喹啉类化合物及其制备方法和作为尿酸盐转运体抑制剂类药物的用途与流程

本发明涉及喹啉类化合物及其制备方法和作为尿酸盐转运体抑制剂类药物的用途。

背景技术：

尿酸盐转运体(URAT1)抑制剂类药物以用于治疗高尿酸血症、痛风等疾病。

技术实现要素：

本发明提供了一类喹啉类化合物，以及它们作为尿酸盐转运体抑制剂类药物的用途。

本发明提供了式(B)所示的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，

其中：W₁、W₂、W₃、X和Y均具有式(A)中所述的含义；R₆选自取代或未被取代的烷基、取代或未被取代的芳基、取代或未被取代的杂芳基、取代或未被取代的环烷基；进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，所述化合物具有如式(Ⅱ)所示的结构：

其中，R₅选自氢、卤素、氰基、硝基、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR^d、-S(O)_mR^d、-C(O)R^d、C(O)OR^d、-C(O)NR^eR^f、-NR^eR^f或NR^eC(O)R^f，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基分别独立地任选进一步被一个或多个选自卤素、氰基、硝基、氧代基、烷基、卤代烷基、羟烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-OR^d、-S(O)_mR^d、-C(O)R^d、C(O)OR^d、-C(O)NR^eR^f、-NR^eR^f或NR^eC(O)R^f的取代基所取代；

R^d、R^e、R^f、m均具有式(A)中所述的含义；

R₆选自取代或未被取代的烷基、取代或未被取代的芳基、取代或未被取代的杂芳基、取代或未被取代的环烷基；

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₅选自卤素、取代或未被取代的芳基、取代或未被取代的吡啶基、取代或未被取代的嘧啶基、取代或未被取代的吡咯基、取代或未被取代的咪唑基、或C₃～C₆的环烷基。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₅选自F、Br、Cl、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、咪唑基、苯基或环丙基，其中所述的苯基任选进一步被一个或多个选自甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴或三氟甲基的取代基所取代。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₆选自苯基、C₁～C₆的烷基或三氟甲基。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₆选自苯基、甲基、乙基、异丁基或三氟甲基。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐，所述化合物具有如式(Ⅱa)所示的结构：

其中，R₅具有前述的含义。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₅选自卤素、取代或未被取代的芳基、取代或未被取代的吡啶基、取代或未被取代的嘧啶基、取代或未被取代的吡咯基、取代或未被取代的咪唑基、或C₃～C₆的环烷基。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₅选自F、Br、Cl、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、咪唑基、苯基或环丙基，其中所述的苯基任选进一步被一个或多个选自甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴或三氟甲基的取代基所取代。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐，所述化合物具有如式(Ⅱb)所示的结构：

其中，R₅具有前述的含义。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₅选自卤素、取代或未被取代的芳基、取代或未被取代的吡啶基、取代或未被取代的嘧啶基、取代或未被取代的吡咯基、取代或未被取代的咪唑基、或C₃～C₆的环烷基。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₅选自F、Br、Cl、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、咪唑基、苯基或环丙基，其中所述的苯基任选进一步被一个或多个选自甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴或三氟甲基的取代基所取代。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐，所述化合物具有如式(Ⅱc)所示的结构：

其中，R₅具有前述的含义。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₅选自卤素、取代或未被取代的芳基、取代或未被取代的吡啶基、取代或未被取代的嘧啶基、取代或未被取代的吡咯基、取代或未被取代的咪唑基、或C₃～C₆的环烷基。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₅选自F、Br、Cl、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、咪唑基、苯基或环丙基，其中所述的苯基任选进一步被一个或多个选自甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴或三氟甲基的取代基所取代。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐，所述化合物具有如式(Ⅱd)所示的结构：

其中，R₅具有前述的含义。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₅选自卤素、取代或未被取代的芳基、取代或未被取代的吡啶基、取代或未被取代的嘧啶基、取代或未被取代的吡咯基、取代或未被取代的咪唑基、或C₃～C₆的环烷基。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₅选自F、Br、Cl、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、咪唑基、苯基或环丙基，其中所述的苯基任选进一步被一个或多个选自甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴或三氟甲基的取代基所取代。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐，所述化合物具有如式(Ⅱe)所示的结构：

其中，R₅具有前述的含义。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₅选自卤素、取代或未被取代的芳基、取代或未被取代的吡啶基、取代或未被取代的嘧啶基、取代或未被取代的吡咯基、取代或未被取代的咪唑基、或C₃～C₆的环烷基。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₅选自F、Br、Cl、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、咪唑基、苯基或环丙基，其中所述的苯基任选进一步被一个或多个选自甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴或三氟甲基的取代基所取代。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐，其中，R₅选自Br；R₆选自取代或未被取代的烷基、取代或未被取代的芳基、取代或未被取代的杂芳基、取代或未被取代的环烷基；

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₆选自苯基、C₁～C₆的烷基或三氟甲基。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₆选自苯基、甲基、乙基、异丁基或三氟甲基。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐，其中，R₅选自甲氧基苯基；R₆选自取代或未被取代的烷基、取代或未被取代的芳基、取代或未被取代的杂芳基、取代或未被取代的环烷基

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₆选自苯基、C₁～C₆的烷基或三氟甲基。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₆选自苯基、甲基、乙基、异丁基或三氟甲基。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐，其中R₅选自氟苯基；R₆选自取代或未被取代的烷基、取代或未被取代的芳基、取代或未被取代的杂芳基、取代或未被取代的环烷基；

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₆选自苯基、C₁～C₆的烷基或三氟甲基。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₆选自苯基、甲基、乙基、异丁基或三氟甲基。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐，其中，R₅选自环丙基；R₆选自取代或未被取代的烷基、取代或未被取代的芳基、取代或未被取代的杂芳基、取代或未被取代的环烷基；

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₆选自苯基、C₁～C₆的烷基或三氟甲基。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，其中，R₆选自苯基、甲基、乙基、异丁基或三氟甲基。

进一步地，所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，所述化合物为如下化合物之一：

本发明还提供了所述化合物的制备方法，包括按照下述路线进行的步骤：

或者，包括按照下述路线进行的步骤：

本发明还提供了所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物在制备URAT1抑制剂类药物中的用途。

进一步地，所述是药物是预防和/或治疗痛风、复发性痛风发作、痛风性关节炎、高尿酸血症、高血压、心血管疾病、冠心病、莱-萘二氏综合症、凯-赛二氏综合症、肾病、肾结石、肾衰竭、关节炎症、关节炎、尿石症、铅中毒、甲状旁腺功能亢进、银屑病、结节病或次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺乏症的药物，优选预防和/或治疗痛风或高尿酸血症的药物。

本发明还提供了一种药物组合物，它是以权利要所述的化合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。

本发明还提供了所述的药物组合物在制备URAT1抑制剂类药物中的用途。

进一步地，所述药物是预防和/或治疗痛风、复发性痛风发作、痛风性关节炎、高尿酸血症、高血压、心血管疾病、冠心病、莱-萘二氏综合症、凯-赛二氏综合症、肾病、肾结石、肾衰竭、关节炎症、关节炎、尿石症、铅中毒、甲状旁腺功能亢进、银屑病、结节病或次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺乏症的药物，优选预防和/或治疗痛风或高尿酸血症的药物。

本发明提供的各种化合物及其盐类、水合物、或其光学异构体、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物，是一种选择性尿酸再吸收抑制剂，可以通过促进尿酸从体内排泄并减少血清尿酸来治疗高尿酸血症和痛风。

此外，对于本发明的化合物而言，其同位素取代物，如氘代、氚代、¹⁴C代以及¹⁵N代也具有相同的活性和用途。例如，同位素取代物可以将氢置换为氘和/或氚。同样的，天然丰度的¹²C可被¹³C或¹⁴C置换、天然丰度的¹⁴N可被¹⁵N置换，天然丰度的¹⁶O被¹⁷O或¹⁸O置换等或任何组合。

本发明中，所述C₁～C₄的烷基是指C₁、C₂、C₃、C₄的烷基，即具有1～4个碳原子的直链或支链的烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基等等。

本发明中，“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。

本发明中，“盐”是将化合物或其立体异构体，与无机和/或有机酸和碱形成的酸式和/或碱式盐，也包括两性离子盐(内盐)，还包括季铵盐，例如烷基铵盐。这些盐可以是在化合物的最后分离和纯化中直接得到。也可以是通过将化合物，或其立体异构体，与一定数量的酸或碱适当(例如等当量)进行混合而得到。这些盐可能在溶液中形成沉淀而以过滤方法收集，或在溶剂蒸发后回收而得到，或在水介质中反应后冷冻干燥制得。本发明中所述盐可以是化合物的盐酸盐、硫酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、氢溴酸盐、氢氟酸盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、草酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐，也可以是化合物的碱金属离子盐如钠盐，钾盐。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

具体实施方式

反应通式如下：

实施例1

4–氨基-6-溴喹啉(中间体7)的合成

向50mL的反应瓶中加入中间体6(242mg，1mmol)，乙酰胺(5g)，碳酸钾(276mg，2mmol)然后加热到180℃反应5个小时，加入水(50mL)，用乙酸乙酯萃取三次(3×50ml)，有机层合并，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸后过柱得中间体7(110mg)，收率50％。质谱：223.0,225.0(M+H⁺)。

4-(6-溴喹啉)-氮甲磺酰胺(43)的合成

向50mL的反应瓶中加入中间体7(222mg，1mmol)，三乙胺(207mg，2.1mmol)和二氯甲烷(8mL)，搅拌下慢慢滴加甲磺酰氯(115mg，1mmol)。反应液搅拌4个小时，加入水(10mL)，分层，用二氯甲烷萃取三次(3×3ml)将合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩溶剂，残留物通过反相柱纯化得到化合物43(30mg)，收率10％。质谱：301.0,303.0(M+H⁺)。

中间体8的合成：

向50mL的反应瓶中加入中间体6(241mg，1mmol)，环丙基苯硼酸(172mg，2mmol)，碳酸钠(212mg，2mmol)，双二苯基膦二茂铁二氯化钯(37mg，0.05mmol)，二氧六环(6mL)，水(3mL)，然后氮气置换，在氮气保护条件下加热到110℃反应2个小时，反应完毕后，加入水(50mL)，用乙酸乙酯萃取三次(3×50ml)，有机层合并，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸后过柱得中间体8(190mg)，收率50％。质谱：204.0(M+H⁺)。

中间体9和产物79按照上述反应中类似方法，用与之对应的试剂去合成。通过这种方法，所得化合物种类及MS如下：

产物43 4-(6-溴喹啉)-4-氮甲磺酰胺:质谱：301.0,303.0(M+H⁺)。

产物44 4-(6-溴喹啉)-4-氮乙磺酰胺:质谱：315.0,317.0(M+H⁺)。

产物45 4-(6-溴喹啉)-4-氮异丁基磺酰胺:质谱：343.0,345.0(M+H⁺)。

产物43 4-(6-溴喹啉)-4-氮三氟甲磺酰胺:质谱：355.0,357.0(M+H⁺)。

产物47 4-(6-溴喹啉)-4-氮苯磺酰胺:质谱：363.0,365.0(M+H⁺)。

产物48 4-(6-溴喹啉)-4-丁二酰亚胺:质谱：305.0,307.0(M+H⁺)。

产物49 4-(6-溴喹啉)-4-氮琥珀酰胺:质谱：323.0,325.0(M+H⁺)。

产物50 4-(6-(4-甲氧基-苯基)-喹啉)-4-氮甲磺酰胺:质谱：329.0(M+H⁺)。

产物51 4-(6-(4-甲氧基-苯基)-喹啉)-4-氮乙磺酰胺:质谱：343.0(M+H⁺)。

产物52 4-(6-(4-甲氧基-苯基)-喹啉)-4-氮异丙磺酰胺:质谱：371.0(M+H⁺)。

产物53 4-(6-(4-甲氧基-苯基)-喹啉)-4-氮三氟甲磺酰胺:质谱：383.0(M+H⁺)。

产物54 4-(6-(4-氟-苯基)-喹啉)-4-氮甲磺酰胺:质谱：317.0(M+H⁺)。

产物55 4-(6-(4-氟-苯基)-喹啉)-4-氮乙磺酰胺:质谱：331.0(M+H⁺)。

产物56 4-(6-(4-氟-苯基)-喹啉)-4-氮异丙磺酰胺:质谱：359.0(M+H⁺)。

产物57 4-(6-(4-氟-苯基)-喹啉)-4-氮三氟甲磺酰胺:质谱：371.0(M+H⁺)。

产物58 4-(6-(3-甲氧基-苯基)-喹啉)-4-氮甲磺酰胺:质谱：329.0(M+H⁺)。

产物59 4-(6-(3-甲氧基-苯基)-喹啉)-4-氮乙磺酰胺:质谱：343.0(M+H⁺)。

产物60 4-(6-(3-甲氧基-苯基)-喹啉)-4-氮异丙磺酰胺:质谱：371.0(M+H⁺)。

产物61 4-(6-(3-甲氧基-苯基)-喹啉)-4-氮三氟甲磺酰胺:质谱：383.0(M+H⁺)。

产物58 4-(6-(3-氟-苯基)-喹啉)-4-氮甲磺酰胺:质谱：317.0(M+H⁺)。

产物63 4-(6-(3-氟-苯基)-喹啉)-4-氮乙磺酰胺:质谱：331.0(M+H⁺)。

产物64 4-(6-(3-氟-苯基)-喹啉)-4-氮异丙磺酰胺:质谱：359.0(M+H⁺)。

产物65 4-(6-(3-氟-苯基)-喹啉)-4-氮三氟甲磺酰胺:质谱：371.0(M+H⁺)。

产物66 4-(6-(3-氟-苯基)-喹啉)-4-氮苯磺酰胺:质谱：379.0(M+H⁺)。

产物67 4-(6-(3-三氟甲基-苯基)-喹啉)-4-氮甲磺酰胺:质谱：367.0(M+H⁺)。

产物68 4-(6-(3-三氟甲基-苯基)-喹啉)-4-氮乙磺酰胺:质谱：381.0(M+H⁺)。

产物69 4-(6-(3-三氟甲基-苯基)-喹啉)-4-氮异丙磺酰胺:质谱：409.0(M+H⁺)。

产物70 4-(6-(3-三氟甲基-苯基)-喹啉)-4-氮三氟甲磺酰胺:质谱：421.0(M+H⁺)。

产物71 4-(6-(3-三氟甲基-苯基)-喹啉)-4-氮苯磺酰胺:质谱：429.0(M+H⁺)。

产物72 4-(6-(4-三氟甲基-苯基)-喹啉)-4-氮甲磺酰胺:质谱：367.0(M+H⁺)。

产物73 4-(6-(4-三氟甲基-苯基)-喹啉)-4-氮乙磺酰胺:质谱：381.0(M+H⁺)。

产物74 4-(6-(4-三氟甲基-苯基)-喹啉)-4-氮异丙磺酰胺:质谱：409.0(M+H⁺)。

产物75 4-(6-(4-三氟甲基-苯基)-喹啉)-4-氮苯磺酰胺:质谱：429.0(M+H⁺)。

产物76 4-(6-环丙基喹啉)-4-氮苯磺酰胺:质谱：325.0(M+H⁺)。

产物78 4-(6-环丙基喹啉-4-氨基)-氧代丁酰胺:质谱：285.0(M+H⁺)。

产物79 4-(6-环丙基喹啉)-4-氮甲磺酰胺:质谱：263.0(M+H⁺)。

产物80 4-(6-环丙基喹啉)-4-氮乙磺酰胺:质谱：277.0(M+H⁺)。

产物81 4-(6-环丙基喹啉)-4-氮异丙磺酰胺:质谱：305.0(M+H⁺)。

产物82 4-(6-环丙基喹啉)-4-氮三氟甲磺酰胺:质谱：317.0(M+H⁺)。

实施例2本发明化合物的生物学测定

测试例：本发明化合物对URAT1抑制活性的测定

实验材料：

FBS(Invitrogen,Cat.No.10099141)

Trypsin(Invitrogen,Cat.No.25200056)

DPBS(Invitrogen,Cat.No.14190250)

DMEM(Invitrogen,Cat.No.10564)

Penicillin-Streptomycin(Invitrogen,Cat.No.15070-063)

TransIT-293Transfection Reagent(MIRUS BIO,Cat.No.MIR2706)

I Reduced Serum Medium(Invitrogen,Cat.No.31985-070)

URAT1plasmid(Genecopoeia,Cat.No.EX-T4563-M03)

Uric acid[8-14C](ARC,Cat.No.ARC0513-250UCI)

Ultima Gold^TM XR(PerkinElmer,Cat.No.6013111)

Benzbromarone(百灵威科技,Cat.No.3562-84-3)

D-Gluconic acid sodium salt(阿拉丁,Cat.No.527-07-1)

Potassium D-gluconate(阿拉丁,Cat.No.299-27-4)

Calcium gluconate(阿拉丁,Cat.No.299-28-5)

DMSO(Sigma,Cat.No.D2650)

Tube,15ml(Greiner,Cat.No.07030115)

Tube,50ml(BD Falcon,Cat.No.352098)

Poly-D-lysine 96-well microplates(BD,Cat.No.356461)

Isoplate-96Microplate(PERKIN ELMER,Cat.No.6005040)

实验方法：

缓冲液配制

细胞培养：

1.将稳定表达hURAT1的HEK-293T细胞培养于10％FBS和1％P/S的DMEM培养基中，在5％二氧化碳的37度培养箱中培养过夜。

2.将培养基去掉后用PBS清洗一次，然后加入胰酶消化2分钟，待细胞于培养皿分离后加入10毫升培养基终止消化。

3.把细胞放入离心机1000转离心2分钟，加入新的10毫升培养基来重悬细胞，并计算细胞个数。将细胞个数调整为4x10⁵个细胞每毫升。

4.将上述计数好的细胞接种到96孔板中，每孔100微升。

5.将接种好细胞的96孔板放置于37度细胞培养箱中培养过夜。

同位素碳14标记的尿酸吸收实验：

1.在15毫升离心管中加入5毫升Cl-free HBSS缓冲液，然后加入碳14标记的尿酸，使尿酸的浓度达到2uCi/ml.

2.将之前培养过夜的96孔板中的培养基吸干净，加入100毫升预热过的Cl-free HBSS缓冲液清洗三次。

3.将清洗好后的96孔板中的所以缓冲液吸干净。

4.清洗好的96孔板上每孔中加入50微升含有碳14标记的尿酸的Cl-free HBSS缓冲液，然后加入需要测试的化合物的DMSO溶液。

5.把上述96孔板在室温下静置5分钟后，将里面所有的液体吸干。

6.加入100毫升预冷的Cl-free HBSS缓冲液清洗三次。

7.把板里残留的液体吸干净后，于每孔中加入50微升的细胞裂解液，在混匀器上以每分钟600转的速度振荡10分钟。

8.加入50微升Ultima Gold^TM XR scitillation cocktail闪烁液后，继续振荡10分钟。将振荡好的板用封板膜贴好后，于MicroBeta Trilux上读数。

9.将测试化合物溶解在DMSO中，然后将相同浓度的DMSO加入不包含测试化合物的HEK293/hURAT1细胞孔中。将各测试浓度下的细胞的尿酸摄取表示为相对DMSO对照的平均百分比抑制率。将对包含DMSO的孔得到的放射性值视为细胞的100％摄取。化合物的IC50值可通过不同浓度下的抑制率计算得出。

本发明化合物对hURAT1的活性抑制的IC50(nM)，结果如表1所示。其中，参照化合物1按照专利WO 2014/183555 A1中所述方法合成。参照化合物2按照专利WO 2011/159839 A2中所述方法合成。

表1

参比化合物1和2是已知的高活性尿酸转运体URAT1抑制剂。化合物46比参比化合物1和2展示了更好的尿酸转运体抑制活性。

本发明提供的各种化合物及其盐类、水合物或溶剂合物，是一种比本领域代表化合物生物活性更高的选择性尿酸再吸收抑制剂，可以通过促进尿酸从体内排泄并减少血清尿酸来治疗或预防以尿酸水平异常为特征的病症。其中所述病症选自痛风、复发性痛风发作、高尿酸血症、心血管疾病、莱-萘二氏综合症、凯-赛二氏综合症、肾病、关节炎、尿石症、铅中毒、甲状旁腺功能亢进、银屑病、结节病或次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺乏症，具有在动物体内和人体内具有降低尿酸的效果。