1.一种鸡溶菌酶和鸡β-防御素7的融合基因,其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。
2.如权利要求1所述的融合基因,其特征在于:
其核苷酸序列SEQIDNO:1包括SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:7的序列;
基因的5′端为SEQIDNO:3序列,来自于鸡溶菌酶基因,全长393bp;
基因的3′端为SEQIDNO:4序列,来自于鸡β-防御素,全长132bp;
SEQIDNO:3和SEQIDNO:4之间为连接肽编码序列SEQIDNO:7。
3.一种权利要求1所述的融合基因的制备方法,包括以下步骤:
(1)设计扩增鸡溶菌酶和鸡β-防御素7基因片段的PCR引物;
(2)在鸡溶菌酶基因下游引物和鸡β-防御素7基因上游引物中加上一段柔性的连接肽序列,然后通过PCR反应分别扩增鸡溶菌酶基因和鸡β-防御素7基因;
(3)根据基因重叠延伸技术,以步骤(2)所得的两个PCR反应产物的混合物为模版,以鸡溶菌酶基因上游引物和鸡β-防御素7基因下游引物为引物,分三步进行基因重叠延伸,获得融合基因。
4.一种融合基因表达载体,其特征在于:所述的表达载体为pET32a。
5.一种融合基因工程菌,其特征在于:由权利要求1的融合基因表达载体转入宿主制备而得。
6.根据权利要求5所述的一种融合基因工程菌,其特征在于:所述的融合基因工程菌为大肠杆菌。
7.根据权利要求6所述融合基因表达载体的构建方法,其特征在于:具体步骤如下:
(1)以PCR扩增融合基因,得到融合基因扩增片段SEQIDNO:1;
(2)采用双酶切法,双酶切载体与扩增后的片段,并用T4连接酶将双酶切后的产物连接到质粒;
(3)将连接产物转化大肠杆菌获得阳性克隆子,提取质粒,测序验证后,得到所述融合基因的表达载体。
8.一种权利要求1所述的鸡溶菌酶和鸡β-防御素7的融合基因编码的融合蛋白,其氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。
9.如权利要求8所述的融合蛋白,其特征在于:其氨基酸序列SEQIDNO:2中同时具有SEQIDNO:5和SEQIDNO:6中的氨基酸序列。
10.如权利要求8所述的8融合蛋白,其特征在于:该融合蛋白同时具有鸡溶菌酶和鸡β-防御素的功能,并对金黄色葡萄球菌有明显的抑菌活性,最小抑菌浓度低于4mg/ml。