专利名称：能促进经皮吸收的普萘洛尔复合磷脂传递体及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物制剂技术领域，具体涉及一种能促进普萘洛尔经皮吸收的复合磷脂传递体及其制备方法，同时还提供此种普萘洛尔复合磷脂传递体在治疗婴儿血管瘤中的应用。
背景技术：
普萘洛尔(Propranolol)作为一种经典的非选择性β _受体阻滞剂，现已被广泛证实具有治疗婴幼儿血管瘤(Infantile Hemangiomas, IH)的确切效果。目前，普萘洛尔用于IH治疗时多采用口服给药，但由于IH治疗周期长，这种给药方式对于婴幼儿来说顺应性较差，并可能导致心动过缓、低血压、低血糖等广泛的不良反应，且普萘洛尔口服给药已被 证实首过效应严重，生物利用度低。故若能将普萘洛尔透皮给药并直接作用于IH患处，在保证疗效的同时，可以有效减免不良反应的发生，并且给药更加方便、对患者的顺应性好。然而，完整皮肤，尤其是表皮最外层的角质层作为绝大多数药物经皮吸收的主要屏障，极大地制约了透皮给药系统(Transdermal Drug Delivery System, TDDS)在临床上的应用。传递体是在脂质体的基础上发展起来的一种自聚集泡囊，其组成一般是在磷脂双分子层中掺入边缘活性剂，从而赋予其特殊的柔性，使其能在外压作用下，挤压变形穿过孔径仅为自身粒径1/10的孔道，故而传递体除了具有普通脂质体亲水性强的特点外，还具有高度的变形性和透皮能力，所以已经成为极具发展潜力的新型透皮给药载体系统。传递体需要考察的物理化学性质主要包括形态学、粒径及其分布、Zeta电位、包封率、稳定性等。其中，鉴于传递体主要以载体的形式增强药物的透皮性能，故提高传递体对药物的包封率就显得尤为重要；而变形性作为传递体区别于普通脂质体的显著标志能有效地预测传递体的透皮性能，是传递体性质研究中极为重要的内容。传递体制备过程中所采用的磷脂材料与普通脂质体相似，常用的有大豆磷脂(SPC)、氢化磷脂酰胆碱(HPC)、蛋黄磷脂酰胆碱(EPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)等。一般来说，高相变温度(37°C以上)的磷脂(如DSPC、HSPC)由于刚性较高，不利于传递体给药后的变形，因此较少采用。通常采用低相变温度(37°C以下)的磷脂作为膜材，但由于此种载药传递体其相变温度低于体温，给药后在体温的作用下，磷脂双分子层转变为液晶相，药物泄漏较多，不利于载药传递体的透皮吸收。而在传递体制备若仅采用一种磷脂材料作为膜材必然会导致此种情况发生，所以如果能够灵活调节磷脂的相变温度，有望同时实现传递体的高变形性和高稳定性。2004年，Kan P等发明了用多种磷脂材料制备传递体的复合磷脂脂质体技术，其基本特征是使用不同相变温度的磷脂作为膜材，如常用的大豆磷脂(SPC，Tm约为o°c )、蛋磷脂(EPC，Tm约为-8°c )、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC，Tm约为55°C )、氢化大豆磷脂(HSPC，T1^ASS(TC)等。在一定条件下，复合磷脂中两种磷脂可以融合成为新相，其相变温度可以通过改变两种磷脂的比例灵活调节。
从目前的技术来看，经皮给药的普萘洛尔有制成贴剂等剂型的报道，但是婴幼儿血管瘤面积不固定，皮肤表面也不易长时间粘贴，采用液体或半固体剂型无疑更适合临床应用的需要。但普萘洛尔直接给药极性大、透皮吸收量有限，应用单一磷脂组成的传递体技术可以促进普萘洛尔的透皮吸收，但程度有限。
发明内容
解决技术问题为了解决现有技术的不足，本发明提供一种能够促进普萘洛尔经皮吸收的复合磷脂传递体；本发明的另一个目的是提供一种制备所述普萘洛尔复合磷脂传递体的方法；同时本发明还提供所述普萘洛尔复合磷脂传递体在治疗婴幼儿血管瘤中的应用。而本发明所提供的复合磷脂传递体，由于相变温度通过复合磷脂组成的调节设定在37°C左右，因此在透皮给药系统中具有最大的促渗效果。技术方案为实现以上目的，本发明提供一种能够促进药物经皮吸收的普萘洛尔复合磷脂传递体，其特征在于它是由两类磷脂成分二棕榈酰磷脂酰胆碱和大豆磷脂、边缘活性剂和普萘洛尔按下列重量份配比所制成二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)I 10份，大豆磷脂(SPC) I 10份，边缘活性剂O. 2 2份，普萘洛尔的量为磷脂总量的O. 05 O. 5 倍。作为本发明的进一步改进，二棕榈酰磷脂酰胆碱与大豆磷脂的摩尔量比等于8 : 2 至 2 : 8。作为本发明的更进一步改进，二棕榈酰磷脂酰胆碱与大豆磷脂的摩尔量比等于6 4。作为本发明的一种优选的方案，边缘活性剂选自胆酸钠、脱氧胆酸钠、吐温与司盘。作为本发明的进一步优选的方案，边缘活性剂为司盘-80。同时，本发明还提供一种制备上述普萘洛尔复合磷脂传递体的方法，分为制备空白复合磷脂传递体与载药两大步骤，其具体操作步骤如下第一大步骤制备空白复合磷脂传递体，包括(I)按重量比称取二棕榈酰磷脂酰胆碱I 10份，大豆磷脂I 10份，边缘活性剂O. 2 2份，溶解于无水乙醇，注入硫酸铵水溶液；(2)通过加热或减压的方法除去乙醇；(3)超声处理或高压乳匀，减少复合磷脂传递体的粒径；(4)通过透析法、超滤法或凝胶柱层析法除去未被复合磷脂传递体包封的硫酸铵，形成空白复合磷脂传递体混悬液。第二大步骤，载药，包括(5)取总量为磷脂总量O. 05 O. 5倍的普萘洛尔加入上述空白复合磷脂传递体混悬液中温孵，使其被复合磷脂传递体包封，制成普萘洛尔复合磷脂传递体。作为本发明的进一步改进，在步骤(I)中所述的溶解于无水乙醇时，以5ml/min的速度注入10 20倍体积的O. I O. 3mol/L的硫酸铵水溶液。作为本发明的进一步优选方案，步骤(4)中采用pH7. 4的磷酸盐缓冲液透析以除去未被复合磷脂传递体包封的硫酸铵。
作为本发明的另一种优选方案，步骤(5)中所述的温孵温度为O 60°C，温孵时间为 5 60mino同时本发明还提供所述普萘洛尔复合磷脂传递体在治疗婴幼儿血管瘤中的应用。有益效果本发明经大量实验研究筛选两种不同相变温度的磷脂材料二棕榈酰磷脂酰胆碱和大豆磷脂，经过大量实验研究表明当由I 10份摩尔分数的DPPC和I 10份摩尔分数的SPC组成的复合磷脂材料，尤其是DPPC与SPC的摩尔量比等于6 4时，制备成复合磷脂传递体膜时形成新相，不存在相分离，具有单一的相变温度。这样就使得用此复合磷脂材料制备成的普萘洛尔复合磷脂传递体，与现有技术中只采用单一磷脂材料DPPC或SPC的传递体相比，包封率得到显著提高，体外释放呈现缓释效果，在大鼠血浆中的稳定性提高，经皮给药后血药浓度与药-时曲线下面积也显著提高。表明经本发明提供的复合磷脂材料包 裹的普萘洛尔传递体能够促进普萘洛尔经皮吸收，生物利用度显著提高，尤其适用于治疗婴幼儿血管瘤等疾病，可以实现普萘洛尔透皮给药并直接作用在IH患处，以期实现普萘洛尔局部及全身治疗作用的协同发挥，在提高疗效、降低毒副作用的同时，改善IH患儿用药的顺应性。
图I空白传递体及普萘洛尔传递体的HPLC2制备方法对普萘洛尔传递体包封率的影响，图中纵坐标EE表示药物包封率图3边缘活性剂对普萘洛尔传递体包封率的影响，图中纵坐标EE表示药物包封
率图4不同磷脂组成普萘洛尔传递体的形态学图5磷脂组成对普萘洛尔传递体变形性的影响，图中纵坐标为ADI =DI37-DI32,用来描述不同磷脂组成普萘洛尔传递体因温度差异而引起的变形性变化情况图6不加大鼠血浆的L%_t曲线(η =3，χ土s)，图中纵坐标L%表示药物累积泄漏
百分率图7加大鼠血浆的L%_t曲线(η =3，χ 土 s)，图中纵坐标L%表示药物累积泄漏
百分率图8大鼠血浆中的普萘洛尔HPLC图
图9各试验组的血药浓度比较(η =5，χ 土s)，图中右上角小图血药浓度在250ng · ml/1以下时各组血药浓度曲线的放大图
图10普萘洛尔复合磷脂传递体相变温度的测定图谱
具体实施例方式下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。实施例I空白磷脂传递体的制备
称取磷脂材料2 20份，其总量控制在O. 2mmol，与O. 2 2份边缘活性剂共溶于适量无水乙醇，注入恒温水浴且磁力搅拌的O. 2mol/L硫酸铵水溶液中，通过加热或减压的方法挥尽乙醇，然后取出放冷，并以超纯水定容至5mL ；200ff探头超声一定时间以减少磷脂传递体的粒径，低速离心除钛粉后置于透析袋中，再用PH7. 4磷酸盐缓冲液透析以除去外水相未被磷脂传递体包封的硫酸铵，即得空白复合磷脂传递体。实施例2普萘洛尔磷脂传递体的制备在实施例I制备的空白磷脂传递体的基础下，按摩尔比给定药物/磷脂=19. 83%，取一定量普萘洛尔与空白磷脂传递体，恒温水浴温孵一定时间，使普萘洛尔被磷脂传递体包封，制成普萘洛尔复合磷脂传递体。实施例3普萘洛尔磷脂传递体包封率的测定具体操作步骤分三步进行
①样品处理采用S^hadex G_50柱分离由实施例2制备的普萘洛尔磷脂传递体粗品样品，得含药传递体与游离药物，含药传递体定容后等体积破膜剂破膜，12000r · HiirT1离心后备用。②高效液相色谱测定含药传递体与游离药物的含量精密吸取样品ImL上高效液相色谱Kromasil C18柱(250mmX4. 6mm, 5 μ m)进行洗脱，流动相为甲醇-O. 02mol .[1KH2PO4 (50 50)，流速 O. 9mL .mirT1,柱温 35°C，检测波长 289nm,进样体积IOuL0此色谱条件下可使含药传递体与未包封的游离药物实现基线分离，且仪器精密度良好，回收率高，同时传递体膜材成分对普萘洛尔的含量测定无干扰，见图I。③包封率计算包封率=传递体中药物含量/ (传递体中药物含量+游离药物含量)* 100 %实施例4普萘洛尔磷脂传递体制备方法的选择选取司盘-80 (Span-80)作为边缘活性剂，用薄膜水化法、乙醇注入法、硫酸铵梯度法和逆向蒸发法等四种方法制备普萘洛尔传递体，每组样品平行3份，具体步骤如下(I)薄膜水化法0. 2mmol SPC与适量Span-80置于50mL规格的茄形瓶中，加入5mL无水乙醇，充分溶解后于55°C水浴下减压旋转蒸发至形成均匀的类脂薄膜，真空干燥过夜以除去痕量的有机溶剂。向所得类脂薄膜中精密加入5mL含11. 84mg盐酸普萘洛尔(即药物/磷脂摩尔比为O. 2)的磷酸盐缓冲液(PBS)，并于55°C水浴下振荡至充分水化，所得含药传递体混悬液经200W探头超声200次即可。(2)乙醇注入法0. 2mmol SPC与适量Span-80共溶于5mL无水乙醇，注入到5mL含11. 84mg盐酸普萘洛尔的PBS中，于55°C水浴下磁力搅拌至挥尽乙醇，经200W探头超声200次即得。(3)硫酸铵梯度法0. 2mmol SPC与适量Span-80共溶于5mL无水乙醇,注入到5mL浓度为O. 2Mol · L-I的硫酸铵溶液中，于55°C水浴下磁力搅拌至挥尽乙醇，经200W探头超声200次后，低速离心除钛粉后置于透析袋中，再用PBS透析(10倍体积，4次)以除去外水相的硫酸铵，即得空白传递体。按照药物/磷脂摩尔比为O. 2，取定量空白传递体与盐酸普萘洛尔，55°C水浴振荡一定时间，即得载药传递体。(4)逆向蒸发法0. 2mmol SPC与适量Span-80共溶于5mL三氯甲烧，并于2. 5mL含11. 84mg盐酸普萘洛尔的PBS充分混合，400W探头超声片刻使形成稳定的W/0型乳剂，于55°C水浴下减压旋转蒸发至形成半固体胶状物，加入适量PBS于55°C水浴下振荡至水化完全，所得含药传递体混悬液经200W探头超声200次即可。把制备所得传递体用实施例3中方法测定包封率，最后测得包封率结果见图2。结果表明，采用主动载药的硫酸铵梯度法制备普萘洛尔传递体能实现更好的载药效果。实施例5边缘活性剂的选择按实施例2中方法制备四组普萘洛尔传递体，其中磷脂均为SPC，边缘活性剂分别为胆酸钠、脱氧胆酸钠、Span-80和吐温_20，其用量一致，把制备所得传递体用实施例3中方法测定包封率，每组样品平行3份，最后测得包封率结果见图3。结果表明以Span-80作为边缘活性剂制备的普萘洛尔传递体在提高药物包封率方面有显著的优势。 实施例6普萘洛尔复合磷脂传递体的药剂学性质评价用实施例2中方法在不同处方条件下制备普萘洛尔磷脂传递体七组，每组平行制备3份，具体处方条件如下
权利要求
1.一种能够促进药物经皮吸收的普萘洛尔复合磷脂传递体，其特征在于它是由两类磷脂成分ニ棕榈酰磷脂酰胆碱和大豆磷脂、边缘活性剂和普萘洛尔按下列重量份配比所制成ニ棕榈酰磷脂酰胆碱f 10份，大豆磷脂广10份，边缘活性剂0. 2^2份，普萘洛尔的量为磷脂总量的0. 05、. 5倍。
2.根据权利要求I所述的复合磷脂传递体，其特征在于所述ニ棕榈酰磷脂酰胆碱与大豆磷脂的摩尔量比等于8:2至2:8。
3.根据权利要求I所述的复合磷脂传递体，其特征在于所述ニ棕榈酰磷脂酰胆碱与大豆磷脂的摩尔量比等于6:4。
4.根据权利要求I所述的复合磷脂传递体，其特征在于所述边缘活性剂选自胆酸钠、脱氧胆酸钠、吐温与司盘。
5.根据权利要求I所述的复合磷脂传递体，其特征在于所述边缘活性剂为司盘-80。
6.ー种制备权利要求广5中任一项所述的普萘洛尔复合磷脂传递体的方法，分为制备空白复合磷脂传递体与载药两大步骤，其具体操作步骤如下 (1)按重量比称取ニ棕榈酰磷脂酰胆碱广10份，大豆磷脂广10份，边缘活性剂0.2^2份，溶解于无水こ醇，注入硫酸铵水溶液； (2)通过加热或减压的方法除去こ醇； (3)超声处理或高压乳匀，減少复合磷脂传递体的粒径； (4)通过透析法、超滤法或凝胶柱层析法除去未被复合磷脂传递体包封的硫酸铵，形成空白复合磷脂传递体混悬液。
7.(5)取总量为磷脂总量0. 05、. 5倍的普萘洛尔加入上述空白复合磷脂传递体混悬液中温孵，使其被复合磷脂传递体包封，制成普萘洛尔复合磷脂传递体。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于在步骤(I)中所述的溶解于无水こ醇吋，以5 ml/min的速度注入1(T20倍体积的0. f 0. 3 mo I/L的硫酸铵水溶液。
9.根据权利要求6中所述的制备方法，其特征在于步骤(4)中采用pH7.4的磷酸盐缓冲液透析以除去未被复合磷脂传递体包封的硫酸铵。
10.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在干步骤(5)中所述的温孵温度为0 60で，温孵时间为5 60 min。
11.权利要求1飞中任一项所述的普萘洛尔复合磷脂传递体在婴幼儿血管瘤中的应用。
全文摘要
本发明提供一种能够促进普萘洛尔经皮吸收的复合磷脂传递体及其制备方法，其由两种不同相变温度的磷脂材料——二棕榈酰磷脂酰胆碱和大豆磷脂，作为复合磷脂材料，由此磷脂材料制备的普萘洛尔复合磷脂传递体，与现有技术中只采用单一磷脂材料的传递体相比，包封率得到显著提高，泄漏降低，在大鼠血浆中的稳定性提高，经皮给药后生物利用度也显著提高。由本发明提供的普萘洛尔复合磷脂传递体尤其适用于治疗婴幼儿血管瘤，可以实现普萘洛尔透皮给药并直接作用在血管瘤患处，在提高疗效、降低毒副作用的同时，改善患儿用药的顺应性。同时本发明还提供此种普萘洛尔复合磷脂传递体的制备方法。
文档编号A61K9/127GK102846546SQ20121013034
公开日2013年1月2日 申请日期2012年4月27日 优先权日2012年4月27日
发明者陈军, 蔡宝昌, 顾薇, 肖寒露, 李俊 申请人:南京中医药大学