷却到室温并超声处理直到观察到固体。然后在室温下搅拌混合物16h。收集沉淀物并用己烷洗涤以得到白色固体(0.609g，59.1％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.65(s，1H)，12.05(br s，1H)，7.72(s，1H)，7.30(d，J＝8.8Hz，2H)，7.16(d，J＝8.4Hz，2H)，7.05(d，J＝8.4Hz，2H)，7.01(d，J＝8.4Hz，2H)，6.99(d，J＝9.2Hz，2H)，6.98(d，J＝8.0Hz，2H)，4.92(dd，J＝4.4和9.6Hz，1H)，3.38(dd，J＝4.4和14.0Hz，1H)，3.21(dd，J＝9.2和14.0Hz，1H)，2.24(s，H)。
2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}-3-对甲苯基丙烯酸甲酯(42)。向41(0.1g，0.218mmol)和BOP[Castro′s Reagent，苯并三唑-1-基-氧-三-(二甲基氨基)-磷鎓六氟磷酸盐](0.144g，0.326mmol)的5mL二氯甲烷混合物中加入三乙胺(0.067mL，0.477mmol)。将混合物搅拌1h，然后将甲醇钠(甲醇中的0.5M溶液，0.07mL，0.035mmol)与5mL MeOH一起加入。在室温下搅拌反应16h。将5％HCl加入到pH为0和用25mL二氯甲烷萃取混合物三次。用盐水洗涤，通过MgSO4干燥，过滤和浓缩结合的有机层。将残余物作为在二氯甲烷中的溶液装载到硅胶柱上。用己烷-乙酸乙酯(3∶2)洗脱产物。在真空中浓缩成分至白色固体(0.037g，36.4％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.05(br s，1H)，7.75(s，1H)，7.30(d，J＝8.8Hz，2H)，7.18(d，J＝8.8Hz，2H)，7.06(d，J＝8.0Hz，2H)，7.02(d，J＝8.8Hz，2H)，6.99(d，J＝8.8Hz，2H)，6.98(d，J＝8.0Hz，2H)，4.91(dd，J＝4.8和9.6Hz，1H)，3.72(s，3H)，3.39(dd，J＝4.0和13.6Hz，1H)，3.13(dd，J＝9.2和14.0Hz，1H)，2.25(s，3H)。
实施例6在方案7中说明此实施例所示的合成。
3，5-二甲基苯甲醛(43)。向3，5-二甲基苯甲酸(7.51g，50mmol)和三乙胺(21mL，150mmol)的二氯甲烷(200mL)混合物中加入BOP药剂(22.11g，50mmol)。将溶液在室温下搅拌20min，然后加入N，O-二甲基羟基胺盐酸盐(5.0g，50mmol)。在另外10min之后，加入三乙胺(7mL，50mmol)并将混合物搅拌另外0.5h。在真空中除去溶剂并将混合物再溶于乙酸乙酯(300mL)，用1N HCl(200mL)，1N NaOH(200mL)，水，盐水洗涤然后干燥(MgSO4)，过滤和在真空中浓缩以得到无色糖浆(6.25g)。将此材料溶于THF(250mL)和在氩气气氛下冷却到0℃。在5min内将DIBAL[氢化二异丁基铝](THF中的1M，50mL)的溶液加入到搅拌溶液中。在20min的搅拌之后，加入另外的DIBAL(20mL)。在另外15min之后，用另外的1N HCl(300mL)骤冷反应并将产物在乙酸乙酯(300mL)中萃取，用水(2×200mL)，盐水(200mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和在真空中浓缩以得到43(4.97g，74％总体)。
3-(3，5-二甲基苯基)-2-(4-羟苯基)-丙烯酸(44)。向43(3.23g，24mmol)，4-羟苯基乙酸(3.66g，24mmol)和乙酸钾(2.83g，28mmol)的混合物中加入乙酸酐(100mL)。加热4h混合物至回流，冷却至室温，然后倾入水(400mL)中。在搅拌1.5h之后，固体胶沉降到底部和滗析上清液。向残余物中加入THF(100mL)和1N NaOH(150mL)并将混合物搅拌30min。用1N HCl(200mL)酸化混合物和将产物在乙酸乙酯(300mL)中萃取，用水(300mL)，盐水(300mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和在真空中浓缩。在甲苯中结晶粗固体以得到2.65g(42％)淡黄色固体44。
3-(3，5-二甲基苯基)-2-[4-(4-甲酰基苯氧基)-苯基]-丙烯酸(45)。向44(2.65g，10mmol)的DMF溶液(20mL)中加入氢化钠(在矿物油中的60％分散体，0.88g，22mmol)。在气体释放停止之后，加入4-氟苯甲醛(1.60g，15mmol)并搅拌反应16h。将混合物倾入10％柠檬酸(100mL)中，其后形成亮黄色固体。用水洗涤固体和然后从甲苯中共沸和再结晶湿固体以得到2.97g(80％)黄色固体45。
3-(3，5-二甲基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基亚基甲基)-苯氧基]-苯基}-丙烯酸(46)。在装配Dean-Stark设备的100mL圆底烧瓶中，在剧烈回流下，将45(1.55g，4.2mmol)，2，4-噻唑烷二酮(0.5g，4.2mmol)，苯甲酸(0.62g，5.0mmol)和哌啶(0.62mL，6.3mmol)的混合物在甲苯(60mL)中共混45min。冷却反应混合物，然后倾入10％柠檬酸(40mL)中并搅拌直到形成亮黄色固体。将固体过滤并用水洗涤和从甲苯中共沸和再结晶湿固体以得到1.83g(93％)的46。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.72(br s，1H)，12.57(br s，1H)，7.77(s，1H)，7.70(s，1H)，7.63(d，J＝8.8Hz，2H)，7.22(d，J＝8.4Hz，2H)，7.14(d，J＝8.4Hz，2H)，7.12(d，J＝8.8Hz，2H)，6.92(s，1H)，6.69(s，2H)，2.16(s，6H)。
3-(3，5-二甲基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}-丙烯酸(47)。将46(1.83g，3.9mmol)，甲酸铵(4.90g，78mmol)和10％氧化铝载Pd(2.0g)的混合物回流15h。冷却反应混合物至室温并滤出催化剂。加入水来分离产物和过滤固体。从甲苯中共混和再结晶湿固体以得到0.81g(44％)5。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.68(br s，1H)，12.05(br s，1H)，7.68(s，1H)，7.27(d，J＝8.8Hz，2H)，7.16(d，J＝8.4Hz，2H)，7.02(d，J＝8.4Hz，2H)，6.96(d，J＝8.8Hz，2H)，6.90(s，1H)，6.62(s，2H)，4.92(dd，J＝8.8和4.4Hz，1H)，3.37(dd，J＝14.0和4.4Hz，1H)，3.12(dd，J＝14.0和8.8Hz，1H)，2.12(s，6H)。
3-(3，5-二甲基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}-丙烯酸苯并三唑-1-基酯(48)。向47(0.81g，1.7mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.33mL，1.9mmol)的二氯甲烷(20mL)混合物中加入BOP药剂(0.76g，1.7mmol)。在室温下搅拌45min之后，将混合物用乙酸乙酯(150mL)稀释然后用1N HCl(100mL)，水(100mL)，盐水(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和在真空中浓缩。通过使用己烷∶乙酸乙酯(3∶2)由快速色谱精制粗产物。将在浓缩之后获得的固体进一步用己烷∶乙酸乙酯(4∶1)研制以得到0.75g(76％)48。
3-(3，5-二甲基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}-丙烯酸甲酯(49)。向48(240mg，0.4mmol)的甲醇溶液(10mL)中加入甲醇钠(在甲醇中的0.5N，2mL)。在10min之后用1N HCl(2mL)稀释混合物并将产物在乙酸乙酯(50mL)中萃取，用水(100mL)，盐水(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和在真空中浓缩。使用己烷∶乙酸乙酯(3∶2)由快速色谱精制粗材料以得到为白色泡沫的49(122mg，62％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.10(br s，1H)，7.71(s，1H)，7.28(d，J＝8.8Hz，2H)，7.18(d，J＝8.8Hz，2H)，7.03(d，J＝8.8Hz，2H)，6.97(d，J＝8.8Hz，2H)，6.92(s，1H)，6.68(s，2H)，4.91(dd，J＝8.8和4.4Hz，1H)，3.73(s，3H)，3.37(dd，J＝14.0和4.4Hz，1H)，3.12(dd，J＝14.0和8.8Hz，1H)，2.12(s，6H)。
5-(4-{4-[2-(3，5-二甲基苯基)-1-(吗啉-4-羰基)-乙烯基]-苯氧基}-苄基)-噻唑烷-2，4-二酮(50)。在室温下，向48(116mg，0.2mmol)的二氯甲烷悬浮液(5mL)中加入吗啉(87mL，1mmol)。溶液变清晰。在10min之后，用10％柠檬酸(4mL)处理混合物。将二氯甲烷层干燥(MgSO4)并直接装载到柱子上，用己烷∶乙酸乙酯(2∶3)洗脱柱子以得到为白色泡沫的50(104mg，86％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.10(br s，1H)，7.27(d，J＝8.8Hz，2H)，7.26(d，J＝8.8Hz，2H)，6.98(d，J＝8.8Hz，2H)，6.96(d，J＝8.8Hz，2H)，6.85(s，1H)，6.72(s，2H)，6.61(s，1H)，4.91(dd，J＝8.8和4.4Hz，1H)，3.59(bs，8H)，3.37(dd，J＝14.0和4.4Hz，1H)，3.12(dd，J＝14.0和8.8Hz，1H)，2.13(s，6H)。
实施例75-(4-{4-[2-(4-甲氧基苯基)-乙烯基]-苯氧基}-苄基)-噻唑烷-2，4-二酮(54)的合成(参见方案8)5-(4-羟基亚苄基)-噻唑烷-2，4-二酮(51)。向4-羟基苯甲醛(3.67g，30mmol)，2，4-噻唑烷二酮(3.51g，30mmol)和苯甲酸(4.40g，36mmol)的甲苯(100mL)混合物中加入哌啶(4.5mL，45mmol)并将混合物装入DeanStark设备并引入剧烈回流。在45min之后将混合物在冰浴中冷却及滗析上清液。通过加入冰乙酸(100mL)将亮黄色固体变为悬浮液并通过布氏漏斗过滤以得到淡黄色固体(6.00g，90％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.45(bs，1H)，10.30(s，1H)，7.70(s，1H)，7.45(d，J＝8.8Hz，2H)，6.91(d，J＝8.8Hz，2H)。
5-(4-羟基苄基)-噻唑烷-2，4-二酮(52)。向51(6.00g，27mmol)的冰乙酸悬浮液(100mL)中加入甲酸铵(6.27g，100mmol)和10％碳载Pd(5.80g)并将混合物加热16h至剧烈回流。将混合物冷却至室温，然后通过Celite过滤。在真空中除去大多数乙酸，然后将粗产物溶于乙酸乙酯(250mL)，用水(2×250mL)洗涤，然后用盐水(250mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)，过滤和在真空中浓缩以得到米色固体(5.35g，85％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.98(bs，1H)，9.32(s，1H)，7.02(d，J＝8.4Hz，2H)，6.68(d，J＝8.4Hz，2H)，4.82(dd，J＝8.4和4.0Hz，1H)，3.25(dd，J＝14.4和4.4Hz，1H)，2.99(dd，J＝14.0和9.2Hz，1H)。
4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯甲醛(53)。向52(5.35g，24mmol)的DMF溶液(150mL)中加入4-氟苯甲醛(3.00g，24mmol)和Cs2CO3(20g，62mmol)并加热混合物2h到100℃。将混合物倾入剧烈搅拌的10％柠檬酸(200mL)和乙酸乙酯(200mL)中。将有机层用水(300mL)，盐水(300mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和在真空中浓缩。在己烷-乙酸乙酯(2∶1)中研制粗产物以得到白色固体(5.15g，65％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.07(bs，1H)，9.92(s，1H)，7.92(d，J＝8.8Hz，2H)，7.35(d，J＝8.4Hz，2H)，7.12(d，J＝8.4Hz，2H)，7.09(d，J＝8.4Hz，2H)4.94(dd，J＝8.4和4.4Hz，1H)，3.41(dd，J＝14.4和4.4Hz，1H)，3.17(dd，J＝14.4和9.2Hz，1H)。
5-(4-{4-[2-(4-甲氧基苯基)-乙烯基]-苯氧基}-苄基)-噻唑烷-2，4-二酮(54)。在0℃下，向氯化4-甲氧基苄基三苯基磷鎓(419mg，1.0mmol)的THF悬浮液(10mL)中，加入固体叔丁醇钾(224mg，2.0mmol)。将获得的橙-红色溶液在0℃下搅拌15min，然后冷却到-45℃。加入固体化合物53(327mg，1.0mmol)并将反应混合物在此温度下搅拌30min。向此淡黄色溶液中加入冰乙酸(60pL，1mmol)和在真空中除去溶剂。在二氯甲烷中悬浮粗产物，使其吸附到硅胶上和使用己烷-乙酸乙酯(7∶3)由快速色谱精制，以在高真空干燥之后得到白色固体(143mg，33％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.04(bs，1H)，7.27(d，J＝8.0Hz，2H)，7.24(d，J＝8.4Hz，2H)，7.18(d，J＝8.4Hz，2H)，6.97(d，J＝8.4Hz，2H)，6.88(d，J＝8.8Hz，2H)，6.84(d，J＝8.8Hz，2H)，6.53(d，J＝12.4Hz，2H)，6.48(d，J＝12.0Hz，2H)，4.90(dd，J＝9.2和4.4Hz，1H)，3.36(dd，J＝14.0和4.4Hz，1H)，3.11(dd，J＝14.0和8.8Hz，1H).
实施例8 5-(4-{4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)-乙烯基]-苯氧基}-苄基)-噻唑烷-2，4-二酮(55)。在0℃下，向溴化3，5-二甲氧基苄基三苯基磷鎓(0.82g，2.0mmol)的THF悬浮液(10mL)中加入固体叔丁醇钾(224mg，2.0mmol)。将获得的红色溶液在0℃下搅拌15min然后冷却到-78℃。加入固体53(0.3mg，0.90mmol)并使反应升温到室温。在30min之后加入10％柠檬酸(50mL)并将混合物在水(50mL)和乙酸乙酯(75mL)之间分配。将有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤然后干燥(MgSO4)，过滤和在真空中浓缩。使用己烷-乙酸乙酯(7∶3)由快速色谱精制粗产物，以在高真空下浓缩和干燥之后得到为轻微不透明膜的55(25mg，6％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.04(b s，1H)，7.26(d，J＝8.8Hz，2H)，7.25(d，J＝8.8Hz，2H)，6.93(d，J＝8.4Hz，2H)，6.91(d，J＝8.4Hz，2H)，6.61(d，J＝12.4Hz，1H)，6.53(d，J＝12.0Hz，1H)，6.39(d，J＝2.4Hz，1H)，6.36(t，J＝2.4Hz，1H)，4.90(dd，J＝9.2和4.4Hz，1H)，3.62(s，6H)，3.36(dd，J＝14.0和4.4Hz，1H)，3.11(dd，J＝14.4，8.8Hz，1H)。
实施例9在方案9中说明此实施例所示的合成。
4′-甲氧基联苯-3-醇(56)。向3-羟苯基硼酸(1.00g，7.3mmol)的2M含水K2CO3溶液(4mL)中加入4-碘苯甲醚(1.70g，7.3mmol)在丙酮(4mL)中的溶液。按顺序加入水(60mL)和丙酮(30mL)以获得均匀混合物。加入催化Pd(OAc)2(160mg，0.73mmol)和在室温下搅拌混合物10min。在真空中从暗棕色溶液除去丙酮和用1N HCl(20mL)酸化以及乙酸乙酯(75mL)萃取获得的含水混合物。将有机层用水(50mL)，盐水(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和在真空中浓缩。在二氯甲烷中悬浮粗产物并使其吸附到硅胶和使用己烷-乙酸乙酯(3∶1)由快速色谱精制以在溶剂脱除之后得到为白色固体的1.20g(82％)56。
4-(4′-甲氧基联苯-3-基氧基)-苯甲醛(57)。向56(1.20g，6.0mmol)和4-氟苯甲醛(745mg，6.0mmol)的DMF溶液(25mL)中加入碳酸铯(3.90g，12.0mmol)。在100℃下搅拌1h之后，将产物在乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)之间分配。将有机层用水(100mL)，盐水(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和在真空中浓缩。将粗产物溶于二氯甲烷并使其吸附到硅胶上和使用己烷-乙酸乙酯(6∶1)由快速色谱精制，以在溶剂脱除之后得到为白色固体的57(1.23g，67％)。
5-[4-(4′-甲氧基联苯-3-基氧基)-亚苄基]-噻唑烷-2，4-二酮(58)。将57(1.23g，4.0mmol)，2，4-噻唑烷二酮(0.48g，4.0mmol)，苯甲酸(0.60g，4.8mmol)和哌啶(0.61mL，6.0mmol)的甲苯(30mL)混合物加热至剧烈回流直到蒸发大多数溶剂。通过加入乙酸(25mL)，随后的超声处理得到黄色悬浮液。过滤悬浮液，随后用乙酸(10mL)洗涤，在过滤和烘箱干燥之后得到58(1.25g，75％)。1H MR(400MHz，DMSO-d6)δ12.57(br s，1H)，7.78(s，1H)，7.63(d，J＝8.8Hz，2H)，7.62(d，J＝8.8Hz，2H)，7.49(d，J＝5.2Hz，2H)，7.36(t，J＝1.6Hz，1H)，7.16(d，J＝8.8Hz，2H)，7.03(m，1H)，7.01(d，J＝8.8Hz，2H)，3.7(s，3H)。
5-[4-(4′-甲氧基联苯-3-基氧基)-苄基]-噻唑烷-2，4-二酮(59)。向58(1.25g，3.0mmol)的乙酸悬浮液(30mL)中加入甲酸铵(1.50g，24mmol)和10％碳载Pd(1.30g)。在剧烈回流16h之后，将混合物通过赛力特过滤，随后用乙酸乙酯(100mL)洗涤。将混合物用水(2×75mL)，1NNaHCO3(50mL)，盐水(75mL)洗涤然后干燥(MgSO4)，过滤和在真空中浓缩。将粗产物溶于二氯甲烷，使其吸附到硅胶上和使用己烷∶乙酸乙酯(3∶7)由快速色谱精制，以在用己烷-乙酸乙酯(4∶1)浓缩、研制和过滤之后得到白色固体(0.48g，38％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.04(br s，1H)，7.58(d，J＝8.8Hz，2H)，7.43(t，J＝7.6Hz，1H)，7.39(dt，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.27(d，J＝8.8Hz，2H)，7.22(t，J＝2.0Hz，1H)，7.01(d，J＝8.8Hz，2H)，7.00(d，J＝9.2Hz，2H)，4.91(dd，J＝8.8和4.4Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.37(dd，J＝14.4和4.4Hz，1H)，3.13(dd，J＝14.4和8.8Hz，1H)。
实施例10 5-[4-(3′，5′-二甲氧基联苯-3-基氧基)-苄基]-噻唑烷-2，4-二酮(61)。首先，使用类似于方案9中说明的58合成的方案合成5-[4-(2′，4′-二甲氧基联苯-3-基氧基)-亚苄基]-噻唑烷-2，4-二酮(60)。向60(0.28g，0.65mmol)的乙腈悬浮液(20mL)中加入三乙胺(180mL，1.3mmol)，甲酸铵(0.41g，6.5mmol)和10％氧化铝载Pd(0.5g)。在回流2.5h之后，通过Celite过滤混合物，随后用乙酸乙酯(60mL)洗涤。将混合物用10％柠檬酸(50mL)酸化，随后用水(50mL)，盐水(50mL)洗涤然后干燥(MgSO4)，过滤和在真空中浓缩。使用己烷∶乙酸乙酯(3∶7)由快速色谱精制粗产品，以在高真空下浓缩和干燥之后得到轻膜(59mg，21％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.04(br s，1H)，7.38(t，J＝8.4Hz，1H)，7.27(d，J＝9.2Hz，2H)，7.22(d，J＝8.4，1H)，7.20(dt，J＝8.4和0.8Hz，1H)，7.06(t，J＝2.0Hz，1H)，7.00(d，J＝8.8Hz，2H)，6.90(ddd，J＝8.02.4和0.8Hz，1H)，6.64(d，J＝2.0Hz，1H)，6.60(dd，J＝8.4和2.4Hz，1H)，4.91(dd，J＝8.8和4.4Hz，1H)，3.79(s，6H)，3.37(dd，J＝14.4和4.4Hz，1H)，3.13(dd，J＝14.4和8.8Hz，1H).
实施例11对佐剂诱导关节炎(AIA)大鼠体内骨松质损失的预防炎性关节炎是由于激活破骨细胞活性的细胞因子活化而导致显著的关节周围骨损失。作为可抑制TNF-α产生的胰岛素敏化剂的噻唑烷二酮(TZD)会导致炎性关节炎中骨损失的重要因子。此研究的目的是展示如下内容TZD化合物11和依那西普(p55TNF溶解性受体)可预防AIA大鼠体内的骨损失。通过在尾基上使用包含乳酪分枝杆菌(100mg)的弗罗因德氏完全佐剂使其免疫来在雄性Lewis大鼠(Harlan，weight150g)中诱导关节炎。当关节炎症状开始显现时(以12-14天)，将动物随机分入三组之一组I载体(20％PEG-400水溶液，由口腔管饲法)。组II化合物11(50mg/kg，每天一次由口腔管饲)。组III依那西普(1.67mg/kg，腹膜内每日一次)。由不知晓治疗组的观察者对每个肢从0(无变化或正常)到4(具有肿胀，红斑，小瘤，畸形，僵硬的明显关节炎)单独评分。同时还注意体重，受影响的肢体数目和后手掌体积。在第11天，杀死AIA大鼠以及得到，解剖并在70％EtOH中固定右股骨和胫骨。由MicroCT评定(μCT-20，Scanco Medical，Bassersdorf，瑞士)右胫骨近端和股骨远端的骨松质体积和微结构。右胫骨近端的结果见下表。
表2组
总之，在AIA大鼠体内会发生明显的骨松质损失和微结构变化。然而，在此AIA模型中，在由化合物11或依那西普治疗的动物体内骨松质的损失几乎少于50％。因此，化合物11可以有效降低炎性关节炎和相似的快速骨损失状态中的骨损失。
实施例12葡萄糖摄取在分化的3T3-L1脂肪细胞中遵循具有改进的Tafuri过程(6)测量基础葡萄糖摄取。简要地，通过如下方式将从ATCC(Manassas，VA)中获得的3T3-L1成纤维细胞分化成脂肪细胞遵循Frost和Lane过程(7)，用猪胰岛素(1mg/ml，4天)，地塞米松(0.25mM，用于头2天)和异丁基甲基黄嘌呤(IBMX，0.5mM，用于头2天)(都来自Sigma Chemicals，StLouis，MO)处理细胞。在24-孔板中，将分化的脂肪细胞在包含10％胎牛血清(GibcoBRL，gaithersburg，MD)与各种浓度的化合物11或载体(0.1％DMSO的Dulbecco Eagle氏最低要求培养基(Eagle ModifiedEssential Medium)(DMEM)中孵化48h，重复三次。用磷酸盐缓冲盐水(PBS，150mM NaCl，1mM KH2PO4，3mM Na2PO4；pH7.4)洗涤细胞并在37℃下的无葡萄糖DMEM中孵育2h。用克-林二氏磷酸盐缓冲液(KRP)洗涤细胞3次。通过向每个孔中加入0.25μCi 2-14C(U)-脱氧-D-葡萄糖(300μCi/mmol，American Radiolabeled Chemicals Inc.，St Louis，MO)来引发葡萄糖摄取和在室温下将细胞在冷2-脱氧-D-葡萄糖存在的情况下孵育10min。最后，将细胞用包含10mM冷葡萄糖的冰冷PBS洗涤三次，用0.5％SDS溶解，且在闪烁计数器(Beckman LS6500)中计数。
转染和荧光素酶活性的测定通过将PPAR-γ2编码区插入pcDNA3.1+媒介中(Invitrogen，Carlsbad，CA)来构造人类PPAR-γ2表达型媒介。通过将与荧火虫荧光素酶编码区上游邻近的PPRE应答元件结扎来构造荧光素酶报告媒介。对照载体，购自Promega(Madison，WI)的表达海肾(Renilla)荧光素酶的pRL-SV40。
将约2.7×104个293细胞(ATCC，Manassas，VA)在35mM培养孔中平皿培养并在由10％热失活马血清(ATCC，Manassas，VA)补充的伊格尔最低要求的培养基(ATCC，Manassas，VA)中保持24小时。由LIPOFECTAMIN PLUSTM药剂(Invitl-ogen，Carlsbad，CA)转染表达，报告和对照媒介(每个培养孔中2.5ng对照物和100ng其它)。根据制造商的推荐制备转染药剂和DNA并用细胞孵育3小时，随后加入同等体积的由20％马血清补充的EMEM。在转染二十四小时之后，用载体或化合物在指示的最终浓度下处理细胞24小时。培养基中载体的最终浓度是0.001％ DMSO(Sigma，ST Louis，MO)。载体和化合物治疗都进行三次。然后测定每个培养孔的应答，该应答的特征为增加由海肾荧光素酶活性规格化的荧火虫荧光素酶活性。
荧火虫荧光素酶活性和海肾荧光素酶活性的测定遵循双荧光素酶Reporter测定系统的标准过程(Promega，Madison，WI)。简单地，将400ml被动溶解缓冲剂加入到每个培养孔中并将所有的孔放置在振荡器上15分钟。将每个孔的5μl细胞溶解产物加入到反应管中。由粘胶纤维发光计(Berthold Detection Systems，Pforzheim，德国)按顺序将荧光素酶药剂II和Stop &Glo注入反应管。最终的报告活性计算为荧火虫荧光素酶活性对海肾荧光素酶活性的比例。
结果制备并在3T3-L1细胞中，0.1和1mM浓度下在体外葡萄糖摄取上测试化合物11的不同位置上带有双键的三种可能甲基酯类似物(10，11，17)，没有任何双键的甲基酯18，游离酸类似物14，和11的Z-异构体23(Tafuri等人，Endocrinology，1374706-12，1996；Frost和Lane，J BiolChem 2602646-52，1985)(表3)。在1mM的浓度下，化合物10，11，和14可将葡萄糖摄取增至可与罗西格列酮的水平相比的程度。化合物17和18在1mM浓度下显示出适度活性而化合物23是基本上非活性的。在0.1mM的浓度下，化合物10和11保持活性，但小于罗西格列酮的活性。包含两个双键的化合物10显示出与11相比较低的葡萄糖摄取的增加。仅具有一个结合到TZD环的双键的化合物17和双倍还原的产物18在0.1mM下没有活性。我们由此推断不存在与TZD环结合的双键和肉桂酸双键的存在对于此系统中增加的葡萄糖摄取是重要的。23，11的相应Z-异构体，活性的缺乏显示出双键的几何位置对于活性是关键的。与甲基酯11相比，游离酸14的更低活性可能是由于化合物亲脂性的差异。
TZD类别的抗糖尿病化合物通过PPAR-γ的活化增加对胰岛素的周缘组织的灵敏度。我们的目标是通过化学改进向二苯基亚乙基化合物中引入这种额外的作用机理。在体外系统中使用由与荧火虫荧光素酶结扎的人类PPAR-γ2转染的细胞作为报告元件，来研究对PPAR-γ的激动剂活性。对试验化合物的这种体外转活测定的结果总结在表4中。在这个系列中最有效力的化合物认为是11(0.28mM的EC50)，其具有通过相同的测定的罗西格列酮(0.009mM的EC50)大约三十分之一的活性。化合物10(两个双键)和化合物14(11的游离酸)也显示出合理的效力，尽管其小于化合物11的效力。其中还原肉桂酸双键的化合物17和18是基本上非活性的。
在此测定中，Z-异构体23显示出小于化合物11十分之一的效力。根据这些体外结果，在两个广泛使用的NIDDM鼠模型中评价化合物11。
开始，在遗传学胰岛素过多的，糖尿病小鼠(db/db)模型(8周大的雄性小鼠，5只动物一组)中，遵循50mg/kg(在0.5％CMC和10％ PEG中)的单一口服剂量对11的体内葡萄糖降低效率进行研究。在0min，1，4，6，24，48和72h时间间隔下监测血糖水平。化合物11显示出依赖于时间的葡萄糖降低影响，该影响在24hrs时为最大(0min的23％，数据未显示)。将罗西格列酮和化合物11并排比较(每个在50mg/kg/天，口服，14天)显示出引人注目的，可比的血糖降低影响，其随给药的持续时间增加(图1bA)。体重(图16B)在这个短时间的试验内不受任何一种化合物影响。
也在遗传学肥胖(ob/ob)雄性糖尿病小鼠(7周大雄性小鼠，5个动物一组)中对化合物11进行评价，该鼠在50mg/kg体重的剂量下持续治疗14天。在11治疗的小鼠中，48小时内血糖水平显著降低并通过三天使其规格化(*p值＜0.05；成对的T测试)(图17A)。这些小鼠中的血糖水平在停止治疗之后缓慢回弹(图17A)。有趣地，与载体治疗的组相比，在药物治疗的动物中没有看到任何体重增加(图17B)。与强PPAR-γ激动剂相比，这可能是有利的状况，该激动剂在不同的动物模型中显示出大的体重增量。
在十四天治疗之后，从两个组收集血样用于糖基化血红蛋白，血清胰岛素，甘油三酯，FFA水平的测定(图18)。用作糖尿病治疗标记物的糖基化血红蛋白，从5.2％降低到3.8％(p＝0.15)。11降低血清胰岛素58％，甘油三酯65％和游离脂肪酸(FFA)水平33％，与载体治疗的动物相比，所有的p＜0.05。
为建立11的有效剂量，在ob/ob小鼠(n＝8)中用三种不同的剂量进行进一步的试验。如图19所示，存在着依赖于剂量的葡萄糖降低影响。在治疗十二天之后，采用3.12mg/kg剂量治疗的动物显示出与12.5mg/kg相似的葡萄糖降低程度。因此，在db/db和ob/ob小鼠中11的影响都可以与罗西格列酮相比。
较早提出，显示PPAR-γ高活化程度的化合物在动物试验中通常具有优异的葡萄糖降低活性(Wilson等人，J Med Chem 39665-8，1996；Foreman等人，Cell 83803-12，1995)。然而，发现在此的报告与此解释不同。我们发现不很有效的PPAR-γ激动剂11，其在动物试验中显示出可以与罗西格列酮相比的葡萄糖降低活性。进行尝试以进一步解释11的有效葡萄糖降低活性的机理。在肝中，特别是肌肉中的糖原合成是餐后葡萄糖处理的主要部位。不管适度PPAR-γ激动剂活性，对强葡萄糖降低活性的一种可能解释是我们近来对与罗西格列酮相比的由11诱导的更高糖原合成的观察(参见以下)。
表3.3T3-L1脂肪细胞a中的体外葡萄糖摄取化合物no. ％葡萄糖摄取
0.1μm1.0μm1(罗西格列酮)204.2±8.5214.7±36.510 142.6±7.4209.3±22.611 161.6±11.4 218.1±10.014 108.6±19.9 199.5±11.617 101.9±6.8130.0±27.018 104.4±5.7137.0±10.123 89.5±5.6 118.0±3.6胰岛素 335.2±21.7 345.6±8.3以非治疗细胞的％基底表达a基础葡萄糖摄取(每个点是四倍测定值的平均值+SD值)。
表4.由噻唑烷二酮a的PPAR-γ介导的荧光素酶活性诱导化合物no. EC50(μM)1(罗西格列酮) 0.009±0.00710 1.13611 0.284±0.036(n＝5)b14 0.690±0.038(n＝2)17 23.918 57.723 3.686±1.454(n＝2)a结果是基于几个独立的试验。每个试验包含至少8个不同的药物治疗浓度(0.1-30mM)，及每个浓度进行三次。由非线性回归分析使用GraphPad Prism软件计算EC50值。
bn＝独立的试验。
结论在糖尿病小鼠的遗传模型中，基于α-苯基肉桂酸基序的TZD具有葡萄糖降低活性。化合物11显示出强的葡萄糖降低活性，即使其是弱的PPAR-γ激动剂。不管其可为更弱的PPAR-γ激动剂，11的强葡萄糖降低活性可能是由于与罗西格列酮相比更高的糖原合成。需要进行进一步的研究以完全解释这个新TZD族的作用机理。
实施例13糖原合成以作为HepG2细胞中从14C-D-葡萄糖到细胞糖原的净转化来测量糖原合成，如由Ciaraldi等人，糖尿病41975-81，1992中所述。简单地，在6孔板中由化合物11或其它化合物治疗HepG2细胞(ATCC，Manassas，VA)48h。将其用包含1％ BSA的10mM HEPES缓冲剂(150mM NaCl，5mM KCl，1.2mM MgSO4，1.2mM CaCl2，2.5mM CaCl2，10mM HEPES；pH7.4)洗涤。在加入0.2mCi/孔的14C-D-葡萄糖(5mM最终浓度，10μCi/mmol，American Radiolabeled Chemicals Inc.，St Louis，MO)之前，将细胞在相同的缓冲剂中孵育30min。在37℃下孵育2h之后，将细胞用冰冷PBS洗涤并在55℃下用1M KOH增溶。在加入10mM载体糖原之后，由乙醇沉淀转化的糖原。将小片洗涤并在水中再悬浮，以及在闪烁计数器(Beckman LS6500)中计数等分试样。测定总蛋白质并且以cpm/mg的蛋白质说明结果。
脂肪形成以Wu等人，J Clin Invest 10122-32，1998所述的那样进行3T3-L1成纤维细胞中的脂肪形成。在6孔板中生长两天之后，将细胞或用载体(0.1％DMSO)或用化合物处理十天。每48h补充含有化合物或载体的新鲜培养基。将细胞用PBS洗涤两次并在PBS中的10％福尔马林(σ)中固定。在PBS中洗涤之后，在室温下将细胞用在异丙醇中新鲜稀释的油红O染色1h。将细胞用PBS洗涤五次并在Olympus BH2显微镜下进行观察。也在相似的试验条件下测量甘油三酯的定量累积，只是在此情况下是将细胞在100-mm组织培养皿中平皿培养。用甲醇∶氯仿(2∶1)混合物萃取甘油三酯。为监测回收效率，在遵循Brown等人，J ClinInvest 55783-93，1975的萃取过程之前，在每个管中加入3H-胆固醇油酸酯(50,000cpn/well，American Radiolabeled Chemicals Inc.，St Louis，MO)以作为示踪物。由比色测定(GPO-Trinder，σ)根据制造商技术说明书测量萃取的甘油三酯。
转染和转活测定通过将PPARγ2 cDNA编码区插入pcDNA3.1+载体(Invitrogen，Carlsbad，CA)来构造人类PPARγ2表达型载体。PPRE-荧光素酶报告基因是Dr.Kenneth Feingold的亲切礼物。对照载体，由Promega(Madison，WI)购得包含海肾荧光素酶cDNA的pRL-SV40。在35-mm组织培养皿中平皿培养约2.7×104个HEK293人类胚胎肾细胞(ATCC)并在包含10％热失活马血清的Eagle氏最低要求培养基(EMEM，ATCC)中将其保持24h。使用LIPOFECTAMIN PLUSTM药剂(GibcoBRL)根据制造商的推荐转染表达型，报告(100ng/皿)和对照媒介(2.5ng/皿)。在转染24h之后，将细胞用载体(培养基中的0.001％DMSO)或化合物在指示的浓度下处理和孵育24h。每个处理进行三次。为海肾荧光素酶活性规格化的荧火虫荧光素酶活性而测定每个培养皿以说明转染效率的差异。使用双荧光素酶Reporter测定系统(Promega)和粘胶纤维发光计(Berthold Detection System，Pforzheim，germany)测量荧光素酶活性。
体内试验进行的所有过程均符合动物福利法案(Animal Welfare Act)和美国农业部规范(U.S.Department of Agriculture regulations)并且由Calyx治疗学会动物关怀和使用委员会(Calyx Therapeutics Institutional AnimalCare and Use Committee)批准。将动物在22℃和50％相对湿度的情况下，采用12-h照明和黑暗循环饲养，和施予规则的啮齿动物饮食(HarlanTeklad，Madison，WI)和随意饮水。当其年龄是5周时，从JacksonLaboratories(Barharbor，Maine)得到雄性C57BL/KsJ-db/db和C57BL/6J-ob/ob小鼠。用化合物11，马来酸罗西格列酮(从市售片剂再结晶)或载体(0.5％羧甲基纤维素水溶液(σ，St.Louis，MO))对七周大的动物进行强饲每日一次口服给药。在使用下一次剂量之前和在进食状态下，用简单操作的葡萄糖计(Life Scan，Inc.，Milpitas，CA)和/或葡萄糖氧化酶测定(Glucose Trinder，Sigma，St.Louis，MO)进行血糖测量。在整个试验中监测体重。在如上所述给药之前，使八周大的雄性Zucker糖尿病肥胖(ZDF-fa/fa)大鼠(遗传模型，Indianapolis，IN)持续6.5％脂肪Formulab Diet 5008(PMI Feeds，Richmond，IN)两周。
统计分析数据呈现为平均值±标准误差(SE)和由t测试或ANOVA采用Tukey/Kramer由此测试进行的统计对比，其中适当地使用StatView 5软件(SAS Institute)。
结果化合物11刺激体外葡萄糖摄取分化3T3-L1脂肪细胞表示用于研究葡萄糖摄取的胰岛素敏感性细胞培养模型并且通常用于表征潜在的抗糖尿病化合物。尽管在这些细胞中，在胰岛素不存在和存在的两种情况下TZDs增加葡萄糖摄取，但是此影响的主要部分是由于非胰岛素介导的葡萄糖处理。如图20A所示，响应于化合物11的增加浓度(0.01，0.1，1.0和10mM)，葡萄糖摄取最大增加到相对于基底水平的1.33±0.02(平均值±SE)倍。我们也检测化合物11和罗西格列酮对3T3-L1脂肪细胞中胰岛素刺激的葡萄糖摄取的影响(图20B)。
无论TZD存在(5mM)或不存在，在响应于胰岛素的葡萄糖摄取剂量的响应曲线中不存在差异。可以通过在胰岛素和化合物11或罗西格列酮不存在的情况下，指示出对葡萄糖摄取额外的，而非协同影响的基础葡萄糖摄取增加数量来解释最大响应的差异。这些结果指出通过非胰岛素依赖性机理，如GLUT-1运载体的增加介导此葡萄糖摄取的提高。
化合物11的体内抗高血糖药的影响在2型糖尿病的几个模型中检测化合物11的抗高血糖活性。图21总结在8-9天内使用以50mg/kg(96.2mmol/kg)每日一次口服剂量的化合物11的影响。在每个研究结束时，药物会导致ob/ob小鼠(59％对基线)，db/db小鼠(32.％对基线)和ZDF大鼠(50％对基线)中血糖水平的显著增加。
除了ZDF大鼠，在治疗和对照动物中的重量增量是相似的，其中化合物11治疗的动物比对照动物多重13％。在随后的研究中，在ob/ob小鼠中将化合物11的体内效力与罗西格列酮的进行比较(图22)。化合物11和罗西格列酮治疗(分别用化合物11和罗西格列酮以10mg/kg/天；19.2和28.0μmol/kg/天)在8天的治疗周期以上显示出相似的抗糖尿病效力。
在载体和药物治疗的组中重量的增量是相似的。在此模型中，两种化合物显著降低血清胰岛素，游离脂肪酸和甘油三酯(数据未显示)。
在脂肪形成方面化合物11不如罗西格列酮由于TZDs是PPAR-γ的配体并诱导脂肪细胞分化(13-15)，所以我们使用3T3-L1预脂肪细胞模型来尝试确定化合物11的脂肪形成潜力。在这些研究中，在地塞米松，胰岛素和IBMX不存在的情况下，使用各种浓度(0.1，1，10pM)的化合物11，罗西格列酮或载体孵育3T3-L1成纤维细胞。在14天之后，将细胞用油红O染色，为目测评定用亚甲基蓝复染(图23B)以及为甘油三酯累积对细胞进行测定。如图23A所示，响应于化合物11和罗西格列酮的甘油三酯累积具有剂量依赖性的增加。与罗西格列酮相比，响应于化合物11的甘油三酯累积的剂量响应是右移的。另外，响应于化合物11累积的甘油三酯的最大数量明显小于响应于罗西格列酮的所看到的最大数量(分别相对于对照物的3.96对9.22倍增加；P＜0.0001，ANOVA)。在100μM和更高的浓度下，化合物11在此系统中是细胞毒素(数据未显示)。
化合物11是PPARγ2的部分激动剂在与人类PPAR-γ2表达型载体共转染的HEK293细胞中，我们检测罗西格列酮和化合物11转活化PPRE-Luc报告基因的能力。与罗西格列酮相比，化合物11是PPAR-γ基本上较无效的活化剂(图24)。在此系统中转活的EC50是罗西格列酮的0.009±0.0007μM(SE)，是化合物11的0.284±0.036μM(n＝5)。在由GAL4-DNA结合域的异源cDNA构造物/PPAR-γ配体结合域和5X上游活化剂序列(UAS)-荧光素酶构造物转染的细胞中，使用报告基因测定获得相似的剂量-响应曲线(数据未显示)。
化合物11增加HepG2肝细胞中的糖原合成在HepG2肝细胞中检查化合物11增加糖原合成的能力。图25A显示在胰岛素不存在的情况下，在引入响应于化合物11的糖原的14C-葡萄糖中存有剂量依赖性的增加；此响应在48到72h时为最大(相对于基线的3.1-倍增加)(图25B)。相反，罗西格列酮不会增加糖原合成(在10μM下的0.9-倍降低，图25A)。
在单独的试验中，高于30μM的罗西格列酮浓度仅会产生糖原合成的最小增加量(1.4±0.06，相对于基线的SD倍增加，数据未显示)。当其由亚胺环己酮的治疗阻断时，由化合物11诱导的糖原合成的增加依赖于新蛋白质合成(图25C)。
讨论我们的结果显示化合物11有效降低2型糖尿病的几个动物模型中的血糖。其在ZDF大鼠中具有强烈的抗高血糖药影响，使葡萄糖水平规格化。此药物在ob/ob小鼠中也具有有效的葡萄糖降低活性，使其在质量基础上等效于罗西格列酮。实际上在摩尔每摩尔的基础上，在体内化合物11比罗西格列酮多46％的有效性；罗西格列酮的分子量基本小于化合物11(357对520g/mol)，然而在ob/ob小鼠中，两种药物产生相同的葡萄糖降低程度。我们的结果还显示化合物11在脂肪形成上基本不如罗西格列酮。影响与罗西格列酮相比，此影响同样反映化合物11对于PPAR-γ具有更低亲和力。我们可以检测到在由化合物11治疗的ZDF大鼠中的小幅重量增加，而不能在此短期研究中检测到罗西格列酮和化合物11治疗的动物中重量增加的差异。由于研究是在可以使这些药物对体重的不同影响不很明显的遗传性肥胖动物中进行的，所以难以解释这些数据影响。至多一个月的持续时间中，在正常动物中的几个研究不能展示出在临床上有意义的重量增量(数据未显示)。
广泛认为与TZDs有关的重量增量部分是由于其脂肪形成的潜力，以及在发现为有效的PPAR-γ活化剂但不引起重量增加的化合物方面存有较多的努力。由于化合物11具有较少的脂肪形成活性，但可以保持抗高血糖药活性，所以显现出可以开发比目前市售PPAR-γ活化剂产生较少重量增加的药理学PPAR-γ活化剂。除脂肪形成起作用以外，水肿是与PPAR-γ激动剂相关的重量增加中的重要因素。这个毒性可认为直接与分子的PPAR-γ活化效力有关。由于化合物11是可能与较少的水肿相关的PPAR-γ的弱激动剂。进行中的临床研究会有助于确定化合物11对人体重的影响。
在初步竞争性结合测定中，PPAR-γ对于化合物11的亲和力(Ki)比罗西格列酮的亲和力小6.5倍(数据未显示)，和转活效力小于罗西格列酮的多至30倍。一般情况下，在PPAR-γ亲和力和葡萄糖降低活性之间存在强的关联；然而，近来的数据显示此关系可能对于此受体的所有配体不是真实的。近来非-TZD PPAR-γ活化剂，FMOC-L-亮氨酸显示出对化合物11具有相似情况。FMOC-L-亮氨酸具有比PPAR-γ大约小400倍的亲和力，其仅是弱脂肪形成的，但具有有效的体内抗高血糖药活性(Rocchi等人，Mol Cell 8737-47，2001)。体内代谢的差异可解释化合物11和其它配体的PPAR-γ亲和力和体内抗糖尿病效力之间的一部分表观的不一致。由Reginato等人(J Biol Chem 27332679-84，1998)，Mukherjee等人(Mol Endocrinol 141425-33，2000)和Rocchi等人(Mol Cell 8737-47，2001)的研究显示共活化剂SRC-1对PPAR-γ的配体介导补充是配体差异活性的重要决定因素。目前，我们仅可以推测，化合物11会影响对PPARγ-RXR配合物的共活化剂补充。有可能的情况是化合物11较无助于SRC-1或PGC-1的补充，以及结果是，转录活化。近来的研究(Nugent等人，Mol Endocrinol 151729-38，2001)说明进入脂肪细胞的体外葡萄糖摄取部分独立于PPAR□。非-PPARγ-介导活性或共活化剂补充可解释将需要对化合物11独特性能做进一步研究。
目前，包括TZD的PPAR-γ配体产生其抗高血糖药的效果的机理并非已知。占主导的知识建议通过PPAR-γ受体介导这些药物的葡萄糖降低效果，其可提高胰岛素敏感性。近来的数据显示在PPAR-γ，其配体和胰岛素敏感性之间的关系变得更为复杂。例如，杂合PPAR-γ无效小鼠实际展示出增加的胰岛素敏感性，以及合成配体的胰岛素敏化效果可由在转录活化和表达之间的平衡产生(Miles等人，J Clin Invest105287-92，2000)。另外，不能排除化合物11和其它PPAR-γ激动剂的非受体介导作用机理。事实上，废除内源PPAR-γ并不导致TZD活性的消除(Nugent等人，Mol Endocrinol 151729-38，2001；Chawla等人，Nat Med 748-52，2001)。我们的数据显示化合物11，与罗西格列酮相反，在肝细胞中增加糖原合成，可能提供在糖尿病动物中降低葡萄糖水平的额外机理。近来的数据显示一些非-TZD PPAR-γ激动剂可上调糖原合成中的基因(Way等人，Endocrinology 1421269-77，2001)。显然的是此受体的配体将会具有亲和力，转录活性，和体内药效学情况的光谱。因此，在产生具有选择性PPAR-γ调节活性的化合物中存在基本的临床价值。用于″选择性PPAR调节剂″的首字母缩略词SPRM(Mukherjee等人，Mol Endocrinol 141425-33，2000)最好用来描述这些分子。SPRMs可最终证明具有特异和针对的活性，包括与目前销售的TZD有关的重量增加的潜在避免性。这样的药剂在治疗2型糖尿病的患者中具有极大的益处。
图20显示3T3-L1细胞中的葡萄糖摄取。A.在增加化合物11(黑棒)或0.1％作为载体的DMSO(阴影线棒)的浓度的同时，在48h治疗之后测量分化3T3-L1脂肪细胞中的体外葡萄糖摄取。*P≤0.001。B.在载体(圆)，罗西格列酮(5mM)(三角形)或化合物11(5mM)(正方形)存在且增加胰岛素浓度的情况下，在分化3T3-L1脂肪细胞中测量葡萄糖摄取。*P＜0.05，#P＝0.02对载体。
图21显示化合物11在糖尿病动物中的体内抗高血糖活性。采用每日一次剂量的化合物11(50mg/kg＝96.2mmol/kg)(正方形)或载体(0.5％羧甲基纤维素)(圆)通过强饲治疗糖尿病ob/ob小鼠(A)和db/db小鼠(B)和糖尿病ZDF大鼠(C)8或9天。在进食状态中进行血糖测量。*P＜0.05，#*P＜0.01，P＜0.001。
图22显示在ob/ob小鼠中化合物11对罗西格列酮的体内抗高血糖活性。将糖尿病ob/ob小鼠以每日一次剂量的化合物11(正方形)和罗西格列酮(三角形)在10mg/kg下(分别19.2和28.0mmol/kg)或载体(0.5％羧甲基纤维素)(圆)通过强饲治疗。在8天治疗时间内测量血糖(A)和体重(B)。
图23显示化合物11的体外脂肪形成活性。将3T3-L1细胞用载体，化合物11或罗西格列酮培养10天。测量总累积的甘油三酯。(A)累积甘油三酯在10天治疗之后随增加浓度的化合物11(黑棒)或罗西格列酮(阴影线棒)或载体(白棒)的定量测量。(B)由油红O在使用1mM化合物11，罗西格列酮或载体的10天治疗之后甘油三酯累积的定量评定。
图24显示由化合物11和罗西格列酮的PPRE-Luc报告物对PPARγ-介导转活化的诱导。用PPAR-γ表达型载体和PPRE-Luc报告构造物短暂共转染HEK293细胞。还用包含海肾荧光素酶的eDNA构造物转染细胞，其用于控制转染效率。将转染的细胞用增加浓度的化合物11和罗西格列酮治疗。以相对于基底水平(无药物)的提高来表达荧光素酶活性且为转染效率进行校正。附图显示五个试验的代表结果。
图25显示化合物11对HepG2细胞中体外糖原合成的影响。A.在胰岛素不存在的情况下，48h时由化合物11的来自葡萄糖的糖原合成的剂量依赖性刺激。以定义为100％的基底百分比(载体)来表达糖原合成的刺激。B.化合物11-刺激的糖原合成中时间依赖性的增加。最大影响发生在用化合物11治疗的48到72h。C.亚胺环己酮阻断由化合物11诱导的糖原合成(30mM，48h)。载体＝白棒，化合物11＝黑棒，罗西格列酮＝阴影线棒，CHX＝亚胺环己酮，校验棒，rosi＝罗西格列酮。
共同给药根据本发明的化合物可以与生理学可接受的载体或媒介结合以提供药物组合物，如形式为含有各种填料和粘结剂的片剂或胶囊的低压冻干粉末。相似地，化合物可以与其它药剂共同给药。共同给药应该表示至少对患者使用两种药剂以提供两种药剂结合的有益效果。例如，可以在一定时间内同时或按顺序使用药剂。可以广泛地由本领域技术人员选择和按经验确定组合物中化合物的有效剂量。另外，根据适应症和所需治疗效果，本发明的化合物可以单独使用或与一种或多种额外的药剂结合使用。例如，在糖尿病，胰岛素耐受性和相关病况或并发症，包括肥胖症和高脂血症的情况下，这种额外药剂可以选自胰岛素或胰岛素模拟物、磺酰脲类(如醋环磺己脲、氯磺丙脲、格列美脲、格列吡嗪、格列本脲等)或其它胰岛素促分泌剂(如那格列萘、瑞格列萘等)、噻唑烷二酮(如匹格列酮、罗西格列酮等)或其它过氧化物酶体增生物激活受体(PPAR)-γ激动肌、贝特(如苯扎贝特、安妥明、非诺贝特、gemfibrozol等)或其它PPAR-α激动药、PPAR-Δ激动剂、双胍(如丁福明)、抑制素(如氟伐他丁、洛伐他丁、普伐他汀、斯伐他汀等)或其它羟基甲基戊二酰基(HMG)辅酶A还原酶抑制剂、α-糖苷酶抑制剂(如阿卡波糖、米格列醇、伏格列波糖等)、胆酸结合树脂(如考来烯胺、考来替泊等)、高密度脂蛋白(HDL)-降低剂如载脂蛋白A-I(apoA1)、烟酸等、普罗布考和烟碱酸在炎症、炎性疾病、自身免疫疾病和其它这样的细胞因子介导病症的情况下，额外的药剂可以选自非类固醇类消炎药(NSAID)(如双氯芬酸、二氟尼柳、布洛芬、萘普生等)，环氧合酶-2抑制剂(如塞来考昔，罗非考昔等)、皮质类固醇(如泼尼松、甲基强的松等)或其它免疫抑制剂(如甲氨蝶呤、来氟米特、环磷酰胺、硫唑嘌呤等)、缓解疾病的抗风湿性药物(DMARD)(如可注射金、青霉胺、羟氯喹、柳氮磺吡啶等)、TNF-α抑制剂(如依那西普，英夫利昔单抗等)、其它细胞因子抑制剂(如溶解性细胞因子受体、抗一细胞因子抗体等)、其它免疫调制剂(如环孢霉素、他克莫司、雷怕霉素等)和麻醉剂(如氢可酮、吗啡、可待因、曲马多等)。由本发明设想的联合治疗包括，例如，本发明化合物和额外药剂在单一药物配方中的使用以及本发明化合物和额外药剂在分开药物配方中的使用。
可以在如上所述和如以下权利要求定义的本发明中进行各种改进。
权利要求
1.由如下通式1表示的化合物 其中Z是 或 n，m，q和r单独表示0～4的整数，条件是n+m≤4和q+r≤4；p和s分别表示0～5的整数，条件是p+s≤5；a，b和c表示可以存在或不存在的双键；当双键存在时，可以为E或Z构型，当双键不存在时，获得的立体中心可以具有R-或S-构型；R和R′各自单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、-CONR2′、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R″单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R单独表示线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、或-(CH2)x-Ar，其中x表示1～6的整数以及Ar表示芳基；R′单独表示氢原子、可任意取代的C1-C20烷基、可任意取代的C1-C20烷氧基、可任意取代的C2-C20烯基、可任意取代的C6-C10芳基；或NR2′表示环状部分；Z′表示氢原子或药物上可接受的反荷离子；A，A′和A″各自单独表示氢原子、C1-C20酰氨基、C1-C20酰氧基、C1-C20烷酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷氧基、C1-C20烷氨基、C1-C20烷羧氨基、羧基、氰基、卤素、或羟基；B，B′和B″各自单独表示C2-C20烯酰基、芳酰基、芳烷酰基、硝基、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、或可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；或A和B共同地，A′和B′共同地，或A″和B″共同地，单独表示亚甲二氧基或亚乙二氧基团；和X和X′单独表示＞NH、＞NR、-O-、或-S-。
2.由如下通式1表示的化合物 其中Z是 或 或 n，m，q和r单独表示0～4的整数，条件是n+m≤4和q+r≤4；p和s单独表示0～5的整数，条件是p+s≤5；a，b和c表示可以存在或不存在的双键；当双键存在时，可以为E或Z构型，当双键不存在时，获得的立体中心可以具有R-或S-构型；R单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、-CONR2′、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R′单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、-CONR2′、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R″单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R单独表示线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、或-(CH2)x-Ar，其中x表示1～6的整数和Ar表示芳基；R′单独表示氢原子、可任意取代的C1-C20烷基、可任意取代的C1-C20烷氧基、可任意取代的C2-C20烯基、可任意取代的C6-C10芳基；或NR2′表示环状部分；Z′表示氢原子或药物上可接受的反荷离子；A，A′和A″各自单独表示氢原子、C1-C20酰氨基、C1-C20酰氧基、C1-C20烷酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷氧基、C1-C20烷氨基、C1-C20烷羧氨基、羧基、氰基、卤素、或羟基；B，B′和B″每个单独表示C2-C20烯酰基、芳酰基、芳烷酰基、硝基、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、或可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；或A和B共同地，A′和B′共同地，或A″和B″共同地，单独表示亚甲二氧基或亚乙二氧基团；和X和X′单独表示＞NH、＞NR、-O-、或-S-。
3.一种药物组合物，包括治疗有效量的，在生理学可接受的载体中的，由如下通式1表示的化合物 其中Z是 或 n，m，q和r单独表示0～4的整数，条件是n+m≤4和q+r≤4；p和s单独表示0～5的整数，条件是p+s≤5；a，b和c表示可以存在或不存在的双键；当双键存在时，可以为E或Z构型，当双键不存在时，得到的立体中心可以具有R-或S-构型；R和R′各自单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、-CONR2′、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R″单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R单独表示线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、或-(CH2)x-Ar，其中x表示1～6的整数和Ar表示芳基；R′单独表示氢原子、可任意取代的C1-C20烷基、可任意取代的C1-C20烷氧基、可任意取代的C2-C20烯基、可任意取代的C6-C10芳基；或NR2′表示环状部分；Z′表示氢原子或药物上可接受的反荷离子；A，A′和A″各自单独表示氢原子、C1-C20酰氨基、C1-C20酰氧基、C1-C20烷酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷氧基、C1-C20烷氨基、C1-C20烷羧氨基、羧基、氰基、卤素、或羟基；B，B′和B″各自单独表示C2-C20烯酰基、芳酰基、芳烷酰基、硝基、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、或可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；或A和B共同地，A′和B′共同地，或A″和B″共同地，单独表示亚甲二氧基或亚乙二氧基团；和X和X′单独表示＞NH、＞NR、-O-、或-S-。
4.一种药物组合物，包括治疗有效量的，在生理学可接受的载体中，由如下通式1表示的化合物 其中Z是 或 或 n，m，q和r单独表示0～4的整数，条件是n+m≤4和q+r≤4；p和s单独表示0～5的整数，条件是p+s≤5；a，b和c表示可以存在或不存在的双键；当双键存在时，可以为E或Z构型，当双键不存在时，获得的立体中心可以具有R-或S-构型；R单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、-CONR2′、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R′单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、-CONR2′、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R″单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R单独表示线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、或-(CH2)x-Ar，其中x表示1～6的整数和Ar表示芳基；R′单独表示氢原子、可任意取代的C1-C20烷基、可任意取代的C1-C20烷氧基、可任意取代的C2-C20烯基、可任意取代的C6-C10芳基；或NR2′表示环状部分；Z′表示氢原子或药物上可接受的反荷离子；A，A′和A″各自单独表示氢原子、C1-C20酰氨基、C1-C20酰氧基、C1-C20烷酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷氧基、C1-C20烷氨基、C1-C20烷羧氨基、羧基、氰基、卤素、或羟基；B，B′和B″每个单独表示C2-C20烯酰基、芳酰基、芳烷酰基、硝基、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、或可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；或A和B共同地，A′和B′共同地，或A″和B″共同地，单独表示亚甲二氧基或亚乙二氧基团；和X和X′单独表示＞NH、＞NR、-O-、或-S-。
5.一种治疗糖尿病的方法，包括对患有糖尿病的患者使用治疗有效量的，在生理学可接受的载体中的，由如下通式1表示的化合物 其中Z是 或 n，m，q和r单独表示0～4的整数，条件是n+m≤4和q+r≤4；p和s单独表示0～5的整数，条件是p+s≤5；a，b和c表示可以存在或不存在的双键；当双键存在时，可以为E或Z构型，当双键不存在时，获得的立体中心可以具有R-或S-构型；R和R′各自单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHr、-NR2、-OH、-OR、-CONR2′、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R″单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R单独表示线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、或-(CH2)x-Ar，其中x表示1～6的整数和Ar表示芳基；R′单独表示氢原子、可任意取代的C1-C20烷基、可任意取代的C1-C20烷氧基、可任意取代的C2-C20烯基、可任意取代的C6-C10芳基；或NR2′表示环状部分；Z′表示氢原子或药物上可接受的反荷离子；A，A′和A″各自单独表示氢原子、C1-C20酰氨基、C1-C20酰氧基、C1-C20烷酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷氧基、C1-C20烷氨基、C1-C20烷羧氨基、羧基、氰基、卤素、或羟基；B，B′和B″各自单独表示C2-C20烯酰基、芳酰基、芳烷酰基、硝基、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、或可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；或A和B共同地，A′和B′共同地，或A″和B″共同地，单独表示亚甲二氧基或亚乙二氧基团；和X和X′单独表示＞NH、＞NR、-O-、或-S-。
6.一种治疗糖尿病的方法，包括对患有糖尿病的患者使用治疗有效量的，在生理学可接受的载体中的，由如下通式1表示的化合物 其中Z是 或 或 n，m，q和r单独表示0～4的整数，条件是n+m≤4和q+r≤4；p和s单独表示0～5的整数，条件是p+s≤5；a，b和c表示可以存在或不存在的双键；当双键存在时，可以为E或Z构型，当双键不存在时，获得的立体中心可以具有R-或S-构型；R单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、-CONR2′、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R′单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、-CONR2′、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R″单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R单独表示线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、或-(CH2)x-Ar，其中x表示1～6的整数和Ar表示芳基；R′单独表示氢原子、可任意取代的C1-C20烷基、可任意取代的C1-C20烷氧基、可任意取代的C2-C20烯基、可任意取代的C6-C10芳基；或NR2′表示环状部分；Z′表示氢原子或药物上可接受的反荷离子；A，A′和A″各自单独表示氢原子、C1-C20酰氨基、C1-C20酰氧基、C1-C20烷酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷氧基、C1-C20烷氨基、C1-C20烷羧氨基、羧基、氰基、卤素、或羟基；B，B′和B″各自单独表示C2-C20烯酰基、芳酰基、芳烷酰基、硝基、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、或可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；或A和B共同地，A′和B′共同地，或A″和B″共同地，单独表示亚甲二氧基或亚乙二氧基团；和X和X′单独表示＞NH、＞NR、-O-、或-S-。
7.一种治疗炎症或炎性疾病的方法，包括对患有该疾病的患者使用治疗有效量的，在生理学可接受的载体中的，由如下通式1表示的化合物 其中Z是 或 n，m，q和r单独表示0～4的整数，条件是n+m≤4和q+r≤4；p和s单独表示0～5的整数，条件是p+s≤5；a，b和c表示可以存在或不存在的双键；当双键存在时，可以为E或Z构型，当双键不存在时，获得的立体中心可以具有R-或S-构型；R和R′各自单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、-CONR2′、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R″单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R单独表示线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、或-(CH2)x-Ar，其中x表示1～6的整数和Ar表示芳基；R′单独表示氢原子、可任意取代的C1-C20烷基、可任意取代的C1-C20烷氧基、可任意取代的C2-C20烯基、可任意取代的C6-C10芳基；或NR2′表示环状部分；Z′表示氢原子或药物上可接受的反荷离子；A，A′和A″各自单独表示氢原子、C1-C20酰氨基、C1-C20酰氧基、C1-C20烷酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷氧基、C1-C20烷氨基、C1-C20烷羧氨基、羧基、氰基、卤素、或羟基；B，B′和B″每个单独表示C2-C20烯酰基、芳酰基、芳烷酰基、硝基、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、或可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；或A和B共同地，A′和B′共同地，或A″和B″共同地单独表示亚甲二氧基或亚乙二氧基团；和X和X′单独表示＞NH、＞NR、-O-、或-S-。
8.一种治疗炎症或炎性疾病的方法，包括对患有该疾病的患者使用治疗有效量的，在生理学可接受的载体中的，由如下通式1表示的化合物 其中Z是 或 或 n，m，q和r单独表示0～4的整数，条件是n+m≤4和q+r≤4；p和s单独表示0～5的整数，条件是p+s≤5；a，b和c表示可以存在或不存在的双键；当双键存在时，可以为E或Z构型，当双键不存在时，获得的立体中心可以具有R-或S-构型；R单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、-CONR2′、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R′单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、-CONR2′、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R″单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R单独表示线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、或-(CH2)x-Ar，其中x表示1～6的整数和Ar表示芳基；R′单独表示氢原子、可任意取代的C1-C20烷基、可任意取代的C1-C20烷氧基、可任意取代的C2-C20烯基、可任意取代的C6-C10芳基；或NR2′表示环状部分；Z′表示氢原子或药物上可接受的反荷离子；A，A′和A″每个单独表示氢原子、C1-C20酰氨基、C1-C20酰氧基、C1-C20烷酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷氧基、C1-C20烷氨基、C1-C20烷羧氨基、羧基、氰基、卤素、或羟基；B，B′和B″每个单独表示C2-C20烯酰基、芳酰基、芳烷酰基、硝基、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、或可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；或A和B共同地，A′和B′共同地，或A″和B″共同地，单独表示亚甲基二氧或亚乙基二氧基团；和X和X′单独表示＞NH、＞NR、-O-、或-S-。
9.一种治疗免疫性疾病的方法，包括对患有免疫性疾病的患者使用治疗有效量的，在生理学可接受的载体中的，由如下通式1表示的化合物 其中Z是 或 n，m，q和r单独表示0～4的整数，条件是n+m≤4和q+r≤4；p和s单独表示0～5的整数，条件是p+s≤5；a，b和c表示可以存在或不存在的双键；当双键存在时，可以为E或Z构型，当双键不存在时，获得的立体中心可以具有R-或S-构型；R和R′各自单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、-CONR2′、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R″单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R单独表示线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、或-(CH2)x-Ar，其中x表示1～6的整数和Ar表示芳基；R′单独表示氢原子、可任意取代的C1-C20烷基、可任意取代的C1-C20烷氧基、可任意取代的C2-C20烯基、可任意取代的C6-C10芳基；或NR2′表示环状部分；Z′表示氢原子或药物上可接受的反荷离子；A，A′和A″各自单独表示氢原子、C1-C20酰氨基、C1-C20酰氧基、C1-C20烷酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷氧基、C1-C20烷氨基、C1-C20烷羧氨基、羧基、氰基、卤素、或羟基；B，B′和B″各自单独表示C2-C20烯酰基、芳酰基、芳烷酰基、硝基、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、或可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；或A和B共同地，A′和B′共同地，或A″和B″共同地，单独表示亚甲二氧基或亚乙二氧基团；和X和X′单独表示＞NH、＞NR、-O-、或-S-。
10.一种治疗免疫性疾病的方法，包括对患有免疫性疾病的患者使用治疗有效量的，在生理学可接受的载体中的，由如下通式1表示的化合物 其中Z是 或 或 n，m，q和r单独表示0～4的整数，条件是n+m≤4和q+r≤4；p和s单独表示0～5的整数，条件是p+s≤5；a，b和c表示可以存在或不存在的双键；当双键存在时，可以为E或Z构型，当双键不存在时，获得的立体中心可以具有R-或S-构型；R单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、-CONR2′、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R′单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、-CONR2′、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R″单独表示氢原子、线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、-CO2Z′、-CO2R、-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR、卤素原子、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；R单独表示线性或支化C1-C20烷基、线性或支化C2-C20烯基、或-(CH2)x-Ar，其中x表示1～6的整数和Ar表示芳基；R′单独表示氢原子、可任意取代的C1-C20烷基、可任意取代的C1-C20烷氧基、可任意取代的C2-C20烯基、可任意取代的C6-C10芳基；或NR2′表示环状部分；Z′表示氢原子或药物上可接受的反荷离子；A，A′和A″各自单独表示氢原子、C1-C20酰氨基、C1-C20酰氧基、C1-C20烷酰基、C1-C20烷氧羰基、C1-C20烷氧基、C1-C20烷氨基、C1-C20烷羧氨基、羧基、氰基、卤素、或羟基；B，B′和B″各自单独表示C2-C20烯酰基、芳酰基、芳烷酰基、硝基、可任意取代的线性或支化C1-C20烷基、或可任意取代的线性或支化C2-C20烯基；或A和B共同地，A′和B′共同地，或A″和B″共同地，单独表示亚甲二氧基或亚乙二氧基团；和X和X′单独表示＞NH、＞NR、-O-、或-S-。
11.一种抑制TNF-α、IL-1、IL-6或COX-2活性的方法，所述方法包括对需要这样抑制的宿主使用有效剂量的，如权利要求1或权利要求2所述的化合物。
12.一种抑制细胞因子或环氧合酶的不所需作用的方法，所述方法包括对需要这样抑制的宿主使用有效剂量的，如权利要求1或权利要求2所述的化合物。
13.一种治疗由细胞因子或环氧合酶介导的疾病的方法，所述方法包括对需要这样治疗的宿主使用如权利要求1或权利要求2所述的化合物。
14.一种治疗胰岛素耐受的方法，所述方法包括对需要这样治疗的宿主使用有效剂量的，如权利要求1或权利要求2所述的化合物。
15.一种治疗高脂血症的方法，所述方法包括对需要这样治疗的宿主使用有效剂量的，如权利要求1或权利要求2所述的化合物。
16.一种治疗冠心病的方法，所述方法包括对需要这样治疗的宿主使用有效剂量的，如权利要求1或权利要求2所述的化合物。
17.一种治疗多发性硬化症的方法，所述方法包括对需要这样治疗的宿主使用有效剂量的，如权利要求1或权利要求2所述的化合物。
18.一种治疗癌症的方法，所述方法包括对需要这样治疗的宿主使用有效剂量的，如权利要求1或权利要求2所述的化合物。
19.根据权利要求1所述的化合物，选自2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基亚基甲基)-苯氧基]-苯基}-3-对甲苯基丙烯酸、2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}-3-对甲苯基丙烯酸、2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}-3-对甲苯基丙烯酸甲酯、3-(3，5-二甲基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基亚基甲基)-苯氧基]-苯基}-丙烯酸、3-(3，5-二甲基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}-丙烯酸、3-(3，5-二甲基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}丙烯酸甲酯、5-(4-{4-[2-(3，5-二甲基苯基)-1-(吗啉-4-羰基)-乙烯基]-苯氧基}-苄基)-噻唑烷-2，4-二酮、5-(4-{4-[2-(4-甲氧基苯基)-乙烯基]-苯氧基}-苄基)-噻唑烷-2，4-二酮、5-(4-{4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)-乙烯基]-苯氧基}-苄基)-噻唑烷-2，4-二酮、5-[4-(4′-甲氧基联苯-3-基氧基)-亚苄基]-噻唑烷-2，4-二酮、5-[4-(4′-甲氧基联苯-3-基氧基)-苄基]-噻唑烷-2，4-二酮、5-[4-(2′，4′-二甲氧基联苯-3-基氧基)-亚苄基]-噻唑烷-2，4-二酮、或5-[4-(3′，5′-二甲氧基联苯-3-基氧基)-苄基]-噻唑烷-2，4-二酮。
20.一种药物组合物，包括治疗有效量的，选自如下的化合物2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基亚基甲基)-苯氧基]-苯基}-3-对甲苯基丙烯酸、2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}-3-对甲苯基丙烯酸、2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}-3-对甲苯基丙烯酸甲酯、3-(3，5-二甲基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基亚基甲基)-苯氧基]-苯基}-丙烯酸、3-(3，5-二甲基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}-丙烯酸、3-(3，5-二甲基苯基)-2-{4-[4-(2，4-二氧代噻唑烷-5-基甲基)-苯氧基]-苯基}丙烯酸甲酯、5-(4-{4-[2-(3，5-二甲基苯基)-1-(吗啉-4-羰基)-乙烯基]-苯氧基}-苄基)-噻唑烷-2，4-二酮、5-(4-{4-[2-(4-甲氧基苯基)-乙烯基]-苯氧基}-苄基)-噻唑烷-2，4-二酮、5-(4-{4-[2-(3，5-二甲氧基苯基)-乙烯基]-苯氧基}-苄基)-噻唑烷-2，4-二酮、5-[4-(4′-甲氧基联苯-3-基氧基)-亚苄基]-噻唑烷-2，4-二酮、5-[4-(4′-甲氧基联苯-3-基氧基)-苄基]-噻唑烷-2，4-二酮、5-[4-(2′，4′-二甲氧基联苯-3-基氧基)-亚苄基]-噻唑烷-2，4-二酮、或5-[4-(3′，5′-二甲氧基联苯-3-基氧基)-苄基]-噻唑烷-2，4-二酮，以及生理学可接受的载体。
21.一种治疗糖尿病的方法，包括共同使用有效剂量的权利要求1或权利要求2所述的化合物和选自如下的药剂胰岛素或胰岛素模拟剂、磺酰脲类或其它胰岛素促分泌剂、噻唑烷二酮、贝特类或其它PPAR-α激动药、PPAR-Δ激动剂、双胍、斯达汀或其它羟甲基戊二酰基(HMG)CoA还原酶抑制剂、α-糖苷酶抑制剂、胆酸结合树脂、apoAl、烟酸、丙丁酚、烟碱酸。
22.一种治疗炎性或免疫性疾病的方法，包括共同使用有效剂量的权利要求1或权利要求2所述的化合物和选自如下的药剂非类固醇类消炎药(NSAID)、环氧合酶-2抑制剂、皮质类固醇或其它免疫抑制剂、缓解疾病的抗风湿性药物(DMARD)、TNF-α抑制剂、其它细胞因子抑制剂、其它免疫调节剂、麻醉剂。
23.根据权利要求1所述的化合物，其中Z由如下结构式表示
24.根据权利要求3所述的药物组合物，其中Z由如下结构式表示
全文摘要
本发明提供包含噻唑烷二酮或恶唑烷二酮部分的新型二苯基乙烯化合物及其衍生物，其有效降低II型糖尿病动物模型中的血糖水平，血清胰岛素，甘油三酯和游离脂肪酸水平。所公开的化合物用于各种治疗，包括炎症、炎性和免疫性疾病、胰岛素耐受性、高脂血症、冠心病、癌症和多发性硬化症。
文档编号C07D277/24GK1708486SQ200380101164
公开日2005年12月14日 申请日期2003年10月8日 优先权日2002年10月8日
发明者P·奈欧吉, D·戴伊, S·梅迪谢拉, B·纳格, A·李 申请人:特拉科斯公司