专利名称：昆虫c-型凝集素重组表达方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物工程技术领域，涉及生物工程技术领域中的DNA重组表达技术及应用， 具体涉及一种C-型凝集素及其功能域的重组表达的创制方法及应用。
背景技术：
动物免疫系统分为先天性和获得性两部分，先天免疫在多细胞生物进化的早期出现， 不仅存在于脊推动物、无脊推动物，也存在于植物中，而获得性免疫只存在于脊椎动物中。 先天免疫是昆虫等无脊椎动物抵御病源生物入侵和危害的唯一途径。先天免疫包括细胞免疫 和体液免疫两个途径，其基本过程是首先由模式识别受体识别外来异物，称为感染的非己 识别，随后引发激活丝氨酸蛋白酶和解除丝氨酸蛋白酶抑制剂的细胞外级联反应，从而将受 到感染的信号放大为更强的"危险"信号或解除错误警报，然后引发信号转导途径而导致免 疫基因的转录并产生免疫应答。先天免疫反应的策略不在于它们能识别每一个可能的抗原， 而是能够识别在微生物中普遍存在的高保守的共有结构。这些结构被称为病原相关分子模式 (pathogen assiciated molecular patterns, PAMPs)，而先天免疫系统中能够识别这些分子模式的 受体称为模式识别受体(pattem recognition rec印tors, PRRs)。对病原微生物表面独特分子结构 的识别是先天免疫识别的基础。其中，感染的非己识别对于缺少适应性免疫的无脊椎动物尤 为重要。非己识别是因为模式识别受体可以识别或结合那些微生物表面保守的、而在宿主中 又不存在的病原相关分子模式。最广泛和有效的识别自己和非己的方法就是识别病原微生物 表面的碳水化合物结构。 '
C-型凝集素(C-type lectin)是先天免疫反应中的一种模式识别受体，在Ca"存在下 能特异的识别病原微生物表面的糖类物质，引起宿主的一系列免疫反应从而有效地抵抗病原 微生物的入侵。无脊椎动物中C-型凝集素家族在免疫相关时期高表达，原因是可以以其特 有的碳水化合物识别结构域CRD结合微生物表面碳水化合物，在免疫反应的非己识别中起重 要作用。C-型凝集素(C-type lectin)从1988年被定义名称以来，已经发现有一千多种。 全基因组序列研究表明，C-型凝集素从蠕虫，果蝇到脊椎动物，虽然不完全相同，但不同 C-型凝集素的碳水化合物识别结构域CRD序列(carbohydrate recognition domain, CRD) 具有相对保守的氨基酸残基，C-凝集素的碳水化合物结合活性是通过碳水化合物识别结构域 来实现的，因此，重组表达凝集素全长基因(含结构域)或仅表达凝集素的碳水化合物识别
4结构域均可以获得有活性的产物。
家蚕等经济家养昆虫在养殖过程中遭受各种病源生物危害，对蚕业生产造成严重经济损 失，迫切需要高效无害的药物来防治病害。虽然已经有家蚕等昆虫的凝集素克隆和功能研究 的报道，但目前为止没有关于昆虫凝集素的重组表达和用于感染性疾病防治的研究报道。特 别是棉铃虫凝集素基因是我们首次克隆得到并进行重组表达和功能研究。用于棉铃虫在长期 自然选择和人为使用各种微生物农药的选择下形成了极强的抗逆性，在免疫基因方面进化成 了比家蚕等养殖昆虫更强的免疫功能，并且棉铃虫和家蚕都是属于鳞翅目昆虫，基因的相似 性较高，因此通过生物工程技术生产的棉铃虫O型凝集素较从其它生物来源的凝集素具有 更好的抗病能力，可以用于家蚕等养殖昆虫的病害防治。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种家养昆虫感染性病害使用的生物药物， 用于家蚕等养殖经济昆虫的感染性病害防治。
本发明在大肠杆菌中重组表达了棉铃虫C-型凝集素(Ha-lectin)基因及该基因的两个 碳水化合物识别结构域(carbohydrate-recognition domains, CRD) Ha-CRD1和Ha-CRD2， 实验结果证明在大肠杆菌中重组表达的棉铃虫C-型凝集素(Ha-lectin)基因及两个结构域 Ha-CRD1和Ha-CRD2有帮助昆虫抵抗病源生物侵袭的功能，可以用于经济昆虫如家蚕在养殖 生产中的病害防治。
本发明提供基因重组表达棉铃虫C-型凝集素及该基因的两个碳水化合物识别结构域 Ha-CRDl和Ha-CRD2的生物药物，其特征是，将棉铃虫C-型凝集素基因及该基因的两个碳水 化合物识别结构域Ha-CRDl和Ha-CRD2,重组表达到大肠杆菌中。
优选的，所述棉铃虫(We"comr; aar/w'ger3) C-型凝集素(Ha-lectin)基因为Ha-Lect (基因全序列已经由我们提交到GenBank， http:〃www. ncbi. nlm. nih，接受号DQ533877)。 在大肠杆菌中重组表达棉铃虫C-型凝集素(Ha-lectin)全长基因、功能域、以及在上述基 因的基础上进行修饰或碱基突变产生的基因，获得重组蛋白凝集素或凝集素功能域。碳水化 合物识别结构域Ha-CRDl (全长Ha-Lect(接受号DQ533877)中的第30个氨基酸至第156个 氨基酸的序列)和Ha-CRD2 (全长Ha-Lect(接受号DQ533877)中的第68个氨基酸至第307 个氨基酸的序列)
本发明还提供一种基因重组表达棉铃虫c-型凝集素及该基因的两个碳水化合物识别结
构域Ha-CRDl和Ha-CRD2的方法，包括如下步骤针对插入表达载体的Ha-Lect、 Ha-CRDl和Ha_CRD2的基因序列分别设计带酶切位点的引物，用PCR方法分别扩增Ha-Lect及Ha-CRD1和Ha-CRD2;在大肠杆菌中扩增并提取表达载体-Ha-Lect、表达载体-Ha-CRD1和表达载体-Ha-CRD2质粒；将表达载体-Ha-Lect、表达载体-Ha-CRD1和表达载体-Ha-CR&质粒分别转入宿主
体内'用诱导物诱导表达用Ni2'柱或其它填料纯化重组rHa-Lect、 rHa-CRD1和rHa-CRD2。 所述诱导物为IPTG (异丙基硫代-p-D-半乳糖苷的縮写)、甲醇或其它化合物。 其中，步骤[l]中所述表达载体选自大肠杆菌表达载体、酵母表达载体、或昆虫杆状病毒
载体。优选的，大肠杆菌表达载体选自pET系列载体或pGEX系列载体,酵母表达载体选自
pPIC系列载体。
其中，步骤[l]中所述Ha-Lect、 Ha-CRDl和Ha-CRD2为Ha-Lect基因(GenBank， http:〃ww.ncbi.nlm.nih，接受号DQ533877)及其基础上进行修饰或碱基突变产生的基 因。
其中，步骤[2]中所述大肠杆菌表达菌株为任何大肠杆菌表达菌株，优选DH5oc。
其中，步骤[3]中所述宿主为大肠杆菌、酵母菌或其它表达生物。所述大肠杆菌，优选
BL21 (DE3);所述酵母菌，优选毕赤酵母(A'c/w'a pastor/s);所述其它表达生物，优选
昆虫细胞。
本发明还提供所述基因重组表达Ha-Lect及该基因的两个碳水化合物识别结构域 Ha-CRDl和Ha-CRD2的生物药物的应用，其特征是，用于防治家养昆虫感染性病害。所述家 养昆虫选自家蚕、棉铃虫、甜菜夜蛾。 '
利用本发明的方法创制的基因重组rHa-lectin、 rHa-CRD1和rHa-CRD2凝集素，可以用
于家蚕等家养经济昆虫的感染性病害防治。
将rHa-lectin、 rHa-CRD1和rHa-CRD2与病源生物共同注射到昆虫幼虫体内，可以减少 由病源生物引起的幼虫死亡率，减少幅度为50~70%。
将rHa-lectin、 rHa-CRD1和rHa-CRD2与病源生物共同注射到昆虫幼虫体内，可以增加 幼虫血细胞对病源生物的吞噬能力，增加幅度为40~60%。
将rHa-lectin、 rHa-CRDl和rHa-CRD2与病源生物共同注射到昆虫幼虫体内，可以减少 病源生物在体内的存活数量，减少幅度为50~70%。
所述昆虫选自棉铃虫、家蚕、甜菜夜蛾。所述病源生物选自苏云金杆菌苏云金杆菌 (Sac///us ^2w〃'"g/ew^), 克雷伯氏菌(X7e^n'e〃a pwewwo"/ae), 白色念球菌(Q "c /(iara化z'03M5)，纟录〈畺菌ifetar力jf么ii//77. 3/7J'sop7ise, 白僵菌^esi/Fer/s力assj'a/ 3。
将rHa-lectin、 rHa-CRD1和rHa-CRD2添加到灭菌冷却至37°C的人工养殖的昆虫的饲
料中，lmg/L,防治微生物对家蚕等人工养殖昆虫的感染。所述人工养殖的昆虫选自棉铃虫、
家蚕、甜菜夜蛾。所述微生物选自苏云金杆菌(Sflc///^ Z/mn'"gz'ew^),绿僵菌(i/efr力i^/湖
朋is。A/i3e)， 白僵菌(5e3t/mris Z as57-朋a)。
该发明所创制的基因重组rHa-lectin、 rHa-CRD1和rHa-CRD2凝集素的思路、基因和方
法都是由我们首次报道。 '
本发明所述的基因重组rHa-lectin、 rHa-CRD1和rHa-CRD2凝集素，可以减少病源生物
对昆虫的致死率，增加血细胞对病源生物的吞噬效率，减少病源生物在虫体中的生存数量。
防治昆虫细菌性疾病的传统方法主要是使用抗生素，如添食氯霉素、红霉素、土霉素，这
样的方法会导致耐药菌产生，抗生素对昆虫的正常生命活动也会产生不利影响。我们发明的
昆虫凝集素属于生物药物，昆虫凝集素是昆虫本身存在的抵御微生物浸染的天然物质，通过
生物技术方法重组表达生产的昆虫凝集素可以补充昆虫体内的凝集素的不足。重组表达的
凝集素通过取食或呼吸进入虫体后通过凝集入侵的细菌从而增加血细胞对细菌的吞噬，不会
导致耐药菌产生，对昆虫本身的正常生命活动没有不良影响，使用该药物可以减少抗生素
的使用，减少环境中耐药菌的产生。
具体实施例方式
下面结合实验，对利用本发明的方法得到的基因重组昆虫凝集素的作用作进一步的说明。
方法(1):设计l对带有酶切位点的引物扩增C-型凝集素基因成熟肽(84-1013 bp)，' 即去掉信号肽部分。引物如下LectEco: 5， -TACTCAGAATTCGCGTTTACATGCGACTAC-3， (￡boR I) ; LectXho: 5' -TACTCACTCGAGTTATTCAACTTTGTTATT-3， (J/ o I) ， PCR反应，条件 为94。C 30 sec， 60°C 45 sec, 72°C 1 min， 72°C 10 min。将PCR片段和pET-30a(+)载体 分别用^coRI和"wl酶切，由L DNA连接酶将纯化的cDNA片段与纯化的pET-30a(+)载体 连接，将连接产物转化E. coW DH5 a ，筛选阳性克隆，提取质粒，取l pL构建好的表达质 粒，稀释10倍，转化表达菌株E. co7i BL21(DE3)感受态细胞，在LB/Kan培养基中培养， 加入终浓度为0. 5 mM的IPTG诱导插入基因的表达，取诱导后的菌液，6000 rpm离心5 min， 收集菌体，用3ml PBS(140 mM NaCl, 2. 7 mM KC1, 10 raM N&HP04， 1.8 mM KH2P04, pH7. 4) 和30 pi 20% Triton X-100，充分混匀，冰浴超声破碎10 min，破碎好的菌体4°C， 12， 000 rpm离心20 min，分别收集上清和沉淀，用镍亲和柱纯化重组蛋白。方法(2):设计1对带有酶切位点的引物扩增rHa-CRD1，引物如下CRDlEco: 5， -TACTCAGAATTCTGCGACTACAMTACAGTCTA-3， WcoRI ， CDRlXho
5， -TACTCACTCGAGAAAGCAGATGTAAGGTCTGGG-3， JZ oI，后面的步骤同方法(1)。
方法(3):设计1对带有酶切位点的引物扩增rHa-CRD2， 引物如下CRD2Eco 5， -TACTCAGAATTCTGTGGTACTCCTGATGATGGA-3， ￡c。RI , CDR2Xho
5， -TACTCACTCGAGCTCACAAATGAATGGAGCTGG-3， 7力o1,后面的步骤同方法(1)。
方法(4):将rHa-lectin、 rHa-CRDl和rHa-CRD2 (每只幼虫0. 5 ng' 3 fjg or 15 jag) 与Bt (30个/幼虫)混合，注射到昆虫幼虫(如棉铃虫)体内，24和48小时后统计死亡 率，与a射生理盐水的对照组比较。
方法(5):将rHa-lectin、 rHa-CRDl和rHa-CRD2 〔每只幼虫3吗)与Bt (30个/ 幼虫)混合，注射到昆虫幼虫(如棉铃虫)体内，24小时后取出血淋巴，用生理盐水稀释 后涂布在LB平板(W蛋白胨，0.5%酵母提取物，1% NaCl, 1.5%琼脂，pH 7.0),计数统 计菌数。
方法(6):将Bt用70%乙醇处理10分钟，收集细胞，加入丫啶橙(1 pg/ml)染色5 分钟，收集细胞在生理盐水中洗3次，将rHa-lectin、 rHa-CRD1和rHa-CRD2 (每只幼虫5 叫)与Bt (lxl07幼虫)混合，注射到昆虫幼虫(如棉铃虫)体内，24小时后取出血淋巴 和血细胞，在显微镜下观察统计與细胞吞噬细菌的数量。
方法(7):将rHa-lectin、 rHa-CRD1和rHa-CRD2添加到人工养殖的昆虫的词料中，.防 治微生物对家蚕等人工养殖昆虫的感染。
方法(8):将rHa-lectin、 rHa-CRDl和rHa-CRD2喷雾到人工养殖的昆虫的饲料ji,防' 治微生物对家蚕等人工养殖昆虫的感染。 实施例l '
设计1对带有酶切位点的引物扩增C-型凝集素基因成熟肽(84 - 1013 bp)，即去掉信号 肽部分。引物如下LectEco: 5， -TACTCAGAATTCGCGTTTACATGCGACTAC-3， (iboR I); LectXho: 5' -TACTCACTCGAGTTATTCMCTTTGTTATT-3' (J力o I) ， PCR反应，条件为94°C 30 sec, 60'C45sec， 72X 1 min， 72。C10min。将PCR片段和pET-30a(十)载体分别用fcoRI 和J力ol酶切，由L DNA连接酶将纯化的cDNA片段与纯化的pET-30a(+)载体连接，将连接 产物转化E. coW DH5a ，筛选阳性克隆，提取质粒，取1 pL构建好的表达质粒，稀释10 倍，转化表达菌株E. co"'BL21(DE3)感受态细胞，在LB/Kan培养基中培养，加入终浓度为 0. 5 mM的IPTG诱导插入基因的表达，取诱导后的菌液，6000 rpm离心5 min,收集菌体，用3ml PBS (140 mM NaCl， 2. 7 raM KC1， 10 mM Na2HP04， 1. 8 mM KH2P04， pH7. 4)和30 |al 20% Triton X-IOO，充分混匀，冰浴超声破碎10 min,破碎好的菌体4°C, 12， 000 rpm离心20 min，分别收集上清和沉淀，用镍亲和柱纯化重组蛋白。
实施例2
设计1对带有酶切位点的引物扩增rHa-CRD1 ， 引物如下CRDlEco : 5' -TACTCAGAATTCTGCGACTACAAATACAGTCTA-3' ￡coRI ， CDRlXho
5' -TACTCACTCGAGAAAGCAGATGTAAGGTCTGGG-3 ， ，后面的步骤同实施例1 。
实施例3
设计1对带有酶切位点的引物扩增rHa-CRD2 ， 引物如下CRD2Eco 5' -TACTCAGAATTCTGTGGTACTCCTGATGATGGA-3， ￡coRI ， CDR2Xho
5， -TACTCACTCGAGCTCACAAATGAATGGAGCTGG-3' J/wI，后面的步骤同实施例1。 实施例4
将rHa-lectin、 rHa-CRD1和rHa-CRD2添加到人工养殖的昆虫(如家蚕)的饲料中，1 mg/L，防治微生物对家蚕等人工养殖昆虫的感染。试验发现该方法可以减少环境中病源微 生物引起的家蚕感染性疾病的发生，如绿霉菌感染和苏云金杆菌感染，发病率减少60%。 实施例5
在实施例l、 2、 3的基础上，突变基因，获得表达产物，具有相同的防治微生物感染的 功效。如1)将基因中任一编码氨基酸的密码子的第3位碱基突变而不改变氨基酸，获得 具有相同氨基酸序列的rHa-lectin、 rHa-CRD1和rHa-CRD2，如将tac， aca， gtt， ttt， tgc (分 别编码Y 、 T、 V、 F、 C氨基酸)，突变成tat， act、 c、 g， gtc、 a、 g， ttc， tgt(仍然分别编' 码Y 、 T、 V、 F、 C氨基酸)，基因中其它序列也如此；2)将基因中的部分序列缺失，获 得具有相同功效的rHa-lectin、 rHa-CRD1和rHa-CRD2， 如将基因编码框中的第1-78碱基 缺失、或将第473-503碱基缺失、或将第926-1010碱基缺失，获得具有相同功效的 rHa-lectin; 3)将基因编码蛋白质中的氨基酸突变而获得具有相同功效的rHa-lectin、 rHa-CRD1和rHa-CRD2，如将S L L T K突变成S L L A K，基因编码蛋白质中的其它氨基酸 突变也如此。 实施例5
在实施例l、 2、 3的基础上，换用其它表达载体，如pGEX系列载体、酵母表达载体如 pPIC系列载体、以及昆虫杆状病毒载体，获得相同功能的凝集素产物。 实施例6在实施例1、 2、 3的基础上，换用其它表达系统，如酵母表达系统、昆虫细胞表达系统， 获得相同功能的凝集素产物。 实施例7给药方式
将rHa-lectin (每只幼虫15吗)与Bt (30个/幼虫)混合，注射到昆虫幼虫(如棉 铃虫)体内，减少感染死亡率。试验发现与注射生理盐水的对照组比较，48小时后统计 死亡率从97%降低到23%。注射rHa-CRD2 (每只幼虫15吗)与Bt (30个/幼虫)混合， 与注射生理盐水的对照组比较，48小时后统计死亡率从97%降低为38. 2%。
方法(5):将rHa-lectin、 rHa-CRD1和rHa-CRD2 (每只幼虫3 jig)与Bt (30个/ 幼虫)混合，注射到昆虫幼虫(如棉铃虫)体内，24小时后取出血淋巴，用生理盐水稀释 后涂布在LB平板(W蛋白胨，0. 5%酵母提取物，1% NaCl， 1. 5%琼脂，pH 7. 0)，计数统 计菌数。试验发现与注射生理盐水的对照组比较，血淋巴中细菌数从3.87xl()S个/pl降低 为2.77 0.93xl()5个尔l。 '
将Bt用70%乙醇处理10分钟，收集细胞，加入丫啶橙(1叫/ml)染色5分钟，收集 细胞在生理盐水中洗3次，将rHa-lectin、 rHa-CRD1和rHa-CRD2 (每只幼虫5 pg)与Bt (lxl07幼虫)混合，注射到昆虫幼虫(如棉铃虫)体内，24小时后取出血淋巴和血细胞， 在显微镜下观察统计血细胞吞噬细菌的数量。试验发现与注射生理盐水的对照组比较，吞 噬细菌的血细胞的数量从19.02 %增加到54.41%。
将rHa-lectin、 rHa-CRD1和rHa-CRD2添加到人工养殖的昆虫的饲料上，防治微生物对 家蚕等人工养殖昆虫的感染。试验发现该方法使昆虫感染性疾病的发生从90%降低到30%。
权利要求
1. 一种基因重组表达棉铃虫C-型凝集素及该基因的两个碳水化合物识别结构域Ha-CRD1和Ha-CRD2的生物药物，其特征是，将棉铃虫C-型凝集素基因及该基因的两个碳水化合物识别结构域Ha-CRD1和Ha-CRD2，重组表达到大肠杆菌中。
2. 如权利要求1所述的一种基因重组表达棉铃虫C-型凝集素及该基因的两个碳水化合 物识别结构域Ha-CRD1和Ha-CRD2的生物药物，其特征是，所述棉铃虫C-型凝集素基因为 Ha-Lect、在大肠杆菌中重组表达棉铃虫C-型凝集素全长基因、功能域、以及在上述基因的 基础上进行修饰或碱基突变产生的基因，获得重组蛋白凝集素或凝集素功能域。
3. —种基因重组表达棉铃虫C-型凝集素及该基因的两个碳水化合物识别结构域 Ha-CRD1和Ha-CRD2的方法，包括如下步骤[1]针对插入表达载体的Ha-Lect、 Ha-CRD1和Ha-CRD2的基因序列分别设计带酶切位 点的引物，用PCR方法分别扩增Ha-Lect及Ha-CRD1和Ha-CRD2;[2]在大肠杆菌中扩增并提取表达载体-Ha-Lect、表达载体-Ha-CRDl和表达载体-Ha-CRD2质粒；[3]将表达载体-Ha-Lect、表达载体-Ha-CRD1和表达载体-Ha-CRD2质粒分别转入宿主 体内，用诱导物诱导表达；[4]用附2+柱或其它填料纯化重组rHa-Lect、 rHa-CRD1和rHa-CRD2。
4. 如权利要求3所述的基因重组表达棉铃虫C-型凝集素及该基因的两个碳水化合物识 别结构^Ha-CRDl和Ha-CRD2的方法，其特征是，步骤[3]中所述诱导物为IPTG、甲醇或其 它化合物。
5. 如权利要求3所述的基因重组表达棉铃虫C-型凝集素及该基因的两个碳水化合物识 别结构域Ha-CRDl和Ha-CRD2的方法，其特征是，步骤[l]中所述表达载体选自大肠杆菌表 达载体、酵母表达载体、或昆虫杆状病毒载体。优选的，大肠杆菌表达载体选自pET系列载 体或pGEX系列载体，酵母表达载体选自pPIC系列载体。
6. 如权利要求3所述的基因重组表达棉铃虫C-型凝集素及该基因的两个碳水化合物识 别结构域Ha-CRDl和Ha-CRD2的方法，其特征是，步骤[l]中所述Ha-Lect、Ha-CRDl和Ha-CRD2 为Ha-Lect基因及其基础上进行修饰或碱基突变产生的基因。
7. 如权利要求3所述的基因重组表达棉铃虫C-型凝集素及该基因的两个碳水化合物识 别结构域Ha-CRD1和Ha-CRD2的方法，其特征是，步骤[2]中所述大肠杆菌表达菌株为DH5a。
8.如权利要求3所述的基因重组表达棉铃虫C-型凝集素及该基因的两个碳水化合物识别结构域Ha-CRDl和Ha-CRD2的方法，其特征是，步骤[3]中所述宿主为大肠杆菌、酵母菌 或其它表达生物；所述大肠杆菌，优选BL21 (DE3);所述酵母菌，优选毕赤酵母(Wc/n'a / a"on's);所述其它表达生物,优选昆虫细胞。
9. 如权利要求1所述的基因重组表达棉铃虫C-型凝集素及该基H的两个碳水化合物识 别结构域Ha-CRD1和Ha-CRD2的生物药物的应用，其特征是，用于防治家养昆虫感染性病害。 所述家养昆虫选自家蚕、棉铃虫、甜菜夜蛾。
10. -如权利要求9所述的基因重组表达棉铃虫C-型凝集素及该基因的两个碳水化合物 识别结构域Ha-CRD1和Ha-CRD2的生物药物的应用，其特征是，将rHa-lectin、 rHa-CRD1 和rHa-CRD2与病源生物共同注射到昆虫幼虫体内，所述昆虫选自棉铃虫、家蚕、甜菜夜蛾； 所述病源生物选自苏云金杆菌苏云金杆菌、克雷伯氏菌、白色念球菌、绿僵菌、或白僵菌；或将rHa-lectin、 rHa-CRDl和rHa-CRD2添加到灭菌冷却至37°C的人工养殖的昆虫的 饲料中，lmg/L;所述人工养殖的昆虫选自棉铃虫、家泰、甜菜夜蛾；所述微生物选自苏云 金杆菌、绿僵菌或白僵菌。
全文摘要
本发明属于生物工程技术领域，提供一阵基因重组表达棉铃虫C-型凝集素及该基因的两个碳水化合物识别结构域Ha-CRD1和Ha-CRD2的生物药物，将棉铃虫C-型凝集素基因及该基因的两个碳水化合物识别结构域Ha-CRD1和Ha-CRD2重组表达到大肠杆菌中。还提供基因重组表达棉铃虫C-型凝集素及该基因的两个碳水化合物识别结构域Ha-CRD1和Ha-CRD2的方法。本发明的凝集素，可以减少病源生物对昆虫的致死率，增加血细胞对病源生物的吞噬效率，减少病源生物在虫体中的生存数量。不会导致耐药菌产生，对昆虫本身的正常生命活动没有不良影响，使用该药物可以减少抗生素的使用，减少环境中耐药菌的产生。
文档编号C07K14/435GK101434955SQ200810238560
公开日2009年5月20日 申请日期2008年12月18日 优先权日2008年12月18日
发明者王金星, 赵小凡 申请人:山东大学