专利名称：：栽培小麦Brock中一个受白粉菌诱导应答的基因cDNA序列及其获得方法
技术领域：
：本发明属于农业生物基因工程
技术领域：
，特别涉及栽培小麦Brock中一个受白粉菌诱导应答的cDNA序列及其获得方法。
背景技术：
：栽培小麦Brock强抗白粉病，对华北地区流行的15号优势小种免疫。抗白粉病特性分析证实，Brock存在一个抗白粉病新基因，位于染色体3BL上(Wangetal.，PlantProductionScience,2004,7(3):319;Wangetal"PlantProductionScience,2005,8(5):578)。由于小麦中抗白粉病基因抗性退化和抗源的缺乏，克隆Brock中的新基因，对于抗病机理研究和抗白粉病育种都有重要意义，为此，我们利用经白粉菌15号优势小种胁迫5d的Brock总RNA为模板，以带接头的OligodT为逆转录引物，逆转录合成cDNA第一链，然后根据已发表的NBS类抗病基因同源序列设计简并引物进行PCR，结果获得一条比预期分子量大的cDNA片段(NBS片段一般为500bp左右)，将其克隆并测序，发现该片段两端分别有上游和接头引物，进而进行测序，发现该片段与报道的小麦的TCTP(translationallycontrolledtumorprotein,TCTP)基因的cDNA序列(gi|21070378)有97%的同源性。翻译控制肿瘤蛋白(translationallycontrolledtumorprotein,TCTP)最初是在鼠肿瘤细胞中被发现的(ChitpatimaS,etal.，iV"de/c爿c/rfs及es，1988，16(5):2350)，受翻译过程所阻遏，与肿瘤生长相关(BohmH，Wa/.，5/oc/^附./",，1989，19:277)，因此被命名为翻译控制肿瘤蛋白(GrossB，Wfl/.，iV"c/e/c^lc/rfsWese<wr/i，1989，17:8367;BommerUA，"fl/.，CW/Mo/B/o/i^,1994，40:633)，但是以后的研究发现TCTP的表达也受转录水平的调控(XuA，etal"丑/oc/w附/，1999，342:683;KangBS，a/.,/Gewe,，1996，18(2):143)。除肿瘤细胞外，TCTP还存在于许多除肾细胞外的人类的正常细胞中(ThawP，etal.，A^^r""肌o/，2001，8(8):701)，并先后在许多生物体内发现TCTP，其中包括植物、蚯蚓、寄生虫、水螅、酵母等。研究表明，TCTP具有多种生物学功能，如细胞外组胺释放(MacDonaldSM，e,fl/"肠歸，1995，269:688)，微管和钙结合蛋白(YannickG，e,fl/"7ow7m/o/CW/S"e""，1999，112:1257)、抗凋亡等(SinhaP，Wfl/"Afo/ec"/fl,(mrf^/oc/^m/cfl/Z^nw/to/^j,2000，121:107)，并且发现TCTP在高等植物中也广泛存在，重金属(Al)胁迫(VladimirE,etal"J^"/vi"/o/fi"A:/7en'附e",^^flMj;，2003，54:2745)、黑暗诱导(KimiyoSO，e"/"CW/尸一o/，1998，39(3):357)均可引起TCTPmRNA的积累和表达。TCTP的这一特性启示我们，它可能也与小麦的抗白粉病特性有关。为此，我们用RACE方法，获得了该基因的全长cDNA，并对该cDNA进行了基因的结构分析、氨基酸序列推导、特征结构预测和白粉菌诱导实验，我们获得了Brock中的TCTP全长基因，功能分析证实了我们的推测，它参与了小麦对白粉菌的抗性反应。
发明内容本发明的目的在于公开了栽培小麦Brock中一个受白粉菌诱导应答的新基因cDNA序列。本发明的另一个目的在于公开了栽培小麦Brock中一个受白粉菌诱导应答的TCTP基因cDNA序列编码的168aa多肽链氨基酸序列。该多肽链具有2个特征结构区(TCTPl和TCTP2)和7个可能的功能位点。本发明的再一个目的在于公开了栽培小麦Brock中一个受白粉菌诱导应答的新基因cDNA序列的获得方法。本发明提供了根据小麦NBS类抗病基因保守序列设计的简并引物，经RT-PCR扩增和RACE技术，获得全长为766bp的完整TCTP基因，与已发表的小麦TCTP基因有98%的同源性，该基因包括一个507bp的开放阅读框，36bp的5'端非翻译区，223bp的3'端非翻译区。编码一个168aa的多肽链氨基酸，与己发表的小麦TCTP基因编码的氨基酸序列有99%的同源性。这是迄今为止在小麦白粉菌诱导下表达上调的又一个新的应答基因。本发明公开的栽培小麦Brock中受白粉菌诱导应答的基因cDNA序列，为小麦抗白粉病分子机理研究提供了可靠的依据，同时拓展了TCTP基因在植物应用中的新功能。本发明的技术方案如下-栽培小麦Brock中一个受白粉菌诱导应答的TCTP基因cDNA序列，其特征在于它与小麦TCTP基因有98X的同源性，cDNA全长766bp;有一个长36bp的S'UTR和长223bp的3'UTR以及长507bp的开放阅读框；编码一个168aa的多肽链，cDNA序列为ACAAGCTTT^CGGCGACGAGCTTCTGTCGGATTCGTTCCCTTACAGGGAGCTGGAGAACGGCGTGCTCTGGGAAGTCGATGGCCATTGGGTCGTTCAAGGAGCAGTTGATGTGGACATTGGAGCCAATCCCTCTGCTGAGGGTGGTGGTGATGATGAGGGTGTTGATGACCAGGCCGTGAAGGTGGTTGACATTGTTGACACCTTCCGTCTTCAGGAGCAACCTGC竹TTGACAAGAAGCAGTTTATCTCTCACATGAAGCAAGAAGAATGTTGAGTCCGCCACAAAGTATCTTCTTAGCAAGCTCAAGGACCTTCAGTTCTTTGTTGGCGAGAGCATGCATGATGATGGCGGCGTGGTGTTCGCCTACTACAAGGAGGGAGCTGCTGATCCAACTTTCCTGTACTTTGCACATGGGCTTTCTGCCCTGTTAAAAAAAAAAAAAAAAAA(SEQIDNO.l)其中上述序列的阴影部分为编码序列，ATG示起始密码子，TAA示终止密码子。本发明的基因编码区长507bp，编码一个长168aa多肽链，多肽链氨基酸序列为MLVYODKLSGDELLSDSFPYRELENGVLWEVDGHWVVOGAVDVDIGANPSAEGGGDDEGVDDOAVKVVDIVDTFRLOEOPAFDKKOFISHMKRY腦LSAKLEGDDLDAFKKNVESATKYIXSKLKDLOFFVGESMHDDGGVVFAYYKEGAADPTFLYFAHGLKEVKC(SEQIDNO.2)TCTP2其中TCTP1、TCTP2为多肽链氨基酸序列的两个结构特征区。本发明所述的栽培小麦Brock中一个受白粉菌诱导应答的TCTP基因cDNA序列，它是用同源克隆技术采用下述方法得到的以抗白粉病普通小麦Brock为材料，提取白粉菌胁迫5天的总体RNA，根据小麦NBS类抗病基因保守序列设计的简并引物，经RT-PCR扩增，获得比预期大、与TCTP基因cDNA有97^同源性的653bpcDNA片段，通过RACE技术，获得全长为766bp的完整TCTP基因，与已发表的小麦TCTP基因有98%的同源性，该基因包括一个507bp的开放阅读框，36bp的5'非翻译区，223bp的3'非翻译区；编码一个168aa的多肽链，与已发表的小麦TCTP基因编码的氨基酸序列有99%的同源性；ScanProsite分析表明，该多肽链具有TCTP1和TCTP2两个特征结构区和7个可能的功能位点，通过7个可能的功能位点以预测这些序列及其编码的基因的生物功能。表达半定量PCR分析表明，Brock中的TCTP基因受白粉菌诱导，并随染菌时间增长，表达量增加。具体的制备方法如下1、所用实验材料为抗白粉病小麦品种Brock，小麦白粉菌15号小种；2、总体RNA的提取采用酸性异硫氰酸胍法，并通过1%的琼脂糖凝胶电泳和1%的变性琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性；3、以感染小麦白粉菌5天的叶片总体RNA为模板，以5，-CCACGCGTCGACTAGTACTTTTTTTTTTTTTTTTT-3，为逆转录引物(SEQIDNO.3),在AMV逆转录酶的作用下，逆转录成cDNA，以Fl:5，-GGIGGIGTIGGNAAAACAAC-3，(SEQIDNO.4)和Rl:5'-GAGAGIGCIAGIGGNAGGCC-3，(SEQIDNO.5)简并引物进行PCR扩增，获得一个长653bp的目标片段，将目标片段回收、纯化、克隆、测序，其碱基序列为CGTGCTCTGGGAAGTCGATGGCCATTGGGTCGTTCAAGGAGCAGTTGATGTGGACATTGGAGCCAATCCCTCTGCTGAGGGTGGTGGTGATGATGAGGGTGTTGGTTGGCGAGAGCATGCATGATGATGGCGGCGTGGTGTTCGCCTACTACAAGGTTAAAAAAAAAAAAAAAAAA(SEQIDNO.6);4、BLAST比对，发现该片段与已发表的小麦TCTP基因有98X的同源性;5、用RACE方法获得该TCTP全长基因为766bp;6、用表达半定量PCR方法检测白粉菌诱导下的表达，发现该TCTP基因随白粉菌15号生理小种诱导时间的加长而表达量增加。本发明栽培小麦Brock中一个受白粉菌诱导应答的TCTP基因cDNA序列，与已发表的小麦TCTP基因序列相比的优点和有益效果我们的前期工作发现，Brock中存在一个强抗白粉病新基因(Wangetal.，PlantProductionScience,2004,7(3):319;Wangetal"PlantProductionScience,2005,8(5):578)，因此，我们试图通过植物抗病基因保守序列NBS结构特点设计简并引物，来尝试克隆Brock中的抗白粉病新基因，结果却得到1条比预期分子量大的cDNA片段，克隆、测序并序列比对后发现其与小麦的TCTP基因有97X的同源性，是BrockTCTP基因的3'末端部分。TCTP基因最初发现于肿瘤组织(GrossB，7V"c/e/c^"Vfa/^efl"A，1989，17:8367),编码翻译控制肿瘤蛋白，后来在其它组织中也相继发现。TCTP是一类广泛存在于动物、植物及酵母菌中的序列上高度保守、表达量很高的蛋白家族，它的表达受转录和翻译2个水平调节，细胞内钙离子浓度，生长因子、环境污染、异常刺激均可影响其表达。最初认为，TCTP是一类生长相关蛋白，近年来的研究则表明，TCTP功能涉及促进组胺释放(MacDonaldSM，Sc/ewce,1995，269:688)、细胞凋亡(SinhaP,Mo/ec"/flrflwrf加0cAem/cfl/i^raw'totog);，2000，121:107)、信号转导等多种生物学功能。在植物中已经发现，黑暗可以诱导牵牛中TCTPmRNA积累(KimiyoSO，户/fl"/CW/iVi"/o/，1998，39(3):357);草莓果实成熟过程中，营养器官内TCTP含量增加(L叩ezAP，户/flwtora附，2006，50(3):447);Al诱导可以使黄豆根内TCTP基因表达的增强(VladimirE，Jo"/7ifl/o/五x/;eW附e"/fiWfl"j;，2003，54:2745)。上述研究表明，植物中，TCTP基因的表达明显受外界环境条件的诱导。为了分析强抗白粉病小麦Brock中TCTP基因是否参与抗性反应，我们在获得了BrockTCTP3'末端后，利用RACE方法，克隆了159bp的5'末端，它的碱基序列为TT(SEOIDNO.7)，其中本序列的3'端与序列SEQIDNO.6的5'端有46bp重叠(划线碱基部分)，因此可以将上述2个序列拼接成一个具有完整阅读框的全长为766bp的BrockTCTP基因cDNA，该cDNA与已发表的小麦TCTP基因(gi/21070378)有98%同源性，编码一个168aa的多肽链，该多肽链与发表的小麦TCTP蛋白的氨基酸序列(AF508970)具有99%的同源性；ScanProsite分析表明，该获得的TCTP推测的氨基酸序列含有2个TCTP特征结构域(TCTP，和TCTP2)以及7个可能的功能单位。表1BrockTCTP基因编码的氨基酸序列功能单位的ScanProsite分析_<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>上述结果表明我们获得了抗白粉病小麦Brock中的TCTP基因。从我们利用表达半定量分析方法检测该基因与白粉菌胁迫的应答关系中发现，经白粉菌诱导后，Brock中的TCTP的mRNA明显积累，并随着诱导时间的延长而积累增加，说明植物中的TCTP基因功能涉及对白粉菌抗性反应。这是迄今为止在小麦白粉菌诱导下表达上调的又一个新的应答基因。该发明为小麦抗白粉病分子机理研究提供了可靠的依据，同时拓展了TCTP基因在植物中的新功能。图l:小麦总RNA的非变性琼脂糖凝胶电泳图；图2:小麦总RNA的变性琼脂糖凝胶电泳图；图3:BrockTCTP3，末端扩增结果；M为DL2000Marker,1为RT-PCR产物；图4:BrockTCTP基因5'末端片段扩增结果，M为DL2000Marker,1为PCR产物；图5:BrockTCTP基因全序列结果，阴影部分为编码序列；图6:BrockTCTP基因编码的多肽链；图7:BrockTCTP基因表达半定量分析，染菌处理的不同时期图。具体实施例方式(结合附图具体说明)为了更充分的解释本发明的实施，提供下述栽培小麦Brock中一个受白粉菌诱导应答的TCTP基因cDNA序列的制备实施实例。这些实施实例仅仅是解释、而不是限制本发明的范围。实施例1、总体RNA的提取普通小麦Brock在温室生长至3叶期时接菌处理。接菌处理5天后剪取叶片提取RNA，具体为(1)称取0.1g小麦叶片，剪碎入预冷过的研钵；(2)加液氮研磨至粉末状，加入lml的SolutionD和7.2fU巯基乙醇，与粉末研至澄清；(3)(以下各步在冰上操作)倒入5ml离心管中，加入10(^12M的NaAC(PH4.0)颠倒数次混匀置冰上；(4)加入等体积的水饱和酚，斡旋器上震荡混匀；(5)加入20(Hil氯仿-异戊醇(49:1),用力震荡混匀；(6)冰浴30mhi，期间颠倒数次，以不出现分层为宜；(7)10000rpm4。C离心20min;(8)取上清，加入等体积的酚仿，再抽提一次，10000rpm4'C离心20min;(9)取上清，加入等体积的异丙醇，-20°C沉淀lh以上；(10)10000rpm4。C离心25min，弃上清；(11)75%乙醇洗2次，除去盐类和其他杂质，离心弃上清，每次10000rpm4'C离心5min;(12)自然干燥10min，视RNA量的多寡加入40~100fil的DEPC处理过的灭菌ddH20。-70°(:保存备用；(13)用紫外分光光度法检测RNA样品的浓度及纯度，并用1%的琼脂糖凝胶电泳和1%的变性琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性，图1为小麦总RNA的非变性琼脂糖凝胶电泳图；图2为小麦总RNA的变性琼脂糖凝胶电泳图。实施例2、反转录主要参阅AMV系统(宝生物工程有限公司)使用说明书。反应体系RNATemplateljig,5xReverseTranscriptionBuffer4pl，dNTPMixture(10mM)2pl,RNaseInhibitor(40U/fil)20U，01igo(dT)18Primer(50fiM)50pmol，AMVReverseTranscriptase(5U/fil)10U，DEPCwater(nuclease-free)补齐到2(Ui1。轻轻搅拌，混匀离心，室温放置lOmin,42'C保温lh，在冰水中冷却2min。反转录产物经过1%琼脂糖凝胶电泳检测质量后，放入-70'C冰箱冻存备用。实施例3、PCR扩增反应体系10xBuffer2.5fil;MgC12(25mM)l单dNTP(10mM)0.5^1，Forwardl(10fiM)2fi1，Forward2(lOfiM)2ftl，反转录产物2fU，Taq(51]*1)0.5fU，ddH20补齐25jd。PCR参数:94°C预变性2min，94。C变性lmin，5(TC退火30s，72'C延伸30s,40cycles;72°C延伸5min。PCR产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳检测扩增片段的大小，是否清晰明亮，回收纯化PCR产物用于克隆测序(图3)。实施例4、PCR产物克隆采用小量DNA片段快速回收试剂盒(Q柱)进行纯化后，将目的片段连接到pGEM-TeasyVector上，转化大肠杆菌。蓝白斑方法筛选阳性克隆子，PCR法和酶切鉴定方法鉴定后，阳性克隆子送上海生工生物工程公司测序。实施例5、小麦BrockTCTP基因5'末端的快速扩增根据GenBank上查询到已发表的一个小麦的TCTP基因序列(gi|21070378)和本克隆的TCTP测序结果，利用专业引物设计软件Primer5.0设计上下游引物5RACEF:5，隱TCCTTTTTCGGGGGAGAAATC-3，(SEQIDNO.8);5RACER:5，-AACTGCTCCTTGAACGACCCA-3，(SEQIDNO.9)。用实施例2获得的cDNA进行PCR，获得目标带(图4)，将目的片段进行纯化、克隆、测序和BLAST比对。实施例6、普通小麦BrockTCTP基因全长cDNA序列获得及结构分析用DNAClub软件对获得的BrockTCTP3'和5，端进行拼接，获得本发明所克隆的TCTP基因全长，共766bp(图5，SEQIDNO.l)。该cDNA与己发表的小麦TCTP基因(gi/21070378)有98%同源性，编码一个168aa的多肽链，该多肽链与发表的小麦TCTP蛋白的氨基酸序列(AF508970)具有99%的同源性；ScanProsite分析表明，该获得的TCTP推测的氨基酸序列含有2个TCTP特征结构域(TCTP1和TCTP2)以及7个可能的功能单位(图6，表l)表l<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>实施例7、小麦BrockTCTP基因表达半定量鉴定主要参阅Maria等(MariaM,2001,3(1):19)的方法。小麦Brock在温室生长至3叶期时进行白粉菌染菌处理接种白粉菌0h、6h、12h和24h，取材后液氮速冻，提取总RNA，反转录引物采用5'-CCACGCGTCGACTAGTACTTTTTTTTTTTTTTTTT-3，(SEQIDNO.3)半定量PCR引物为SEMIF:S，-CGCTACATCAAGAACCTC-3，(SEQIDNO.10)SEMIR:5，-CCACGCGTCGACTAGTAC-3'(SE(JIDNO.ll)PCR参数94°C预变性2min;94°C变性lmin，60°C退火45s，72°C延伸lmin,28cycles;72°C延伸7min。PCR产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳进行检测，结果如图7，染菌处理6h的TCTP基因表达量较对照组中的有所增加，在处理至12h时有显著增加，在24h表达量已经趋于稳定。说明TCTP基因的表达量随染菌时间的增长而增加，并最终达到稳定状态。SEQUENCELISTING<110>天津师范大学<120>栽培小麦Brock中一个受白粉菌诱导应答的基因cDNA序列及其获得方法<160>11<210>1<211>766bp<212>DNA<213>基因序列<220><221>gene<222>(1),.(766)<400>1tcctttttcgggggagaaatctcaagaggcggcaccatgctcgtgtaccaggacaagctt60tccggcgacgagcttctgtcggattcgttcccttacagggagctggagaacggcgtgctc120tgggaagtcgatggccattgggtcgttcaaggagcagttgatgtggacattggagccaat180ccctctgctgagggtggtggtgatgatgagggtgttgatgaccaggccgtgaaggtggtt240gacattgttgacaccttccgtcttcaggagcaacctgcttttgacaagaagcagtttatc300tctcacatgaagcgctacatcaagaacctctctgccaagcttgaaggggatgacctagat360gctttcaagaagaatgttgagtccgccacaaagtatcttcttagcaagctcaaggacctt420cagttctttgttggcgagagcatgcatgatgatggcggcgtggtgttcgcctactacaag480gagggagctgctgatccaactttcctgtactttgcacatgggctgaaagaggtcaagtgc540taatcgcactgtatgctaaaatctatgctgtcttcagtatttttgctcttatctatggtt600gtcagtcgactctccaatgttggtgtcagtaactgtcagatgttgagtgtcttgaaaact660ttctgataattgtgggatttgctttgtaatggtaatcgtgaaattggtgtggttgtgttt720tggttg加tc加g:ig8ttctgccctgttaaa肌肌itaa3aaaaaaa766<210>2<211>168bp<212>PRT<213>人工序列<220><221>CHAIN<222>(l)..(阔<400>2MetLeuValTyrGinAspLysLeuSerGlyAspGluLeuLeuSerAsp151015SerPheProTyrArgGluLeuGluAsnGlyValLeuTrpGluValAsp202530GlyHisTrpValValGinGlyAlaValAspValAsplieGlyAlaAsn354045ProSerAlaGluGlyGlyGlyAspAspGluGlyValAspAspGinAla505560ValLysValValAsplieValAspThrPheArgLeuGinGluGinPro65707580AlaPheAspLysLysGinPhelieSerHisMetLysArgTyrlieLys859095AsnLeuSerAlaLysLeuGluGlyAspAspLeuAspAlaPheLysLys100105110AsnValGluSerAlaThrLysTyrLeuLeuSerLysLeuLysAspLeu115120125GinPhePheValGlyGluSerMetHisAspAspGlyGlyValValPhe130135140AlaTyrTyrLysGluGlyAlaAlaAspProThrPheLeuTyrPheAla145150155160HisGlyLeuLysGluValLysCys165168<210>3<211>35bp<212>DNA<213>人工序列<400>3ccacgcgtcgactagtacttttttttttttttttt35<210>4<211>20bp<212>DNA<213>人工序列<400>4ggiggigtiggnaaaacaac20<210>5<211>20bp<212>DNA<213>人工序列<400>5gagagigciagiggnaggcc20<210>6<211>653bp<212>DNA<213>基因序列<400>6cgtgctctgggaagtcgatggccattgggtcgttcaaggagcagttgatgtggacattgg60agccaatccctctgctgagggtggtggtgatgatgagggtgttgatgaccaggccgtgaa120ggtggttgacattgttgacaccttccgtcttcaggagcaacctgcttttgacaagaagca180gtttatctctcacatgaagcgctacatcaagaacctctctgccaagcttgaaggggatga240cctagatgctttcaagaagaatgttgagtccgccacaaagtatcttcttagcaagctcaa300ggaccttcagttctttgttggcgagagcatgcatgatgatggcggcgtggtgttcgccta360ctacaaggagggagctgctgatccaactttcctgtactttgcacatgggctgaaagaggt420caagtgctaatcgcactgtatgctaaaatctatgctgtcttcagtatttttgctcttatc480tatggttgtcagtcgactctccaatgttggtgtcagtaactgtcagatgttgagtgtctt540gaaaactttctgataattgtgggatttgctttgtaatggtaatcgtgaaattggtgtggt600tgtgttttggttgaatcaagagattctgccctgttaaaaaaaaaaaaaaaaaa653<210>7<211>159bp<212>DNA<213>基因序列<400>7tcctttttcgggggagaaatctcaagaggcggcaccatgctcgtgtaccaggacsagctt60tccggcgacgagcttctgtcggattcgttcccttacagggagctggagaacggcgtgctc120tgggaagtcgatggccattgggtcgttcaaggagcagtt159<210>8<211>21bp<212>DNA<213>人工序列<400>8tcctttttcgggggagaaatc21<210>9<211>21bp<212>DNA<213>人工序列<400>9aactgctccttgaacgaccca21<210>10<211>18bp<212>DNA<213>人工序列<400>10cgctacatcaagaacctc18<210>11<211>18bp<212>DNA<213>人工序列<400>11ccacgcgtcgactagtac18权利要求1、栽培小麦Brock中一个受白粉菌诱导应答的基因cDNA序列，其特征在于它与小麦TCTP基因有98％的同源性，cDNA全长766bp；有一个长36bp的5’UTR和长223bp的3’UTR以及长507bp的开放阅读框；编码一个168aa的多肽链，cDNA序列为TCCTTTTTCGGGGGAGAAATCTCAAGAGGCGGCACCTCGCACTGTATGCTAAAATCTATGCTGTCTTCAGTATTTTTGCTCTTATCTATGGTTGTCAGTCGACTCTCCAATGTTGGTGTCAGTAACTGTCAGATGTTGAGTGTCTTGAAAACTTTCTGATAATTGTGGGATTTGCTTTGTAATGGTAATCGTGAAATTGGTGTGGTTGTGTTTTGGTTGAATCAAGAGATTCTGCCCTGTTAAAAAAAAAAAAAAAAAA其中上述序列的阴影部分为编码序列，ATG示起始密码子，TAA示终止密码子。2、如权利要求1所述的栽培小麦Brock中一个受白粉菌诱导应答的基因cDNA序列，其特征在于，该基因的编码区长507bp，编码168aa多肽链的氨基酸序列为MLVY⑨KLSGDELLSDSFPYRELENGVLWEVDGHWVVOGAVDVDIGANPSAEG^DDEGVDDQAVKVVDIVDTFRLQEQPAFDKKQFIS頭KRYIKNLSAKLEGDDLDAFKKNVESATKYLLSKLKDLOFFVGESMHDDGGVVFAYYKEGAADPTFLYFAHGLKEVKC窗2其中TCTP1、TCTP2为多肽链氨基酸序列的两个结构特征区。3、如权利要求1或2所述的栽培小麦Brock中一个受白粉菌诱导应答的基因cDNA序列，其特征在于，它是用同源克隆技术采用下述方法得到的以抗白粉病普通小麦Brock为材料，提取白粉菌胁迫5天的总体RNA,根据小麦NBS类抗病基因保守序列设计的简并引物，经RT-PCR扩增，获得比预期大、与TCTP基因cDNA有97^同源性的653bpcDNA片段，通过RACE技术，获得全长为766bp的完整TCTP基因，与己发表的小麦TCTP基因有98%的同源性，该基因包括一个507bp的开放阅读框，36bp的5'非翻译区，223bp的3'非翻译区编码一个168aa的多肽链，与已发表的小麦TCTP基因编码的氨基酸序列有99^的同源性；ScanProsite分析表明，该多肽链具有TCTP1和TCTP2两个特征结构区和7个可能的功能位点；表达半定量PCR分析表明，Brock中的TCTP基因受白粉菌诱导，并随染菌时间增长，表达量增加。全文摘要本发明公开了栽培小麦Brock中一个受白粉菌诱导应答的基因序列和推测的氨基酸序列。它与小麦TCTP基因有98％的同源性，cDNA全长766bp；有一个长36bp的5’UTR和长223bp的3’UTR以及长507bp的开放阅读框；编码一个168aa的多肽链，与已发表的小麦TCTP基因编码的氨基酸序列有99％的同源性。ScanProsite分析表明，该多肽链具有2个特征结构区(TCTP1和TCTP2)和7个可能的功能位点。表达半定量PCR分析表明，Brock中的TCTP基因受白粉菌诱导，并随染菌时间增长，表达量增加。这是迄今为止在小麦白粉菌诱导下表达上调的又一个新的应答基因。该发明为小麦抗白粉病分子机理研究提供了可靠的依据，同时拓展了TCTP基因在植物中的新功能。文档编号C07K14/415GK101126091SQ200710058140公开日2008年2月20日申请日期2007年7月16日优先权日2007年7月16日发明者彭永康,刚李,王振英申请人:天津师范大学