一种噻苯咪唑半抗原制备方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种噻苯咪唑半抗原，相应的人工抗原和单克隆抗体，同时本发明也公开了所述噻苯咪唑半抗原，相应的人工抗原和单克隆抗体的制备方法及其应用。本发明提供的噻苯咪唑半抗原是式1所示产物，用式1所示产物与载体蛋白连接可以得到噻苯咪唑抗原。所述噻苯咪唑抗原可应用于制备噻苯咪唑特异性抗体。本发明制备方法简便可行、成本较低，半抗原产率较高。本发明的噻苯咪唑人工抗原，通过免疫动物可产生了针对噻苯咪唑的特异性抗体，可用于制备检测噻苯咪唑残留的酶联免疫检测试剂盒，具有简单、快速、处理样品量大、灵敏度高、特异性强等诸多优点。
【专利说明】一种噻苯咪唑半抗原制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品安全检测【技术领域】，具体涉及一种噻苯咪唑半抗原、抗原、单克隆 抗体制备方法及其应用。
【背景技术】
[0002] 噻苯咪唑英文名TBZ(Thiabendazole)，别名：特克多；腐绝；硫苯唑；涕灭灵，分子 式：(：1(|!17队5，分子量 ：201.25，原药为白色粉末，熔点：304?3051：，3101：升华。室温时溶解 度为：丙酮28g/L，甲醇9. 3g/L，二甲基亚砜80g/L，二甲基甲酰胺39.Og/L，苯2. 3g/L，氯仿 0. 8g/L。在中性及酸性、碱性水溶液中稳定。
[0003] 噻苯咪唑属于苯并咪唑类药物（benzimidazoles，BMZs)，为广谱、高效、低毒驱肠 虫药，由于对对蛔、钩、鞭、蛲、粪圆线虫和旋毛虫感染，均有驱除作用，至今仍在广泛使用。 噻苯咪唑可引起食欲不振、恶心、呕吐、腹痛、腹泻、眩晕、头痛、嗜睡及黄视等。农业部235 号公告规定了动物源性食品中噻苯咪唑的残留限量为100μg/kg。
[0004]目前的TBZ检测方法多为色谱法，但是需要复杂昂贵的仪器，且样品前处理过程 繁琐，不适应现场大量样本的筛查。基于抗原抗体免疫反应的免疫学检测技术为小分子残 留物的分析检测提供了一个新的途径。该技术研究的关键是半抗原分子的设计、合成和人 工全抗原及抗体的制备。因为TBZ是小分子化合物，本身没有免疫原性，必须将其与大分子 载体蛋白偶联得到具有免疫原性的人工抗原。在此基础上建立起来的酶联免疫检测试剂盒 可快速、方便、准确的检测牛奶中的TBZ残留，可为建立监控动物源性食品中TBZ残留提供 技术支持。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种噻苯咪唑半抗原、抗原、特异性抗体制备方法及其应用。
[0006] 本发明提供的噻苯咪唑半抗原，是式1所示化产物：
【权利要求】
1. 一种噻苯咪唑半抗原，为式1所示产物：
2. 式1所示产物的制备方法，包括如下步骤： 取5-羟基噻苯咪唑220 mg、邻苯二甲酸酐500 mg和吡啶2 mL在20 mL二甲基亚砜 中混合后，于80°C下搅拌反应10小时，蒸除溶剂，柱层析纯化得到式1所示产物，即邻苯二 甲酸单噻苯咪唑酯。
3. -种噻苯咪唑抗原，是将式1所示产物和载体蛋白偶联得到的偶联物。
4. 权利要求3所述噻苯咪唑抗原的制备方法，包括如下步骤： (1) 取式1所示产物l〇mg，溶解于ImL二甲基甲酰胺中； (2) 取氯甲酸异丁酯50 y L，于4°C下搅拌24 h，即可得到反应液A ; (3 )称取载体蛋白50mg，加入pH9. 0的碳酸盐缓冲液3. 8mL，充分溶解，将反应液A逐滴 滴加到蛋白溶液中，并于室温下搅拌反应24 h; (4) 用0. Olmol/L的磷酸盐缓冲液于4°C透析3d，每天换3次透析液，以除去未反应的 小分子物质； (5) 分装，于-20°C保存备用。
5. 权利要求3所述噻苯咪唑抗原在制备噻苯咪唑特异性抗体中的应用。
6. 应用权利要求3所述噻苯咪唑抗原制备得到的特异性抗体。
7. 权利要求1所述产物、权利要求3所述噻苯咪唑抗原、权利要求6所述抗体在检测噻 苯咪唑中的应用。
8. 应用权利要求1所述产物、权利要求3所述噻苯咪唑抗原、权利要求6所述特异性抗 体制备得到的酶联免疫检测试剂盒。
9. 权利要求8所述酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，它包括：包被有噻苯咪唑抗原的 酶标板、酶标抗体工作液、噻苯咪唑系列标准品、底物显色液、终止液、浓缩复溶液、浓缩洗 涤液。
【文档编号】C07K14/765GK104341409SQ201310328972
【公开日】2015年2月11日 申请日期:2013年7月31日 优先权日:2013年7月31日
【发明者】万宇平, 罗晓琴, 吴鹏, 韩京朋, 崔海峰, 蒲小容, 李海静, 刘春雪 申请人:北京勤邦生物技术有限公司