本发明涉及食品加工领域，具体涉及一种促进中性蛋白酶活性的方法及其在啤酒澄清中的应用”。
技术背景
中性蛋白酶别名沙雷肽酶，分子量为35～40KD，是一种在中性条件下活性较高的蛋白酶，可用于各种蛋白质酶解，作为一种生物催化剂，它具有催化反应速度快，无工业污染等优点。根据《GB 2760-2011 食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》的规定，中性蛋白酶可用作食品工业的加工助剂（酶制剂）”。
啤酒在运输、冷藏过程中，由于光照、震动、温度等环境条件的作用，会产生浑浊、沉淀的现象，引起啤酒浑浊、沉淀的原因是啤酒中残留的蛋白质与多元酚结合成大分子的复合物。采用中性蛋白酶处理原浆啤酒，可以分解啤酒中的大分子蛋白质，此法具有快速、简便、效果好等特点，在生产中有重要的应用价值。 但中性蛋白酶价格较高，影响了啤酒的生产成本和中性蛋白酶的应用领域”。
8–((4–(2,4–二甲氧基苯基)哌嗪–1–基)甲基) –5,7 –二羟基–3–(4–羟基苯基) –4H–苯并吡喃–4–酮是染料木素与1-(2,4-二甲基苯基)哌嗪经化学合成得到的一种染料木素衍生物。8–((4–(2,4–二甲氧基苯基)哌嗪–1–基)甲基) –5,7 –二羟基–3–(4–羟基苯基) –4H–苯并吡喃–4–酮分子式为C28H28N2O5，分子量472.52，其结构式如下”。
目前，国内外未见8–((4–(2,4–二甲氧基苯基)哌嗪–1–基)甲基) –5,7 –二羟基–3–(4–羟基苯基) –4H–苯并吡喃–4–酮在促进中性蛋白酶活性方面的应用报道”。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种采用8–((4–(2,4–二甲氧基苯基)哌嗪–1–基)甲基) –5,7 –二羟基–3–(4–羟基苯基) –4H–苯并吡喃–4–酮作为酶促进剂，促进中性蛋白酶活性的方法，不仅改善啤酒的澄清效果，而且得到的澄清啤酒，营养价值更高”。
本发明所述的促进中性蛋白酶活性的方法，是将酶促进剂8–((4–(2,4–二甲氧基苯基)哌嗪–1–基)甲基) –5,7 –二羟基–3–(4–羟基苯基) –4H–苯并吡喃–4–酮与中性蛋白酶一起添加到原浆啤酒中，制备澄清的啤酒”。
其中：
中性蛋白酶促进剂的添加量为中性蛋白酶质量的2～4%，中性蛋白酶的添加量为每升原浆啤酒中添加4～5mg”。
酶解温度为35～40℃，酶解时间为32～34h”。
酶解之后，采用截断分子量为20000的中空纤维超滤膜超滤”。
中性蛋白酶促进剂8–((4–(2,4–二甲氧基苯基)哌嗪–1–基)甲基) –5,7 –二羟基–3–(4–羟基苯基) –4H–苯并吡喃–4–酮，为染料木素与1-(2,4-二甲基苯基)哌嗪的化学合成物，具体制备过程如下”。
在50mL圆底烧瓶中加入染料木素1mmol，无水乙醇25mL和37%甲醛水溶液0.08mL，加热至55～60 ℃，反应液澄清后，加入1-(2,4-二甲基苯基)哌嗪0.19mL，室温搅拌48h，有固体析出，过滤， 固体经重结晶分离纯化，得到本发明的酶促进剂”。
中性蛋白酶促进剂与中性蛋白酶的一个酪氨酸残基以一个氢键相互结合，两个π键和一个赖氨酸残基结合，三个π键和一个色氨酸残基结合，这种结合导致了中性蛋白酶构象的改变，从而提高了中性蛋白酶的活性”。
与现有的技术相比，本发明的有益效果如下”。
（1）本发明的中性蛋白酶促进剂提高了中性蛋白酶的活性，其与中性蛋白酶一起添加到原浆啤酒中，具有协同作用，降低了中性蛋白酶的使用量，改善了啤酒的澄清效果，保证了啤酒在运输、冷藏过程中的高澄清度”。
（2）本发明的制作方法，改善了啤酒的口感，提高了多肽的含量，增加了啤酒的营养价值”。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步描述”。
实施例 1
在原浆啤酒中，加入5mg/L的中性蛋白酶，同时加入占中性蛋白酶质量2%的中性蛋白酶促进剂8–((4–(2,4–二甲氧基苯基)哌嗪–1–基)甲基) –5,7 –二羟基–3–(4–羟基苯基) –4H–苯并吡喃–4–酮，在温度为35℃条件下气浴震荡34h，酶解澄清结束后，中空纤维超滤膜超滤，得到澄清的啤酒”。
加中性蛋白酶促进剂后比未使用中性蛋白酶的啤酒比，澄清度提高了8%，比未使用中性蛋白酶促进剂相比澄清度提高了5%。使用和未使用中性蛋白酶促进剂的啤酒比未使用中性蛋白酶的啤酒的多肽含量分别升高了 4.5% 和 1.1%”。
实施例 2
在原浆啤酒中，加入4mg/L的中性蛋白酶，同时加入占中性蛋白酶质量4%的中性蛋白酶促进剂8–((4–(2,4–二甲氧基苯基)哌嗪–1–基)甲基) –5,7 –二羟基–3–(4–羟基苯基) –4H–苯并吡喃–4–酮，在温度为40℃条件下气浴震荡32h，酶解澄清结束后，中空纤维超滤膜超滤，得到澄清的啤酒”。
加中性蛋白酶促进剂后比未使用中性蛋白酶的啤酒比，澄清度提高11%，比未使用中性蛋白酶促进剂相比澄清度提高了8%。使用和未使用中性蛋白酶促进剂的啤酒比未使用中性蛋白酶的啤酒的多肽含量分别升高了 4.5% 和 1.1%”。