一种检测微量血清白蛋白的荧光试剂、制备方法及应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种检测微量血清白蛋白的荧光试剂、制备方法及应用，属于荧光生物传感器领域。所述荧光试剂由DP-TPPNa和良溶剂组成。将3,4-二溴-1,2,5-三(甲氧羰基苯基)吡咯溶解于良溶剂中，加入苯硼酸、催化剂和碱性盐，反应得到DP-TPP；将DP-TPP溶于溶剂中，加入碱，反应得到DP-TPPNa。将所述DP-TPPNa溶解于良溶剂中得到荧光试剂；所述荧光试剂可定量检测血清中血清白蛋白，制备方法简单，操作方便，响应迅速，兼具高灵敏性和高选择性，且具有良好可视化的检出信号，根据实际需要可以完全脱离对于高精仪器的依赖性，将会在很大程度上满足当今人们对于血清中血清白蛋白的检测要求。
【专利说明】-种检测微量血清白蛋白的荧光试剂、制备方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种检测微量血清白蛋白的荧光试剂、制备方法及应用，具体涉及一 种用于溶液荧光检测血清中微量血清白蛋白的实时"点亮"型荧光试剂及制备方法，属于荧 光生物传感器领域。
【背景技术】
[0002] 血清白蛋白是人体内循环系统中最多的蛋白质，它具有结合和运输内源性与外源 性物质，维持血液胶体渗透压，清除自由基，抑制血小板聚集和抗凝血等生理功能，在生命 过程中有着重要的意义。血清白蛋白由肝脏产生，因此，血清中血清白蛋白含量低可能预示 着患有慢性肝炎，肝硬化，甚至肝衰竭及糖尿病等疾病。其中，糖尿病可以引起蛋白质代谢 紊乱，炎症细胞因子可以促进肝脏的急性期反应造成白蛋白合成的减少和分解的增加，所 以血清中血清白蛋白的急剧减少是糖尿病并发症的表现之一。综上，对血清中血清白蛋白 含量的特异性定量检测具有重要的临床应用。
[0003] 以往对于血清白蛋白的检测主要有以下几个方法：电泳法、免疫法和染料结合法。 电泳法操作相对繁琐；免疫法特异性好、灵敏度高且白蛋白易纯化，但成本较高，检测时间 长；溴甲酚绿（BCG)法是最常用的染料结合法，反应较为快捷，测试在10?30s后可进行， 但血清中的α和β球蛋白与BCG也能起慢反应，选择性较差，且需要专业仪器自动化生化 分析仪，成本较高，操作复杂。
[0004] 近年来，干化学法逐步应用于临床检验中，由于其具有操作简便快速、样本用量少 的优点，适合于急诊检验，但其主要用于检测总蛋白含量，对血清白蛋白检测特异性一般， 且主要用于尿液检查，需要使用干化学尿液分析仪。
[0005] 2001年，唐本忠院士课题组报道了"聚集诱导发光（ΑΙΕ) "现象，由于其独特的"点 亮"效果，ΑΙΕ分子被应用于检测一些生物分子，如DNA，RNA与蛋白质等，其中包括血清白蛋 白。目前，已经报道的检测血清白蛋白的体系包括含有磺酸基钠的四苯基乙烯以及含有磺 酸基钠的二苯乙烯基蒽体系，这两种体系的AIE分子检测血清白蛋白具有灵敏度高，检测 速度快，样本用量少等优点，优于之前提到的方法。但已报道的体系除对血清白蛋白有响应 夕卜，还对其他蛋白存在一定程度的响应，虽然通过对其进行修饰等方法可以提高分子对血 清白蛋白的响应程度，但也只能降低而不能排除其他蛋白对其检测的影响。除此以外，这两 种体系在检测血清白蛋白的同时，并不能很好地排除血清中其他成分对检测的影响。因此， 定量检测血清白蛋白需要进行预先分离才能达到其检测准确性。
[0006] (Peters, T. , Jr. Adv. Protein Chem. 1985, 37, 161. Carter, D. C. ；Ho, J. X. Adv. Protein Chem. 1994, 45, 153. Sjoholm, I. ；Ekman, B. ；Kober, A. Mol. Pharmacol. 1979, 16, 767. Hu, Y. J. ；Liu, Y. ；Xiao, X. H. Biomacromolecules2009, 10, 517. Murch, S. H. ；Winyard, P. J. D. ；Walker-Smith, J. A. Lancetl996, 347, 1299. de Brito-Ashurst I. ；Varagu M. ；Raftery M. J. J. Am. Soc. Nephrol, 2009, 20 (9), 2075-2084. Hoogenberg, K. ；Sluiter, W. J. ；Dullaart, R. P. F. Acta Endrocrinol. 1993, 129, 151. Lowry, 0. H. ；Rosebrough, N. J. ；Farr, A. L. ；Randall, R. J. J. Biol. Chem. 1951, 193, 265. Martinez, A. W. ；Phillips, S. T. ；Butte, M. J. ；Whitesides, G. M. Angew. Chem. , Int. Ed. 2007, 46, 1318. Hong, Y. N. , Lam, J. W. Y. , Tang, B. Z. Chem Soc Rev, 2011, 40:5361 -5388. Li，Z.，Dong，Y. Q.，Tang，B. Z.，Adv. Funct. Mater.，2009，19, 905 - 917. Xu，X. J.，Huang，J.，Li Z. Chem. Commun.，2011，47，12385 - 12387. Wang Z. L.，Ma K.，Tian W. J. Sci. China. Chem. , 2013, 9, 1234 - 1238. Hong Y. N. , Feng C. , Tang B. Z. Anal. Chem. 2010, 82, 7035 - 7043.)
【发明内容】
[0007] 针对现有荧光试剂对血清中白蛋白的检测选择性不高，在定量检测血清白蛋白时 需要进行预先分离才能达到其检测准确性的问题，本发明的目的之一在于提供一种检测微 量血清白蛋白的荧光试剂，所述荧光试剂对血清白蛋白具有特异性的荧光响应，对血清中 白蛋白的检测灵敏度高且非常快捷，并具有高度选择性；目的之二在于提供一种检测微量 血清白蛋白的荧光试剂的制备方法，所述制备方法简单，操作方便。
[0008] 本发明的目的由以下技术方案实现：
[0009] -种检测微量血清白蛋白的荧光试剂，所述荧光试剂由4, 4'，4 " - (3, 4-二苯 基-1H-吡咯-1，2, 5-三基）三苯酸钠（简称DP-TPPNa)和良溶剂1组成。
[0010] 其中，DP-TPPNa的结构式如下：
[0011]
【权利要求】
1. 一种检测微量血清白蛋白的荧光试剂，其特征在于：所述荧光试剂由DP-TPPNa和良 溶剂1组成，其中，〇?1--恥是4,4'，4"-(3,4-二苯基-1!1-吡咯-1，2,5-三基）三苯酸 钠的简称，其结构式如下：
2. 根据权利要求1所述的一种检测微量血清白蛋白的荧光试剂，其特征在于：良溶剂1 为去离子水、磷酸盐缓冲液、盐溶液和血清中的一种。
3. 根据权利要求1所述的一种检测微量血清白蛋白的荧光试剂，其特征在于： DP-TPPNa 的浓度为 ΚΓ3 ?l(T7mol/L。
4. 根据权利要求2所述的一种检测微量血清白蛋白的荧光试剂，其特征在于：所述盐 溶液中的盐为钠盐、钾盐、氯盐、铁盐和铜盐中的一种以上。
5. -种如权利要求1所述的检测微量血清白蛋白的荧光试剂的制备方法，其特征在 于：所述方法步骤如下： (1) 将3, 4-二溴-1，2, 5-三（甲氧羰基苯基）吡咯溶解于良溶剂2中，得到浓度为 3. 33?10g/L的3, 4-二溴-1，2, 5-三（甲氧羰基苯基）吡咯溶液；向所述溶液中加入苯 硼酸、催化剂和碱性盐，于70°C下反应18?30h，得到3, 4-二苯基-1，2, 5-三（甲氧羰基 苯基）吡咯，简称DP-TPP ; (2) 将DP-TPP溶解于溶剂中，得到浓度为1. 67?4g/L的DP-TPP溶液；向所述溶液中 加入氢氧化钠，于70°C下反应18?30h，透析，干燥，得到DP-TPPNa ; (3) 将DP-TPPNa溶解于良溶剂1中，混合均匀，得到所述荧光试剂。
6. 根据权利要求5所述的一种检测微量血清白蛋白的荧光试剂的制备方法，其特征在 于：步骤⑴所述3, 4-二溴-1，2, 5-三（甲氧羰基苯基）吡咯、苯硼酸、催化剂与碱性盐的 质量比为 1:1. 92 ?2. 22:0. 18 ?0· 55:2. 25 ?3. 64。
7. 根据权利要求5所述的一种检测微量血清白蛋白的荧光试剂的制备方法，其特征在 于：步骤（1)所述良溶剂2为乙二醇二甲醚；催化剂为四（三苯基膦）钯；碱性盐为碳酸铯。
8. 根据权利要求5所述的一种检测微量血清白蛋白的荧光试剂的制备方法，其特征在 于：步骤⑵所述DP-TPP与碱的质量比为1:0. 57?0. 96 ;所述溶剂为水与四氢呋喃组成 的混合溶剂，其中，水与四氢呋喃的质量比为1:0. 5?2。
9. 根据权利要求5所述的一种检测微量血清白蛋白的荧光试剂的制备方法，其特征在 于：步骤（2)所述干燥为冷冻真空干燥。
10. -种如权利要求1所述的检测微量血清白蛋白的荧光试剂应用于血清中微量血清 白蛋白的检测。
【文档编号】C07D207/337GK104194771SQ201410389582
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年8月8日 优先权日:2014年8月8日
【发明者】董宇平, 李汪洋, 佟斌, 冯霄, 石建兵 申请人:北京理工大学