一种四环素多克隆抗体及其制备方法与流程

文档序号:12453224阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种四环素多克隆抗体,其特征在于,按照重量份数计由如下原料制备而成:

四环素标准品58-60份、丁胺卡那霉素5-20份、牛血清白蛋白3-5份、卵清蛋白3-6份、碳二亚胺盐酸盐1-5份、N-羚基唬拍酞亚胺2-8份、二甲基甲酞胺1-2份、完全弗式佐剂1-3份、不完全弗式佐剂2-3份、磷酸盐缓冲液8-10份、碳酸盐缓冲液15-20份、包被缓冲液10-15份、洗涤液8-12份、显色剂8-13份、过氧化物酶标记羊抗鼠1-3份、硫酸1-3份。

2.根据权利要求1所述的一种四环素多克隆抗体,其特征在于,所述缓冲液选择PH值为9.6,浓度为0.05mol/ml的碳酸盐缓冲液,定容至100ml。

3.根据权利要求1所述的一种四环素多克隆抗体,其特征在于,所述硫酸选择浓度为2mol/ml的溶液。

4.根据权利要求1所述的一种四环素多克隆抗体,其特征在于,所述显色剂选择过氧化氢水溶液。

5.根据权利要求1所述的一种四环素多克隆抗体,其特征在于,所述洗涤液的浓度为0.01mol/ml,PH值为7.0。

6.一种四环素多克隆抗体的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)取用10g盐酸四环素溶于有2ml浓盐酸的500ml水中,室温搅拌下,再加入7g粉末状玻拍酞亚胺,反应30分钟后,水洗过滤;

(2)将得到的粗产品溶于80ml 95%的乙醇中,溶解完全后,将其加入到80ml加有水合阱的乙醇溶液中,混合物立刻沉淀,搅拌1h,放置过夜,过滤得产品;

(3)采用碳二亚胺两步法合成四环素免疫原:

a:准确称取BSA 40.8mg、EDC 34.47g、NHS 13.81mg,使之充分溶解于4ml PBS中,放入磁力搅拌器转子,密封烧杯,室温下搅拌反应24h,得到的反应液,称为A液;

b:准确称取四环素半抗原12.87mg,加入300ml DMF和3ml PBS使之充分溶解,称为B液;

c:然后将B液逐滴滴加到A液中,密封避光,在4℃下搅拌过夜;

待上述反应完成后,将反应液转移至处理好的透析袋中,于4℃冰箱中,搅拌下用PBS透析72h,前24h每8h换液1次,透析完成后将透析后的交联产物分装,于-20℃保存备用;

(4)采用碳二亚胺两步法合成四环素的包被原:

a:准确称取OVA 40.8mg、EDC 34.47g、NHS 13.81mg,使之充分溶解于5ml PBS中,放入磁力搅拌器转子,密封烧杯,室温下搅拌反应24h,得到的反应液,称为A液;

b:准确称取四环素半抗原12.87mg,加入300ml DMF和3ml PBS使之充分溶解,称为B液;

c:然后将B液逐滴滴加到A液中,密封避光,在4℃下搅拌过夜;

待上述反应完成后,将反应液转移至处理好的透析袋中,于4℃冰箱中,搅拌下用PBS透析72h,前24h每8h换液1次,透析完成后将透析后的交联产物分装,于-20℃保存备用。

7.根据权利要求6所述的一种四环素多克隆抗体的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中,水洗过滤的次数最少在3次以上。

8.根据权利要求6所述的一种四环素多克隆抗体的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)和步骤(4)中,反应液透析的调节分为三段,恒温透析、换液处理、以及反应液降温处理。

9.根据权利要求6所述的一种四环素多克隆抗体的制备方法,其特征在于,所述恒温透析阶段的温度从恒定在4℃,在密封避光的条件下搅拌过夜;所述换液处理阶段的温度保持在4℃不变,但是要对透析液每8h换液1次;所述反应液降温处理阶段,在透析完成后,将反应液置于-20℃的环境下保存备用。

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