专利名称：：炎琥宁及其冻干粉针剂的制备方法
技术领域：
：本发明涉及炎琥宁及其冻干粉针剂的制备方法。技术背景炎琥宁，其化学名称为14-脱羟-11，12-二脱氢穿心莲内酯-3，19-二琥珀酸半酯钾钠盐，分子式为C28H34KNa01()*H20，结构式如式(I)所示；它是由从中药穿心莲中提取的二萜化合物穿心莲内酯经结构改造而制成的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐，具有抗菌、解毒、消炎的作用。式(I)炎琥宁能抑制早期毛细血管通透性增高与炎性渗出及水肿，能特异性地兴奋垂体-肾上腺皮质功能，促进ACTH释放，增加垂体前叶中ACTH的生物合成；体外具有灭活腺病毒、流感病毒、呼吸道病毒等多种病毒的作用。临床用于病毒性肺炎，病毒性上呼吸道感染及菌痢等。在实践中，炎琥宁不仅对某些病毒和细菌有直接的杀灭作用，而且能够提高人体对疾病的防御和抵抗能力，全面治疗各种细菌和病毒对人体造成的损伤(尤其是易发生变异的病毒)。临床应用具有副作用小、无耐药性、疗效可靠、产品质量稳定的特点，是中医急诊中较为常用和理想的药物之一，打破了认为中药只能用来治疗慢性病的传统说法。虽然炎琥宁注射剂具有很好的临床疗效，但由于原料纯度、工艺等原因，注射剂中会含有大量的杂质(有关物质)，这样极大的影响了制剂的安全性，同时会给患者带来许多过敏反应，影响了疗效，严重者会带来过敏性休克，威胁患者的生命。现有明确的研究资料显示中药制剂的疗效和安全性与其"有关物质"有一定的线性关系，对中药提取物的纯度要求就比较高，因此把"有关物质"控制在一定限度下显得尤其重要。炎琥宁及其冻干粉针制剂现行的制备方法较简单，且不可控因素太多。具体方法为将氢氧化钠和穿琥宁投入容器中，加适量的水，搅拌使溶解，完全溶解后，溶液澄清过滤，浓縮，减压干燥即得炎琥宁；再将炎琥宁溶于水，搅拌使溶解，完全溶解后，溶液澄清过滤，灌装，冻干即得炎琥宁制剂。上述制备方法，由于局部的碱性太大，使得炎琥宁可能发生酯分解和裂环反应，再加上减压干燥可能使水分含量较高，以至所得的炎琥宁原料在外观、溶液颜色，尤其有关物质项，不符合质量标准，会大大增加患者使用过程中发生过敏等不良反应的风险，同时炎琥宁原料的收率也比较低。
发明内容本发明的目的是提供炎琥宁及其冻干粉针剂的制备方法。本发明所提供的炎琥宁的制备方法，是将穿琥宁溶于所述穿琥宁4-5倍质量的注射用水中，然后用O.l—0.2mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至7.1—7.5;然后加入活性炭除杂质，接着依次用0.45pm、0.22pm的微孔滤膜过滤，收集滤液，将滤液进行冷冻干燥处理，即得到炎琥宁。本发明所提供的炎琥宁冻干粉针剂，是由下述原料经冷冻干燥制成；所述原料包括下述质量份的炎琥宁、氯化钠和注射用水炎琥宁4-20质量份氯化钠1-5质量份注射用水200-300质量份。其中，所述原料优选包括炎琥宁4质量份氯化钠1质量份注射用水60-200质量份。所述原料还可包括pH调节剂，具体可为0.10.2mol/L的氢氧化钠溶液或盐酸溶液。所述原料中炎琥宁与氯化钠的质量分数比为4:1。制备所述炎琥宁冻干粉针剂的方法，是将所述量的炎琥宁和所述量的氯化钠溶于45-6(TC的注射用水中，混匀后加入所述溶液质量的0.1%的针用活性炭，将溶液的pH值用所述pH调节剂调至6.46.8，补充注射用水至所述量；过滤脱炭，再依次用0.22)tim的微孔滤膜过滤、截留分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤、0.22nm的微孔滤膜过滤，收集滤液，冷冻干燥得到炎琥宁冻干粉针剂。当冻干粉针剂的原料中炎琥宁与注射用水的质量份数比为1:(25-50)时，所述冷冻干燥采用下述方法进行第一阶段预冻采用慢冻的方式，用4小时将产品温度由2(TC线性降温至-45°C，并在-45'C保持1.5小时，不需抽真空；第二阶段升华干燥用1.25小时将温度由-45'C线性升温至-12"C，并在-12匸维持8小时；真空度为14-22Pa;第三阶段解析干燥将温度由-12。C线性升温至33。C，进行7小时，并在33t:维持1~2小时；真空度1.0-5.0Pa。当冻干粉针剂的原料中炎琥宁与注射用水的质量份数比为1:(15-18.75)时，所述冷冻干燥采用下述方法进行第一阶段预冻采用反复预冻的方式(即将产品线性地从2(TC降温至-45r，然后再升温至-l(TC，最后再降温至-45"C)，预冻8小时，将产品温度由2(TC降温至-45。C;第二阶段升华干燥用1.5小时将温度由-45。C线性升温至-12X:，并在-12'C维持12-15小时；然后用l小时将温度由-12。C线性升温至-5'C，并在-5"C维持6-8小时；真空度14-22Pa;第三阶段解析干燥将温度由-5。C线性升温至33r，进行4小时，并在33。C维持6-8小时；真空度1.0-5.0Pa。上述冻干粉针剂中所用的炎琥宁，按照本发明中所提供的制备炎琥宁的方法制备。本发明用穿琥宁与氢氧化钠反应制备炎琥宁，其反应方程式如下:在炎琥宁的制备方法中，使用较稀的氢氧化钠溶液并且采用后加的方式，减4了穿琥宁和炎琥宁的水解，同时也减少了杂质；控制溶解后的溶液pH值在7.l7.5，使穿琥宁成盐完全，增大其溶解性，同时也减少了炎琥宁中的穿琥宁含量；使用的活性炭既能脱去了色素杂质，也能吸附其中的杂质；通过0.45pm的膜粗滤脱去活性炭及其吸附的杂质，通过O.22nm的膜精滤去除了细菌和颗粒较细的不溶性杂质；通过冷冻干燥降低了水分，减少炎琥宁的水解，增加其稳定性，利于贮藏。炎琥宁冻干粉针剂的制备过程中，使用西林瓶，采用超声波洗瓶，四水四冲，35(TC以上6分钟灭菌干燥，保证清洁无异物；采用全自动清洗机清洗胶塞，保证了无附着物、无粘连；选用氯化钠作为起骨架作用的赋形剂，使制品保持块状，且疏松、易溶；所使用的注射用水，采用现制现用，85。C以上循环使用。对原料、辅料、内包材等进行的上述处理，减少了杂质的引入和同时防止了可能发生的反应。炎琥宁冻干粉针剂的制备过程中，控制配液罐的温度在456(TC，是为了使炎琥宁在溶解形成溶液的过程中不至于因温度太高而降解，也不至于因温度太低而形成胶体状态而结合较多的水；加入所述溶液质量0.1%的针用活性炭，虽然对主药有吸附，但为了降低可能的杂质，使用它来吸附色素和杂质；把药液的pH值控制在6.46.8，一是静脉输注用注射液一般要求pH值在4-9之间，二是通过工艺研究，在pH值6.46.8的条件下，炎琥宁溶液是最稳定的；对药液的过滤，采用四级工艺，一是脱炭过滤，去除活性炭及其吸附的杂质，二是0.22pm微孔滤膜过滤，去除细菌和大直径物质，减轻超滤膜负荷，三是10000道尔顿分子量的超滤膜超滤，去除内毒素等大分子物质，提高澄清度，四是再过0.22jim微孔滤膜过滤，去除细菌，消除浓度梯度，提高澄明度。采用这样的配滤工艺，减少了杂质的引入，防止细菌，同时提高炎琥宁在溶液状态下的稳定性。制备炎琥宁冻干粉针剂中冷冻干燥的步骤，按照制剂规格和灌装量的不同，并根据其共晶点温度制定了不同的冻干工艺曲线，控制了冻干制品的水分限度，降低了局部溶化的可能性，并提高了稳定性。冻干后得到的产品采用真空状态下压塞，包装后成品在阴凉干燥处贮存，是为了排除主药的氧化降解，温度、湿度、光照对主药的影响，提高稳定性。本发明制备的炎琥宁及其冻干制剂——注射用炎琥宁，由于采用了上述各种有效的控制措施，使注射用炎琥宁的"有关物质"控制在1%以下，大大提高了注射用炎琥宁在临床应用时的疗效和安全性，而将"有关物质"项控制在1%以下的标准在国内目前是最高标准，同时也提高了炎琥宁的含量，增强了疗效。图1为炎琥宁冻干粉针剂的制备工艺流程图。图2为实施例1的冻干曲线。图3为实施例2的冻干曲线。图4为实施例4的冻干曲线。具体实施方式实施例l、炎琥宁的制备将5g氢氧化钠溶于625ml注射用水中，得到浓度为0.2mol/L的氢氧化钠溶液，备用。将70g的穿琥宁(成都天台山制药有限公司，国药准字H51023411)溶于375ml注射用水中，在搅拌状态下加入上述氢氧化钠溶液，调节pH值至7.3。然后加入所述溶液质量0.1%的活性炭，于室温下搅拌20min，过0.45pm微孔滤膜粗滤，再过0.22pm微孔滤膜精滤，将滤液进行冷冻干燥，得到淡黄色的粉末，即为炎琥宁。冷冻干燥按照冻干曲线图2操作第一阶段预冻釆用慢冻的方式，用3小时将产品温度由2(TC线性降温至-45°C，并在-45'C保持2小时，不需抽真空；第二阶段升华干燥用2小时将温度由-45'C线性升温至-12"C,并在-12'C维持6小时；真空度为14-22Pa;第三阶段解析干燥用7小时将温度由-12。C线性升温升至33X:，并在33。C维持2小时；真空度1.0-5.0Pa。采用分光光度法测定炎琥宁的含量，具体方法为取本品28mg，精密称定，置1000ml量瓶中，加稀乙醇适量使溶解，加醋酸0.1ml，用稀乙醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取5ml，置50ml量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀；作为供试品溶液。另精密称取以五氧化二磷为干燥剂在6(TC减压干燥至恒重的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯对照品适量，按同法制成每lml中含25昭的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶液，照分光光度法在251nm的波长处测定吸收度，计算求得供试品中脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯的含量与1.1128相乘，即得供试品中炎琥宁C28H34KNa01()的重量，实验设三次重复，按干品计算结果分别为96.32%、97.11%、96.70%。表明实施例1所制备的炎琥宁的含量为96.71±0.39%。采用电阻法测得炎琥宁的共晶点为-l(TC。具体方法如下1、电阻测定法原理物料在冻结过程中，温度降到冰点，物料中水分开始生成冰晶。随着温度的下降，冰晶越来越多，物料的电阻也越来越大。当温度降到某一点的时候，物料的电阻值突然增大，此时的温度就是物料的共晶点。2、试验物料预处理将实施例1制备的炎琥宁溶于水，配制成设定浓度(72.0mg/ml78.0mg/ml)的溶液，然后放入冻结箱内进行冻结，液体厚度以20mm25mm为宜铺放在托盘中。3、实验结果从多次的实验过程来看，并不象理论分析的那样有一个特别明显的电阻值突变点，可能是诸多因素的影响，物料的电阻值突变值发生在降温过程的一个温度区间里，为了保证物料的完全冻结，我们取该温度区间的下限作为该物料的共晶点。实施例2、规格为40mg的炎琥宁冻干粉针剂的制备按照图1的制备工艺流程制备炎琥宁冻干粉针剂，具体方法如下将1600ml注射用水加入配液灌中，开启搅拌，控制配液罐的温度在45-55'C。准确称取炎琥宁40g，加入上述配液灌中搅拌至溶解。准确称取氯化钠10g，溶解于200ml注射用水中，加入上述配液罐中。将配液罐中的溶液搅拌均匀后，加入所述溶液质量的0.1%针用活性炭，搅拌回流15min，用0.10.2mol/L的盐酸溶液调节药液的pH值为6.46.8，然后用注射用水补足至2000ml。过滤脱碳，接着依次用0.22jiim微孔滤膜过滤、用分子截留量为10000道尔顿的超滤膜超滤、再用0.22]am微孔滤膜过滤，至滤液澄明。取样，测得上述滤液中炎琥宁的含量为19.420.6mg/ml。将滤液分成1000份，分别无菌灌装于西林瓶中，半加塞，放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥，得冻干产品。冷冻干燥按照冻干曲线图3操作第一阶段预冻采用慢冻的方式，用4小时将产品温度由2(TC线性降温至-45°C，并在-45'C保持1.5小时，不需抽真空；第二阶段升华干燥用1.25小时将温度由-45t:线性升温至-12t:，并在-12"维持8小时；真空度为14-22Pa;第三阶段解析干燥将温度由-12。C线性升温至33。C，进行7小时，并在33r维持1~2小时；真空度1.0-5.0Pa。炎琥宁的含量，按干品计，在冻干前后没有变化。冻干后，炎琥宁复溶情况良好，按时溶解，未见不溶物。主要项目检查及加速试验结果、长期试验结果如下表1注身用炎琥宁加速试验结果(40mg)批号时间(月)性状酸碱度(pH值)可见异物无菌有关物质(%)标示量(%)0淡黄色块状物6.78符合规定符合规定0.5799.831淡黄色块状物6.72符合规定符合规定0.6299.7506020112淡黄色块状物6.70符合规定符合规定0.6599.633淡黄色块状物6.77符合规定符合规定0.7099.606淡黄色块状物6.75符合规定符合规定0.8099.480淡黄色块状物6.74符合规定符合规定0.6199.891淡黄色块状物6.79符合规定符合规定0.6599.8606020212淡黄色块状物6.77符合规定符合规定0.6899.783淡黄色块状物6.72符合规定符合规定0.7399.726淡黄色块状物6.70符合规定符合规定0.7899.660淡黄色块状物6.72符合规定符合规定0.60100.081淡黄色块状物6.76符合规定符合规定0.67100.0106020312淡黄色块状物6.76符合规定符合规定0.7099.943淡黄色块状物6.73符合规定符合规定0.7699.876淡黄色块状物6.75符合规定符合规定0.8099.79表2注身j"用炎琥宁-长期试验结果(40mg)批号时间(月)性状酸碱度(pH值)可见异物无菌有关物质(%)标7K量(%)0淡黄色块状物6.78符合规定符合规定0.5799.833淡黄色块状物6.60符合规定符合规定0.6199.716淡黄色块状物6.72符合规定符合规定0.6599.6806020119淡黄色块状物6.69符合规定符合规定0.6899.6312淡黄色块状物6.68符合规定符合规定0.7399.5818淡黄色块状物6.75符合规定符合规定0.7699.5424淡黄色块状物6.78符合规定符合规定0.7899.50<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>实施例3、规格为80mg的炎琥宁冻干粉针剂的制备将1600ml注射用水加入配液灌中，开启搅拌，控制配液罐的温度在45-55r。准确称取炎琥宁80g，加入上述配液灌中搅拌至溶解。准确称取氯化钠20g，溶解于200ml注射用水中，加入上述配液罐中。将配液罐中的溶液搅拌均匀后，加入所述溶液质量的0.1%针用活性炭，搅拌回流15min，用0.10.2mol/L的盐酸溶液调节药液的pH值为6.46.8，然后用注射用水补足至2000ml。过滤脱碳，接着依次用0.221im微孔滤膜过滤、用分子截留量为10000的超滤膜超滤、再用0.22nm微孔滤膜过滤，至滤液澄明。取样，测得上述滤液中炎琥宁的含量为38.841.2mg/ml。将滤液分成1000份，分别无菌灌装于西林瓶中，半加塞，放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥，得冻干产品。冷冻干燥按照实施例2中冻干曲线图3操作。炎琥宁的含量，按干品计，在冻干前后没有变化。冻干后，炎琥宁复溶情况良好，按时溶解，未见不溶物。主要项目检査及加速试验结果、长期试验结果如下表3<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>实施例4、规格为160mg的炎琥宁冻干粉针剂的制备将2400ml注射用水加入配液灌中，开启搅拌，控制配液罐的温度在55-60。C。准确称取炎琥宁160g，加入上述配液灌中搅拌至溶解。准确称取氯化钠40g，溶解于300ml注射用水中，加入上述配液罐中。将配液罐中的溶液搅拌均匀后，加入所述溶液质量的0.1%针用活性炭，搅拌回流15min，用0.10.2mol/L的盐酸溶液调节药液的pH值为6.46.8，然后用注射用水补足至3000ml。过滤脱碳，接着依次用0.22pm微孔滤膜过滤、用分子截留量为10000的超滤膜超滤、再用0.22|nm微孔滤膜过滤，至滤液澄明。取样，测得上述滤液中炎琥宁的含量为51.854.9mg/ml。将滤液分成1000份，分别无菌灌装于西林瓶中，半加塞，放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥，得冻干产品。冷冻干燥按照冻干曲线图4操作第一阶段预冻采用反复预冻(即将产品线性地从20。C-45。C-1(TC-45。C)的方式，预冻8小时，将产品温度由2(TC降温至-45"C;第二阶段升华干燥用1.5小时将温度由-45"C线性升温至-12'C，并在-12。C维持12-15小时；然后用1小时将温度由-12。C线性升温至-5t:,并在-5X:维持6-8小时；真空度14-22Pa;第三阶段解析干燥将温度由-5。C线性升温至33。C，进行4小时，并在33。C维持6-8小时；真空度1.0-5.0Pa。炎琥宁的含量，按干品计，在冻干前后没有变化。冻干后，炎琥宁复溶情况良好，按时溶解，未见不溶物。主要项目检査及加速试验结果、长期试验结果如下表5注射用炎琥宁加速试验结果(O.16g)批号时间(月)性状酸碱度(pH值)可见异物无菌有关物质(%)标示i(%)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>实施例5、规格为200mg的炎琥宁冻干粉针剂的制备将2400ml注射用水加入配液灌中，开启搅拌，控制配液罐的温度在55-60°C。准确称取炎琥宁200g，加入上述配液灌中搅拌至溶解。准确称取氯化钠50g，溶解于300ml注射用水中，加入上述配液罐中。将配液罐中的溶液搅拌均匀后，加入所述溶液质量的0.1%的针用活性炭，搅拌回流15min，用0.10.2mol/L的盐酸溶液调节药液的pH值为6.46.8，然后用注射用水补足至3000ml。过滤脱碳，接着依次用0.22pm微孔滤膜过滤、用分子截留量为10000的超滤膜超滤、再用0.22pm微孔滤膜过滤，至滤液澄明。取样，测得上述滤液中炎琥宁的含量为64.768.6mg/ml。将滤液分成1000份，分别无菌灌装于西林瓶中，半加塞，放入冷冻干燥机中进行冷冻干燥，得冻干产品。冷冻干燥按照实施例4中冻干曲线图4操作。炎琥宁的含量，按干品计，在冻干前后没有变化。冻干后，炎琥宁复溶情况良好，按时溶解，未见不溶物。主要项目检查及加速试验结果、长期试验结果如下表7注射用炎琥宁加速试验结果(0.2g)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表8注射用炎琥宁长期试验结果(0.2g)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>权利要求1.炎琥宁的一种制备方法，是将穿琥宁溶于所述穿琥宁4-5倍质量的注射用水中，然后用0.1-0.2mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至7.1～7.5；然后加入活性炭除杂质，接着依次用0.45μm、0.22μm的微孔滤膜过滤，收集滤液，将滤液进行冷冻干燥处理，即得到炎琥宁。2、一种炎琥宁冻干粉针剂，是由下述原料经冻干制成；所述原料包括下述质量份的炎琥宁、氯化钠和注射用水3、根据权利要求2所述的冻干粉针剂，其特征在于所述原料包括下述质量份的炎琥宁、氯化钠和注射用水4、根据权利要求2或3所述的冻干粉针剂，其特征在于所述原料还包括pH调节剂；所述原料中炎琥宁与氯化钠的质量分数比为4:1。5、根据权利要求4所述的冻干粉针剂，其特征在于所述pH调节剂为O.l0.2mol/L的氢氧化钠溶液或盐酸溶液。6、根据权利要求2-5中任一所述的冻干粉针剂，其特征在于所述炎琥宁由权利要求1所述的方法制备。7、制备权利要求2-6中任一所述的冻干粉针剂的方法，是将所述量的炎琥宁和所述量的氯化钠溶于45-6(TC的注射用水中，混匀后加入所述溶液质量的0.1%的针用活性炭，用所述pH调节剂将溶液的pH控制在6.46.8，补充注射用水至所述量；过滤脱炭，再依次用0.22pm的微孔滤膜过滤、截留分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤、0.22pm的微孔滤膜过滤，收集滤液，冷冻干燥得到炎琥宁冻干粉针剂。8、根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述冻干粉针剂的原料中炎琥宁与注射用水的质量份数比为1:(25-50)，所述冷冻干燥采用下述方法进行第一阶段预冻用4小时将产品温度由2(TC线性降温至-45'C，并在-45X:保持炎琥宁氯化钠注射用水4-20质量份1-5质量份200-300质量份。炎琥宁氯化钠注射用水4质量份l质量份60-200质量份。1.5小时，不需要抽真空；第二阶段升华干燥用1.25小时将温度由-45"C线性升温至-12X:，并在-12°。维持8小时；真空度为14-22Pa;第三阶段解析干燥将温度由-12。C线性升温至33t:，进行7小时，并在33。C维持1~2小时；真空度1.0-5.0Pa。9、根据权利要求8所述的方法，其特征在于所述冻干粉针剂的原料中炎琥宁与注射用水的质量份数比为1:(15-18.75)，所述冷冻干燥采用下述方法进行第一阶段预冻采用反复预冻的方式，将产品从2(TC线性降温至-45t:，然后再从-45。C线性升温至-l(TC，最后再从-l(TC线性降温至-45"C，预冻8小时；第二阶段升华干燥用1.5小时将温度由-45'C线性升温至-12"C，并在-12'C维持12-15小时；然后用1小时将温度由-12T:线性升温至-5^，并在-5。C维持6-8小时；真空度14-22Pa;第三阶段解析干燥将温度由-5。C线性升温至33。C，进行4小时，并在33。C维持6-8小时；真空度1.0-5.0Pa。10、根据权利要求7-9中任一所述的方法，其特征在于所述炎琥宁由权利要求1所述的方法制备。全文摘要本发明公开了炎琥宁及其冻干粉针剂的制备方法。该炎琥宁的制备方法，是将穿琥宁溶于所述穿琥宁4-5倍质量的注射用水中，然后用0.1-0.2mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至7.1～7.5；然后加入活性炭除杂质，然后依次用0.45μm、0.22μm的微孔滤膜过滤，收集滤液，将滤液进行冷冻干燥处理，即得到炎琥宁。炎琥宁冻干粉针剂的制备方法是将炎琥宁和氯化钠溶于45-60℃的注射用水中，混匀后加入所述溶液质量的0.1％的针用活性炭，将溶液的pH控制在6.4～6.8，补充注射用水至所述量；过滤脱炭，再依次用0.22μm的微孔滤膜过滤、截留分子量为10000道尔顿的超滤膜超滤、0.22μm的微孔滤膜过滤，收集滤液，冷冻干燥得到炎琥宁冻干粉针剂。文档编号C07D307/58GK101270101SQ20081010605公开日2008年9月24日申请日期2008年5月8日优先权日2008年5月8日发明者周庆柱,煜张,范建飞申请人:海南斯达制药有限公司