一种精制提纯瑞鲍迪苷B的方法与流程

本发明属于天然提取物精制技术领域，特别涉及一种精制提纯瑞鲍迪苷B的方法。

背景技术：

甜菊糖苷是从菊科草本植物甜叶菊叶片中提取出来的高甜度、低热能、安全无毒的萜烯类配糖体，主要包括甜菊苷（Stevioside 简称ST）、瑞鲍迪苷A（Rebaudioside A简称RA）、瑞鲍迪苷B（Rebaudioside B简称RB）、瑞鲍迪苷C（RebaudiosideC简称RC）等多种糖苷成分。甜菊糖苷中各种成分因不同的分子结构造成口感、口味、甜度存在差异，在食品、医药、日化工业中得到不同的应用，制备高纯度的RA、RB、SB等成为细分应用的必然趋势。其中RB作为甜菊糖总苷中的一种成分，具有清凉柔和、无不良后苦味等特点，可作为一种特定甜味剂使用。

目前针对甜菊糖苷RB的研究还很不充分，在专利公开号CN 10544091 A中报道了一种阴离子交换树脂去除甜菊糖苷RB的方法，该专利报道的是如何去除甜菊糖苷中RB，而对于如何精制提纯RB没有报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种精制提纯瑞鲍迪苷B的方法，本方法具有工艺简单，条件可控，无污染，成本低等优点。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：一种精制提纯瑞鲍迪苷B的方法，其特征在于，所述方法步骤如下：将甜叶菊提取物加水溶解，得到含瑞鲍迪苷B的溶液，向所述溶液中补充H⁺,进行结晶，固液分离得到结晶产物，所述结晶产物为瑞鲍迪苷B精制产品。

本发明所述补充H⁺方法为，将含瑞鲍迪苷B的溶液通过阳离子交换树脂，收集树脂流出液。

本发明所述阳离子交换树脂类型为大孔型或凝胶型阳离子交换树脂。

本发明所述补充H⁺方法为，向含瑞鲍迪苷B的溶液中加酸。

本发明所述加酸步骤中，每100g甜叶菊提取物溶解后需加入10～100ml 4%的酸，所述添加的酸为盐酸、磷酸、硫酸、硝酸、醋酸中的任意一种或几种。

本发明所述甜叶菊提取物中瑞鲍迪苷B含量≥15%。

本发明所述阳离子交换树脂在装入层析柱前需做预处理，首先采用3%～5%盐酸2BV通过阳离子交换树脂，水洗至PH≥6；再用3%～5%的氢氧化钠水溶液2BV通过阳离子交换树脂，水洗至PH≤9；最后用3%～5%的盐酸2～4BV通过阳离子交换树脂，5～8BV的水冲洗。

本发明所述结晶方式为搅拌下动态结晶或静置结晶。

本发明所述结晶温度为-4～40℃。

本发明所述精制产品中瑞鲍迪苷B含量≥85%。

本发明按照GB 8270-2014规定，使用高效液相色谱法检测总糖苷量和瑞鲍迪苷B（RB）含量。

采用上述技术方案所产生的有益效果在于：本方法工艺简单，条件可控通过增加溶液中的H⁺，破坏了溶液的平衡，使其RB快速结晶。本方法无污染，成本低，可得到瑞鲍迪苷B含量达85%以上的RB甜菊糖，即瑞鲍迪苷B精制产品。

附图说明

图1为实施例1中富含RB甜菊糖（甜叶菊提取物）的高效液相色谱分析图；

图2为实施例1中RB甜菊糖的高效液相色谱分析图；

图3为实施例2中富含RB甜菊糖（甜叶菊提取物）的高效液相色谱分析图；

图4为实施例2中RB甜菊糖的高效液相色谱分析图；

图5为实施例3中富含RB甜菊糖（甜叶菊提取物）的高效液相色谱分析图；

图6为实施例3中RB甜菊糖的高效液相色谱分析图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的说明。

实施例1

取100ml凝胶型阳离子交换树脂装入层析柱中，按以下步骤对树脂进行预处理：用2BV 4%盐酸通过阳离子交换树脂，水洗至PH为6.65；再用2BV 4%的氢氧化钠水溶液通过阳离子交换树脂，水洗至PH为8.52；最后用2BV 4%的盐酸通过阳离子交换树脂，5BV的水进行冲洗。取70g富含RB甜菊糖（甜叶菊提取物）（总糖苷糖量为69.92%，其中RB含量为17.14%，见图1）加水溶解。将高RB溶液通过层析柱后收集流出液，在4℃静置结晶，72h后进行过滤分离，得RB甜菊糖（总糖苷量为93.43%，其中RB含量为87.70%，见图2）。

实施例2

取100ml大孔型阳离子交换树脂装入层析柱中，按以下步骤对树脂进行预处理：用2BV 4%盐酸通过阳离子交换树脂，水洗至PH为6.37；再用2BV 4%的氢氧化钠水溶液通过阳离子交换树脂，水洗至PH为8.74；最后用4BV 4%的盐酸通过阳离子交换树脂，8BV的水进行冲洗。取100g富含RB甜菊糖（甜叶菊提取物）（总糖苷糖量为59.46 %，其中RB含量为24.58%，见图3）加水溶解。将高RB溶液通过层析柱后收集流出液，在-4℃以20r/s进行搅拌析出晶体，36h后进行过滤分离，得RB甜菊糖（总糖苷量为96.25%，其中RB含量为90.66%，见图4）。

实施例3

取100g富含RB甜菊糖（甜叶菊提取物）（总糖苷糖量为74.91%，其中RB含量为57.59%，见图5）加水溶解。在高RB溶液中加入4%盐酸30ml，在10℃下以40r/s进行搅拌析出晶体，12h后进行过滤分离，得RB甜菊糖（总糖苷量为90.39%，其中RB含量为85.85%，见图6）。

实施例4

取100ml凝胶型阳离子交换树脂装入层析柱中，按以下步骤对树脂进行预处理：用2BV 4%盐酸通过阳离子交换树脂，水洗至PH为6.28；再用2BV 4%的氢氧化钠水溶液通过阳离子交换树脂，水洗至PH为8.21；最后用3BV 4%的盐酸通过阳离子交换树脂，7BV的水进行冲洗。取120g富含RB甜菊糖（甜叶菊提取物）（总糖苷糖量为73.62%，其中RB含量为53.42%）加水溶解。将高RB溶液通过层析柱后收集流出液，在40℃以25r/s进行搅拌析出晶体，22h后进行过滤分离，得RB甜菊糖（总糖苷量为94.47%，其中RB含量为85.42%）。

实施例5

取200g富含RB甜菊糖（甜叶菊提取物）（总糖苷糖量为63.28%，其中RB含量为22.11%）加水溶解。在高RB溶液中加入4%硝酸20ml，在-4℃下以28r/s进行搅拌析出晶体，26h后进行过滤分离，得RB甜菊糖（总糖苷量为94.34%，其中RB含量为87.61%）。

实施例6

取150g富含RB甜菊糖（甜叶菊提取物）（总糖苷糖量为69.18%，其中RB含量为56.21%）加水溶解。在高RB溶液中加入4%醋酸150ml，在40℃以30r/s进行搅拌析出晶体，20h后进行过滤分离，得RB甜菊糖（总糖苷量为97.32%，其中RB含量为90.54%）。

实施例4-6中附图与实施例1-3峰形相似，故省略。

以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。