一种牛源抗金黄色葡萄球菌的真核表达单链抗体、制备方法及其用途与流程

文档序号:11124316阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种牛源性抗金黄色葡萄球菌的真核表达单链抗体,其特征在于,其至少具有如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列的牛抗体轻链可变区VL和如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的牛抗体重链可变区VH以及由中间连接肽Linker按照VL-Linker-VH的顺序进行连接构成的牛源单链抗体片段VL-Linker-VH。

2.根据权利要求1所述的牛源性抗金黄色葡萄球菌的真核表达单链抗体,其特征在于:所述的牛源单链抗体片段VL-Linker-VH具有如SEQ ID No.3所示的氨基酸序列。

3.一种权利要求1所述的牛源性抗金黄色葡萄球菌的真核表达单链抗体的编码基因。

4.一种根据权利要求1所述的牛源性抗金黄色葡萄球菌的真核表达单链抗体的制备方法,其特征在于,具体步骤如下:

(1)采用RT-PCR直接从患奶牛乳腺炎的外周血单个核细胞RNA中扩增出抗体编码基因的轻链可变区VL基因和重链可变区基因VH;

(2)利用SOE-PCR法将连接肽linker与VL基因和VH基因相连构建牛源性单链抗体基因;

(3)将步骤(2)的牛源性单链抗体基因克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,构建重组质粒;

(4)将步骤(3)的重组质粒转化入大肠杆菌,培养并用辅助噬菌体扩增建立初级单链抗体文库;

(5)用金黄色葡萄球菌全菌作为包被抗原,富集淘选;

(6)采用phage ELISA,用金黄色葡萄球菌全菌作为包被抗原,筛选得到的阳性克隆即为牛源性抗金黄色葡萄球菌真核表达单链抗体。

5.一种根据权利要求1所述的牛源性抗金黄色葡萄球菌的真核表达单链抗体在制备治疗金黄色葡萄球菌奶牛乳腺炎药物中的用途。

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