1.一种PD-1 CAR-T细胞,其特征在于,所述PD-1 CAR-T细胞是在T细胞内表达PD-1- CD8™-4-1BB-CD3ζ融合蛋白。
2.根据权利要求1所述的PD-1 CAR-T细胞,其特征在于,所述PD-1 CAR-T细胞的制备方法包括步骤为:
(1)合成和扩增PD-1-CD8™-4-1BB-CD3ζ融合蛋白基因,将所述PD-1-CD8™-4-1BB-CD3ζ融合蛋白基因克隆到慢病毒表达载体上;
(2)利用慢病毒包装质粒和步骤(1)得到的慢病毒表达载体质粒感染293T细胞,包装和制备慢病毒;
(3)分离人外周血T淋巴细胞,培养扩增,利用步骤(2)得到的慢病毒感染T淋巴细胞,使所述T淋巴细胞表达PD-1-CD8™-4-1BB-CD3ζ融合蛋白,得到PD-1 CAR-T细胞。
3.根据权利要求2所述的PD-1 CAR-T细胞,其特征在于,所述T淋巴细胞的表面表达所述PD-1分子,所述T细胞的胞内由所述4-1BB-CD3ζ分子传递T细胞活化信号。
4.根据权利要求1或2所述的PD-1 CAR-T细胞,其特征在于,所述PD-1-CD8™-4-1BB-CD3ζ融合蛋白中所述PD-1的氨基酸序列为PD-1蛋白的胞外段序列,如SEQ ID NO:5所示;所述PD-1-CD8™-4-1BB-CD3ζ融合蛋白中所述CD8™的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
5.根据权利要求1或2所述的PD-1 CAR-T细胞,其特征在于,所述PD-1-CD8™-4-1BB-CD3ζ融合蛋白中所述4-1BB的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示;所述PD-1-CD8™-4-1BB-CD3ζ融合蛋白中的所述4-1BB 能替换为CD28,所述CD28的分子序列如SEQ ID NO:3所示。
6.根据权利要求1或2所述的PD-1 CAR-T细胞,所述PD-1-CD8™-4-1BB-CD3ζ融合蛋白中所述CD3ζ的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示;所述T细胞来源于人外周血T淋巴细胞中。
7.根据权利要求1或2所述的PD-1 CAR-T细胞,其特征在于,所述PD-1-CD8™-4-1BB-CD3ζ融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。
8.根据权利要求1或2所述的PD-1 CAR-T细胞,其特征在于,所述PD-1 CAR-T细胞在制备治疗肿瘤药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的PD-1 CAR-T细胞,其特征在于,所述PD-1 CAR-T细胞在制备治疗高表达PDL-1分子的肿瘤药物中的应用。