一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物及医药用图

一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物及医药用图
【专利摘要】本发明涉及一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物及医药用途、制备方法，该衍生物具备抗氧化的活性，具备黄嘌呤氧化酶抑制活性，能用于制备抗氧化、治疗痛风及高尿酸血症的组合物、药物、保健品。
【专利说明】
一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物及医药用途
技术领域
[0001] 本发明属于药物化学领域，特别涉及一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物及其制备 方法，该衍生物具备抗氧化的活性，该衍生物具备黄嘌呤氧化酶抑制活性，该衍生物能用于 制备治疗或预防痛风及高尿酸血症的组合物、药物、保健品。 技术背景
[0002] 随着人们生活水平的不断提高，生活方式及饮食结构也发生了很大变化，过多的 摄入嘌呤和蛋白质饮食使高尿酸血症和痛风的患病率正呈逐渐上升的趋势，已成为一种常 见病、多发病。痛风常与其他代谢性疾病相伴发生，如冠心病、高血压、高血脂、糖尿病等，给 人类生命健康和财产带来严重危害(张建明，郑州大学学报，2009,44(1): 174)。痛风，作为 一种严重影响公共健康的代谢性疾病，在我国，尤其是南方地区，发病率正呈现逐步上升的 趋势，其预防工作也不断引起人们的重视，安全有效的治疗方法与药物迫在眉睫。痛风是由 生物机体内嘌呤代谢紊乱和/或尿酸排泄减少引起的一种晶体性关节炎，临床主要表现为 高尿酸血症和尿酸盐结晶沉积所致的特征性急性关节炎、痛风石、痛风石性慢性关节炎，并 可发生尿酸盐肾病、尿酸性尿路结石等病症(王宇，中国药房，2009，20(22): 1748-1750)。
[0003] 高尿酸血症是诱发痛风的重要生理生化基础，主要表现为血清尿酸浓度过高，其 产生的主要原因有两个方面:一是尿酸生成过多，二是尿酸排泄减少。持续性的高尿酸血症 是痛风的前兆和潜在的诱因。因此，治疗痛风患者的高尿酸血症在治疗痛风过程中有着举 足轻重的作用（吴新荣，中国药理学通报，2010,26(11): 1414-1417)。然而，黄嘌呤氧化酶 (Xanthine Oxidase，简称X0D)是尿酸合成过程中的关键酶，是治疗高尿酸血症的重要药物 靶点之一。XOD是一种复合黄素酶，由两个相同的亚基组成，存在于多种生物体内，是机体内 核酸代谢过程中至关重要的一种酶。它广泛分布于人体心、肝、肺等组织细胞浆中，可催化 次黄嘌呤生成黄嘌呤，并进一步催化黄嘌呤氧化产生尿酸和超氧阴离子(周达，食品科技， 2009,34(6) :174-178)。在非布索坦上市以前，别嘌醇(Allopurinol)是临床上应用的唯一 能够抑制尿酸生成的药物，但其有肝肾功能损伤等毒副作用。而非布索坦(Febuxostat)是 由美国FDA批准的抗痛风新药，可用于长期控制痛风患者的高尿酸血症。它是一种高选择性 的黄嘌呤氧化酶抑制剂，不作用于嘌呤和嘧啶代谢途径中的其他相关酶，不影响机体内嘌 呤与嘧啶的正常代谢，但其也有肝功能异常、关节疼痛等不良反应发生，这在一定程度上也 影响了其临床应用(张静，中国药学杂志，2010，45(15): 1197-1198)。因此，发现和寻找新的 安全有效的黄嘌呤氧化酶抑制剂对于高尿酸血症和痛风等相关疾病的治疗及人体代谢学 研究等方面具有重要意义。
[0004] 天然产物一直都是治疗各类疾病药物的重要源泉，如川芎嗪、阿魏酸钠、长春西汀 等心血管药物，鬼白毒素、紫杉醇等抗肿瘤药物均来自于天然产物。此外，一些天然产物具 有水溶性差，毒副作用大，体内代谢快，生物半衰期短等缺陷，但经过结构优化后，也成为临 床使用的一线药物，如丹参酮IIA磺酸钠、依托泊苷、多烯紫杉醇等药物。因此，对天然产物 中的活性成分进行适当的结构修饰是新药研发的重要途径。
[0005] 丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根及根莖， 全国大部分地区都有分布。丹参具有活血化瘀、调经止痛、清热安神等多种功效，是中医常 用的活血化瘀药。用于胸痹心痛，脘腹胁痛，癥瘕积聚，热痹疼痛，心烦不眠，月经不调，痛经 经闭，疮疡肿痛（中华人民共和国药典（2010年版））。丹参制剂对许多疾病都有着显著的疗 效，临床上广泛用于治疗冠心病、高胆固醇血症、高血压、心律失常、肝炎、周围性血管疾病、 肺血管疾病、肝硬化等疾病(吴浩，沈阳药科大学学报，2006,23(1) :60-64)。根据丹参化学 成分的性质，主要可以分为两大类:水溶性成分和脂溶性成分。其中，脂溶性成分主要集中 在以丹参酮为代表的二萜醌类化合物，而水溶性成分则多具有酚酸类结构，是丹参发挥良 好药效的主要物质基础之一，并在化学成分、药代动力学及药理学等方面已被广泛研究(张 伟伟，中国中药杂志，2010,35(3) :389-392)。研究表明，丹酚酸类成分通过多种作用机制而 发挥药理作用，如抑制血小板聚集、抗血栓形成、防止动脉粥样硬化斑块形成、抑制细胞内 源性胆固醇合成、清除自由基、减少自由基对机体的损伤而产生保护作用等(杜冠华，基础 医学与临床，2000，20(5) :10-14)。
[0006] 最初分离出的水溶性成分为丹参素(β-3,4-二羟基苯乳酸)是各种丹酚酸类化合 物的基本化学结构(杜冠华，基础医学与临床，2000,20(5): 10-14)，如丹酚酸A是由一分子 丹参素与两分子咖啡酸缩合而成，丹酚酸B为三分子丹参素与一分子咖啡酸缩合而成，而丹 酚酸C由两分子丹参素缩合而成。丹参中其它酚酸类化合物还包括丹酚酸D、丹酚酸Ε、丹酚 酸F、丹酚酸G、丹酚酸Η、丹酚酸I、迷迭香酸、紫草酸等。朱大元等发现，丹参中的丹酚酸Β、紫 草酸、迷迭香酸和丹参素这些酚酸类物质具有黄嘌呤氧化酶抑制作用，并能降低高尿酸血 症小鼠的血清尿酸水平(CN 200410084620.4)。
[0007] 本课题组前期研究发现，丹酚酸C具有较强的黄嘌呤氧化酶抑制活性，且抑制作用 明显优于丹酚酸A(燕玉婷，中国药科大学学报，2013,44(5):442-446)。丹酚酸C可以作为黄 嘌呤氧化酶抑制剂用于防治痛风和高尿酸血症及其并发症(CN 201210000772.6)。
[0008]
[0009」燕玉嫜等对丹酚酸C在大鼠体内的代谢过程进行了研咒，运用HPLC-QT0F-MS/MS的 方法从大鼠血液及尿液中检测得到五种代谢产物，并根据化合物裂解规律对丹酚酸C在大 鼠体内的药物代谢途径进行了初步推测（燕玉婷，中国药科大学学报，2013,44(5) :442-446) 0 [00101
[0011 ]丹酚酸C可能存在的体内代谢途径
[0012] 综上所述，可以推测:β-3，4-二羟基苯乳酸的结构单元与黄嘌呤氧化酶的抑制活 性可能具有一定的相关性。但是，丹酚酸C还具有芳基苯并呋喃的结构骨架。芳基苯并呋喃 类化合物，一直以来都是研究者们所关注的热点。它是一类具有新木质素骨架类型的化合 物，分布于自然界多种高等植物中，且具有广泛的生物学活性，如抗病毒、抗肿瘤、抗真菌、 抗氧化、免疫调节及心血管疾病方面等。综述近年来对芳基苯并呋喃类化合物的研究进展， 其研究工作多集中在苯并呋喃类骨架化合物的分离鉴定、衍生物库的构建合成及构效关系 的探讨、生物活性的筛选及作用机制的深入研究，尤其是构建苯并呋喃环新方法的不断发 现(蒲文臣，2-芳基苯并呋喃衍生物的生物活性与合成策略，有机化学，2011，31，155-165)。
[0013] 基于以上内容，仍有一些尚且未知的研究问题需要探讨解决。（1)芳基苯并呋喃环 对具有此骨架类型的化合物（如丹酚酸C等)所表现出的生物活性(如黄嘌呤氧化酶抑制活 性、抗氧化活性)具有怎样的影响；（2)不同取代基(如吸电子基、供电子基等)取代时对芳基 苯并呋喃环类化合物的相关药理活性的影响暂不可知；即针对特定的生物活性，其具体的 构效关系仍不明确；（3)本领域技术人员暂不能确定:不含有β-3,4_二羟基苯乳酸结构而仅 含有芳基苯并呋喃类化合物是否也具备与β-3,4-二羟基苯乳酸类化合物类似的生物活性， 例如具备抑制黄嘌呤氧化酶的活性；同时，本领域技术人员也不能肯定:不含有β-3，4_二羟 基苯乳酸结构而仅含有芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物是否也具备与含有β_3,4-二羟基苯 乳酸结构类化合物类似的生物活性，例如具备抑制黄嘌呤氧化酶的活性。
[0014] 此外，丹酚酸C水溶性较强，对空气、强酸、强碱等较敏感，物理化学稳定性较差，且 体内过程易被代谢，生物半衰期较短，其临床应用有一定局限性。因此，我们以丹酚酸C结构 中所含的2-芳基苯并呋喃环的母核结构为目标，设计并合成了系列芳基苯并呋喃类衍生 物，并对其相关的生物活性进行了深入探讨，具有一定的研究价值。

【发明内容】

[0015] 本发明公开了一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物。
[0016] 本发明公开了一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物抗氧化的活性。
[0017] 本发明公开了一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物清除自由基的活性。
[0018] 本发明公开了一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物具备黄嘌呤氧化酶的抑制活性。
[0019] 本发明公开了一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物具备降低尿酸的活性。
[0020] 本发明公开了一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物具备治疗或预防痛风的活性。
[0021] 本发明公开了一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物用于制备治疗或预防痛风、和、 或高尿酸血症的组合物、药物、保健品。
[0022] 本发明公开了一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物用于制备治疗或预防痛风及高 尿酸血症的组合物、药物、保健品。
[0023] 本发明公开了一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物的制备方法。
[0024] 本发明公开了一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物。
[0025] 本发明公开了一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物，其结构通式如式I所示：
[0026]
[0027] 1^，1?2，1?3，1?4，1^，1?6，办，1? 8各自独立为氢，羟基，卤素，硝基，苄基，未取代或经卤素、 羟基、硝基、Cp2烷氧基中选出1~3个取代基取代的&-4烷基，未取代或经卤素、羟基、硝基、 Cp2烷氧基中选出1~2个取代基取代的&-3烷氧基；
[0028] R9为氢，未取代或经卤素、羟基、巯基、&-3烷基、&-2烷氧基中选出1~3个取代基取 代的Ch烷基，未取代或经卤素、羟基取代的3-乙基-IH-吲哚，未取代或经卤素、羟基、&-2烷 氧基取代的苯基，未取代或经卤素、羟基Xh烷氧基取代的苄基，未取代或经卤素、羟基、 &-2烷氧基取代的其他芳基(其中，所述卤素乂 = ?，(：1，8^11=1，2,3)，如3,4-二羟基苄基，3， 4-二甲氧基苄基，4-羟基苄基，4-甲氧基苄基等；
[0029] Riq 为氢、-⑶OH、-COOCH3、-COOCH2CH3、_⑶0CH( CH3) 2、-COO (CH2) 2CH3 或经卤素、羟 基、Ci-3烷基、Ci-2烷氧基中选出1~3个取代基取代的&-4烷基。
[0030] 本发明公开了式I所示一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物，其特征在于：
[0031]
[0032] 其中：R3，或、和、R4为羟基以外的其他取代基；
[0033] 其中：Rg，或、和、Rio为氢以外的其他取代基。
[0034] 本发明公开了一类芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物，结构通式如式II所示：
[0040] 本发明公开了一类芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物，结构通式如式V所示：
[0035]
[0036]
[0037]
[0038]
[0039]

[0061 ]其中R1，R2，R3各自独立为未取代或经卤素、羟基取代的Ch烷基，未取代或经卤素、 羟基取代的Cl-3烷氧基，卤素，硝基，苄基；
[0062] R4为氢，未取代或经卤素、羟基、巯基取代的Cp4烷基，3-乙基-IH-吲哚，未取代或 经卤素、羟基取代的苯基，未取代或经卤素、羟基取代的苄基，未取代或经卤素、羟基取代的 其他芳基(其中，卤素乂 = ?，Cl，Br )，如3，4-二羟基苄基，3，4-二甲氧基苄基，4-羟基苄基，4-甲氧基苄基等；
[0063] R5 为氢，-COOH、-COOCH3、-COOCH2CH3、-COOCH (CH3) 2、-COO (CH2) 2CH3 或者为氢、Ci-4 烷 基。
[0064] 本发明公开了式1所示一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物，其特征在于：
[0065] 结构通式如式1所示：
[0066]
[0067] 其中Ri，R2，R3各自独立为氢，羟基;R4为氢;R5为氢。
[0068] 本发明公开了式1所示的一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物，其特征在于：
[0069]
[0070] 其中RhR2, R3各自独立为未取代或经卤素、羟基取代的Cp4烷基，未取代或经卤素、 羟基取代的Cl-3烷氧基，卤素，硝基，苄基；
[0071] R4为未取代或经卤素、羟基、巯基取代的Cp4烷基，3-乙基-IH-吲哚，未取代或经卤 素、羟基取代的苯基，未取代或经卤素、羟基取代的苄基，未取代或经卤素、羟基取代的其他 芳基(其中，卤素乂 = F，Cl，Br )，如3，4-二羟基苄基，3，4-二甲氧基苄基，4-羟基苄基，4-甲氧 基苄基；
[0072] R5 为-COOH、-COOCH3、-COOCH2CH3、-COOCH (CH3) 2、
[0073] -COO (CH2) 2CH3 或者为氢、C1-4 烷基。
[0074]本发明公开了 一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物，结构式如式5a所示：


[0106] ⑵将SOCIAK浴冷却下加入有机溶剂中，反应30min后，加入丙氨酸、苯丙氨酸、半 胱氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、D/L-D0PA等氨基类化合物，室温搅拌，浓缩蒸干溶剂并 洗涤干燥，得系列羧基保护的氨基衍生物；
[0107] (3)将中间产物Tournefolic acid A在缩合剂作用下分别与系列氨基衍生物以摩 尔比1: 1.1~2混合，溶于有机溶剂中，室温搅拌，反应后处理后经硅胶柱色谱分离，得到系 列的芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物；
[0108] (4)在系列芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物中加入无机碱，混合溶剂超声溶解，室温 搅拌或加热回流，TLC不断监测反应，样品混合物经后处理，再经过硅胶柱色谱或制备型高 效液相色谱分离纯化，得到系列高纯度的苯并呋喃类酰胺化衍生物。
[0109] 所述的第1步中的无机碱水解可选择LiOH，NaOH，KOH等，有机溶媒为THF，MeOH，H 2O 或为其混合溶剂，优选为混合溶剂Me0H/H20,且溶剂体积比优选为3:1~5:1，反应时间优选 为8~12h。
[0110] 所述的第1步中的分离纯化方法具体为:硅胶柱层析，用氯仿/甲醇/甲酸（10:1: 0.1，v/v/v)等度洗脱得到中间体Tournefolic acid A(2) 〇
[0111] 所述的第2步中的氨基类化合物为各种D/L构型的氨基酸及其它手性氨基衍生物， 有机溶剂为甲醇、乙醇及异丙醇等试剂，反应时间优选为18~24h。
[0112] 所述的第2步中的分离纯化方法具体为：甲醇和乙醚分别多次交互洗涤样品并浓 缩蒸干。
[0113] 所述的第3步中的缩合剂可以为DCC/HoBt，EDCI/HoBt，HATU，HBTU，PyBOP，优选为 EDCI/HoBt，有机溶剂优选为混合溶剂DMF/CH2C12(3:1~5: lv/v)，反应时间优选为8~12h。
[0114] 所述的第3步中的分离纯化方法具体为:硅胶柱层析，氯仿/甲醇梯度洗脱得目标 衍生物。
[0115] 所述的第4步中的无机碱可以为1^0!1，似0!1，1(0!1，优选为他0!1，有机溶媒为1'冊， MeOH，H2O或为其混合溶剂，优选为Me0H/H20(3:1~5:1v/v)，反应时间优选为8~12h。
[0116] 所述的第4步中部分芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物具体的分离纯化方法为:硅胶 柱层析分离纯化，流动相为氯仿/甲醇/甲酸梯度洗脱;或高效液相制备型色谱柱分离纯化 样品混合物，其中，色谱柱(Agilent，zorbax_Ci8，5μηι，9.4 X 250mm)，色谱条件优选为:流速： 8mL/min，检测波长:28Inm，柱温:30°C，流动相：乙腈-0.1 %甲酸-水。
[0117]本制备方法中所得的化合物，均通过质谱和核磁共振等光谱学方法进行结构鉴 定，并利用HPLC法进行了纯度检测。
[0118] 本发明的芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物及其药物上可接受的成盐化产物可与药 用常见辅料和载体结合，制备痛风及高尿酸血症药物的组合物，从而达到预防或治疗的效 果。上述药物可根据实际的需要选择合适的剂型，如片剂、注射剂、栓剂、气雾剂、纳米制剂 等。
[0119] 与现有技术相比较，本发明具有如下有益效果：
[0120] (1)本发明通过以丹酚酸C为底物进行了化学结构修饰，得到了系列芳基苯并呋喃 类衍生物。经体外生物活性筛选及细胞活性验证，本发明的芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物 整体上均表现出较强的黄嘌呤氧化酶的抑制活性及抗氧化活性，为痛风与高尿酸血症及其 并发症的防治提供了物质基础。
[0121] (2)本发明的芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物结构新颖，对黄嘌呤氧化酶具有良好 的抑制效果。与丹酚酸C相比，不同程度改善了水溶性，并在一定程度上增加了化合物的物 理化学稳定性，毒副作用较低，具备一定开发应用价值。
【附图说明】：
[0122] 图1:芳基苯并咲喃类酰胺化衍生物5a，5b，5c，6b，6c，6d，6e以及Salvianolic acid C(I)和Ve对LPS刺激巨噬细胞RAW 264.7中超氧阴离子的清除作用
[0123] 图2:衍生物5b和6e和Salvianolic acid C(I)对细胞中尿酸的抑制作用
[0124] 图3:活性化合物与黄嘌呤氧化酶分子对接实验结果
[0125] 图3的具体解释：图3是由A部分、B部分、C部分、D部分、E部分、F部分组合而成，分别 表示不同化合物与黄噪呤氧化酶分子对接实验结果，（A)Febuxostat(B)AllopurinoI(C)6b (D)6e(E)Salvianolic acid C(l)(F)5b〇
【具体实施方式】
[0126] 下面结合实施例对本发明作进一步详细描述，但本发明的实施方式不限于此。
[0127] 本文中使用的测定仪器：
[0128] 高分辨率质谱用美国Agilent G1969 T0F/MS质谱仪；
[0129] 核磁共振用瑞士Bruker AV-300或500核磁共振仪；
[0130] 反应试剂均购自Sigma-Aldrich或Aladdin试剂公司，试剂均为分析纯或化学纯， 氘代试剂购自美国剑桥CIL试剂公司。
[0131] 实施例1
[0132] 1.芳基苯并咲喃类酰胺化衍生物5a，6a的合成
[0133] (I)Tournefolic acid A
[0134] 准确称取Sal vianol ic acid C( I) (245mg，0 · 498mmol)于二颈圆底瓶中，加入 MeOH/UO 20mL(5: lv/v)，超声至样品完全溶解，加入准确称取适量的无机碱(NaOH或Κ0Η)， 加热条件下不断TLC(氯仿/甲醇/甲酸8:1: lv/v/v)监测反应，直至原料完全消失。待反应完 全后，放置至室温，蒸干溶剂MeOH，加入15mL蒸馏水稀释，冰浴冷却下，逐滴滴加10 %HCl水 溶液并不断搅拌，至pH 3~4，停止滴加。加入乙酸乙酯（20mL X 3)萃取，合并有机层，饱和 NaCl溶液洗涤，MgSO4干燥，减压浓缩，得反应产物粗品。经硅胶柱层析等度洗脱(氯仿/甲 醇/甲酸 1〇: 1:0. lv/v/v)，得产物Tournefolic acid A(138mg，yield 89%) 〇
[0135] 对步骤(1)中得到的反应产物进行结构解析。
[0136] 理化性质:深黄色粉末(TLC Rf = 0.42氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)。
[0137] 波谱信息=1H 匪R(CD30D，300MHz)S7.92(d，lH，J= 15·9Ηζ)，7· 41-7 ·29(ι?，3H)， 7.18(s，lH)，6.88(d，lH，J = 8.1Hz)，6.73(d，lH，J = 8.1Hz)，6.43(d，lH，J=15.9Hz);13C NMR(CD30D，75MHz)S171.3,159.3,148.0,146.7,145.7,144.6,144.3,132.5,126.1，123.4， 119.7,118.7,116.7,116.0,113.3,111·7,99·2.HR-MS(ESI)m/z:found 311·0563[Μ-Η]-， calcd.for C17H12O6 311.0561.
[0138] 据以上波谱信息，可鉴定化合物Tournefolic acid A化学式为C17H12O6,其结构如 下式。
[0139]
[0140] (2)Methyl(S)-2-amin〇-3-(3,4-dihydroxyphenyl)propanoate hydrochloride (4a)
[0141] 准确量取无水甲醇5mL于圆底烧瓶中，冰浴冷却15min，缓慢逐滴加入S0Cl2(493y L，6 · 780mmoI)，0°C搅拌30min后，加入准确称取的L-D0PA(800mg，4 · 520mmol)，放置至室温， 搅拌反应24h。待反应完全后，蒸干溶剂和反应剩余的S0C12,用MeOH和Et 2O分别洗涤样品三 次，蒸干，得反应产物L-多巴甲酯盐酸盐（I .03g,yield 93%)。
[0142] 对步骤(2)中得到的反应产物进行结构解析。
[0143] 理化性质：白色粉末(TLC Rf = O.64氯仿/甲醇10:1)。
[0144] 波谱信息=1H NMR(D2〇,300MHz)S6.78(d，lH，J = 8.2Hz)，6.78(d，lH，J=1.8Hz)， 6.68(dd，lH，J=1.8,8. lHz)，4.35(t，lH，J = 6.6Hz)，3.82(s，3H)，3· 18(dd，lH，J = 5.9， 14.6Hz)，3.06(dd，lH，J = 7.7，14.6Hz).13C NMR(D20,75MHz)S170.6，144.8，144.2，126.6， 122.3.117.4.117.1.54.8.54.0. 35.4.ESI-MS m/z：212.3[M+H]+.
[0145] 据以上波谱信息，可鉴定化合物4a化学式为CiqH14CINO4,结构如下式。
[0146]
123456789 (3)Methyl(S,E)-3-(3,4-dihydroxyphenyI)-2-(3-(2-(3,4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxybenzofuran-4-yI)aerylamido)propanoate(5a) 2 准确称取Tournefolic acid A(36mg，0.115mmol)于圆底烧瓶中，加入DMF/CH2CI2 4mL(4 : lv/v)，超声溶解，冰浴冷却，加入准确称量的EDCI (33 · Img，0 · 173mmol)，HoBt (23.3mg，0.173mmol)，冰浴冷却IOmin，并不断搅拌。加入准确称取的L-多巴甲酯盐酸盐 (34 · Img，0 · 138mmoI)，Et3N(34 · 8mg，0 · 345mmo 1)，冰浴中反应30min后置室温搅拌，TLC(氯 仿/甲醇/甲酸8:1: lv/v/v)不断监测反应，直至原料基本消失。待停止反应后，蒸干溶剂，加 15mL蒸馏水稀释样品，冰浴冷却，滴加几滴10 %HC1水溶液，充分震荡。用乙酸乙酯（15mL X 4)萃取，合并有机层，减压浓缩，饱和食盐水洗涤，MgSO4干燥。样品混合物经硅胶柱分离纯 化样品（氯仿/甲醇15:1 - 10:1￥八），得产物5&(29.611^，5^1(151%)。 3 对步骤(3)中得到的反应产物进行结构解析。 4
[0150] 理化性质:黄绿色粉末(TLC Rf = O.61氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)。 5
[0151]波谱信息=1H NMR(CD30D，300MHz)S7.74(d，IHJ= 15.6Hz)，7.39(s，lH)，7.34(d， 6 lH，J = 8.7Hz)，7.28(s，lH)，6.87(d，lH，J = 8.1Hz)，6.74-6.63(m，4H)，6.55(d，lH，J = 7 7.2Hz)，4.76-4.72(m，lH)，3.72(s，3H)，3.ll-3.00(dd，lH，J=13.5,6.0Hz)，2·99-2·89 8 (dd，lH，J=13.5,7.5Hz);13C 匪R(CD30D，75MHz)S173.8，169.3，159.1，147.9，146.8， 9 146.3.145.3.145.3.144.5.140.7.132.0. 129.5.126.0.123.5.121.7.120.2.118.6， 118.4,117.3,116.7,116,4,113.4,111.6,99.5,55.8,52.6,38.2.HR-MS(ESI)m/z:found 504.1302[M-H] -，calcd.for C27H23NO9 504.1300.
[0152] 据以上波谱信息，可鉴定化合物5a化学式为C27H23NO9,其结构式如下。
[0153]
[0154] (4)(S,E)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2-(3-(2-(3,4-dihydroxyphenyl )-7-hydroxybenzofuran-4-yI)aerylamido)propanoic acid(6a)
[0155] 准确称取化合物5a(18mg，0.036mmol)于二颈烧瓶中，加入MeOH/H2〇 5mL(4: lv/v) 溶解，加入似0!1(17.411^，0.44_31)，加热回流，孔(：(氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)监测反应至反 应完全。待反应停止，冰浴冷却反应混合液，滴加10%HC1水溶液并不断搅拌，至pH 3~4，浓 缩蒸干，加入蒸馏水IOmL，用乙酸乙酯（IOmLX4)萃取，合并有机层，减压浓缩，饱和食盐水 洗涤，]^5〇4干燥。样品混合物经制备型液相色谱(48；1161^2〇1^1-(]18,5以111，20\25〇111111)分 离，流速811117111；[11，检测波长28111111，流动相 ：乙腈-0.1%甲酸-水，得目标产物63(11.611^， yield 66%) 0
[0156] 对步骤(1)中得到的反应产物进行结构解析。
[0157] 理化性质:黄绿色粉末(TLC Rf = 0.48氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)。
[0158] 波谱信息=1H 匪R(DMS0-d6,300MHz)S8.15(br s，4H)，7.54(d，lH，J=15.9Hz)， 7.43(s，lH)，7.35(s，lH)，7.28(d，lH，J = 8.1Hz)，7.23(d，lH，J = 8.4Hz)，6.88(d，lH，J = 8.1Hz)，6.79-6.72(q，2H，J=15.9Hz)，6.65-6.60(m，2H)，6.50(d，lH，J = 8.1Hz)，4.50(m， lH)，3.00-2.91(d，lH，J=14.1，5.1Hz)，2.84-2.74(d，lH，J=13.5,8.7Hz);13CNMR(DMS0-(!6,75ΜΗζ)δ173·3,165.6,156.9,146.9,145.7,145.0,143.9,143.8,142.7,137.8,129.6， 128·3，125·7，121·1，119·9，119·2，118·6，117·0，116·5，116·1，115·4，112·4，110·6,99·0， 53·9，36·7·HR-MS(ESI)m/z:found492·1296[M+H] +，calcd·for C26H2INO9 492·1289·
[0159] 据以上波谱信息，可鉴定化合物6a化学式为C26H21NO9,其结构式如下。
[0160]
12 2.芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物5b，6b的合成 2 (1)_(2)同实施例1中制备中间体的方法。
[0163] (3)Methyl(R,E)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2-(3-(2-(3,4-dihydroxyphenyl)-7~hydroxybenzofuran-4-yI)aerylamido)propanoate(5b)
[0164] 准确称取Tournefolic acid A(32mg，0.103mmol)于圆底烧瓶中，加入DMF/CH2CI2 3.5mL(5 :1 v/v)，超声至样品溶解，冰浴冷却，加入准确称量的EDCI (31.6mg，0.165mmoI)， HoBt(22 · 3mg，0 · 165mmol)，冰浴冷却IOmin，并不断搅拌。加入准确称取的D-多巴甲酯盐酸 盐（30 · 5mg，0 · 124mmoI)，Et3N( 31 · 2mg，0 · 309mmo 1)，冰浴中反应30min后置室温搅拌，TLC (氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)监测反应至原料基本消失。待停止反应后，蒸干溶剂，加15mL蒸馏 水稀释样品，冰浴冷却，滴加几滴1 〇%HCl水溶液，充分震荡。用乙酸乙酯（I5mLX4)萃取，合 并有机层，减压浓缩，饱和食盐水洗涤，MgSO4干燥。样品混合物经硅胶柱纯化(氯仿/甲醇15 :1 - 10: lv/v)得产物5b(30mg，yield 58% )。
[0165] 对步骤(1)中得到的反应产物进行结构解析。
[0166] 理化性质:黄绿色粉末(TLC Rf = 0.6氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)。
[0167] 波谱信息=1H MMR(CD30D，300MHz)S7.74(d，lH，J=15.6Hz)，7.39(s，lH)，7.37-7.32(d，lH，J = 8.4Hz)，7.29-7.24(m，2H)，6.87(d，lH，J = 8.1Hz)，6.73-6.65(m，4H)，6.55 (d，lH，J=8.4Hz)，5.08(m，lH)，4.06(s，3H)，4.00(s，3H)，3.94(s，3H)，3.77(s，3H)，3.23 (m，lH)，2.93(m，lH); 13C 匪R(CD30D，75MHz)S172.4，165.6，157.0，146.9，145.7，145.0， 144·5，143·9，142·7，138·0，129·7，127·8，125·7，121·1，119·8，118·7，118·4，117·0， 116.4,116.1,115,4,112.3,110.6,96.9,54.0,51.8,36.7.HR-MS(ESI)m/z：found 504.1311[M-H] -，calcd.for C27H23NO9 504.1300.
[0168] 据以上波谱信息，可鉴定化合物5b化学式为C27H23NO9,其结构式如下。
[0169] 12345 、n y-j-、j，^±-uiiiyur<jAy IJiitJiiy 丄 二―、j，4_di hydroxy pheny 1 )_7_ hydroxybenzofuran-4-yI)aerylamido)propanoic acid(6b) 2
[0171 ]准确称取化合物5b( 18mg，0 ·036mmol)于二颈烧瓶中，加入MeOH/H2〇 5mL(3: lv/v) 溶解，准确称取Na0H( 17. Img，0.428mmoI)加入上述溶液中，加热回流，TLC(氯仿/甲醇/甲酸 8:1:1)监测反应，直至反应完全。待停止反应，冰冷却反应液，滴加10 %HCl溶液并搅拌，至 PH3~4，蒸干，加入蒸馏水IOmL，用乙酸乙酯（IOmL X 4)萃取，合并有机层，浓缩，饱和食盐水 洗涤，]^5〇4干燥，样品混合物经制备型液相色谱(48；1161^2〇1^1-(]18,5以111，20\25〇111111)分 离，流速8mL/min，检测波长281nm，流动相：乙腈-0.1 %甲酸-水，得产物6b(9.5mg，yield 54%) 〇 3 对步骤(1)中得到的反应产物进行结构解析。 4 理化性质:黄色粉末(TLC Rf = 0.46氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)。 5 波谱信息=1H 匪R(DMS0-d6,300MHz)S8.21(br s，4H)，7.53(d，lH，J=15.9Hz)， 7.43(s，lH)，7.35(s，lH)，7.23(d，lH，J = 8.1Hz)，7.22(d，lH，J = 8.1Hz)，6.87(d，lH，J = 8.4Hz)，6.80-6.70(q，2H，J=15.9Hz)，6.65-6.59(m，2H)，6.43(d，lH，J = 8.4Hz)，4.50(m， lH),2.98-2.91(daHJ=14.2,4.9Hz),2.81-2.73(daHJ=14.2,8.3Hz)；13C NMR(DMS〇-(!6,75ΜΗζ)δ173·6,165.4,156.9,146.9,145.7,144.9,143.8,143.8,142.7,137.6,129.5， 128.5,125.7,121.0,119.9,119.3,118.6,116.9,116.6,116.1，115.3,112.4,110.5,99.0， 54·2，36·8·HR-MS(ESI)m/z:found492·1293[M+H] +，calcd·for C26H2INO9 492·1289·
[0175] 根据以上高分辨质谱及核磁谱信息，可鉴定化合物6b的化学式为C26H21NO9，其结构 式如下
[0176]
[0177] 3.芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物5c，6c的合成
[0178] (1)_(2)同实施例1中制备中间体的方法。
[0179] (3)Methyl(E)-(3-(2-(3,4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxybenzofuran-4-yl) acryloyl)-L-alaninate(5c)
[0180] 准确称取Tournefolic acid A(35mg，0.112mmol)于圆底烧瓶中，加入DMF/CH2CI2 4mL(3: lv/v)，超声至样品溶解，冰浴冷却至(TC，加入EDCI(32.3mg，0.168mmol)，HoBt (22.6mg，0.168mmol)，冰浴冷却IOmin，并不断搅拌。加入准确称取的L-丙氨酸甲酯盐酸盐 (18 · 7mg，0 · 134mmol)，Et3N(33 · 9mg，0 · 336mmol)，冰浴中反应30min后放置至室温搅拌，TLC (氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)不断监测反应，直至原料基本消失。待停止反应后，蒸干溶剂，加 15mL蒸馏水稀释样品，冰浴冷却，滴加几滴10 %HC1水溶液，充分震荡。用乙酸乙酯（15mL X 4)萃取，合并有机层，减压浓缩，饱和食盐水洗涤，MgSO4干燥。样品混合物经硅胶柱(氯仿/ 甲醇20:1-8:1￥八)纯化，得产物5(：(28.411^，5^61(164%)。
[0181] 对步骤(3)中得到的反应产物进行结构解析。
[0182] 理化性质：淡绿色粉末(TLC Rf = 0.65氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)。
[0183] 波谱信息=1H NMR(CD30D，300MHz)S7.77(d，lH，J=15.9Hz)，7.39(s，lH)，7.35(d， lH，J = 8.1Hz)，7.32-7.25(m，2H)，6.87(d，lH，J = 8.1Hz)，6.75-6.70(d，lH，J = 8.4Hz)， 6.70-6.63(d，lH，J=15.9Hz)，4.62-4.53(dd，lH，J=14.7,7.5Hz)，3.75(s，3H)，1.46(d， 3H，J = 7.2Hz);13C 匪R(CD30D，75MHz)S174.9,169.2,159.1，148.0,146.8,145.4,144.5， 140.7,132.I，125.9,123.5,120.2,118.6,118.4,116.7,113.4,111·7,99·5,52·8,49·7， 17.7.HR-MS(ESI)m/z：found 396.1089[M-H]^calcd.for C21H19NO7 396.1089.
[0184] 根据以上高分辨质谱及核磁谱信息，可鉴定化合物5c的化学式为C21H19NO7，其结构 式如下。
[0185]
[0186] (4)(E)-(3-(2-(3,4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxybenzofuran-4-yl) acryloyl)-L-alanine(6c)
[0187] 准确称取化合物5c(19mg，0.048mmol)于二颈烧瓶中，加入MeOH/H2〇 5mL(3: lv/v) 溶解，加入Na0H(19 · Img，0 · 478mmol)，加热回流，并TLC(氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)监测反应， 至反应完全。待停止反应后，冰浴冷却反应混合液，滴加10%HC1水溶液并不断搅拌，至pH 3 ~4，浓缩蒸干MeOH，加入蒸馏水IOmL，用乙酸乙酯（IOmLX4)萃取，合并有机层，浓缩，饱和 食盐水洗涤，]^5〇4干燥，样品混合物经制备型液相色谱(48；[1611丨201^31-(]18,5以111，20\ 250mm)分离，流速8mL/min，检测波长28Inm，流动相：乙腈-0.1 %甲酸-水，得衍生物6c (13. lmg,yield 71%)〇
[0188] 对步骤(1)中得到的反应产物进行结构解析。
[0189] 理化性质:黄绿色粉末(TLC Rf = 0.48氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)。
[0190] 波谱信息=1H NMR(CD30D，300MHz)S7.53(d，lH，J=15.6Hz)，7.44(s，lH)，7.36(s， lH)，7.32-7.20(m，2H)，6.83(d，lH，J = 7.8Hz)，6.82(t，2H，J=15.6Hz)，4.38(m，lH)，1.35 (d，3H，J = 6.6Hz) ;13C 匪R(CD30D，75MHz)S174.5，165.5，157.0，147.0，145.8，143.9， 142·8，137·8，129·6，125·8，121·1，119·3，118·7，117·0，116·2，112·4，110·6,99·0,48·7， 17.8.HR-MS(ESI)m/z：found 382.0941 [M-H]^calcd.for C20H17NO7 382.0932.
[0191] 据以上波谱信息，可鉴定化合物6c化学式为C2qHhNO7，其结构式如下。
[0192] 123456 4.方垂本开吠卩阐关酞妝化衍王物bd，bd的甘肷 2 (1)_(2)同实施例1中制备中间体的方法。 3 (3)Methyl(E)-(3-(2-(3,4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxybenzofuran-4-yl) aeryIoyI)-L-phenylalaninate(5d) 4 准确称取Tournefolic acid A(35mg，0· 112mmol)于25mL圆底烧瓶中，加入DMF/ 5 CH2Cl2 3mL(4:lv/v)，超声至样品溶解，冰浴冷却，加入EDCI(30·2mg，0·157mmol)，HoBt 6 (21 · 2mg，0 · 157mmol)，冰浴冷却lOmin，并不断搅拌。加入L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(28.9mg， 0.134mmol)，Et3N(33.9mg，0.336mmol)，冰浴中反应30min后放置至室温搅拌，TLC(氯仿/甲 醇/甲酸8:1:1)不断监测反应，直至原料基本消失。待停止反应后，蒸干溶剂，加15mL蒸馏水 稀释样品，冰浴冷却下滴加几滴10%HCl水溶液，充分震荡。用乙酸乙酯（I5mLX 3)萃取，合 并有机层，浓缩，饱和食盐水洗涤，MgSO4干燥，混合物经硅胶柱(氯仿/甲醇20:1-10: lv/v) 纯化，得反应产物5d(24.3mg，yield 46%)。
[0197] 对步骤(1)中得到的反应产物进行结构解析。
[0198] 理化性质:黄绿色粉末(TLC Rf = 0.69氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)。
[0199] 波谱信息=1H NMR(CD30D，300MHz)S7.73(d，lH，J=15.9Hz)，7.39(s，lH)，7.34(d， lH，J = 9.0Hz)，7.31-7.18(m，7H)，6.87(d，lH，J = 8.1Hz)，，6.71(d，lH，J = 8.4Hz)，6.65(d， lH，J=15.9Hz)，4.95-4.86(m，lH)，3.72(s，3H)，3.27-3.17(dd，lH，J=13.5,5.7Hz)，3.12-3.01(dd，lH，J=13.5,8.4Hz); 13C NMR(CD30D，75MHz)S173.7,169.3,159.1，148.0,146.8， 145.3,140.8,138.2,132.1，130.2,130.2,129.5,129.5,127.9,126.0,123.5,121.8， 120.2,118.6,118.3,116.7,113.4,111.6,99.5,55.6,52.7,38.7.HR-MS(ESI)m/z:found 472.1414[M-H] -，calcd.for C27H23NO7 472.1402.
[0200] 据以上波谱信息，可鉴定化合物5d化学式为C27H23N〇7,其结构式如下。
[0201]
123456 (4)(E)-(3-(2-(3,4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxybenzofuran-4-yl) aeryIoyl)-L-phenylalanine(6d) 2 准确称取化合物5d(16mg，0.034mmol)于二颈烧瓶中，加入MeOH/H2〇 5mL(4: lv/v) 溶解，加入NaOH(14 · 9mg，0 · 372mmol)，加热回流，并TLC(氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)监测反应， 至反应完全。待停止反应后，冰浴冷却反应液，滴加10 %HC1水溶液，并不断搅拌至pH 3~4， 浓缩蒸干，加入蒸馏水IOmL，乙酸乙酯（IOmLX4)萃取，合并有机层，浓缩，饱和食盐水洗涤， MgS〇4干燥，样品混合物经制备型液相色谱(Agilent zorbax_Ci8，5μηι，20 X 250mm)分离，流 速8mL/min，检测波长281nm，流动相：乙腈-0.1 %甲酸-水，得反应产物6d(8 . Img，yieId 52%)〇 3 对步骤(1)中得到的反应产物进行结构解析。 4
[0205] 理化性质:黄绿色粉末(TLC Rf = 0.53氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)。 5 波谱信息=1H 匪R(DMS0-d6,300MHz)S8.20(br s，2H)，7.54(d，lH，J=15.9Hz)， 7.42(s，lH)，7.35(s，lH)，7.30-7.20(m，7H)，6.88(d，lH，J = 7.8Hz)，6.79-6.69(t，2H，J = 15.9Hz)，4.63(m，lH)，3·16-3.08(m，lH)，3.01-2.91(m，lH);13C 匪R(DMS0-d6,75MHz)S 173.2,165.5,156.9,146.9,145.7,143.8,142·7，137·73,137.68,129.6,129.1，129.1， 128.2,128.2,126.4,125.6,121.0,119.0,118.5,116.9,116.I，112.4,110·5,96·9,53·7， 37·2·HR-MS(ESI)m/z:found458·1252[M-H] -，calcd·for C26H21NO7 458·1245· 6 据以上波谱信息，可鉴定化合物6d化学式为C26H21NO7,其结构式如下。
[0208]
[0209] 5.芳基苯并咲喃类酰胺化衍生物5e，6e的合成
[0210] (1)_(2)同实施例1中制备中间体的方法。
[0211] (3)Methyl(E)-(3-(2-(3,4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxybenzofuran-4-yl) aeryIoyI)-L-tyros inate(5e)
[0212] 准确称取Tournefolic acid A(33mg，0.106mmol)于圆底烧瓶中，加入DMF/CH2CI2 4mL( 3 :1v/v)，超声至样品完全溶解，冰浴冷却，加入EDCI (30.4mg，0.158mmol)，HoBt (21 · 5mg，0 · 159mmol)，冰浴冷却lOmin，并不断搅拌。加入L-酪氨酸甲酯盐酸盐（29.4mg， 0.127mmol)，Et 3N(32.1mg，0.318mmol)，冰浴中反应 30min 后至室温搅拌，TLC(氯仿 / 甲醇 / 甲酸8:1:1)不断监测反应，直至原料基本消失。待停止反应后，蒸干溶剂，加15mL蒸馏水稀 释样品，冰浴冷却，滴加10%HCl水溶液，充分震荡。用乙酸乙酯（I5mLX4)萃取，合并有机 层，减压浓缩，饱和食盐水洗涤，MgSO 4干燥。样品混合物经硅胶柱(氯仿/甲醇15:1 - 10: Iv/ V)分离纯化，得衍生物5e(28.0mg，yield 54% )。
[0213] 对步骤(3)中得到的反应产物进行结构解析。
[0214] 理化性质：黄绿色粉末(TLC Rf = O .64氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)。
[0215] 波谱信息=1H MMR(CD30D，300MHz)S7.73(d，lH，J=16.2Hz)，7.39(s，lH)，7.37-7.32(d，lH，J = 8.1Hz)，7.26(s，lH)，7.06(d，2H，J = 8.4Hz)，6.90-6.82(m，2H，J = 7.5Hz)， 6.74-6.64(m，4H)，4.69-4.58(m，lH)，3.72(s，3H)，3.16-3.07(dd，lH，J=13.5,6.0Hz)， 3.02-2.94(dd，lH，J=13.5,8.1Hz);13C 匪R(CD30D，75MHz)S174.5，169.2，159.3，155.7， 147.3,146.6,145.2,143.9,141.7,130.2,130.2,129.2,124.3,123.0,122.0,121.6， 120.2 a 19.8 a 16.9 a 15.8 a 15.8 a 14.2,108.4,99.8,56.2,52.0,38.2.HR-MS(ESI)m/z： found 488.1353[M-H] -，calcd.for C27H23NO8 488.1351.
[0216] 据以上波谱信息，可鉴定化合物5e化学式为C27H23NO8，其结构式如下。
[0217]
12 (4)(E)-(3-(2-(3,4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxybenzofuran-4-yl) 2 aeryIoyI)-L-tyros ine(6e)
[0219] 准确称取化合物6e(19mg，0.039mmol)于二颈烧瓶中，加入MeOH/H2〇 5mL(4: lv/v) 溶解，加入NaOH(14. Omg，0，350mmoI)，加热回流反应，并TLC(氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)监测反 应至反应完全。停止反应后，冰浴冷却反应液，滴加10 % HCl水溶液并不断搅拌，至pH 3~4， 浓缩蒸干，加入蒸馏水IOmL，用乙酸乙酯（IOmLX4)萃取，合并有机层，减压浓缩，饱和食盐 水洗涤，]^5〇4干燥。样品混合物经制备型液相色谱（48；1161^2〇1^1，513-(]18,5以111，20\ 25〇111111)分离，流速8111]^/111；[11，检测波长28111111，流动相 ：乙腈-0.1%甲酸-水，得反应产物66 (11.8mg,yield 62%)0
[0220] 对步骤(1)中得到的反应产物进行结构解析。
[0221] 理化性质:黄绿色粉末(TLC Rf = 0.5氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)。
[0222] 波谱信息=1H 匪R(DMS0-d6,300MHz)S7.95(br s，lH)，7.50(d，lH，J=16.2Hz)， 7.47(s，lH)，7.36(s，lH)，7.28(d，lH，J = 8.1Hz)，7.20(d，lH，J = 8.1Hz)，7.06-6.98(m， 2H)，6·87(d，1H，J = 8· lHz)，6.79(d，IHJ= 16.2Hz)，6.74(d，lH，J = 8.1Hz)，6·65-6·59(ι?， 2H)，4.66(m，lH)，3.09-3.01(q，lH)，2.89-2.80(q，lH); 13C NMR(DMS0-d6,75MHz)Sl74.3， 165.2.156.9.155.7.147.0. 145·8，143·8，142·7，137·3,130.1，130.1，129.4,128.4， 125.8.121.0. 119.6.118.6.116.9.116.2.114.8.114.8.112.5.112.5.99.1，54.8， 36.8.HR-MS(ESI)m/z:found 474.1201[M-H]-，calcd.for C26H2INO8 474.1194.
[0223] 据以上波谱信息，可鉴定化合物6e化学式为C26H21NO8,其结构式如下。
[0224]
123456 6.芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物5f，6f的合成 2 (1)_(2)同实施例1中制备中间体的方法。 3 (3)Methyl(E)-(3-(2-(3,4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxybenzofuran-4-yl) aeryIoyI)-L-tryptophanate(5f) 4 准确称取Tournefolic acid A(41mg，0.131mmol)于圆底烧瓶中，加入DMF/CH2CI2 5 m L (5 : I v / v)，超声至样品完全溶解，冰浴冷却至0 °C，加入准确称量的E D CI (3 7.8 m g， 0· 197mmol)，HoBt(26.5mg，0.196mmol)，冰浴冷却lOmin，并不断揽摔。加入准确称取的L-色 氨酸甲酯盐酸盐（39 · 9mg，0 · 157mmoI)，Et3N(39 · 7mg，0 · 393mmo 1)，冰浴中反应30min后放置 至室温搅拌，TLC(氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)不断监测反应，直至原料基本消失。待停止反应 后，蒸干溶剂，加15mL蒸馏水稀释样品，滴加10 % HCl水溶液，冰浴冷却下充分震荡。用乙酸 乙酯（15mL X 4)萃取，合并有机层，减压浓缩，饱和食盐水洗涤，MgSO4干燥。样品混合物经硅 胶柱分离纯化(氯仿/甲醇20:1 -12: lv/v)，得衍生物5f (28.2mg，yield 42% )。 5 对步骤(3)中得到的反应产物进行结构解析。 6 理化性质:黄绿色粉末(TLC Rf = 0.71氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)。
[0231] 波谱信息=1H NMR(CD30D，300MHz)S7.74(d，lH，J=15.6Hz)，7.56(d，lH，J = 7.5Hz)，7.40-7.29(m，3H)，7.28-7.20(m，2H)，7.11(s，lH)，7.10-7.05(d，lH，J=7.5Hz)， 7.04-6.98(t，lH，J = 7.5,7.2Hz)，6.86(d，lH，J = 6.6Hz)，6.75-6.69(d，lH，J = 6.0Hz)， 6.69-6.62(d，lH，J=15.6Hz)，4.95-4.89(m，lH)，3.69(s，3H)，3.43-3.35(m，lH)，3.29-3.20(m，lH) ;13CMMR(CD30D，75MHz)Sl74.2，169.4，159.1，148.2，147.0，145.9，144.7， 140.8,138.9,138.1，132.0,128.8,126.1，124.4,123.5,122.5,120.0,119.9,119.2， 118.6，118.3，117.3，116.7，113,4，112.3，111.8,99.5,55.2,52.7,28.8.HR-MS(ESI)m/z: found 511.1508[M-H]^calcd.for C20H17NO7 511.1511.
[0232] 据以上波谱信息，可鉴定化合物5f化学式为C29H24N2O7,其结构式如下。
[0233]
[0234] (4)(E)-(3-(2-(3,4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxybenzofuran-4-yl) aeryIoyI)-D-tryptophan(6f)
[0235] 准确称取化合物5f (20mg，0.039mmol)于二颈烧瓶中，加入MeOH/H2〇 5mL(4: lv/v) 溶解，加入Na0H(18.8mg，0.469mmoI)，加热回流反应，并TLC(氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)监测反 应，至反应完全。待反应停止，冰浴冷却反应混合液，滴加 10 %HC1液并不断搅拌，至pH 3~ 4，浓缩蒸干，加入蒸馏水IOmL，用乙酸乙酯（IOmL X 4)萃取，合并有机层，浓缩，饱和食盐水 洗涤，]^5〇4干燥。样品混合物经制备型液相色谱(48；1161^2〇1^1-(]18,5以111，20\25〇111111)分 离，流速811117111；[11，检测波长28111111，流动相 ：乙腈-0.1%甲酸-水，得反应产物6;^10.711^， yield 55%)0
[0236] 对步骤(1)中得到的反应产物进行结构解析。
[0237] 理化性质:黄绿色粉末(TLC Rf = 0.58氯仿/甲醇/甲酸8:1:1)。
[0238] 波谱信息=1H NMR(DMS0-d6,300MHz)Sl0.85(s，lH)，8.17(s，lH)，7.62-7.56(t，2H， J=16.2Hz)，7.44(s，lH)，7.37(s，lH)，7.34(d，lH，J = 8.4Hz)，7.29(d，lH，J = 8.7Hz)，7.24 (d，1H，J = 8· 1Hz)，7· 18(s，1H)，7.09-7.03(t，lH，J = 7.5Hz)，7.01-6.96(t，lH，J = 7.5Hz)， 6.89(d，lH，J = 8.1Hz)，6.80(d，lH，J=16.2Hz)，6.75(d，lH，J = 9.3Hz)，4.72(dd，lH，J = 12.8,7.4Hz)，3.69(dd，lH，J=14.4,4.8Hz)，3.29-3.20(dd，lH，J=14.4,7.8Hz); 13C NMR (DMS〇-d6，75MHz)δ173·7，165·7，157·0，147·0，145·8，143·9，142·8，137·9，136·2，129·6， 127·4，125·9，123·6，121·1，121·0，119·3，118·7，118·5，118·4，117·0，116·2，112·4， 111.5，110.6，110.0,99.1，53.2,27.6.HR-MS(ESI)m/z:found 497·1368[Μ-Η]-，calcd.for C28H22N2O7 497.1354.
[0239] 据以上波谱信息，可鉴定化合物6f化学式为C28H22N2O7,其结构式如下。
[0240]
[0241 ] 7.芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物7的合成
[0242] (2R)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)-1-methoxy-1-〇xopropan-2-yl(2E)-3-[2-(3, 4-dimethoxyphenyl)-7-methoxy-1-benzofuran-4-yl]prop-2-enoate(7)
[0243] 准确称取Salvianol ic acid C( 206mg，0 · 419mmol)于圆底二颈烧瓶中，加 15mL Me2CO超声溶解，准确称（量）取K2C〇3(1.16g，8.374mmol)，Me2S〇4(714.5mL，7.542mmol)加入 salvianolic acid C样品溶液中，回流反应，并TLC(环己烧/乙酸乙酯1:1)监测，直至反应 原料基本消失。待反应终止，蒸干溶剂，饱和NH 4Cl水溶液（20mL)稀释，用乙酸乙酯（20mL X 4)萃取，合并有机层，饱和食盐水洗涤，MgSO4干燥，减压浓缩，得混合物样品。用硅胶柱梯度 洗脱(环己烷/乙酸乙酯10:1，5: lv/v)，得反应产物7(431mg，yield 92% )。
[0244] 对步骤(1)中得到的反应产物进行结构分析。
[0245] 理化性质：黄色粉末(TLC Rf = O.62环己烷/乙酸乙酯1:1)。
[0246] 波谱信息=1H NMR(CDCl3,300MHz)S7.96(d，lH，J=15.9Hz)，7.53(dd，lH，J = 8.4， 2.1Hz)，7.39(m，2H)，7.17(s，lH)，6.97(d，lH，J = 8.4Hz)，6.82(m，4H)，6.50(d，lH，J = 15.9Hz)，5.41(q，IHJ= 13.2,7.5,5.4Hz)，4.09(s，3H)，4.03(s，3H)，3.96(s，3H)，3.88(s， 3H)，3.86(s，3H)，3.78(s，3H)，3.21(dd，2H，J = 5.1，2.1Hz);13C NMR(CDC13,75MHz)S170.5， 166.7,157.6,150.1，149.2,148.8,148.8,146.9,144.1，143.7,130.7,128.4,125.8， 122·7，121·4，121·4，118·5，114·9，112·5，111·3，111·2，108·2，106·6,99·2,73·1，56·2， 56.2,56.0,55.8,55.8,52.4,37.2.HR-MS(ESI)m/z:found 577.2068[M+H]+，calcd.for C32H32Oio 577.2079.
[0247] 根据以上波谱信息，可鉴定化合物7化学式为C32H32Oiq,其结构如下式。
[0248]
123 8.芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物9a的合成 2 Methyl(S，E)_3_(3，4-dihydroxyphenyl)-2-(3-(2-(3，4_dimethoxyphenyl)_7_ 3 methoxybenzofuran-4-yl)acrylamido)propanoate(9a)
[0251] 准确称取反应中间体于圆底烧瓶中，加入DMF/CH2C12 5mL(v/v 2:5)，超声至样品 溶解，冰浴冷却至〇 °C，加入EDCI (27 · 4mg，0 · 143mmoI)，HoBt (19 · 3mg，0 · 143mmo 1)，冰浴冷却 1〇111；[11并不断搅拌。加入1^-丙氨酸甲酯盐酸盐（30.311^，0.1691]1111〇1)4丨31^(36.111^， 0.357mmol)，冰水浴中反应30min后放置至室温，TLC(环己烷/乙酸乙酯5: 2v/v)监测反应， 至原料基本消失。待反应完全，蒸干溶剂，加入蒸馏水15mL稀释样品，滴加几滴10 % HCl水溶 液，充分震荡。用乙酸乙酯（I5mLX 3)萃取，得有机层，浓缩，并依次用饱和NaHCO3水溶液和 饱和食盐水洗涤，MgSO4干燥，得样品混合物。经硅胶柱层析(氯仿/甲醇80:1)等度洗脱，得 到反应产物9a(37.7mg，yield 52%)。
[0252] 对步骤(1)中得到的反应产物进行结构解析。
[0253] 理化性质：黄绿色粉末(TLC Rf = 0.57环己烷/乙酸乙酯5: 2)。
[0254] 波谱信息=1H NMR(CD30D，300MHz)S7.71(d，lH，J=15.6Hz)，7.46(d，lH，J = 8.7Hz)，7.42(s，lH)，7.37-7.26(d，2H，J = 8.4Hz)，7.01(d，lH，J = 7.8Hz)，6.83(d，lH，J = 8.1Hz)，6.73-6.65(t，3H，J=15.6Hz)，6.56(d，lH，J = 8.1Hz)，4.77-4.60(dd，lH，J=14.4， 7.8Hz)，4.02(s，3H)，3.92(s，3H)，3.87(s，3H)，3.72(s，3H)，3.13-3.01(dd，lH，J=13.2， 5.4Hz)，2.99-2.91(dd，lH，J=13.2,7.8Hz);13C NMR(CD30D，75MHz)S173.8，169.0，158.5， 151.5,150.8,147.8,146.3,145.4,140.5,131.4,129.5,126.2,124.4,122.7,121.7， 121.6,119.54,119.49,117.3,116.4,113.2,109.8,107.9,100·3,56·71，56·67,56·5， 55·8，52·7，38·2·HR-MS(ESI)m/z:found546·1777[M-H] -，calcd·for C30H29NO9 546·1770·
[0255] 根据以上波谱信息，可鉴定化合物9a化学式为C3qH29NO9,其结构如下。
[0256]
12345 9.芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物IOa的合成 2 (S,E)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2-(3-(2-(3,4-dimethoxyphenyl)-7-methoxybenzofuran-4-yI)aerylamido)propanoic acid(10a) 3 准确称取化合物9a(20mg，0.039mmol)于二颈烧瓶中，加入MeOH/H2〇 5mL(4: lv/v) 溶解，加入Na0H(18 · 8mg，0 · 469mmol)，加热回流，并TLC(环己烷/乙酸乙酯/甲酸2:1:0 · I % v/V/V)监测反应至反应完全。待反应停止，冰浴冷却反应液，滴加10%HC1液并不断搅拌，至 pH3~4,浓缩蒸干，加入蒸馏水IOmL，乙酸乙酯（IOmL X 4)萃取，合并有机层，浓缩，饱和食盐 水洗涤，MgS〇4干燥。样品经制备型液相色谱(Agilent zorbax_Ci8，5μηι，20 X 250mm)分离，流 速8mL/min，检测波长281nm，流动相：乙腈-0.1%甲酸-水，得反应产物10&(10.711^，7丨61(1 55%)〇 4
[0260]对步骤(1)中得到的反应产物进行结构解析。 5 理化性质：黄绿色粉末(TLC Rf = O.36环己烷/乙酸乙酯/甲酸4:1:0.1%)。
[0262] 波谱信息=1H NMR(DMS0-d6,300MHz)S8.20-8.09(t，lH，J = 7.8Hz)，7.68(s，lH)， 7.62(d，lH，J=15.9Hz)，7.55-7.45(m，2H)，7.41(d，lH，J = 8.7Hz)，7.11(d，lH，J = 8.1Hz)， 6.98(d，lH，J = 8.4Hz)，6.82(d，lH，J = 15.9Hz)，6.67-6.58(m，2H)，6.49(d，lH，J = 7.8Hz)， 4.58-4.46(dd，lH，J=13.6,7.4Hz)，4.01(s，3H)，3.89(s，3H)，3.83(s，3H)，3.00-2.92(dd， lH，J=14.1，4.8Hz)，2.83-2.75(dd，lH，J=13.6,7.4Hz);13C NMR(DMS0-d6,75MHz)Sl73.4， 165.2,156.5,149.9,149.2,145.7,144.9,143.9,143.0,136.8,129.5,128.4,124.6， 122·2,120.6,120·3,119.9,117·9,116.6,115.3,112.I，108.4,107.2,100·0,56·0,55·8， 55.7,54.2,36.7.HR-MS(ESI)m/z：found 532.1620[M-H]^calcd.for C29H27NO9 532.1613.
[0263] 根据以上波谱信息，可鉴定化合物IOa的化学式为C29H27NO9,其结构如下式。
[0264]
[0265] IU ·万整本升η大μ#」失剛:收tL彳玎土柳日、风
[0266] Methyl(R，E)_3_(3，4-dihydroxyphenyl)-2-(3-(2-(3，4_dimethoxyphenyl)_7_ methoxybenzofuran-4-yl)acrylamido)propanoate(9b)
[0267] 准确称取反应中间体于圆底烧瓶中，加入DMF/CH2C12 5mL(v/v 2:5)，超声至样品 溶解，冰浴冷却至〇 °C，加入EDCI (31 · 4mg，0 · 152mmoI)，HoBt (26 · 3mg，0 · 167mmo 1)，冰浴冷却 IOmin并不断搅拌。加入D-丙氨酸甲酯盐酸盐(37mg，0.181mmol)，Et3N(39mg，0.371mmol)，N2 保护，冰浴中反应30min后放置至室温，TLC(环己烷/乙酸乙酯5:2v/v)不断监测反应，直至 原料基本消失。待反应完全后，蒸干溶剂，加入蒸馏水15mL稀释样品，滴加几滴10 % HCl水溶 液，充分震荡。用乙酸乙酯（I5mLX 3)萃取，得有机层，浓缩，并依次用饱和NaHCO3水溶液和 饱和食盐水洗涤，MgSO4干燥，得样品混合物。经硅胶柱层析(环己烷/乙酸乙酯12:1)等度洗 脱，得到反应产物9b(45.7mg，yield 66%)。
[0268] 对步骤(1)中得到的反应产物进行结构解析。
[0269] 理化性质：黄绿色粉末(TLC Rf = 0.56环己烷/乙酸乙酯5: 2)。
[0270] 波谱信息=1H 匪R(O)Cl3，300ΜΗζ)δ7· 61 (d，lH，J= 15·3Ηζ)，7· 46-7 ·39(ι?，1H)， 7 · 37-7 · 28(m，2H)，7.12(d，lH，J = 8.1Hz)，6.93-6.89(m，2H)，6.65-6.60(d，2H，J = 8.1Hz)， 6.53-6.48(d，lH，J = 8.4Hz)，6.28(d，lH，J=15.3Hz)，5.02-4.90(dd，lH，J=13.8,4.8Hz)， 3.97(s，3H)，3.91(s，3H)，3.74(s，3H)，3.49(s，3H)，3.24-3.11(dd，lH，J=14.4,5.4Hz)， 3.09-2.95(dd，lH，J=14.4,4.8Hz);13C 匪R(CDC13,75MHz)S172.5，167.2，157.3，150.0， 149.3,146.5,144.4,143.9,140.1，136.0,130.9,127.9,124.1，122.9,121.2,119.8， 118·6，117·3，116·3，115·4，111·4，108·4，106·6,99·0,56·3,56·2,56·1，54·0,52·6， 37.3.HR-MS(ESI)m/z：found 546.1777[M-H]^calcd.for C30H29NO9 546.1770.
[0271 ]根据以上波谱信息，可鉴定化合物9b化学式为C3qH29NO9,其结构如下。
[0272]
[0273] 芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物及反应试剂(氨基衍生物）的黄嘌呤氧化酶抑制活 性测定
[0274] 11.1试剂与标准溶液的配制
[0275] (l)75mM 磷酸缓冲液（PB，pH 7.4):含 KH2PO4 0.0956g，K2HP〇4 0.6946g，EDTA 1.862mg，用纯水稀释至50mL，用于稀释样品和其它试剂；
[0276] (2)X0D溶液：取25U/2 · 6mL的XOD，用75mM的PB溶液稀释至0 · 08U/mL的XOD工作液， 用移液枪吹匀，置于冰上保存，待用；
[0277] (3)底物配制：精密称取适量黄嘌呤(XA)加入0.1 N NaOH溶液5mL中，超声溶解，后 者中加入75mM I3B溶液95mL，配制终浓度为0.48mM的底物母液，涡旋混匀Imin，每次实验前 新鲜配制；
[0278] (4)供试药物配制:精密称取受试药物适量，用DMSO溶解配制为IOmM的储备液，于_ 20°C避光保存。实验前用PB稀释至不同浓度(0~IOOmM)，DMS0含量小于0.1 %。
[0279] 11.2实验步骤
[0280] (1)在96孔板上加入不同浓度的待测样品溶液IOOyU再加入0.08U/mL XOD 50yL， 并以相同体积的PB作为空白对照，以别嘌呤醇(Allopurinol)为阳性对照，在酶标仪上37°C 孵育3min，每组平行设置4个复孔。
[0281] (2)加入底物0.48mM XA 50yL启动反应，在波长295nm处每隔15s读数一次，记录吸 光值，共计7min。数据处理:使用Excel分析处理数据，并用GraphPad Prism 6.0.2计算得到 半数抑制浓度(IC50)。
[0282] (3)测定结果如表1所示，合成得到的多数苯并呋喃酰胺化衍生物均具有较显著地 黄嘌呤氧化酶抑制活性。
[0283] 表1苯并呋喃类酰胺化衍生物对黄嘌呤氧化酶的抑制活性
[0285] a IC5q值均为四次平行实验的均结果；
[0286] 1献报道：Κ：5() = 2·55μΜ;
[0287] 实施例12
[0288]采用DPPH自由基清除实验对合成得到的苯并呋喃类酰胺化衍生物进行抗氧化活 性评价。
[0289] 12.1试剂与标准溶液的配制
[0290] (I )DPPH溶液的配制：精密称取适量DPPH，加入MeOH超声溶解，配制IOmM储备液，-20°C保存。实验前用MeOH稀释至0.1 mM，避光保存；
[0291] (2)供试药物的配制：精密称取受试药物适量，用MeOH溶解配制IOm储备液，_20°C 避光保存。实验前用MeOH稀释至不同浓度(0~IOOmM)。
[0292] 12.2实验步骤
[0293] (1)在96孔板上加入不同浓度的待测样品溶液IOOyU再加入0.1 mM DPPH溶液100μ U并以相同体积的MeOH作为空白对照，以槲皮素(Quercetin)作为阳性对照，在酶标仪上37 °(：摇晃混匀Imin后，暗处放置30min，每组平行设置3个复孔。
[0294] (2)在波长517nm处用酶标仪记录其吸光值，数据处理:使用Excel分析处理数据， 并用GraphPad Prism 6.0.2计算得到半数抑制浓度（IC50)。
[0295] (3)测定结果如表2所示，大部分芳基苯并呋喃衍生物均具有较明显的抗氧化作 用，由其结构可推测邻酚羟基对其清除自由基能力有着重要影响。
[0296] 表2苯并呋喃类酰胺化衍生物抗氧化活性
[0299] a IC5q值均为三次平行实验的均结果；
[0300] 1献报道 Κ：5〇 = 9·1μΜ;
[0301] 实施例13
[0302] 采用细胞模型评价合成得到的苯并呋喃类酰胺化衍生物的抗氧化活性评价(清除 超氧阴离子的能力）。
[0303] 哺乳动物巨噬细胞在吞噬细菌、衰老变性细胞、免疫复合物或氧化低密度脂蛋白 后，吞噬细胞进入功能活化状态，细胞内溶酶体功能增强、ROS水平增加，分泌合成炎症性细 胞因子。脂多糖(Lipopolysacchar ide，LPS)是革兰阴性菌细胞壁的主要成分，也是其致病 的主要物质基础，可通过刺激单核/巨噬细胞产生并释放大量的活性氧（主要包括〇:T和 H2O2)、一氧化氮(NO)、IL_10以及肿瘤坏死因子-a(Tumor necrosis factor-α，TNF_a)等炎 症因子参与机体急性期应答，引起机体炎性损伤。本发明利用LPS刺激巨噬细胞模型来评价 苯并呋喃类酰胺化衍生物在细胞水平清除超氧阴离子的抗氧化活性。
[0304] 13.1试剂与标准溶液的配制
[0305] (1)待测药物:精密称取受试药物适量，用DMSO配制为IOmM的样品储备液，并于-20 °C保存备用。
[0306] (2)LPS:精密称取造模剂LPS适量，用DMEM配制为0. lyg/mL的样品储备液，并于-20 °C保存备用。
[0307] (3)探针稳定剂DTPA:精密称取DTPA适量，用DMSO配制为20mM的样品储备液，并用 PB稀释成100μΜ，于4°C保存备用。
[0308] (4)HE:在厌氧、避光条件下用二甲基亚砜溶解探针配制成20mmol/L的储备溶液， 于-80°C条件下避光保存。使用前取出，用DMEM配制成ΙΟμ mol/L溶液，置于冰上避光保存备 用。
[0309] 13.2实验步骤
[0310] LPS刺激巨噬细胞RAW 264.7造模并给药：
[0311] (I)RAW 264· 7细胞接种于培养皿（60mm)，每皿4mL，置于饱和湿度，37°C的5%⑶2 孵箱中培养。实验分为空白组、模型组和给药组，其中模型组和给药组分别加入造模剂LPS (以DMEM配制为），实验优选的LPS浓度为0. lyg/mL，造模时间24h，以维生素 E为阳性对照。 [0312] (2)细胞培养12h后，吸弃去上清液，加入含0.1yg/mL LPS培养基配置的终浓度为 IOyM的待测药物，每个待测样品分别设两个平行复孔。
[0313] ⑶继续置于细胞培养箱中培养24h后，弃去上清液，用I3BS冲洗细胞，加入含有探 针ΗΕ( ΙΟμΜ)的DMEM培养基，避光培养30min。
[0314] (4)随后用冰冷的PBS/(100yM)DTPA冲洗细胞两次，再加入ImL PBS/(100yM)DTPA， 用刮刀将细胞分为两份(700yL和300yL)分别收集至EP管中，4°C，13000rpm离心10min，去除 上清液，将细胞团块置于-80°C保存待用。其中前者含700yL细胞液用于检测物2-OH-E+的 LC-MS含量测定，后者含300yL细胞液用于细胞蛋白浓度的测定。
[0315] 13.3 LC-MS分析条件、待测样品前处理及数据处理方法
[0316] (I)LC-MS色谱条件：仪器:Agilent IlOOseries LC-QMS;色谱柱:Agilent Zorbax SB-Aq(4.6X50mm，1.8ym);流动相:0.1%甲酸-水(A相）；0·1%甲酸-乙腈(B);梯度条件:0 ~2min，5% ~30%Β;2~511^11，30%8;5~711^11，30%~100%8;7~1011^11，100%8 ;流速： lmL/min ;MS条件：positive ion mode，SIM(SIM1:1 · 2~3min[M+H]+288(加兰他敏）；3~ 10min[M]+330(2-OH-E+));裂解电压：120V;氮气流速：10 · 0L/min;
[0317] (2)待测样品前处理：每个EP管中加入500yL乙腈，避光，超声（10s，八个循环， 100W)，并于4°C，12,000g离心10min后，取其上清液转移到1.5mL EP管中，真空干燥lh，得红 色干燥物并用IOOyL质谱水复溶样品，同时加入内标物加兰他敏，使其待测样品终浓度为 0· ΙμΜ。待测样品于4°C，13,000rpm离心 10min，进LC-MS分析。
[0318] (3)超氧阴离子清除率的计算:通过峰面积/蛋白浓度来评价产物2-OH-E+的生成 量。化合物对xoD抑制率或的清除率按以下公式计算：〇厂'自由基清除率=以^3^-A sampIeVAbiankX 100%，其中Abiank为对照组2-OH-E+的峰面积值/蛋白浓度;AsampIe为样品组2-OH-E +的峰面积值/蛋白浓度。
[0319] 13.4数据结果分析:结果如表3所示，与模型组相比，2-芳基苯并呋喃类酰胺化衍 生物 5&，513,5(3,613,6(3,6(1，66及531￥丨311〇1丨〇3(^(1(：对1^5刺激巨噬细胞1^1 264.7产生的 超氧阴离子有较明显的清除作用。与Ve相比，衍生物5a，5b，5c，6b，6d和6e表现出更好的超 氧阴离子清除活性。显示出芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物具有较好的抗氧化活性，尤其是 衍生物5a，5b，5c，6b，6d和6e表现出优于Ve的超氧阴离子清除活性。
[0320] 表3芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物对RAW 264.7中超氧阴离子的清除活性评价
[0322] 实施例14
[0323] 采用细胞模型评价苯并呋喃类酰胺化衍生物对尿酸生成的影响。
[0324] (1)供试药物配制:精密称取受试药物适量，用DMSO配制为I OmM的样品储备液，并 于4 °C保存备用。
[0325] (2)实验步骤:正常肝细胞L02接种于6孔板中培养(铺板密度IX IO6个/mL)，铺板 4h后，进行细胞实验。实验分为空白组、模型组和给药组，其中模型组和给药组分别加入造 模剂黄嘌呤（以D M S 0配制为储备液待用），空白组加入相同体积D M S 0，并以非布索坦 (Febuxostat)作为阳性对照。阳性对照药非布索坦取5μΜ，受试药物用培养基稀释至所需浓 度（10μΜ，30μΜ，50μΜ)后，加入6孔板中，37 °C度孵育15min后，模型组、给药组分别加入终浓 度为1〇μΜ的黄嘌呤，每组分别设两个复孔，置于细胞培养箱中培养24h后，收集培养基IOOyL 进行LC-MS分析。
[0326] (3)质谱分析前处理:取IOOyL收集的培养基，加入MeOH 400yL、CHCl3 IOOyL和H2O 300yL，涡旋混匀，20000g离心10min，取上层浓缩干燥。H2O IOOyL复溶，并加入内标加兰他 敏（1 ·25μΜ)IOyL(终浓度为0· 125μΜ)，13000rpm离心10min，取上层进行LC-MS分析。
[0327] (3)测定结果如表4所示，芳基苯并咲喃类酰胺化衍生物5b，6e和Salvianolic acid C(I)对由黄嘌呤造模形成的肝细胞模型中尿酸的生成有较为明显的抑制作用，并呈 现出一定的浓度依赖性。
[0328]表4苯并呋喃类酰胺化衍生物5b，6e对细胞模型中尿酸的抑制作用
[0330] 实施例15
[0331] 采用氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症动物模型评价苯并呋喃类酰胺化衍生物对小鼠 血尿酸的影响
[0332] (1)实验动物：昆明小鼠由扬州大学实验动物中心提供。给药前12h及试验期间禁 食，实验过程中不限制饮水。
[0333] (2)供试药物配制:精密称取受试药物适量，用相应体积的生理盐水超声溶解至溶 液澄清，配制为储备液，并于4°C保存备用。
[0334] (3)实验步骤:小鼠随机分为9组，每组10只：①正常对照组，②模型对照组，③衍生 物5b低剂量组:20mg/kg，④衍生物5b中剂量组:40mg/kg，⑤衍生物5b高剂量组:80mg/kg，⑥ 衍生物6e低剂量组:20mg/kg，⑦衍生物6e中剂量组:40mg/kg，⑧衍生物6e高剂量组:80mg/ kg，⑨阳性对照组:别嘌醇20mg/kg。供试药物用0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)配制成适宜 浓度，正常组小鼠腹腔注射0.5%羧甲基纤维素钠，其余各组小鼠腹腔注射氧嗪酸钾300mg/ kgdh后正常组和模型组小鼠腹腔注射0.5%羧甲基纤维素钠，其余各组腹腔注射供试药物 10mL/kg。给药2h后摘眼球取血500yL，室温放置lh，3000rpm离心5min，取上层血清于_4°C保 存。按尿酸检测试剂盒说明书方法测定小鼠血清中尿酸水平。同时取小鼠肝脏，生理盐水漂 洗，取100mg，加900yL预冷的生理盐水匀浆，离心，取上清按试剂盒说明书方法测定肝脏匀 浆中黄嘌呤氧化酶活力。
[0335] (4)测定结果如表5所示:小鼠腹腔注射氧嗪酸钾后，血中尿酸水平显著升高，与正 常组相比，有显著性差异，表明造模成功。给药后，血清中的尿酸水平和肝脏中XOD活性均与 浓度呈现一定的剂量依赖性。
[0336] 表5衍生物5b，6e对氧嗪酸钾所致小鼠高尿酸血症模型的影响
[0338] a给药组与模型组相比:*P<0 · 05，**P<0 · 01。
[0339] 实施例16
[0340] 为初步阐明所合成的系列2-芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物与黄嘌呤氧化酶可能 的结合模式及相互作用位点，采用分子对接的方法(Molecular docking experiment)初步 对2-芳基苯并咲喃类酰胺化衍生物6e，6b，5b和Salvianolic acid( 1)与黄噪呤氧化酶进行 了作用机制研究。黄嘌呤氧化酶(PDB C〇de:lFIQ)由A、B、C三条亚基构成，其中包含有三个 活性结构域，分别为A链中的Fe/S中心结构域，B链中的FAD结构域和C链中的钼蝶呤结构域。 在对接实验中，使用Febuxostat和AlIopurinol这两个已知黄噪呤氧化酶抑制剂作为对照。 分析分子对接结果，根据打分函数确定，认为化合物单体与黄嘌呤氧化酶结合能最低的对 接构象为其优势构象。对接结果如图3:化合物I，6e，6b，5b及Febuxostat和AlIopurinol的 对接打分分别为-7 · 1，_7 · 42，-7 · 25，-7 · 1，-8 · 19，-5 · 21。由图3可以看出，化合物I，6e，6b和 卩〇131^〇8七31:与多个相同的氨基酸残基发生相互作用，如1^8249，1^8256，1^11257，'\^1259， Ile264, Ile353，Arg394和Leu404,表明化合物I，6e，6b可能与阳性药Febuxostat相似，结合 于黄嘌呤氧化酶相同的结构域而发挥着抑制该酶的活性。由图3还可以看出，衍生物5b则与 氨基酸残基Prol076，Phe100 9 ,ThrlOlO，Arg880 ,VallOll，Leul014，Glu802，Ser876，Glu879 发挥着相互作用，且与残基？1^1009，1'1^1010 &11(16111879形成三个氢键，这与阳性药 Allopurinol相似，可能作用于黄嘌呤氧化酶共同的结构域而发挥着酶抑制作用。同时还观 察出，氢键的形成和疏水性相互作用对于维系蛋白受体-配体构象的稳定发挥重要作用。
[0341] 在图3活性化合物与黄嘌呤氧化酶分子对接实验结果中，（A)Febuxostat(B) Allopurinol(C)6b(D)6e(E)Salvianolic acid C(l)(F)5b〇
[0342] 实施例17
[0343] 衍生物5b的制剂
[0344] (1)本发明的衍生物5b的片剂：
[0345] 衍生物5b2mg，淀粉88g，硬脂酸镁3g
[0346] 制备工艺：取本发明的衍生物5b过100目筛，加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗 粒，干燥，压片，即得。
[0347] (2)本发明的衍生物5b的胶囊
[0348] 衍生物5b2mg，淀粉88g，硬脂酸镁3g
[0349] 制备工艺：取本发明的衍生物5b过100目筛，加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗 粒，干燥，装胶囊，即得。
[0350] (3)本发明的衍生物5b的软胶囊
[0351] 衍生物5b IOmg，大豆卵磷脂100g
[0352]制备工艺：取本发明的衍生物5b，加大豆软磷脂，胶体磨混匀，抽真空，压制，即得 软胶囊。
[0353] (4)本发明的衍生物5b的冻干粉：
[0354] 衍生物5b2g，亚硫酸钠4g，乙醇50mL，加水定容至1000 mL;
[0355] 制备工艺:取本发明的衍生物5b分散在乙醇中，亚硫酸钠溶于水中，在超声或搅拌 条件下将拿硫酸钠溶液逐渐加入，使成澄清透明溶液;补加水定容至足量;经〇. 22μπι微孔滤 膜过滤，冷冻干燥得到。
[0356] 实施例18
[0357] 衍生物6e的制剂
[0358] (1)本发明的衍生物6e的片剂：
[0359]衍生物6e2mg，淀粉88g，硬脂酸镁3g
[0360]制备工艺：取本发明的衍生物6e过100目筛，加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗 粒，干燥，压片，即得。
[0361] (2)本发明的衍生物6e的胶囊
[0362]衍生物6e2mg，淀粉88g，硬脂酸镁3g
[0363]制备工艺：取本发明的衍生物6e过100目筛，加淀粉、硬脂酸镁混合均匀，制成颗 粒，干燥，装胶囊，即得。
[0364] (3)本发明的衍生物6e的软胶囊
[0365] 衍生物6el0mg，大豆卵磷脂100g
[0366]制备工艺：取本发明的衍生物6e，加大豆软磷脂，胶体磨混匀，抽真空，压制，即得 软胶囊。
[0367] (4)本发明的衍生物6e的冻干粉：
[0368] 衍生物6e2g，亚硫酸钠4g，乙醇50mL，加水定容至1000 mL;
[0369]制备工艺:取本发明的衍生物6e分散在乙醇中，亚硫酸钠溶于水中，在超声或搅拌 条件下将拿硫酸钠溶液逐渐加入，使成澄清透明溶液;补加水定容至足量;经〇. 22μπι微孔滤 膜过滤，冷冻干燥得到。
[0370]上述实施例为本发明具有代表性的实施方案的举例说明，仅仅是示例性的说明， 但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他任何未背离本发明的精神实质与原理 下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范 围之内。
【主权项】
1. 一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物，其结构通式如式I所示：尺1，1?2，1?3，1?4，1^，1?6，办，1?8各自独立为氢，羟基，卤素，硝基，苄基，未取代或经卤素、羟基、 硝基、Ch烷氧基中选出1~3个取代基取代的&-4烷基，未取代或经卤素、羟基、硝基、&-2烷 氧基中选出1~2个取代基取代的&-3烷氧基； R9为氢，未取代或经卤素、羟基、疏基、Cl-3烷基、Cl-2烷氧基中选出1~3个取代基取代的 &一4烷基，未取代或经卤素、羟基取代的3-乙基-1H-吲哚，未取代或经卤素、羟基、&-2烷氧基 取代的苯基，未取代或经卤素、羟基、&- 2烷氧基取代的苄基，未取代或经卤素、羟基烷 氧基取代的其他芳基(其中，所述卤素乂 = ?，(：1，8^11 = 1，2,3)，如3,4-二羟基苄基，3,4-二 甲氧基苄基，4-羟基苄基，4-甲氧基苄基等； Rio 为氢、-COOH、-C00CH3、-⑶OCH2CH3、_COOCH( CH3) 2、-COO (CH2) 2CH3 或经卤素、羟基、Ci-3 烷基、烷氧基中选出1~3个取代基取代的&-4烷基。2. 根据权利要求1的一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物，其特征在于：其中:R3，或、和、R4为羟基以外的其他取代基； 其中:R9，或、和、Rio为氢以外的其他取代基； 或;一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物： 结构通式如下任意一项所示：? 或;一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物： 结构通式如式1所示：其中各自独立为未取代或经卤素、羟基取代的烷基，未取代或经卤素、羟基 取代的Cl-3烷氧基，卤素，硝基，苄基； R4为氢，未取代或经卤素、羟基、巯基取代的Ci-4烷基，3-乙基-1H-吲哚，未取代或经卤 素、羟基取代的苯基，未取代或经卤素、羟基取代的苄基，未取代或经卤素、羟基取代的其他 芳基(其中，卤素乂 = F，Cl，Br)，如3，4-二羟基苄基，3，4-二甲氧基苄基，4-羟基苄基，4-甲氧 基苄基等； R5 为氢，-COOH、-COOCH3、-COOCH2CH3、_COOCH( CH3) 2、-COO (CH2) 2CH3 或者为氢、Ci-4 烷基； 或;一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物： 其中Ri，R2，R3各自独立为m；R4为氢;R5为氢； 或;一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物：其中各自独立为未取代或经卤素、羟基取代的烷基，未取代或经卤素、羟基 取代的Cl-3烷氧基，卤素，硝基，苄基； R4为氢，未取代或经卤素、羟基、巯基取代的Ci-4烷基，3-乙基-1H-吲哚，未取代或经卤 素、羟基取代的苯基，未取代或经卤素、羟基取代的苄基，未取代或经卤素、羟基取代的其他 芳基(其中，卤素乂 = F，Cl，Br)，如3，4-二羟基苄基，3，4-二甲氧基苄基，4-羟基苄基，4-甲氧 基苄基等； R5 为氢，-C00H、-COOCH3、-COOCH2CH3、_C00CH( CH3) 2、-COO (CH2) 2CH3 或者为氢、Ci-4 烷基； 或;一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物：其中各自独立为未取代或经卤素、羟基取代的烷基，未取代或经卤素、羟基 取代的Cl-3烷氧基，卤素，硝基，苄基； R4为未取代或经卤素、羟基、巯基取代的CH烷基，3-乙基-1H-吲哚，未取代或经卤素、羟 基取代的苯基，未取代或经卤素、羟基取代的苄基，未取代或经卤素、羟基取代的其他芳基 (其中，卤素 X = F，Cl，Br)，如3，4-二羟基苄基，3，4-二甲氧基苄基，4-羟基苄基，4-甲氧基苄 基； R5 为-COOH、-COOCH3、-COOCH2CH3、_COOCH( CH3) 2、-COO (CH2) 2CH3 或者为氢、Ci-4 烷基； 或;一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物： 结构通式如下任意一项所示：3. 根据权利要求1-2的一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物，其特征在于:其用于制备抗 氧化、制备清除自由基、制备黄嘌呤氧化酶抑制剂、治疗痛风、或、治疗高尿酸血症的组合 物、药物、保健品上的应用。4. 根据权利要求1-2的一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物，其特征在于：合成方法如 下： (1) 将丹酚酸C与无机碱混合，超声溶解于混合溶剂中，加热不断检测反应，待反应完全 后，硅胶柱色谱分离，得到中间体Tournefolic acid A; (2) 将S0C12冰浴冷却下加入有机溶剂中，反应30min后，加入丙氨酸、苯丙氨酸、半胱氨 酸、酪氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、D/L-D0PA等氨基类化合物，室温搅拌，浓缩蒸干溶剂并洗涤 干燥，得系列羧基保护的氨基衍生物； (3) 将中间产物Tournefο 1 ic acid A在缩合剂作用下分别与系列氨基衍生物以摩尔比 1:1.1~2混合，溶于有机溶剂中，室温搅拌，反应后处理后经硅胶柱色谱分离，得到系列的 芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物； (4) 在系列芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物中加入无机碱，混合溶剂超声溶解，室温搅拌 或加热回流，TLC不断监测反应，样品混合物经后处理，再经过硅胶柱色谱或制备型高效液 相色谱分离纯化，得到系列高纯度的苯并呋喃类酰胺化衍生物。5. 根据权利要求4的一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物，其特征在于:合成方法如下： 所述的第1步中的无机碱水解可选择LiOH，NaOH，KOH等，有机溶媒为THF，Me0H，H20或为 其混合溶剂，优选为混合溶剂Me0H/H20,且溶剂体积比优选为3:1~5:1，反应时间优选为8 ~12h; 所述的第1步中的分离纯化方法具体为:硅胶柱层析，用氯仿/甲醇/甲酸（10:1:0.1，v/ v/v)等度洗脱得到中间体Tournefolic acid A; 所述的第2步中的氨基类化合物为各种D/L构型的氨基酸及其它手性氨基衍生物，有机 溶剂为甲醇、乙醇及异丙醇等试剂，反应时间优选为18~24h; 所述的第2步中的分离纯化方法具体为：甲醇和乙醚分别多次交互洗涤样品并浓缩蒸 干； 所述的第3步中的缩合剂可以为DCC/HoBt，EDCI/HoBt，HATU，HBTU，PyBOP，优选为EDCI/ HoBt，有机溶剂优选为混合溶剂DMF/CH2C12(3:1~5: lv/v)，反应时间优选为8~12h; 所述的第3步中的分离纯化方法具体为:硅胶柱层析，氯仿/甲醇梯度洗脱得目标衍生 物； 所述的第4步中的无机碱可以为LiOH，NaOH，K0H，优选为NaOH，有机溶媒为THF，MeOH，H20 或为其混合溶剂，优选为Me0H/H20(3:1~5: lv/v)，反应时间优选为8~12h。6. 根据权利要求4的一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物，其特征在于:分离纯化方法如 下： 硅胶柱层析分离纯化，流动相为氯仿/甲醇/甲酸梯度洗脱;或制备型液相色谱柱分离 纯化样品混合物，其中，色谱柱为(Agilent，Zorbax_Ci8，5μηι，9.4 X 250mm)，色谱条件优选 为:流速:8mL/min，检测波长:28lnm，柱温:30°C，流动相：乙腈-0.1 %甲酸-水。7. 根据权利要求4的一种芳基苯并呋喃类酰胺化衍生物，其特征在于： L-多巴甲酯盐酸盐的结构是：8. 根据权利要求4的一种方_本开w天_突既妝化W 了生物，兵特征在于： L-多巴甲酯盐酸盐的制备方法为:准确量取无水甲醇5mL于25mL圆底烧瓶中，冰水浴冷 却15min，缓慢逐滴加入S0C12 (493yL，6.780mmo 1)，0 °C搅拌30min后，加入准确称取的卜 DOPA( 800mg，4.520mmo 1)，放置至室温，搅拌反应24h，待反应完全后，蒸干溶剂MeOH和反应 剩余的S0C12，用MeOH和Et 20多次交互洗涤样品，浓缩蒸干，得反应产物L-多巴甲酯盐酸盐。
【文档编号】C07D405/12GK105859667SQ201610076098
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年2月3日
【发明人】陈君, 唐红进, 张文, 李萍, 周萍
【申请人】中国药科大学