专利名称：一种普萘洛尔药物对映体拆分方法
技术领域：
本发明涉及一种从手性药物普萘洛尔对映体中拆分出左旋普萘洛尔和右旋普萘洛尔的方法。
背景技术：
手性药物中不同对映体在体内显示出不同生物活性，这使得寻找高效、便捷的拆分方法显得尤为重要。普萘洛尔属于β_肾上腺阻滞剂类药物，临床上广泛用于治疗高血压，心肌缺血和心律不齐等疾病，其中S型普萘洛尔的药效大约是R型的40倍，且R型普萘洛尔还具有很强的抗生育作用。目前，拆分普萘洛尔对映体的方法主要有高效液相色谱法、毛细管电泳法、离子对色谱法、薄层色谱法等。近十年来手性药物的开发倾向于发展单一对映体，单一对映体药物的世界市场每年以20%以上速度的增长。美国食品和药物管理局早在1992年就规定，今后凡开发具有不对称中心的药物，必须给出手性拆分的结果。因此，进行手性药物的拆分并获得单一的手性药物，已成为分离科学领域的一个重要分支。高速逆流色谱技术(high-speedcountercurrent chromatography, HSCCC)是 20世纪80年代发展起来的一种不用固态支撑体或载体的液液分配技术，在分离过程中完全消除了气、液色谱中常见的不可逆吸附现象，不会破坏分子，适用于分离极性大的手性化合物以及生物大分子；由于它独特的分离机制，使其可用于制备分离，因此很适用于制备性分离手性化合物。近年来有关逆流色谱手性分离方面的研究有所加快。
发明内容
本发明的目的是提供一种采用高速逆流色谱技术拆分普萘洛尔药物对映体的方法。为实现上述发明目的，本发明以盐酸普萘洛尔为拆分对象，先将普萘洛尔盐酸盐转化为普萘洛尔游离体，用L-酒石酸酯类和硼酸作为拆分试剂，L-酒石酸酯类添加到有机相中，硼酸添加到水相中，采用高速逆流色谱法得到左旋普萘洛尔和右旋普萘洛尔。本发明采用的具体技术方案如下一种普萘洛尔药物对映体拆分方法，包括如下步骤(I)将含有L-酒石酸酯的有机溶剂和含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液按照体积比1:1混合均匀，静置分层，分离得到有机相和水相；所述的有机溶剂为CfCS的卤代烷烃、取代芳烃、crcs的烷烃或C2 C8的醚，所述的取代芳烃的取代基为一个或多个，所述取代基各自独立选自卤素或Cf C4的烷基，所述的有机溶剂中L-酒石酸酯的浓度为O. 02、. 5mol/L ;所述含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液的pH在3. (Γ5. 0，其中硼酸的浓度为O. 02、. 30mol/L ；(2)将普萘洛尔盐酸盐转化为普萘洛尔游离体， 并用步骤(I)所得水相溶解，制成样品待用，样品浓度为O. Γ15. Omg/ml ；
(3)采用高速逆流色谱法拆分普萘洛尔分别以步骤(I)得到的有机相和水相为固定相和流动相，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5 30°C，开启速度控制器，转速为50(T2000rpm，以O. 2^3. Oml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后(当流动相从色谱柱出口处流出时就认为达到平衡)，由进样阀进样，以波长19(T400nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液；(4)分别从步骤(3)中收集得到的前峰洗脱液和后峰洗脱液中回收得到左旋普萘洛尔和右旋普萘洛尔的单体。本发明所述的有机溶剂为Cf C8的卤代烷烃、取代芳烃、Cf C8的烷烃或C2 C8的醚，所述的Cfcs的卤代烷烃可以是氯仿、二氯甲烷等，所述的取代芳烃优选取代苯，例如甲苯、氯苯等，所述的Cfcs的烷烃可以是正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、石油醚等，所述的C2 C8的醚可以是乙醚、甲基叔丁基醚等。优选的有机溶剂为氯仿或二氯甲烷，最优选的有机溶剂为氯仿。本发明所述的L-酒石酸酯可以是L-酒石酸正己酯、L-酒石酸正丁酯、L-酒石酸正辛酯、L-酒石酸正戊酯、L-酒石酸异丁酯或L-酒石酸-2-乙基己酯。本发明优选所述的含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液的ρΗ=4. (Γ4. 4，其中硼酸浓度优选为O. 05、. lmol/L ;最优选所述的含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液的pH=4. 4，其中硼酸浓度为O. lmol/L。本发明优选所述的有机溶剂中L-酒石酸酯的浓度为O. Γ0. 2mol/L，最优选为O.lmol/L。本发明所述的步骤(2)中，可通过现有方法将普萘洛尔盐酸盐转化为普萘洛尔游离体，例如可采用如下方法取普萘洛尔盐酸盐加入到l 2mol/L氢氧化钠溶液中，加热至4(T50°C搅拌2 3min，然后用二氯甲烷萃取，所得有机相用超纯水洗涤至中性、用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液蒸除溶剂即得粗品，粗品用二氯甲烷溶解并加入几滴正己烷重结晶，得到普萘洛尔游离体。 本发明步骤(3 )中，经高速逆流色谱法拆分之后，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均可大于95%。在拆分过程中，优选逆流色谱分离柱的柱温为5 15°C ;优选以0. 5^2. Oml/min的流速将流动相泵入柱内。本发明步骤(4)中，可通过现有方法分别从前峰洗脱液和后峰洗脱液中回收左旋普萘洛尔和右旋普萘洛尔的单体，例如可采用如下方法将前峰洗脱液或后峰洗脱液碱化至pH为扩14，析出大量白色粉末后直接用二氯甲烷萃取，二氯甲烷层用饱和食盐水洗涤至中性、无水硫酸钠干燥、过滤、滤液蒸除溶剂即得粗品，粗品用二氯甲烷溶解并加入几滴正己烷重结晶即可获得纯化的左旋普萘洛尔单体或右旋普萘洛尔单体。其中前峰洗脱液或后峰洗脱液可用氢氧化钠溶液碱化，氢氧化钠溶液浓度可以是2mol/L。本发明具体推荐所述拆分方法按照如下步骤进行(I)将含有L-酒石酸酯的有机溶剂和含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液按照体积比1:1混合均匀，静置分层，分离得到有机相和水相；所述的有机溶剂为CfCS的卤代烷烃、取代芳烃、crcs的烷烃或C2 C8的醚，所述的取代芳烃的取代基为一个或多个，所述取代基各自独立选自卤素或Cf C4的烷基，所述的有机溶剂中L-酒石酸酯的浓度为0. 02、. 5mol/L ;所述含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液的pH在3. (Γ5. 0，其中硼酸的浓度为O. 02、. 30mol/L ；
(2)将普萘洛尔盐酸盐转化为普萘洛尔游离体，并用步骤(I)所得水相溶解，制成样品待用，样品中普萘洛尔游离体浓度为O. Γ15. Omg/ml ；
(3)采用高速逆流色谱法拆分普萘洛尔分别以步骤(I)得到的有机相和水相为固定相和流动相，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5 30°C，开启速度控制器，转速为50(T2000rpm，以O. 2^3. Oml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后(当流动相从色谱柱出口处流出时就认为达到平衡)，由进样阀进样，以波长 19(T400nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液；
(4)分别从步骤(3)中收集得到的前峰洗脱液和后峰洗脱液中回收得到左旋普萘洛尔和右旋普萘洛尔的单体。
进一步优选本发明所述拆分方法按照如下步骤进行
(I)将含有L-酒石酸酯的有机溶剂和含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液按照体积比1:1混合均匀，静置分层，分离得到有机相和水相；所述的有机溶剂为氯仿或二氯甲烷， 所述的有机溶剂中L-酒石酸酯的浓度为O. Γ0. 2mol/L ;所述含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液的pH在4. (Γ4. 4，其中硼酸的浓度为O. 05、. lmol/L ；
(2)将普萘洛尔盐酸盐转化为普萘洛尔游离体，并用步骤(I)所得水相溶解，制成样品待用，样品中普萘洛尔游离体浓度为O. Γ15. Omg/ml ；
(3)采用高速逆流色谱法拆分普萘洛尔分别以步骤(I)得到的有机相和水相为固定相和流动相，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5 15°C，开启速度控制器，转速为 50(T2000rpm，以O. 5^2. Oml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样，以波长19(T400nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液；
(4)分别从步骤(3)中收集得到的前峰洗脱液和后峰洗脱液中回收得到左旋普萘洛尔和右旋普萘洛尔的单体。
本发明可采用分析型和半制备型逆流色谱仪(分析型分离柱柱体积为20ml，半制备型分离柱柱体积为300ml)，逆流色谱仪由恒流泵、主机(分离柱)、紫外检测器、记录仪等组成。
与现有技术相比，本发明的优势在于采用本方法拆分手性药物普萘洛尔可以达到较高的分离度，并且该方法适用于各种型号的制备型逆流色谱仪，可以分离得到左旋普萘洛尔和右旋普萘洛尔的单体。
图1:实施例1实验条件下的分析型高速逆流色谱图2:实施例2实验条件下的分析型高速逆流色谱图3:实施例5实验条件下的分析型高速逆流色谱图4:实施例 7实验条件下的分析型高速逆流色谱图5:实施例10实验条件下的分析型高速逆流色谱图6:实施例11实验条件下的半制备型高速逆流色谱图7:图6中A部分(110mirT200min)洗脱液的高效液相色谱检测谱图，即R型普萘洛尔；
图8 :图6中B部分(235mirT540min)洗脱液的高效液相色谱检测谱图，即S型普萘洛尔。
具体实施方式
下面以具体实施例来对本发明做进一步说明，但本发明的保护范围不限于此。
实施例1
普萘洛尔盐酸盐转化为普萘洛尔游离体取610mg普萘洛尔盐酸盐，加入到 5mLlmol/L的氢氧化钠溶液中,加热至50°C搅拌2 3min,然后转移至分液漏斗中用二氯甲烷少量分批多次萃取，合并有机相并用超纯水洗涤至中性，无水硫酸钠干燥，过滤后蒸除溶剂即得普萘洛尔游离体，粗品用二氯甲烷溶解加入几滴正己烷重结晶，得到无色针状晶体 488mg,即为游离普萘洛尔。
将氯仿水(有机相含O. lmol/L L-酒石酸正己酯，水相为O. 05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液pH=4.4并含有O. lmol/L硼酸)按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取 IOmg普萘洛尔对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分普萘洛尔对映体，分离柱体积为20ml。进样前， 将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15°C，开启速度控制器，转速为1800rpm，以O. 50ml/ min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为1. 08。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件为Chiralcel OD-R column (4. 6X 250mm);柱温20°C; 流动相0. lmol/L KPF6:乙腈(60:40, v/v)等度洗脱;流速O. 5ml/min ;检测波长215nm ;进样量10μ I。
实施例2
将氯仿水(有机相含O. lmol/L L-酒石酸异丁酯，水相为0. 05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液pH=4.4并含有0. lmol/L硼酸)按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取实施例1中得到的IOmg普萘洛尔对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分普萘洛尔对映体，分离柱体积为20ml。进样前， 将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15°C，开启速度控制器，转速为180 0rpm，以0. 50ml/ min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为1. 10。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
实施例3
将环己烷水(有机相含0. lmol/L L-酒石酸正己酯，水相为0. 05mol/L的醋酸/ 三乙胺缓冲溶液pH=4.4并含有0. lmol/L硼酸)按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取实施例1中得到的IOmg普萘洛尔对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分普萘洛尔对映体，分离柱体积为20ml。进样前， 将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15°C，开启速度控制器，转速为1800rpm，以O. 50ml/ min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为O. 34。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
实施例4
将二氯甲烷水(有机相含O. lmol/L L-酒石酸正己酯，水相为O. 05mol/L的醋酸 /三乙胺缓冲溶液pH=4.4并含有O. lmol/L硼酸)按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取实施例1中得到的IOmg普萘洛尔对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分普萘洛尔对映体，分离柱体积为20ml。进样前， 将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15°C，开启速度控制器，转速为1800rpm，以O. 50ml/ min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为1. 10。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
实施例5
将氯仿水(有机相含O. lmol/L L-酒石酸正己酯,水相为O. 05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液pH=4.4并含有O. lmol/L硼酸)按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取实施例1中得到的IOmg普萘洛尔对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分普萘洛尔对映体，分离柱体积为20ml。进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5°C,开启速度控制器,转 速为1800rpm,以O. 50ml/min 的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为1. 13。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于 95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
实施例6
将氯仿水(有机相含O. lmol/L L-酒石酸正己酯，水相为0. 05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液pH=4.4并含有0. lmol/L硼酸)按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取实施例1中得到的IOmg普萘洛尔对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分普萘洛尔对映体，分离柱体积为20ml。进样前， 将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15°C，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0. 80ml/ min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为1. 01。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
实施例7
将氯仿水(有机相含O. 2mol/L L-酒石酸正己酯，水相为O. 05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液pH=4.4并含有O. lmol/L硼酸)按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取实施例1中得到的IOmg普萘洛尔对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分普萘洛尔对映体，分离柱体积为20ml。进样前， 将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15°C，开启速度控制器，转速为1800rpm，以O. 50ml/ min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为1. 21。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
实施例8
将氯仿水(有机相含O. lmol/L L-酒石酸正己酯，水相为O. 05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液pH=4.4并含有O. lmol/L硼酸)按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动 相。称取实施例1中得到的IOmg普萘洛尔对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分普萘洛尔对映体，分离柱体积为20ml。进样前， 将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15°C，开启速度控制器，转速为1500，以O. 50ml/min 的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为1. 01。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于 95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
实施例9
将氯仿水(有机相含O. lmol/L L-酒石酸正己酯，水相为O. 05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液pH=4. 4并含有O. 05mol/L硼酸)按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取实施例1中得到的IOmg普萘洛尔对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分普萘洛尔对映体，分离柱体积为20ml。进样前， 将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15°C，开启速度控制器，转速为1800rpm，以O. 50ml/ min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为1. 02。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
实施例10
将氯仿水(有机相含O. lmol/L L-酒石酸正己酯，水相为0. 05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液PH = 4. O并含有0. lmol/L硼酸)按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取实施例1中得到的IOmg普萘洛尔对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分普萘洛尔对映体，分离柱体积为20ml。进样前， 将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15°C，开启速度控制器，转速为1800rpm，以O. 50ml/ min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为1. 07。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
实施例11
将氯仿水(有机相含O. lmol/L L-酒石酸正己酯，水相为O. 05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液pH=4.4并含有O. lmol/L硼酸)按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取实施例1中得到的108mg普萘洛尔对映体用20ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用半制备型高速逆流色谱仪拆分普萘洛尔对映体，分离柱体积为300ml。进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15°C，开启速度控制器，转速为800rpm，以 2. OOml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，接收前峰洗脱液和后峰洗脱液，计算分离度为1. 05。将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
从洗脱液中回收样品将前峰和后峰洗脱液分别用lmol/L氢氧化钠溶液碱化至 PHll左右，析出大量白色粉末后直接用二氯甲 烷少量多次萃取合并二氯甲烷层，用饱和食盐水洗涤二氯甲烷层至中性，无水硫酸钠干燥，过滤后蒸除溶剂即得左旋普萘洛尔和右旋普萘洛尔，最后用二氯甲烷溶解加入几滴正己烷重结晶，获得纯化的22. 9mg左旋普萘洛尔和30.1mg右旋普萘洛尔，对映体纯度大于95%。
权利要求
1.一种普萘洛尔药物对映体拆分方法，包括如下步骤(1)将含有L-酒石酸酯的有机溶剂和含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液按照体积比1:1 混合均匀，静置分层，分离得到有机相和水相；所述的有机溶剂为CfCS的卤代烷烃、取代芳烃、CrCS的烷烃或C2 C8的醚，所述的取代芳烃的取代基为一个或多个，所述取代基各自独立选自卤素或Cf C4的烷基，所述的有机溶剂中L-酒石酸酯的浓度为O. 02、. 5mol/L ； 所述含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液的PH在3. (Γ5. O,其中硼酸的浓度为O. 02、. 30mol/ L ；(2)将普萘洛尔盐酸盐转化为普萘洛尔游离体，并用步骤(I)所得水相溶解，制成样品待用，样品中普萘洛尔游离体浓度为O. Γ15. Omg/ml ；(3)采用高速逆流色谱法拆分普萘洛尔分别以步骤(I)得到的有机相和水相为固定相和流动相，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5 30°C，开启速度控制器，转速为 50(T2000rpm，以O. 2^3. Oml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样，以波长19(T400nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液；(4)分别从步骤(3)中收集得到的前峰洗脱液和后峰洗脱液中回收得到左旋普萘洛尔和右旋普萘洛尔的单体。
2.如权利要求1所述的普萘洛尔药物对映体拆分方法，其特征在于所述的有机溶剂选自下列之一氯仿、二氯甲烷、甲苯、氯苯、正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、乙醚、石油醚或甲基叔丁基醚。
3.如权利要求1所述的普萘洛尔药物对映体拆分方法，其特征在于所述的有机溶剂为氯仿或二氯甲烷。
4.如权利要求1所述的普萘洛尔药物对映体拆分方法，其特征在于所述的有机溶剂为氯仿。
5.如权利要求1 4之一所述的普萘洛尔药物对映体拆分方法，其特征在于所述的 L-酒石酸酯是L-酒石酸正己酯、L-酒石酸正丁酯、L-酒石酸正辛酯、L-酒石酸正戊酯、 L-酒石酸异丁酯或L-酒石酸-2-乙基己酯。
6.如权利要求5所述的普萘洛尔药物对映体拆分方法，其特征在于所述的含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液的pH = 4. (Γ4. 4，其中硼酸浓度为O. 05、. lmol/L ;所述的有机溶剂中L-酒石酸酯的浓度为O. Γ0. 2mol/L。
7.如权利要求5所述的普萘洛尔药物对映体拆分方法，其特征在于所述的含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液的pH=4. 4，其中硼酸浓度为O. lmol/L ;所述的有机溶剂中L-酒石酸酯的浓度为0. lmol/L。
8.如权利要求5所述的普萘洛尔药物对映体拆分方法，其特征在于控制逆流色谱分离柱的柱温为5 15°C，以0. 5^2. Oml/min的流速将流动相泵入柱内。
9.如权利要求1所述的普萘洛尔药物对映体拆分方法，其特征在于所述方法按照如下步骤进行(I)将含有L-酒石酸酯的有机溶剂和含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液按照体积比1:1 混合均匀，静置分层，分离得到有机相和水相；所述的有机溶剂为氯仿或二氯甲烷，所述的有机溶剂中L-酒石酸酯的浓度为0. Γ0. 2mol/L ;所述含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液的pH在4· (Γ4. 4， 其中硼酸的浓度为O. 05、· lmol/L ；(2)将普萘洛尔盐酸盐转化为普萘洛尔游离体，并用步骤(I)所得水相溶解，制成样品待用；(3)采用高速逆流色谱法拆分普萘洛尔分别以步骤(I)得到的有机相和水相为固定相和流动相，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5 15°C，开启速度控制器，转速为 50(T2000rpm，以O. 5^2. Oml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样，以波长19(T400nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液；(4)分别从步骤(3)中收集得到的前峰洗脱液和后峰洗脱液中回收得到左旋普萘洛尔和右旋普萘洛尔的单体。
全文摘要
本发明公开了一种普萘洛尔药物对映体拆分方法，包括如下步骤(1)将含有L-酒石酸酯的有机溶剂和含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液按照体积比1:1混合均匀，静置分层，分离得到有机相和水相；(2)将普萘洛尔盐酸盐转化为普萘洛尔游离体，并用步骤(1)所得水相溶解，制成样品待用；(3)采用高速逆流色谱法拆分普萘洛尔，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液；(4)分别从步骤(3)中收集得到的前峰洗脱液和后峰洗脱液中回收得到左旋普萘洛尔和右旋普萘洛尔的单体。本发明采用本方法拆分手性药物普萘洛尔可以达到较高的分离度，并且该方法适用于各种型号的制备型逆流色谱仪，可以分离得到左旋普萘洛尔和右旋普萘洛尔的单体。
文档编号C07B57/00GK103030567SQ201210259529
公开日2013年4月10日 申请日期2012年7月25日 优先权日2012年7月25日
发明者童胜强, 颜继忠, 郑烨 申请人:浙江工业大学