一种从海洋微藻发酵液中提取dha的方法
【专利摘要】本发明公开了一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法，属于微生物油脂提取【技术领域】。其解决了现有技术中DHA提取率低，产品质量差的问题，本发明采用酶法破壁处理，离心分离提取毛油、精炼纯化等工艺步骤提取DHA，其中酶法破壁可提高细胞破壁率，充分释放细胞所含DHA，使DHA提取率大大提高，减少损耗浪费，降低生产成本；离心分离步骤不会加入其它有害物质，保证了DHA的质量；精炼提纯步骤可进一步提高DHA成品的纯度和品质。本发明方法可提高DHA的提取率，总提取率均在80％以上，减少浪费，降低生产成本，同时可提高DHA藻油质量，产品性能安全。
【专利说明】一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及微生物油脂的提取【技术领域】，具体涉及一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法。
【背景技术】
[0002]DHA，全名二十二碳六烯酸，俗称脑黄金，是一种对人体非常重要的多不饱和脂肪酸，属于Omega-3不饱和脂肪酸家族中的重要成员。DHA是神经系统细胞生长及维持的一种主要元素，是大脑和视网膜的重要构成成分，在人体大脑皮层中含量高达20%，在眼睛视网膜中所占比例最大，约占50%，因此，对胎婴儿智力和视力发育至关重要。DHA的主要作用:促进胎儿大脑发育、促进视网膜光感细胞的成熟、增进大脑细胞之发育、用于癌症治疗、抑制发炎、降低血脂肪、预防心脏血管疾病、改善老人痴呆等。
[0003]早期DHA产品多以富含DHA和EPA的深海鱼油(通常为金枪鱼油)为原料制得，以二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)混合形式存在,我们通常叫做Omega-3或多烯酸乙脂，目前最先进的产品是用富含DHA且不含EPA的海洋微藻菌株通过生物发酵工艺后提取制得。
[0004]目前，实际生产中应用的和分离微藻DHA的方法主要有低温分级法、尿素包合法、溶剂法、超临界气体萃取法等。其中，低温分级法需要有大型制冷设备，耗能高，提取效率低；尿素包合法是一种比较简便有效的分离方法，但在实际生产中应用时，存在溶剂损耗大、排水和因尿素添加物而引起的废物处理等问题；超临界气体萃取法能分离出高纯度的DHA，但对碳数相同而双键数不同的脂肪酸的分离效果较差，且设备投资大，技术要求高，耗能亦较大；有机溶剂提取法是目前国内外广泛应用的微藻油脂提取法，但所用溶剂大多易燃，溶剂蒸汽有一定的毒性，此外，溶剂法提取的油脂中残留有溶剂，故其产品质量较差。
【发明内容】
[0005]为了解决上述现有技术中存在的问题，本发明提出了一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法，该方法采用酶法破壁、离心分离等步骤提取DHA，提高了 DHA提取率、减少损耗，并且产品质量安全。
[0006]本发明技术方案包括:
[0007]一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法，包括以下步骤:
[0008]a)将海洋微藻发酵液进行酶法破壁处理，得到破壁后的发酵液；
[0009]b)向步骤a)得到的发酵液中加入一定量的酒精，用离心机进行离心分离去除水分，得到破壁细胞和藻油；
[0010]c)将步骤b)得到的破壁细胞和藻油再次经过高速离心分离，去除固体残渣，得到DHA毛油；
[0011]d)对步骤c)得到的 DHA毛油进行精炼纯化，得到DHA藻油成品。
[0012]作为本发明的一个优选方案，上述步骤a)中，选用碱性蛋白酶进行酶法破壁处理，上述碱性蛋白酶的加入量为海洋微藻发酵液干物质的0.1~I %，上述酶法破壁中，温度为50~70°C，pH8~9，搅拌破壁为6~10h。
[0013]所述步骤b)中，离心机离心分离转速≥3000rpm，即分离因素Fr≥1000，离心时间为5~20min。
[0014]优选的，上述步骤c)中，离心机离心分离转速≥1000Orpm,即分离因素Fr≥10000，离心时间为5~20min。
[0015]上述步骤d)中，对DHA毛油进行精炼纯化后，再依次经过脱胶、脱酸、脱色、脱臭工序，得到DHA藻油成品。
[0016]本发明所带来的有益技术效果、；
[0017]本发明提出了一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法，采用酶法破壁，离心分离提取毛油再经过精炼纯化等工艺步骤提取DHA，其中酶法破壁步骤可提高细胞破壁率，充分释放细胞所含DHA，使DHA提取率大大提高，减少损耗浪费，降低生产成本；离心分离步骤不会加入其它有害物质，保证了 DHA的质量；精炼提纯步骤可进一步提高DHA成品的纯度和品质。
[0018]本发明可提高微藻发酵生产DHA的提取总收率，总提取率均在80%以上，减少浪费，降低生产成本，同时可提高DHA藻油质量，产品性能安全。
【具体实施方式】
[0019]本发明提出了一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法，为了使本发明的技术方案更加清楚、明确，下面结合具体实施例对本发明做进一步清楚、完整的说明。
[0020]本发明所选原料除特别说明外，均可通过商业渠道购买得到。
[0021]本发明，一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法，包括以下步骤:
[0022]a)将海洋微藻发酵液进行酶法破壁处理，得到破壁后的发酵液，其中，酶选用碱性蛋白酶，碱性蛋白酶的加入量为海洋微藻发酵液干物质的0.1~1%，上述酶法破壁中，温度为50~70°C，pH8~9，搅拌破壁为6~IOh ;
[0023]b)向步骤a)得到的发酵液中加入一定量的酒精，用离心机进行离心分离去除水分，得到破壁细胞和藻油，离心过程中，离心机离心分离转速> 3000rpm,即分离因素Fr≥1000，离心时间为5~20min ；
[0024]c)将步骤b)得到的破壁细胞和藻油再次经过高速离心分离，去除固体残渣，得到DHA毛油，离心机离心分离转速≥1000Orpm,即分离因素Fr≥10000，离心时间为5~20min ；
[0025]d)对步骤c)得到的DHA毛油进行精炼纯化，经过脱胶、脱酸、脱色、脱臭等工序，得到DHA藻油成品。
[0026]下面结合具体实施例详细说明。
[0027]实施例1:
[0028]将发酵结束的DHA微藻发酵液IL(初始总酯含量为9.7%)调节温度至50°C，pH8.0，按发酵液干物质的1%加入碱性蛋白酶进行细胞破壁预处理，搅拌破壁9h后镜检破壁率90% ;按发酵液体积为100%，加入95%酒精IL混匀；用离心机3000rpm进行离心分离去除水分，离心IOmin后得破壁细胞和藻油；将得到的藻油和细胞碎片经过高速离心机1000Orpm分离去除破壁细胞等固体残渣，离心lOmin，得到DHA毛油；再对DHA毛油进行精炼纯化，经过脱胶、脱酸、脱色、脱臭等工序，最后得到DHA藻油成品80g，总酯提取率为82.5%。
[0029]实施例2:
[0030]将发酵结束的DHA微藻发酵液IL(初始总酯含量为9.7%)调节温度至57°C，pH8.4，按发酵液干物质的0.5%加入碱性蛋白酶进行细胞破壁预处理，搅拌破壁7h后镜检破壁率100% ;按发酵液体积为90%，加入85%酒精IL混匀；用离心机3000rpm进行离心分离去除水分，离心5min后得破壁细胞和藻油；将得到的藻油和细胞碎片经过高速离心机1000Orpm分离去除破壁细胞等固体残渣，离心5min，得到DHA毛油。再对DHA毛油进行精炼纯化，经过脱胶、脱酸、脱色、脱臭等工序，最后得到DHA藻油成品78g，总酯提取率为80.4%。
[0031]实施例3:
[0032]将发酵结束的DHA微藻发酵液IL (初始总酯含量为10.2)调节温度至60°C，pH8.4，按发酵液干物质的0.5%加入碱性蛋白酶进行细胞破壁预处理，搅拌破壁8h后镜检破壁率100% ;按发酵液体积为100 %，加入95%酒精IL混匀；用离心机4000rpm进行离心分离去除水分，离心IOmin后得破壁细胞和藻油；将得到的藻油和细胞碎片经过高速离心机12000rpm分离去除破壁细胞等固体残渣，离心lOmin，得到DHA毛油；再对DHA毛油进行精炼纯化，经过脱胶、脱酸、脱色、脱臭等工序，最后得到DHA藻油成品85.6g，总酯提取率为83.9%。
[0033]实施例4:
[0034]与实施例1不同之处在于:将发酵结束的DHA微藻发酵液IL (初始总酯含量为10.2)调节温度至70° C，搅拌破壁6h，总酯提取率为81.9%。
[0035]实施例5:
[0036]与实施例1不同之处在于:与实施例1不同之处在于:将发酵结束的DHA微藻发酵液IL (初始总酯含量为10.2)调节温度至70°C，搅拌破壁10h，总酯提取率为82.5%。
[0037]现有技术中大部分DHA的提取率都在80%以下，从本实施例1~5可以看出，按照本发明方法提取的DHA，其提取率都在80%以上。
【权利要求】
1.一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法，其特征在于:包括以下步骤: a)将海洋微藻发酵液进行酶法破壁处理，得到破壁后的发酵液； b)向步骤a)得到的发酵液中加入一定量的酒精，用离心机进行离心分离去除水分，得到破壁细胞和藻油； c)将步骤b)得到的破壁细胞和藻油再次经过高速离心分离，去除固体残渣，得到DHA毛油； d)对步骤c)得到的DHA毛油进行精炼纯化，得到DHA藻油成品。
2.根据权利要求1所述的一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法，其特征在于:所述步骤a)中，选用碱性蛋白酶进行酶法破壁处理，所述碱性蛋白酶的加入量为所述海洋微藻发酵液干物质的0.1~I %，所述酶法破壁中，温度为50~70°C，pH8~9，搅拌破壁为6 ~10h。
3.根据根据权利要求1或2所述的一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法，其特征在于:所述步骤b)中，离心机离心分离转速≥3000rpm，即分离因素Fr≥1000，离心时间为5 ~20min。
4.根据权利要求3所述的一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法，其特征在于:所述步骤c)中，离心机离心分离转速≥lOOOOrpm，即分离因素Fr≥10000，离心时间为5~20mino
5.根据权利要求3所述的一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法，其特征在于:所述步骤d)中，对DHA毛油进行精炼纯化后，再依次经过脱胶、脱酸、脱色、脱臭工序，得到DHA藻油成品。
【文档编号】C07C51/42GK103787864SQ201410060198
【公开日】2014年5月14日 申请日期:2014年2月20日 优先权日:2014年2月20日
【发明者】崔球, 李悦明, 宋晓金, 徐建春, 李霞, 夏修峦, 王道会 申请人:青岛琅琊台集团股份有限公司