石蒜科植物忽地笑细胞色素P450还原酶1及其编码基因与应用的制作方法

文档序号:12056344阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种细胞色素P450还原酶,其特征在于,所述的细胞色素P450还原酶选自:

(a)氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的蛋白质;或

(b)将SEQ ID NO:1氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的,且具有细胞色素P450还原酶活性的由(a)衍生的蛋白质;或

(c)与SEQ ID NO:1氨基酸序列有至少85%序列相同性,且具有细胞色素P450还原酶活性的由(a)衍生的蛋白质。

2.编码权利要求1所述的细胞色素P450还原酶的多核苷酸。

3.如权利要求2所述的多核苷酸,其特征在于,该多核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

4.一种载体,其特征在于,它含有权利要求2或3所述的多核苷酸。

5.权利要求4所述的载体的用途,其特征在于:

(a)表达权利要求1所述的细胞色素P450还原酶;或

(b)抑制权利要求1所述的细胞色素P450还原酶的表达;或

(c)抑制权利要求2或3所述的多核苷酸的表达。

6.一种宿主细胞,其特征在于,它含有权利要求4所述的载体或基因组中整合有权利要求2或3所述的多核苷酸。

7.权利要求1所述的细胞色素P450还原酶的用途,其特征在于,用于传递电子给细胞色素P450酶并协助细胞色素P450酶对底物进行氧化修饰合成产物。

8.如权利要求7所述的用途,其特征在于,所述的细胞色素P450酶是CYP73A,所述的底物是反式-肉桂酸,所述的产物是对-香豆酸。

9.一种表达构建物,其特征在于,所述表达构建物包括以下酶的基因表达盒:

(a)权利要求1所述的细胞色素P450还原酶;和

(b)细胞色素P450酶。

10.如权利要求9所述的表达构建物,其特征在于,还包括:反式-肉桂酸-4-羟化酶的基因表达盒。

11.一种宿主细胞,其特征在于,所述的宿主细胞中包括权利要求9或10所述的表达构建物。

12.如权利要求11所述的宿主细胞,其特征在于,所述的宿主细胞是原核细胞或真核细胞,常用的原核宿主细胞包括大肠杆菌、枯草杆菌、运动假单胞菌和乳酸菌等,常用的真核宿主细胞包括真菌细胞、植物细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞等,所述的真菌细胞包括酵母细胞。较佳地,所述的宿主细胞是包含有细胞色素P450酶的底物的细胞;更佳地,所述的宿主细胞是内源存在反式-肉桂酸或其前体的细胞。

13.权利要求9或10所述的表达构建物或权利要求11或12所述的宿主细胞的用途,其特征在于,用于生产对-香豆酸。

14.一种生产对-香豆酸的方法,其特征在于,所述方法包括:利用权利要求1所述的细胞色素P450还原酶作为氧化还原分子伴侣,协助细胞色素P450酶催化反式-肉桂酸合成对-香豆酸。

15.如权利要求14所述的方法,其特征在于,所述方法包括:以权利要求10所述的表达构建物转化宿主细胞,利用转化的宿主细胞催化反式-肉桂酸合成对-香豆酸。

16.如权利要求14所述的方法,其特征在于,所述方法包括:以权利要求10所述的表达构建物转化宿主细胞,培养转化的宿主细胞,合成对-香豆酸;所述的宿主细胞是原核细胞或真核细胞;常用的原核宿主细胞包括大肠杆菌、枯草杆菌、运动假单胞菌和乳酸菌等;常用的真核宿主细胞包括真菌细胞、植物细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞等;所述的真菌细胞包括酵母细胞。较佳地,该宿主细胞是包含有细胞色素P450酶的底物的细胞;更佳地,该宿主细胞是内源存在反式-肉桂酸或其前体的细胞。

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