本发明涉及一种龙胆苦苷衍生物的合成方法，属于化学合成技术领域。
背景技术：
龙胆苦苷是一种天然化合物，具有胆苦苷具有保护肝脏、抗氧化、抗炎、镇痛及抗肿瘤等作用.等活性，广泛存在于龙胆科多种植物中，由于龙胆苦苷其良好的生物活性和潜在的应用前景，但其水溶性极强在体内代谢快，关于龙胆苦苷的合成及其结构修饰的文章报道非常少，所以对龙胆苦苷的结构修饰进行研究具有重要意义。
技术实现要素：
针对现有技术存在的不足，本发明提供了一种龙胆苦苷衍生物的合成方法。
为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：
一种龙胆苦苷衍生物的合成方法，将龙胆苦苷加入反应容器中，加入丙酮为溶剂，后加入过量的2,2-甲氧基丙烷，在室温下搅拌10min，加入催化剂，在室温下搅拌2h，反应完成后过滤，用丙酮洗涤，得到中间产物A，将中间产物A溶解后在氮气保护条件下与化合物B进行反应，得到中间产物C，中间产物C加入醋酸和水混合液，在室温下搅拌2h，反应完成后，减压蒸干溶剂，得到龙胆苦苷衍生物。
所述的一种龙胆苦苷衍生物的合成方法，所述催化剂为三氯化铁、对甲苯磺酸吡啶盐或对甲苯磺酸。
所述的一种龙胆苦苷衍生物的合成方法，所述化合物B为丁香酚甲醚、苯乙烯、丁香酚或对甲氧基苯丙烯。
所述的一种龙胆苦苷衍生物的合成方法，所述中间产物A与化合物B的反应是在Grubbs催化剂的催化下进行的，经过柱层析纯化，得到中间产物C。
所述的一种龙胆苦苷衍生物的合成方法，所述醋酸和水的体积比是4:1。
本发明的有益效果：
本发明的合成方法操作简单，收率高，为龙胆苦苷的结构修饰提供新的思路。
具体实施方式
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。
实施例1
称取357.2mg龙胆苦苷(1mmol)加入事先烘干的100ml圆底烧瓶中，加入10ml丙酮为溶剂，后加入过量的2,2-甲氧基丙烷，在室温下搅拌10min，加入催化量的三氯化铁(5％mmol)，在室温下搅拌2h，容易变浑浊，TLC监测反应完全，停止反应，过滤，用丙酮洗涤，得到中间产物A 367.2mg，产率为93％。
中间产物A的表征：1H-NMR(300MHz,CDCl3),δppm:7.37(1H,s),5.71(1H,t,J＝7.8Hz),5.63(1H,s),5.44(1H,d,J＝2.7Hz),5.19-5.24(3H,m),5.15(1H,s),4.99(2H,dd,J＝2.7Hz),4.62(1H,d,J＝8.1Hz),3.77-3.82(1H,q),3.65(1H,t,J＝10.2Hz),3.41(1H,d,J＝4.2Hz),3.17-3.37(2H,m),2.99-3.07(1H,q),1.41(3H,s),1.30(3H,s).
13C-NMR(75MHz,CDCl3),δppm:162.78,148.57,133.78,124.67,118.01,116.35,103.34,99.61,98.77,96.91,73.59,73.11,72.91,69.16,66.89,61.28,44.35,28.94,18.98.
称取200.2mg中间产物A(0.5mmol)加入事先烘干的100ml圆底烧瓶中，加入20ml无水二氯甲烷，在室温下搅拌使中间产物A溶解，用氮气置换体系中的空气，在氮气的保护下用注射泵加入丁香酚甲醚(1mmol)，再加入22.3mg GrubbsⅠ催化剂(5mol％)(溶于3ml无水二氯甲烷中)，后在60℃下回流搅拌5h，TLC监测反应完全，停止反应并冷却至室温，减压抽去溶剂，柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇＝50:1。得到深棕色粉状中间产物C1226.3mg，产率为83％。
中间产物C1的表征：1H-NMR(300MHz,CDCl3),δppm:7.48(1H,s),6.80(1H,d,J＝8.1Hz),6.69(2H,d,J＝12.1Hz),5.73-5.82(1H,m),5.50(1H,s),5.40(1H,d,J＝3.0Hz),5.29-5.37(2H,m),5.08(1H,d,J＝17.7Hz),4.95(1H,d,J＝17.1Hz),4.72(1H,d,J＝7.8Hz),3.90(6H,s),3.73(3H,d,J＝6.6Hz),3.64(1H,t,J＝10.2Hz),3.34(1H,s),3.23-3.29(2H,m),3.00-3.07(3H,q),1.41(3H,s),1.30(3H,s).
13C-NMR(75MHz,CDCl3),δppm:163.78,149.23,148.91,147.54,133.76,132.16,126.26,125.91,120.38,120.19,115.58,111.95,111.34,103.83,99.85,99.37,97.60,74.03,73.45,72.87,69.44,67.55,61.89,55.94,55.89,44.30,38.38,28.97,19.04.
称取60.3mg中间产物C1(0.1mmol)加入50ml圆底烧瓶中，加入10ml醋酸和水混合液(4:1)，在室温下搅拌2h，TLC监测反应完全，停止反应，减压蒸干溶剂，得到目标化合物为深棕色，产率为100％。
目标化合物的表征：1H-NMR(300MHz,CDCl3),δppm:7.42(1H,s),6.84(1H,d,J＝8.1Hz),6.72(1H,d,J＝1.5Hz),6.67(1H,d,J＝8.1Hz),5.69-5.76(1H,q),5.63(1H,s),5.56(1H,t,J＝3.0Hz),5.37-5.46(1H,m),4.99(1H,s),4.49(2H,d,J＝7.8Hz),3.70(6H,s),3.37-3.42(6H,m),3.29(3H,t,J＝7.2Hz),3.13-3.18(2H,q),2.29-3.04(2H,m).
13C-NMR(75MHz,CDCl3),δppm:162.85,148.79,148.60,147.09,132.42,132.33,126.68,125.73,120.11,115.78,112.13,111.89,103.36,98.75,96.80,77.31,76.62,72.82,69.98,69.15,61.11,55.48,55.29,43.36,37.46.
反应式如下：
实施例2
称取357.2mg龙胆苦苷(1mmol)加入事先烘干的100ml圆底烧瓶中，加入10ml丙酮为溶剂，后加入过量的2,2-甲氧基丙烷，在室温下搅拌10min，加入催化量的对甲苯磺酸吡啶盐5％mmol)，在室温下搅拌2h，TLC监测反应完全，停止反应，过滤，用丙酮洗涤，得到中间产物A 367.2mg，产率为93％。
称取201.3mg中间产物A(0.5mmol)加入事先烘干的100ml圆底烧瓶中，加入20ml无水二氯甲烷，在室温下搅拌使中间产物A溶解，在氮气的保护下用注射泵加入苯乙烯(1mmol)，再加入21.8mg GrubbsⅡ催化剂(5mol％)(溶于3ml无水二氯甲烷中)，在60℃下回流搅拌5h，TLC监测反应完全，停止反应并冷却至室温，减压抽去溶剂，柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇＝50:1。得到深棕色中间产物C2207.3mg，产率为86％。
中间产物C2的表征如下：1H-NMR(300MHz,CDCl3),δppm:7.41(3H,d,J＝9.3Hz),7.31(2H,t,J＝7.5Hz),7.25(1H,d,J＝6.9Hz),6.55(1H,d,J＝15.9Hz),6.14(1H,dd,J＝7.2Hz),5.63-5.70(2H,m),5.53(1H,d,J＝2.7Hz),5.16-5.27(1H,m),5.05(1H,s),4.64(1H,t,J＝8.1Hz),3.78-3.83(1H,q),3.66(1H,t,J＝10.2Hz),3.40(1H,s),3.24-3.34(2H,m),3.05(1H,d,J＝5.4Hz),1.40(3H,s),1.30(3H,s).
13C-NMR(75MHz,CDCl3),δppm:162.77,148.72,136.22,132.12,128.59,127.71,126.26,125.43,125.07,124.70,116.48,103.43,99.77,98.75,97.25,73.62,73.14,72.95,69.23,66.91,61.31,43.93,29.03,19.13.
称取47.3mg中间产物C2(0.1mmol)加入50ml圆底烧瓶中，加入10ml醋酸和水混合液(1:1)，在室温下搅拌2h，TLC监测反应完全，停止反应，减压蒸干溶剂，得到目标化合物为深棕色，产率为100％。
目标化合物表征如下：
1H-NMR(300MHz,CDCl3),δppm:7.43(3H,t,J＝7.2Hz),7.32(2H,t,J＝7.2Hz),7.25(1H,d,J＝8.1Hz),6.56(1H,d,J＝15.9Hz),6.16(1H,dd,J＝7.2Hz),5.58-5.74(2H,m),5.20(1H,t,J＝4.8Hz),4.96(1H,s),4.47-4.60(3H,m),3.69(2H,d,J＝11.4Hz),3.14(4H,d,J＝8.7Hz),2.92-3.03(3H,m).
13C-NMR(75MHz,CDCl3),δppm:162.81,148.93,136.28,132.04,128.60,127.68,126.23,125.60,117.93,116.24,103.37,98.86,96.73,77.35,76.62,72.81,69.97,96.23,61.16,43.78.
反应式如下：
实施例3
称取357.2mg龙胆苦苷(1mmol)加入事先烘干的100ml圆底烧瓶中，加入10ml丙酮为溶剂，后加入过量的2,2-甲氧基丙烷，在室温下搅拌10min，加入催化量的对甲苯磺酸(TsOH)(5％mmol)，在室温下搅拌2h，TLC监测反应完全，停止反应，过滤，用丙酮洗涤，得到中间产物A 367.2mg或356.3mg，产率为93％或90％。
称取201.3mg中间产物A(0.5mmol)加入事先烘干的100ml圆底烧瓶中，加入20ml无水二氯甲烷，在室温下搅拌使中间产物A溶解，在氮气的保护下用注射泵加入丁香酚(1mmol)，再加入21.6mgHoveyda-GrubbsⅡ催化剂(5mol％)(溶于3ml无水二氯甲烷中)，后在60℃下回流搅拌4h，TLC监测反应完全，停止反应并冷却至室温，减压抽去溶剂，柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇＝50:1。得到深棕色粉末中间产物C3234.3mg，产率为88％。
中间产物C3的表征如下：1H-NMR(300MHz,CDCl3),δppm:8.73(1H,s),7.40(1H,s),6.66-6.68(2H,m),6.54(1H,d,J＝7.8Hz),5.69-5.73(2H,m),5.62(1H,s),5.27-5.54(1H,m),5.16-5.24(2H,q),4.91(1H,s),4.63(1H,d,J＝7.8Hz),3.77-3.82(1H,q),3.73(3H,d,J＝6.6Hz),3.64(1H,t,J＝10.2Hz),3.34(1H,s),3.23-3.29(2H,m),3.00-3.07(3H,q),1.41(3H,s),1.30(3H,s).
13C-NMR(75MHz,CDCl3),δppm:162.80,148.61,147.38,144.68,132.79,130.49,126.28,125.59,120.43,115.92,115.33,112.46,103.40,99.72,98.74,97.40,73.63,73.13,72.97,69.15,66.88,55.44,54.83,43.41,37.48,28.97,18.99.
称取47.3mg中间产物C3(0.1mmol)加入50ml圆底烧瓶中，加入10ml醋酸和水混合液(4:1)，在室温下搅拌2h，TLC监测反应完全，停止反应，减压蒸干溶剂，得到目标化合物深棕色泡沫状，产率为100％。
目标化合物表征如下：1H-NMR(300MHz,CDCl3),δppm:7.42(1H,s),6.66(2H,d,J＝7.8Hz),6.54(1H,d,J＝7.8Hz),5.67-5.76(1H,m),5.62(1H,s),5.57(1H,dd,J＝3.0Hz),5.39(1H,dd,J＝7.8Hz),4.97(1H,s),4.59(2H,s),4.48(1H,d,J＝8.4Hz),3.70(3H,s),3.66(1H,s),3.29(2H,d,J＝6.9Hz),3.23(2H,d,J＝6.6Hz),3.11-3.17(3H,q),2.90-3.08(3H,m).
13C-NMR(75MHz,CDCl3),δppm:162.87,148.79,147.39,144.64,132.63,130.53,126.48,125.76,120.43,115.75,115.33,112.40,103.35,98.74,96.83,77.30,76.60,72.81,69.98,69.16,61.10,55.42,43.34,37.50.
反应式如下：
实施例4
称取357.2mg龙胆苦苷(1mmol)加入事先烘干的100ml圆底烧瓶中，加入10ml丙酮为溶剂，后加入过量的2,2-甲氧基丙烷，在室温下搅拌10min，加入催化量的三氯化铁(5％mmol)，在室温下搅拌2h，容易变浑浊，TLC监测反应完全，停止反应，过滤，用丙酮洗涤，得到中间产物A 367.2mg，产率为93％。
称取199.3mg中间产物A(0.5mmol)加入事先烘干的100ml圆底烧瓶中，加入20ml无水二氯甲烷，在室温下搅拌使中间产物A溶解，在氮气的保护下用注射泵加入对甲氧基苯丙烯(1mmol)，再加入22.6mg GrubbsⅡ催化剂(5mol％)(溶于3ml无水二氯甲烷中)，后在60℃下回流搅拌6h，TLC监测反应完全，停止反应并冷却至室温，减压抽去溶剂，柱层析纯化，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇＝50:1。得到深棕色泡沫状中间产物C4220.3mg，产率为85％。
中间产物C4的表征如下：1H-NMR(300MHz,CDCl3),δppm:7.40(1H,s),7.07(H,d,J＝6.6Hz),6.84(2H,d,J＝8.7Hz),5.67-5.77(2H,m),5.62(1H,d,J＝7.5Hz),5.45(2H,d,J＝2.7Hz),5.16-5.38(2H,m),4.97(1H,s),4.64(1H,t,J＝6.9Hz),3.77-3.82(1H,q),3.70(3H,s),3.63(1H,t,J＝10.2Hz),3.39(1H,s),3.18-3.34(5H,m),3.04(1H,t,J＝7.5Hz),1.41(3H,s),1.30(3H,s).
13C-NMR(75MHz,CDCl3),δppm:162.78,157.56,148.73,132.90,131.98,129.31,126.30,125.61,115.88,113.71,103.38,99.72,98.73,97.41,73.64,73.10,69.15,66.84,61.31,54.92,43.46,37.09,28.96,18.95.
取中间产物C4(0.1mmol)加入50ml圆底烧瓶中，加入10ml醋酸和水混合液(4:1)，在室温下搅拌2h，TLC监测反应完全，停止反应，减压蒸干溶剂，得到目标化合物深棕色泡沫状，产率为100％。
目标化合物表征如下：1H-NMR(300MHz,CDCl3),δppm:7.42(1H,s),7.08(2H,d,J＝8.4Hz),6.83(2H,d,J＝8.4Hz),5.67-5.77(1H,m),5.59(2H,d,J＝7.8Hz),5.53(1H,d,J＝3.0Hz),5.37(1H,dd,J＝7.2Hz,J＝7.5Hz),4.98(1H,s),4.50(1H,dd,J＝8.1Hz),3.70(3H,s),3.66(1H,s),3.38(2H,d,J＝5.7Hz),3.27(3H,d,J＝6.6Hz),3.14(1H,d,J＝9.0Hz),3.29-3.03(2H,m).
13C-NMR(75MHz,CDCl3),δppm:162.78,157.51,148.88,132.73,131.57,129.29,126.43,125.79,115.64,113.69,103.28,98.70,96.80,77.27,76.55,72.78,69.96,69.11,61.08,54.89,43.37,37.06.
反应式如下：
活性试验：
将丁香假单胞菌菌液均匀涂布于LB培养皿上，晾干，再将分别吸附有阳性对照、溶剂和新化合物的滤纸片置于培养皿上，于25℃下培养，若化合物有抑制该菌生长的活性，则滤纸片周围将形成一无菌圈，若滤纸片所吸附的化合物无抑制该菌生长的活性，则滤纸片周围不会产生无菌圈。
将称量好的新化合物用溶剂溶解，定容于10mL的容量瓶中待用。将丁香假单胞菌接种于LB液体培养基中，于25℃培养24h。取约0.3ml菌液均匀涂布于LB平皿上，晾干，用滤纸片吸附溶剂、硫酸链霉素溶液和新化合物溶液，分别再将滤纸片置于平皿的三个点上，于25℃培养24h至36h。观察滤纸片周围无菌圈的大小。新化合物、阳性对照和溶剂对照都平行做三个平皿。新化合物对丁香假单胞菌生长的抑制作用见下表：
由上表可以看出龙胆苦苷及实施例2和实施例4合成的衍生物对丁香假单胞菌生长的均有抑制作用，并且衍生物对丁香假单胞菌生长的抑制作用比龙胆苦苷更有效。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。