本发明属于医药技术领域，涉及呋喃并[3,2-e][1]苯并呋喃类化合物及其抗乳腺癌的用途。
背景技术：
临床研究表明，乳腺癌是一种恶性肿瘤，大约三分之二的乳腺癌属于雌激素受体阳性乳腺癌，其发生、发展与雌激素和雌激素受体密切相关(Katzenellenbogen BS,Frasor J.Semin Oncol,2004,31(Suppl 3):28-38.)。
典型的雌激素受体包括ERα和ERβ两种亚型，多数乳腺肿瘤表达ERα和ERβ两种受体，ERα和ERβ的比值在良性和恶性乳腺肿瘤中不同，在良性组织中以ERβ表达为主，而在恶性组织中ERα占优势。在乳腺肿瘤发生发展过程中ERα升高而ERβ降低，ERα和ERβ的比值升高(Balf PJ,McCann AH,Welch HM,et al.European Journal of Surgical Oncology,2004,30(10):1043.)。目前在乳腺癌的临床治疗中，使用选择性雌激素受体调节剂(SERMs)是主要治疗方法之一。SERMs是一种类似于雌激素的非雌激素药物，属于非甾类化合物，只对某一种ER亚型ERα或ERβ有激动作用而对另一亚型无作用或有拮抗作用的药物。其“选择性”是指SERMs在某些组织如骨、肝、心血管系统ERβ集中区中表现为激动剂，而在另外一些组织如乳腺中表现为拮抗剂，在子宫(ERα较显著区)中可以是激动剂，也可以是拮抗剂(Katzenellenbogen B S,Katzenenllenbogen J A.Science,2002,295(5564):2380-2381.Pennisi E.Science,1997,277(5331):1439.)。SERMs是一类结构多样的分子家族，根据其母核结构和非甾体雌激素拮抗剂的化学分类方法，可将SERMs分为三苯乙烯类(triphenylethylenes,TPE)，苯并噻吩类(benzotriophenes)，苯并吡喃类(benzopyrans)，萘类(naphthalenes)，吲哚类(indoles)及其他类共6类(Miquel JF,Gilbert J.J S teroid Biochem,1988,31(4B):525-544.)。但临床上常用的SERMs生物利用度低，易产生耐药性，具有毒副作用大等缺点，因此寻找治疗效果更好，生物利用度高，毒副作用小的SERMs是当今研究方向。
苯并噻吩类SERMs的代表药物是雷洛昔芬(raloxifene)，是第二代SERMs，通过与ER结合在乳腺组织中表现为拮抗作用，能抑制雌激素诱发的乳腺增生(Liu H,Lee ES,Gajdos C,et al.Journal of the National Cancer Institute,2003,95:1586-1597.)，并且在动物体内能抑制肿瘤生长(Clemens JA,Bennett DR,Black LJ,Jones CD.Life Science,1983,32:2869-2875.，可降低乳腺肿瘤细胞的增殖活性(Lopes-Costa PV，dos Santos AR，dos Santos LG，et a1.Cell Proliferation,2010,43(2):124-129.)，并且能降低血脂、预防及治疗骨质疏松，在治疗剂量下不升高子宫内膜癌的发病率(范忠林,李海平,呈祥德.中华现代外科学杂志,2004,1(1):51-54.)。但其临床效果并不是非常显著，有效率仅为33％(Gradishar W,G1usIllan J Y,et a1.Cancer,2000,88(9):2047.)，也可导致热潮红和小腿痛性痉挛等不良反应(Davies G C,Huster W J,Lu Y,et al.Obstetrics&Gynecology,1999,93(4):558-565.)。
我们根据电子等排原理对苯并噻吩类化合物进行结构改造，设计并合成了一系列呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃类化合物，以克服现有的SERMs上述缺点。
技术实现要素：
本发明的一个目的是提供新的抗雌激素受体阳性乳腺癌药物。
本发明的另一个目的是提供一种药用组合物，该组合物包含有效量的所述新的抗雌激素受体阳性乳腺癌化合物或其药学上可接受的盐及其药学上可接受的载体。
本发明的另外一个目的是提供一种在受治疗者体内产生抗雌激素受体阳性乳腺癌效应的方法，该方法是给予受治疗者足以产生所述效应量的，所述新的抗雌激素受体阳性乳腺癌化合物或其非毒性的药学上可接受的盐。
本发明涉及以下通式的化合物：
其中X可以选自H2或者O；
R可以任意选择1个、2个或3个H，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，卤素，-OH，-NO2。
R1、R2可以独立的选自H，C1-C4烷基，未取代或C1-C4烷基或卤素取代的苯基，未取代或C1-C4烷基或卤素取代的苄基，或与它们相连的氮原子一起组成1-哌啶基，1-吡咯烷基，4-吗啉基，4-未取代或C1-C4烷基取代的-1-哌嗪基，N-未取代或C1-C4烷基或卤素取代的苯基-1-哌嗪基，或六亚甲基亚胺基环。
进一步地，本发明优选具有如下结构的呋喃并[2,3-e][1]苯并呋喃类化合物及其药学上可接受的盐，
其中X可以选自H2或者O；
R可以任意选择地由1个、2个或3个独立地选自H，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，卤素，-OH，-NO2。
R1、R2可以独立的选自H，C1-C4烷基，或与它们相连的氮原子一起组成1-哌啶基，1-吡咯烷基，4-吗啉基，4-甲基-1-哌嗪基，4-苯基-1-哌嗪基，4-(4-氯苯基)-1-哌嗪基，4-(4-甲基苯基)-1-哌嗪基，4-(4-甲氧基苯基)-1-哌嗪基，4-苄基-1-哌嗪基，苄胺基，4-氯苯胺基，4-甲基苯胺基，4-甲氧基苯胺基，或六亚甲基亚胺基环。
本发明所述的化合物可以与药学上可接受的载体组合制备临床上可接受的药物组合物。
本发明的这类化合物的合成方法简单，适应工业化生产，相对于现有的药物活性更强，生物活性测试显示此类化合物具有抗ER阳性乳腺癌细胞株T-47D活性，是一种抗雌激素受体阳性乳腺癌药物。
具体实施方式
下列实施例阐述而非限制本发明的方法和组合物。不同条件和参数的其他适当修改和调整也是正常的，对本领域技术人员来说，显然也在本发明的范围之内。
如下反应式概括了制备本发明化合物的合成步骤。
通过下述实施例将有助于理解本发明，但并不影响本发明的内容。
实施例1：1-苯基-2-{4-[(2-二乙氨基)乙氧基]苯甲酰基}-7-苯甲酰基-8-甲基呋喃并[3,2-e][1]苯并呋喃
将1-苯基-2-(4-羟基苯甲酰基)-7-苯甲酰基-8-甲基呋喃并[3,2-e][1]苯并呋喃1mmol溶于30ml丙酮中，依次加入2-氯-N,N-二乙胺盐酸盐1.1mmol、碘化钾0.1mmol、无水碳酸钾10mmol，于40-45℃的油浴加热回流12h，TLC检测至反应完全，冷却至室温，抽滤，滤液旋蒸除去溶剂，柱层析分离(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)，得浅黄色固体，收率68.1％，m.p:180.2-180.6℃；EI-MS:572.1([M+H]+)；IR:3057.9,2966.9,2929.8,1642.2,1599.0,1554.4,1446.5,1386.6,1277.6,1170.8；1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ8.03(2H,d,J＝8.9Hz),7.99(2H,d,J＝7.2Hz),7.76(1H,d,J＝9.1Hz),7.68(1H,d,J＝9.1Hz),7.60(1H,t,J＝7.4Hz),7.44-7.51(7H,m),6.93(2H,d,J＝8.9Hz),4.12(2H,t,J＝6.2Hz),2.90(2H,t,J＝6.1Hz),2.65(4H,q,J＝7.2Hz),1.83(2H,s),1.08(3H,t,J＝7.1Hz)。
实施例2：1-苯基-2-{4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯甲酰基}-7-苯甲酰基-8-甲基呋喃并[3,2-e][1]苯并呋喃
按照实施例1方法，由1-苯基-2-(4-羟基苯甲酰基)-7-苯甲酰基-8-甲基呋喃并[3,2-e][1]苯并呋喃、1-(2-氯乙基)哌啶盐酸盐反应，得黄色色固体，收率78.9％，yield,m.p:202.3-206.6℃；EI-MS:584.9([M+H]+),606.5([M+Na]+)；IR:3058.2,2954.2,2853.1,1642.4,1598.8,1553.2,1447.8,1386.8,1371.7,1246.1,1169.9；1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ8.04(2H,d,J＝8.8Hz),7.99(2H,d,J＝7.3Hz),7.75(1H,d,J＝9.1Hz),7.68(1H,d,J＝9.1Hz),7.60(1H,t,J＝7.5Hz),7.55-7.41(6H,m),6.94(2H,d,J＝8.9Hz),4.19(2H,t,J＝5.6Hz),3.80-3.65(4H,m),2.84(2H,t,J＝5.5Hz),2.59(4H,s),1.83(3H,s),1.31(2H,s)。
实施例3：1-苯基-2-{4-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯甲酰基}-7-苯甲酰基-8-甲基呋喃并[3,2-e][1]苯并呋喃
按照实施例1方法，由1-苯基-2-(4-羟基苯甲酰基)-7-苯甲酰基-8-甲基呋喃并[3,2-e][1]苯并呋喃、4-(2-氯乙基)吗啉盐酸盐反应，得白色固体，收率65.3％，m.p:188.4-191.3℃；EI-MS:586.0([M+H]+)；IR:3058.2,2930.9,2852.3,1644.8,1598.9,1552.4,1445.1,1386.6,1276.6,1170.2；1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ8.03(2H,d,J＝8.9Hz),7.99(2H,d,J＝7.1Hz),7.76(1H,d,J＝9.1Hz),7.68(1H,d,J＝9.1Hz),7.60(1H,t,J＝7.4Hz),7.44-7.52(6H,m),6.93(2H,d,J＝8.9Hz),4.18(2H,t,J＝6.0Hz),2.80(2H,t,J＝6.0Hz),2.52(4H,s),1.83(3H,s),1.61-1.64(4H,m)。
实施例4：1-苯基-2-{4-[(2-二乙氨基)-2-氧代乙氧基]苯甲酰基}-7-苯甲酰基-8-甲基呋喃并[3,2-e][1]苯并呋喃
按照实施例1方法，由1-苯基-2-(4-羟基苯甲酰基)-7-苯甲酰基-8-甲基呋喃并[3,2-e][1]苯并呋喃、N,N-二乙基-2-氯乙酰胺反应，得黄色固体，收率74.5％，m.p:177.4-181.0℃；EI-MS:586.2([M+H]+)；IR:3073.1,2971.8,2929.3,1656.6,1597.0,1551.1,1447.5,1386.0,1372.1,1277.8,1240.8,1169.7；1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ8.05(2H,d,J＝8.9Hz),7.99(2H,d,J＝8.4Hz),7.75(1H,d,J＝9.1Hz),7.69(1H,d,J＝9.1Hz),7.60(1H,t,J＝7.4Hz),7.54-7.42(7H,m),6.99(2H,d,J＝8.9Hz),4.76(2H,s),3.41(4H,dq,J＝14.4,7.1Hz),1.82(3H,s),1.23(3H,t,J＝7.1Hz),1.16(3H,t,J＝7.1Hz)。
实施例5：1-苯基-2-{4-[2-(1-四氢吡咯基)-2-氧代乙氧基]苯甲酰基}-7-苯甲酰基-8-甲基呋喃并[3,2-e][1]苯并呋喃
按照实施例1方法，由1-苯基-2-(4-羟基苯甲酰基)-7-苯甲酰基-8-甲基呋喃并[3,2-e][1]苯并呋喃、1-氯乙酰四氢吡咯反应，得浅黄色固体，收率71.3％，m.p:174.8-175.9℃；EI-MS:584.1([M+H]+),606.1([M+Na]+),622.0([M+K]+)；IR:2924.9,2871.6,1661.1,1637.8,1599.0,1545.2,1448.1,1385.9,1371.9,1274.4,1242.4,1174.7；1H-NMR(600-MHz,CDCl3)δ8.07-8.03(2H,m),8.00-7.95(2H,m),7.75(1H,d,J＝9.1Hz),7.69(1H,d,J＝9.1Hz),7.60(1H,t,J＝7.4Hz),7.53-7.42(6H,m),7.02-6.96(2H,m),4.70(2H,s),3.53(4H,dt,J＝11.4,6.9Hz),1.99(2H,p,J＝6.8Hz),1.93-1.83(2H,m),1.82(3H,s)。
实施例6：1-苯基-2-{4-[2-(1-哌啶基)-2-氧代乙氧基]苯甲酰基}-7-苯甲酰基-8-甲基呋喃并[3,2-e][1]苯并呋喃
按照实施例1方法，由1-苯基-2-(4-羟基苯甲酰基)-7-苯甲酰基-8-甲基呋喃并[3,2-e][1]苯并呋喃、1-氯乙酰哌啶反应，得黄色固体，收率76.7％，yield,m.p:156.1-158.2℃；EI-MS:598.1([M+H]+),620.1([M+Na]+)；IR:2934.3,2853.6,1636.8,1599.0,1542.5,1443.5,1385.4,1273.3,1175.2；1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.04(2H,d,J＝8.6Hz),7.97(2H,d,J＝7.4Hz),7.69(2H,dd,J＝27.9,9.1Hz),7.58(1H,t,J＝7.2Hz),7.44-7.50(7H,m),6.99(2H,d,J＝8.6Hz),4.75(2H,s),3.51(4H,d,J＝39.8Hz),1.81(3H,s),1.63(6H,s)。
实施例7：1-苯基-2-{4-[2-(1-吗啉基)-2-氧代乙氧基]苯甲酰基}-7-苯甲酰基-8-甲基呋喃并[3,2-e][1]苯并呋喃
按照实施例1方法，由1-苯基-2-(4-羟基苯甲酰基)-7-苯甲酰基-8-甲基呋喃并[3,2-e][1]苯并呋喃、4-氯乙酰吗啉反应，得浅黄色固体，收率81.5％，m.p:160.4-162.2℃；EI-MS:600.2(M+H)+；IR:2921.4,2852.7,1734.2,1674.0,1599.0,1573.3,1444.8,1386.1,1275.0,1173.3；1H-NMR(600MHz,CDCl3)δ8.06(2H,d,J＝8.9Hz),7.99(2H,d,J＝8.4Hz),7.76(1H,d,J＝9.1Hz),7.70(1H,d,J＝9.1Hz),7.60(1H,t),7.45-7.53(7H,m),7.00(2H,d,J＝8.9Hz,),3.60-3.68(8H,m),1.83(3H,s)。
实施例8：对ER阳性乳腺癌细胞株T-47D的抑制作用
细胞株：人乳腺癌细胞T-47D，ER阳性。
仪器：高压灭菌锅SN510C(日本YAMATO)；CO2培养箱(日本SANYO)、倒置显微镜(CKX31，日本OLYMPUS)、酶标光度计(MULTISKAN MC，England)。
药品配置方法：用DMEM/L-15将受试药物(原液浓度为4mM)分装成浓度为0.4mM的储存液。再配制成终浓度为8uM的加药培养基。
阳性对照：他莫昔芬也用标准溶液配成如上浓度。
实验方法：待细胞培养至对数生长期后，贴壁细胞用0.25％的胰酶消化液消化约2min，加入10％胎牛血清DMEM/L-15培养基终止消化，吹打成细胞悬液，移入15ml离心管，1000转，离心5min弃上清，加入10％胎牛血清DMEM培养基，吹打混匀，制备成单细胞悬液，调整细胞悬液浓度为5.0×104个/ml，将上述细胞悬液铺于96孔板中，每孔200ul，每组设3个孔；另留3个孔，各加入10％胎牛血清DMEM/L-15培养基200ul作为空白对照孔。继续培养24h后，吸弃各孔培养基，再加入配置好的不同浓度的含待测药物的培养基180ul,使各组待测药物终浓度分别为0.03、0.1、0.3、1、3、10、30、100uM；对照组加入普通培养基180ul；继续培养48h后取出培养板，每孔加入5mg/ml的MTT 20ul，避光孵育4h，吸弃培养基，每孔加入DMSO 150ul，震荡摇匀，在酶标仪上以570nm的波长测定吸光度值。重复3次。计算生长抑制率。细胞生长抑制率＝[1-(实验组吸光度平均值﹣空白对照吸光度平均值)/(对照组吸光度平均值﹣空白对照吸光度平均值)]×100％。应用SPSS16.0统计软件，计算IC50值。
样品抑制率列表如下：
本发明的化合物进行该实验时，结果表明有抑制人乳腺癌细胞T-47D的作用。
在下述实施例中，“活性成分”是指式Ⅰ化合物，或其盐或其溶剂化物。
实施例9：片剂配方
生产工艺：(1).将项目1，2和3在合适的混合器中混合15min。(2).将步骤1的粉末混合物用20％Povidone K30溶液制粒。(3).在50℃干燥步骤2的颗粒。(4).将步骤3的颗粒通过合适的整粒装置。(5).将项目5加入磨碎后的步骤4的颗粒中，并混合3min。(6).将步骤5的颗粒在合适的压片机上压片。
实施例10：胶囊配方
生产工艺：(1).将项目1，2和3在合适的混合器中混合15min。(2).加入项目4和5并混合3min。(3).填充到胶囊内。
实施例11：注射液/乳剂
生产工艺：(1).将项目1溶于项目2中。(2).将项目3、4和5加入项目6并混合至分散，然后均化。(3).将步骤1的溶液加入步骤2的混合物中，并均化至分散液透明。(4).无菌滤过0.2μm滤纸并填充到小瓶内。
实施例12：注射液/乳剂
生产工艺：(1).将项目1溶于项目2中。(2).将项目3、4和5加入项目6并混合至分散，然后均化。(3).将步骤1的溶液加入步骤2的混合物中，并均化至分散液透明。(4).无菌滤过0.2μm滤纸并填充到小瓶内。
实施例20：含有脂质体的配方配方
A.滴注配方的制备
在一玻璃管中混合合成的二棕榈酰基卵磷脂(45mg)，二肉豆蔻酰基卵磷脂(7mg)，二棕榈酰基磷脂酰甘油(1mg)和活性化合物(5mg)，将所有组份溶解在氯仿中，用N2蒸发掉大部分溶剂，然后减压，由此，在玻璃管表面形成脂质薄膜.在该脂质中加入水溶液(0.9％NaCl)，在高于脂质的转相温度下形成脂质体，所得悬液含有大小范围为极小囊泡至2μm的脂质体。
B.吸入用配方的制备
按实施例A制备脂质体，其中的水溶液含有10％乳糖，乳糖与脂质之比为7:3。将该脂质体悬液用干冰冷冻，并且进行冷冻干燥，将干燥产物微粉化，所得颗粒的质均空气动力学直径(MMAD)约为2μm。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。