专利名称：新型jnk抑制剂分子的制作方法
新型JNK抑制剂分子本发明涉及酶抑制领域，尤其涉及C-Jun氨基末端激酶(JNK)的(多_)肽抑制剂。本发明还涉及培养抗这种(多_)肽抑制剂的抗体的方法，以及对应的抗体和生产所述抗体的细胞。C-Jun氨基末端激酶(JNK)是丝裂原活化蛋白(MAP)激酶的应激活化群组的成员。这些激酶已经涉及对细胞生长和分化的控制，更广泛地说，涉及细胞对环境刺激的反应。JNK信号传导路径通过对环境应激的反应而被激活，并通过几种类型的细胞表面受体的结合而被激活。这些受体可以包括细胞因子受体、螺旋受体和受体酪氨酸激酶。在哺乳动物细胞中，JNK已经被涉及在生物过程如致癌性转化中，并调节对环境应激的适应性反应。已经将JNK与调节免疫反应相关联，包括免疫细胞的成熟和分化，以及影响识别免疫系统破坏的细胞中的程序性细胞死亡。丝裂原活化蛋白质激酶(ΜΑΡΚ)ρ38α显示出通过对抗JNK-c-Jun-路径而负面调节细胞增殖。丝裂原活化蛋白质激酶(ΜΑΡΚ)ρ38α因此看上去在抑制正常和癌症细胞增殖中是起作用的(例如见Hui等人，Nature Genetics, Vol 39，No. 6，2007年6月)。还示出的是，c-Jun N-末端激酶(JNK)涉及由脊神经结扎(SNL)造成的神经性疼痛，其中SNL诱导JNK尤其是JNKl的缓慢和持续性的活化，而在SNL之后在脊髓小胶质细胞中发现P38丝裂原活化蛋白质激酶活化，其在21天降至接近基础水平(Zhuang等人，The Journal of Neuroscience，2006 年 3 月 29 日，26 (13) :3551-3560))。作为现有技术中已知的JNK信号路径的抑制剂，尤其包括例如上游激酶抑制剂(例如CEP-1347) JNK的小的化学抑制剂(SP600125和AS601245)，其直接影响激酶活性例如通过与蛋白质激酶的ATP-结合位点竞争；以及JNK和其底物之间相互作用的肽抑制剂(例如见Kuan 等人，Current Drug Targets-CNS & Neurological Disorders, 2005年 2 月，第4卷，第I号，第63-67页；WO 2007/031280 ;全部通过引用并入本文)。WO 2007/031280公开了小的细胞渗透性融合肽，包括来源于HIV-TAT蛋白质的基础运输序列的所谓的TAT转运序列、和IBl的氨基酸抑制性序列。WO 2007/031280 公开了尤其是两种特殊的序列L_TAT_IB1 (GRKKRRQRRRPPRPKRPTTLNLFPQVPRSQD,本文的 SEQ ID NO: 196)和 D-TAT-1Bl (dqsrpvcjpflnlttprkprpprrrqrrkkrg，本文的SEQ ID NO :197)，后一种是L-TAT-1Bl的逆反序列。由于HIV TAT衍生的转运序列，所以这些融合肽更有效地转运至靶细胞中，在那里保持有效直至蛋白质降解。由于JNK的ATP独立的肽抑制剂通常是更特殊的抑制剂，如果要抑制JNK它们经常是第一选择。然而，甚至WO 2007/031280中公开的肽抑制剂也不是最理想的。例如，只由L-氨基酸构成的复合物L-TAT-1B1(本文的SEQ ID NO :196)快速地蛋白质降解。为了克服这个问题，WO 2007/031280的发明人还提出了 D-TAT-1B1(本文的SEQ ID N0:197)，其包括D-氨基酸。更准确地，D-TAT-1Bl显示出L-TAT-1Bl的逆反(retro-1nverso)序列。D-氨基酸的引入由于立体化学的改变可能导致功能丧失的事实而变得困难。逆反方法可以用于降低所述风险，这是因为使用i)只是D-氨基酸ii)但是在反向肽序列中，与将一个或更多个D-氨基酸引入原始序列中相比，可以更有可能产生原始肽的可接受的构象类似物。 在TO 2007/031280的情况下，该方法带来了与L-TAT-1Bl相比抑制能力上的显著降低(见图4)。另外，逆反肽对蛋白质消化极其稳定，结果是例如在时间敏感的试验中控制的消化几乎是不可能的。因此，本领域仍然需要比例如L-TAT-1Bl (本文为SEQ ID NO :196)更稳定的JNK的肽抑制剂。另一方面，需要比例如D-TAT-1B1(本文为SEQ IDNO 197)更有效同时比其更不稳定的JNK的肽抑制剂。因此，本发明要解决的问题是提供另外的JNK的(肽)抑制剂，它对蛋白水解降解优选不如WO 2007/031280中公开的L-TAT-1Bl敏感，但同时优选比WO 2007/031280中公开的D-TAT-1Bl对蛋白质水解降解更敏感和/或更有活性。本发明的目的由发明人借助于所附的权利要求中列出的主题得以解决。下面给出对附图的简要说明。附图旨在更详细地说明本发明。但附图不旨在以任 何方式限制本发明的主题。
图1 :几种根据本发明的JNK抑制剂的抑制效率的图解说明，通过体外AlphaScreen试验(增强的发光临近均相筛选试验(AmplifiedLuminescence ProximityHomogeneous-Screen Assay))进行调查研究。图1A :通过 SEQ ID NO :193、2、3、5、6 和 7 对 JNKl 的抑制。图1B :通过 SEQ ID NO :193、2、3、5、6 和 7 对 JNK2 的抑制。图1C :通过 SEQ ID NO :193、2、3、5、6 和 7 对 JNK3 的抑制。图2 :表格说明了几种根据本发明的JNK抑制剂(SEQ ID NO :193、2、3、5、6和7)的抑制效率。给出的是nM范围内的IC50值，平均值的各个标准误差和所实施的试验数目(n)。图3 :几种根据本发明的JNK抑制剂的抑制效率的图解说明，它们是JNK抑制性(多-)肽序列和转运序列的融合蛋白。借助体外AlphaScreen试验(AmplifiedLuminescence Proximity Homogeneous-Screen Assay,增强的发光临近均相筛选试验)确定抑制效率。图 3A:通过 SEQ ID NO : 194、195、172、200、46、173、174、175、176、177、178、179、180、181和197对JNKl的抑制。图 3B:通过 SEQ ID NO : 194、195、172、200、46、173、174、175、176、177、178、179、180、181和197对JNK2的抑制。图 3C:通过 SEQ ID NO : 194、195、172、200、46、173、174、175、176、177、178、179、180、181和197对JNK3的抑制。图 3D:通过 SEQ ID NO : 194、195、172、200、46、182、183、184、185、186、187、188、189、190和197对JNKl的抑制。图 3E:通过 SEQ ID NO : 194、195、172、200、46、182、183、184、185、186、187、188、189、190和197对JNK2的抑制。图 3F:通过 SEQ ID NO : 194、195、172、200、46、182、183、184、185、186、187、188、189、190和197对JNK3的抑制。图4 :表格说明了几种根据本发明的JNK抑制剂的抑制效率，它们是JNK抑制性(多_)肽序列和转运序列的融合蛋白。给出的是nM范围内的IC50值，平均值的各个标准误差和所实施的试验数目(n)。
图5 :具有SEQ ID NO :172,196和197的JNK抑制剂在50%人血清中的稳定性。具有SEQ ID NO :196的JNK抑制剂在6个小时内完全降解为氨基酸残基(A)。具有SEQ IDNO :172的JNK抑制剂只有在14天之后才完全降解⑶。具有SEQ ID NO :197的JNK抑制剂稳定至少长达30天(B)。图6 :示出内化实验，其使用TAT衍生的转运体构建如SEQ ID NO :30中表示的D-氨基酸/L-氨基酸模型。经分析的转运序列对应于SEQ IDNO :52-94加上SEQ ID NO:45、47、46、43和99(图6a)以及SEQ ID NO :100-147 (图6b)。如可以看出的，具有共有序列rXXXrXXXr (SEQ ID NO :31)的所有转运体表现出比L-TAT转运体(SEQ ID NO 43)更高的内化能力。在包含IOmM各种转运体的96孔板中将Hela细胞孵育24小时。随后用酸性缓冲液(O. 2M甘氨酸，O. 15M NaCl,pH 3. O)清洗细胞两次和用PBS清洗细胞两次。通过添加RIPA裂解缓冲液使细胞破裂。然后通过读取每种提取物的荧光强度(Fusion Alpha读 板仪；PerkinElmer)随后进行背景扣除来确定内化的肽的相对量。图7具有SEQ ID NO :172序列的JNK抑制剂阻断LPS-诱导的细胞因子和趋化因子在THPl-PMA-分化的巨噬细胞中释放。图7A :TNF释放(THPlpma 6h 3ng/ml LPS);图7B:TNFa 释放(THPlpma 6h 10ng/ml LPS) ^7C:1L 6 释放(THPlpma 6h lOng/ml LPS)；图 7D MCP1 释放(THPlpma6h 3ng/ml LPS)。图8SEQ ID NO :172的JNK抑制剂阻断LPS-诱导的IL6在THPl分化的巨噬细胞中释放，且比D-TAT-1B I (SEQ ID NO :197)、dTAT (SEQ IDNO :45)和 SP 600125 的潜能更高。添加 LPS 6 小时(10ng/ml)。图9SEQ ID NO :172的JNK抑制剂阻断LPS-诱导的TNF α在THPl分化的巨噬细胞中释放，且比 D-TAT-1Bl (SEQ ID NO : 197)、dTAT (SEQ IDNO 45)和 SP 600125 的潜能更高。添加LPS 6小时(10ng/ml)。图1OSEQ ID NO :172的JNK抑制剂阻断LPS-诱导的IL-6在PMA分化的巨噬细胞中释放，且比 D-TAT-1Bl (SEQ ID NO :197)和 L-TAT-1Bl (SEQ ID NO :196)的潜能更高。添加LPS 6小时。图1lSEQ ID NO :172的JNK抑制剂阻断LPS-诱导的TNF α在PMA分化的巨噬细胞中释放，且比 D-TAT-1Bl (SEQ ID NO :197)和 L-TAT-1B1 (SEQ ID NO :196)的潜能更高。图12SEQ ID NO :172的JNK抑制剂阻断3ng/ml的LPS-诱导的TNFa在原代大鼠全血细胞中释放。给出的是在不同的LPS水平(ng/ml)下对照、I μ M SEQ ID Ν0:172、3μΜSEQ ID NO :172 和 10 μ M SEQ ID NO :172 的结果。图13SEQ ID NO :172的JNK抑制剂阻断通过人类原代T-细胞对PMA/离子霉素的反应的IL2分泌。图14SEQ ID NO : 172的JNK抑制剂阻断通过人类原代T-细胞对⑶3/⑶28刺激的反应的IL2分泌。通过它们的SEQ ID NO :172和197指出所用的JNK抑制剂。图15具有SEQ ID NO :172的JNK抑制剂对大鼠原代淋巴结纯化的T细胞中⑶3/CD28-诱导的IL-2释放的剂量-依赖性抑制。将对照大鼠牺牲并收集淋巴结。进一步纯化T-细胞(使用磁性阴性选择)并以200. 000细胞/孔放入96孔板。用抗-大鼠⑶3和抗-大鼠⑶28抗体(2 μ g/mL)处理细胞。在⑶3/⑶28处理之前I小时将具有SEQ ID NO 172的JNK抑制剂添加到培养物中，并在处理之后24小时评价上清液中的IL-2释放。
图16大鼠原代淋巴结纯化的T细胞中⑶3/⑶28-诱导的IL_2释放的剂量-依赖性抑制几种JNK抑制剂的比较，也就是SEQ ID NO : 172、197和SP600125。图17用PMA+离子霉素刺激的大鼠全血中IL-2释放的剂量依赖性抑制。在用PMA+离子霉素刺激之前I小时，以三种不同的浓度(即1、3和IOiiM)添加具有SEQ ID NO :172的JNK抑制剂。添加三种剂量的活化剂(25/500ng/mL、50/750ng/mL和50/1000ng/mL) 4小时。在上清液中评价IL-2释放。具有SEQ ID NO :172的JNK抑制剂在IOii M时确实有效地降低了三种被测试的活化剂浓度下PMA-离子霉素诱导的IL-2释放。图18人类全血中的JNK抑制和IL-6释放。在用LPS (0. 02ng/mL)进行4小时全血刺激之前I小时，以三种不同浓度(即1、3和10 u M)添加具有SEQ ID NO :172的JNK抑制剂。具有SEQ ID NO :172的JNK抑制剂确实以剂量-依赖方式降低了 LPS-诱导的IL-6释放。图19人类全血中的JNK抑制和IL-2释放。在用PMA+离子霉素(25/700ng/mL、 50/800ng/ml和50/1000ng/mL)进行4小时全血刺激之前I小时，以三种不同浓度(即1、3和10 u M)添加具有SEQ ID NO :172的JNK抑制剂。具有SEQ ID NO :172的JNK抑制剂确实以剂量-依赖方式降低了 PMA+离子霉素诱导的IL-2释放。图20人类全血中的JNK抑制和IFN- y释放。在用PMA+离子霉素(25/700ng/mL、50/800ng/ml和50/1000ng/mL)进行4小时全血刺激之前I小时，以三种不同浓度(即1、3和10 u M)添加具有SEQ ID NO :172的JNK抑制剂。具有SEQ ID NO :172的JNK抑制剂确实以剂量-依赖方式降低了 PMA+离子霉素诱导的IFN-Y释放。图21人类全血中的JNK抑制和TNF-a释放。在用PMA+离子霉素(25/700ng/mL、50/800ng/ml和50/1000ng/mL)进行4小时全血刺激之前I小时，以三种不同浓度(即1、3和10 u M)添加具有SEQ ID NO :172的JNK抑制剂。具有SEQ ID NO :172的JNK抑制剂确实以剂量-依赖方式降低了 PMA+离子霉素诱导的TNF- a释放。图22人类全血中的JNK抑制和TNF- a释放。在用PHA-L (5 U g/mL)进行3天的全血刺激之前I小时，以三种不同浓度(即1、3和10 u M)添加具有SEQ ID NO :172的JNK抑制剂。具有SEQ ID NO :172的JNK抑制剂确实以剂量-依赖方式降低了 PHA-L诱导的TNF-a释放。图23人类全血中的JNK抑制和IL-2释放。在用PHA-L (5 u g/mL)进行3天的全血刺激之前I小时，以三种不同浓度(即1、3和10 u M)添加具有SEQ ID NO :172的JNK抑制剂。具有SEQ ID NO :172的JNK抑制剂确实以剂量-依赖方式降低了 PHA-L诱导的IL-2释放。图24人类全血中的JNK抑制和TNF- a释放。在用⑶3+/-⑶28抗体(2 ii g/mL)进行3天的全血刺激之前I小时，以三种不同浓度(即1、3和10 u M)添加具有SEQ ID NO 172的JNK抑制剂。具有SEQ ID NO :172的JNK抑制剂确实以剂量-依赖方式降低了⑶3/⑶28诱导的TNF-a释放。JNK抑制剂本发明的第一方面涉及JNK抑制剂，其包括根据下列通式的抑制性(多_)肽序列X1-X2-X3-R-X4-X5-X6-L-X7-L-X8(SEQ ID NO 1),
其中Xl是选自氨基酸R、P、Q和r的氨基酸，其中X2是选自氨基酸R、P、G和r的氨基酸，其中X3是选自氨基酸K、R、k和r的氨基酸，其中X4是选自氨基酸P和K的氨基酸，其中X5是选自氨基酸T、a、S、q、k的氨基酸，或者是不存在的，其中X6是选自氨基酸T、D和A的氨基酸，其中X7是选自氨基酸N、n、r和K的氨基酸；和其中X8是选自F、f和w的氨基酸， 条件是至少一种、至少两种、至少三种、至少四种、至少五种或六种选自X1、X2、X3、X5、X7和X8的氨基酸是D-氨基酸，优选地条件是，至少一种、至少两种、至少三种或四种选自X3、X5、X7和X8的氨基酸是D-氨基酸。根据本发明的JNK抑制剂的抑制性(多_)肽序列包括L-氨基酸和在大多数实施方案中包括D-氨基酸。除非特殊指出，在本文中用大写字母表示L-氨基酸残基，而用小写字母表示D-氨基酸残基。甘氨酸可以用大写或小写字母表示(由于没有D-或L-甘氨酸)。除非特殊指出，本文公开的氨基酸序列通常从N-端至C-端(从左到右)给出。所给出的氨基酸序列在C-端和/或N-端可以是经修饰或未经修饰的，例如在C-端乙酰化和/或在N-端酰胺化或用巯基乙胺化(cysteamide)修饰。为了清楚起见,本文公开的氨基酸序列的C-端和/或N-端的这种可能的但完全是任选的修饰为清楚起见没有具体指出。本发明的JNK抑制剂是c-Jun N-末端激酶(JNK)的(多_)肽抑制剂。所述抑制剂抑制c-Jun N-末端激酶(JNK)的激酶活性，也就是说，阻止或减少JNK底物例如c-Jun、ATF2和/或Elk-1的磷酸化的程度。本领域的技术人员应理解，本文所用的术语“抑制剂”不包括不可逆地破坏c-Jun N-末端激酶(JNK)分子和/或激酶活性的化合物。此外，本文所用的术语“抑制JNK活性”指的是c-Jun N-末端激酶(JNK)的激酶活性的抑制。此外，本文所用的JNK抑制剂包括至少一个氨基酸的聚合物的功能单元，也就是(多_)肽序列。而且，该至少一个氨基酸的功能聚合物提供对JNK活性的抑制。所述抑制性(多_)肽序列的氨基酸单体通常经由肽键互相连接，但是可以容忍所述肽键或所述侧链残基的(化学)修饰，只要抑制活性(JNK活性的抑制)没有完全丧失，也就是说得到的化学实体仍然在本文定义的功能上适合作为JNK抑制剂。术语“(多-)肽”不应解释为对(多-)肽单元的长度的限制。优选地，本发明的JNK抑制剂的抑制性(多-)肽序列小于500、490、480、470、460、450、440、430、420、410、400、390、380、370、360、350、340、330、320、310、300、290、280、270、260、250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、95、90、85、80、75、70、65、60、55、50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13，或者小于12个氨基酸长。优选地，该抑制性(多_)肽序列不小于10个氨基酸残基，更优选地不少于11个氨基酸残基。此外，本发明的“ JNK抑制剂”抑制JNK活性，例如显示出对人类JNK调节的c-Jun底物(SEQ ID NO :198)的磷酸化以下列的IC 50值的抑制a)关于人类JNKl的抑制，小于3000nM，更优选小于2000nM，甚至更优选小于IOOOnM,甚至更优选小于500nM，甚至更优选小于250nM，甚至更优选小于200nM，甚至更优选小于150nM，最优选小于lOOnM，b)关于人类JNK2的抑制，小于3000nM，更优选小于2000nM，甚至更优选小于IOOOnM,甚至更优选小于500nM，甚至更优选小于250nM，甚至更优选小于200nM，甚至更优选小于150nM，最优选小于IOOnM,和/或c)关于人类JNK3的抑制，小于3000nM，更优选小于2000nM，甚至更优选小于IOOOnM,甚至更优选小于500nM，甚至更优选小于250nM，甚至更优选小于200nM，甚至更优选小于150nM，最优选小于lOOnM。对于一些应用，优选该抑制剂根据上面的定义抑制人类JNK2和/或JNK3，但是不根据上面的定义抑制JNKl。本领域技术人员可以容易地评估JNK活性是否受到抑制。本领域公知有几种方法。一个实例是放射性激酶试验或非放射性激酶试验(例如Alpha筛选测试；例如见Guenat 等人，J Biomol Screen, 2006 ；11 :第 1015-1026 页)。根据本发明的JNK抑制剂可以因此例如包括根据SEQ ID NO :2至27中任意项的抑制性(多_)肽序列(见表I)。
权利要求
1.一种JNK抑制剂，选自a)包括根据以下通式的抑制性(多_)肽序列的JNK抑制剂 X1-X2-X3-R-X4-X5-X6-L-X7-L-X8(SEQ ID NO 1),其中Xl是选自氨基酸R、P、Q和r的氨基酸，其中X2是选自氨基酸R、P、G和r的氨基酸，其中X3是选自氨基酸K、R、k和r的氨基酸，其中X4是选自氨基酸P和K的氨基酸，其中X5是选自氨基酸T、a、S、q、k的氨基酸，或者是不存在的，其中X6是选自氨基酸T、D和A的氨基酸，其中X7是选自氨基酸N、n、r和K的氨基酸；和其中X8是选自F、f和w的氨基酸，并且其中以大写字母给出的氨基酸残基指的是L-氨基酸，而以小写字母给出的氨基酸残基指的是D-氨基酸残基，条件是，选自X1、X2、X3、X5、X7和X8的氨基酸的至少一种是D-氨基酸，和b)包括与a)中定义的SEQID NO :1分享至少80%的序列一致性的抑制性(多-)肽序列的JNK抑制剂，条件是，对于SEQ ID NO :1，与SEQ ID NO 1分享序列一致性的这些抑制性(多_)肽序列保留SEQ ID NO :1的在位置4处的L-精氨酸(R)残基和SEQ ID NO :1的在位置8和 10处的两个L-亮氨酸(L)残基，并且与SEQ IDNO :1分享至少80%的序列一致性的所述序列中剩余的氨基酸中的至少一种是D-氨基酸。
2.根据权利要求1的JNK抑制剂，其中选自X3、X5、X7和X8中的氨基酸的至少一种是 D-氨基酸。
3.根据权利要求1或2的JNK抑制剂，其中所述抑制性(多_)肽序列选自SEQID NO 2-27中的任一个。
4.根据权利要求1或2的JNK抑制剂，其中所述JNK抑制剂包括与选自SEQID NO 2-27中任一个的序列分享至少80%的序列一致性的抑制性(多-)肽序列。
5.根据前述权利要求中任一项的JNK抑制剂，其中所述JNK抑制剂包括SEQID NO :8， 或与SEQ ID NO 8分享至少80%的序列一致性的抑制性(多-)肽序列。
6.根据前述权利要求中任一项的JNK抑制剂，其中所述JNK抑制剂包括转运序列。
7.根据权利要求6的JNK抑制剂，其中所述抑制性(多_)肽序列和所述转运序列重叠。
8.根据权利要求6或7的JNK抑制剂，其中所述转运序列包括根据SEQIDNO :28-30中任一个的交替D-氨基酸和L-氨基酸的序列。
9.根据权利要求6至8中任一项的JNK抑制剂，其中所述转运序列选自SEQID NO 31-170中的任一个。
10.根据权利要求6至9中任一项的JNK抑制剂，其中所述转运序列选自SEQID NO 31-34、46、47 和 52-151 中的任一个。
11.根据权利要求6至10中任一项的JNK抑制剂，其中所述转运序列直接位于所述抑制性(多_)肽序列的N-端或直接位于所述抑制性(多_)肽序列的C-端。
12.根据权利要求6至11中任一项的JNK抑制剂，其中所述JNK抑制剂包括a)根据SEQID NO =171-190中任一个的序列，或b)与SEQID NO :171-190中至少一个分享至少50%的序列一致性的序列，条件是与 SEQ ID NO :171-190中任一个分享序列一致性的所述序列i)在其对应于SEQ ID NO 1的序列延伸中保留位置4上的L-精氨酸(R)残基， )在其对应于SEQ ID NO 1的序列延伸中保留两个L-亮氨酸(L)，和 iii)在其对应于SEQ ID NO :1的序列延伸中在X1、X2、X3、X5、X7或X8位置处表现出至少一种D-氨基酸。
13.根据权利要求6至12中任一项的JNK抑制剂，其中所述JNK抑制剂包括a)SEQ ID NO :172 的序列，或b)与SEQID NO :172分享50%的序列一致性的序列，条件是与SEQ IDNO :172分享 50 %的序列一致性的所述序列i)在其对应于SEQ ID NO 1的序列延伸中保留位置4上的L-精氨酸(R)残基， )在其对应于SEQ ID NO 1的序列延伸中保留两个L-亮氨酸(L)，和 iii)在其对应于SEQ ID NO :1的序列延伸中在X1、X2、X3、X5、X7或X8位置处表现出至少一种D-氨基酸。
14.一种JNK抑制剂，所述JNK抑制剂包括a)抑制性(多-)肽，其包括选自RPTTLNLF (SEQ ID NO : 191)、KRPTTLNLF (SEQ ID NO 192)、RRPTTLNLF 和 / 或 RPKRPTTLNLF (SEQID NO :193)的序列，和 b)选自SEQID NO :31-34和46-151的转运序列。
15.一种包括SEQ ID NO :194或195的序列的JNK抑制剂。
16.一种包括转运序列的(多_)肽，所述转运序列选自rKKRrQRr(SEQID NO 148), rKKRrQRrK (SEQ ID NO :149)、和 / 或 rKKRrQRrR(SEQ IDNO :150)。
17.一种用根据权利要求1至14中任一项的JNK抑制剂使非人类动物免疫的方法，所述方法包括下列步骤-使适用于抗体生产的非人类动物与根据权利要求1至14中任一项的JNK抑制剂接触 (免疫)，更优选与包括具有选自SEQ ID NO 1-27中任一个的序列的(多_)肽的JNK抑制剂接触(免疫)，所述非人类动物尤其是非人类哺乳动物，更优选是选自山羊和例如小鼠、 大鼠和兔子的啮齿动物的动物。
18.—种生产识别根据权利要求1至14中任一项的JNK抑制剂的(多克隆)抗体的方法，所述方法包括下列步骤-从适用于抗体生产的非人类动物分离识别所述JNK抑制剂的(多克隆)抗体，所述非人类动物尤其是非人类哺乳动物，更优选是选自山羊和例如小鼠、大鼠和兔子的啮齿动物的动物，所述非人类动物事先已经与根据权利要求1至14中任一项的JNK抑制剂接触(免疫)， 更优选与由具有选自SEQ ID NO 1-27中任一个的序列的(多_)肽构成的JNK抑制剂接触 (免疫)。
19.一种分离产生抗体的细胞的方法，所述抗体识别根据权利要求1至14中任一项的 JNK抑制剂，所述方法包括下列步骤-从适用于抗体生产的非人类动物分离产生识别所述JNK抑制剂的所述抗体的细胞， 以及任选地使所述细胞永生化，所述非人类动物尤其是非人类哺乳动物，更优选是选自山羊和例如小鼠、大鼠和兔子的啮齿动物的动物，所述非人类动物事先已经与根据权利要求1至14中任一项的JNK抑制剂接触(免疫)， 更优选与由具有选自SEQ ID NO :1-27中任一个的序列的(多-)肽构成的JNK抑制剂接触 (免疫)。
20.一种生产识别根据权利要求1至14中任一项的JNK抑制剂的(单克隆)抗体的方法，所述方法包括下列步骤从生产所述抗体的细胞的细胞培养物上清液分离抗体，所述细胞任选地是永生化的， 所述抗体识别根据权利要求1至14中任一项的JNK抑制剂，更优选地识别由具有选自SEQ ID NO 1-27中任一个的序列的(多_)肽构成的JNK抑制剂。
21.一种能够用根据权利要求18或20中任一项的方法生产的抗体，其中所述抗体识别选自SEQ ID NO 1-27中任一个的至少一种(多_)肽，但是不识别用L-氨基酸替代D-氨基酸的基本相同的(多_)肽。
22.一种能够用根据权利要求19的方法生产的细胞，其中所述细胞产生根据权利要求 21的抗体。
全文摘要
本发明涉及新型JNK抑制剂分子。本发明还涉及用于培养抗这种JNK抑制剂分子的抗体的方法，以及相应的抗体和生产所述抗体的细胞。
文档编号C07K7/06GK103025754SQ201180030452
公开日2013年4月3日 申请日期2011年6月21日 优先权日2010年6月21日
发明者C·邦尼 申请人:希根有限责任公司