本发明涉及医药
技术领域：
，特别是制备抗肿瘤药物
技术领域：
，具体涉及喹唑啉酮类抗肿瘤衍生物及其制备方法与应用。
背景技术：
：pi3k(phosphatidylinositol3-kinases，磷脂酰肌醇3-激酶)为类脂激酶，通过催化磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(pip2)磷酸化为磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸(pip3)，继而激活下游的蛋白激酶b(akt)，激活后的akt将信号传递给数种下游底物，从而控制诸如转录、翻译、细胞周期、凋亡等生物学效应。pi3k根据结构和磷酸化底物的不同分为ⅰ、ⅱ、ⅲ三种类型。人们通常把i型pi3k称为pi3k。i型pi3k根据它们的催化亚单位等的不同又分为pi3kα、pi3kβ、pi3kδ和pi3kγ四种亚型。pi3k位于几个重要信号转导通路的中心位置，在肿瘤中pi3k通路的许多成员发生突变，表明pi3k在肿瘤发生中起到很重要的作用，它已成为当前最具潜力的肿瘤治疗靶点之一。很多pi3k抑制剂由于毒副作用大、引起肿瘤耐药而不能成为药物，因此研发新型毒副作用小，效果好的抗肿瘤药物非常关键和必要。技术实现要素：本发明的目的是提供喹唑啉酮类衍生物及其制备方法及用途。该类化合物有很好的抗肿瘤活性，可以作为新型抗肿瘤药物，用于预防或者治疗肿瘤及其肿瘤并发症。本发明提供喹唑啉酮类衍生物及其盐，其结构通式如式(i)所示：其中，r1为h，c1-c6烷基，c1-c6烷氧基，卤素；r2为c1-c6烷基，c1-c6烷氧基，取代或未取代的6-10元芳基或5-10元杂环基，所述的杂环基含有1-3个n，o或s的杂原子；所述取代基为：c1-c6烷基，c1-c6烷氧基，卤素；r3为c1-c6烷氧基，c1-c6烷基氨基，5-10元杂环基，所述杂环基含有1-3个n、o或s的杂原子；m取值为3-4；n取值为0-1。本发明优选式i所述的衍生物及其盐：其中，r1为h，c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，卤素；r2为c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，取代或未取代的苯基；所述取代基为：c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，卤素；r3为c1-c4烷氧基，c1-c4烷基氨基，5-6元杂环基，所述杂环基含有1-3个n、o或s的杂原子；m取值为3-4；n取值为0-1。本发明优选式i所述的衍生物及其盐：其中，r1为h，c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，氟，氯，溴；r2为c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，取代或未取代的苯基；所述取代基为：c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，氟，氯，溴；r3为c1-c4烷氧基，c1-c4烷基氨基，5-6元杂环基，所述杂环基含有1-3个n、o或s的杂原子；m取值为3-4；n取值为0-1。本发明优选式i所述的衍生物及其盐：其中，r1为h、甲氧基、乙氧基、氯、氟、溴；r2为甲基、乙基、丁基、未取代或卤素取代的苯基；r3为甲氧基、乙氧基、吗啉基、哌嗪基、咪唑基、吡唑基、2-氧代吡啶基、二甲基胺基、二乙基胺基；m取值为3-4；n取值为0-1。本发明优选式i所述的衍生物及其盐：其中，r1为甲氧基、氯；r2为甲基、氟取代苯基；r3为吗啉基、咪唑基、吡唑基、2-氧代吡啶基；m取值为3-4；n取值为0-1。本发明优选式i所述的衍生物及其盐：其中，r1为甲氧基、氯；r2为甲基、氟取代苯基；当m为3，n为0时，r3为吗啉基、咪唑基、吡唑基、2-氧代吡啶基。本发明优选式i所述的衍生物及其盐：其中，r1为甲氧基、氯；r2为甲基、氟取代苯基；当m为3，n为1时，r3为吗啉基。本发明优选式i所述的衍生物及其盐：其中，r1为甲氧基、氯；r2为甲基、氟取代苯基；当m为4，n为1时，r3为吗啉基。本发明提供了喹唑啉酮类衍生物，同时提供了该衍生物的制备方法，该方法合成步骤简便且易于操作。该类化合物具有非常好的抗肿瘤活性，在制备抗肿瘤药物领域，具有重要的实用价值和应用前景。本发明提供的制备式i所述化合物的方法，包括如下步骤：使式ii化合物与式iii发生缩合反应，得到式iv所示化合物。1)使式iv所示化合物与式v偶联，得到式i所示化合物r1、r2、r3、m、n如权利要求书所述。具体实施方式下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均为市售。实施例1n-(5-(3-(3-吗啉基丙基)-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-6-基)-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟苯磺酰胺(化合物1)步骤1)6-溴-4(3h)-喹唑啉酮的合成于100ml圆底烧瓶中，加入2-氨基-5-溴苯甲酸2.16g(10mmol)，醋酸甲脒1.04g(10mmol)，异丙醇30ml，100℃搅拌8小时，冷却，析出白色固体，抽滤，干燥得6-溴-4(3h)-喹唑啉酮2.1g，收率94％。结构确证数据如下：mp84-86℃.esi-ms:m/z225.0[m+h]+.1hnmr(400mhz,dmso)δ12.17(s,1h),8.20(d,j＝2.2hz,1h),8.15(s,1h),7.96(dd,j＝8.7,2.3hz,1h),7.62(d,j＝8.7hz,1h).步骤2)6-溴-3-(3-吗啉基丙基)-4(3h)-喹唑啉酮的合成于100ml圆底烧瓶中，加入6-溴-4(3h)-喹唑啉酮0.45g(2mmol)，4-(3-氯丙基)吗啉0.33g(2mmol)，k2co30.56g(4mmol)，20mldmf，60℃搅拌12小时。之后将dmf浓缩，采用硅胶柱色谱分离，流动相采用二氯甲烷和甲醇系统柱层析，得到目标化合物0.64g，收率92％。结构确证数据如下：mp84-86℃.esi-ms:m/z352.2[m+h]+.1hnmr(400mhz,dmso)δ8.44(s,1h),8.23(d,j＝2.3hz,1h),7.97(dd,j＝8.7,2.3hz,1h),7.64(d,j＝8.7hz,1h),4.03(t,j＝6.8hz,2h),3.45(s,4h),2.32(t,j＝6.6hz,2h),2.27(s,4h),1.87(p,j＝6.6hz,2h).步骤3)2,4-二氟-n-(2-甲氧基-5-(3-(3-吗啉基丙基)-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-6-基)吡啶-3-基)苯磺酰胺于100ml圆底烧瓶中，加入6-溴-3-(3-吗啉基丙基)-4(3h)-喹唑啉酮0.35g(1mmol)，2,4-二氟-n-(2-甲氧基-5-(4,4,5,5-4甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-3-基)苯磺酰胺0.43g(1mmol)，双三苯基磷二氯化钯0.035g(0.5mmol)，10mldmf，n2保护下，90℃搅拌4小时，之后将dmf浓缩，用乙酸乙酯萃取100ml×3，采用硅胶柱色谱分离，流动相采用二氯甲烷和甲醇系统柱层析，得到目标化合物0.44g，收率77.8％。结构确证数据如下：mp179-181℃.hrms:m/z571.1905[m]+.1hnmr(400mhz,dmso)δ10.37(s,1h),8.55(s,1h),8.52–8.37(m,2h),8.09(d,j＝2.1hz,1h),8.06(d,j＝8.7hz,1h),7.83–7.68(m,2h),7.64–7.50(m,1h),7.20(dd,j＝11.9,5.2hz,1h),3.63(s,3h),3.62–3.53(m,6h),2.48–2.32(m,6h),1.86(p,j＝6.8hz,2h).13cnmr(100mhz,dmso)δ165.4(dd,j＝11.8,252.2hz),159.9,159.8(dd,j＝13.3,255.9hz),158.3,155.8,148.9,142.9,135.2,133.8,132.3(d,j＝10.1hz),131.1,129.4,128.8,125.8(dd,j＝14.5,3.1hz),120.5(2c),115.7,112.4(dd,j＝22.0,3.0hz),106.2(t,j＝25.7hz),66.5,56.4,53.8,53.7,26.8,25.8.实施例2n-(5-(3-(3-吡唑基丙基)-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-6-基)-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟苯磺酰胺(化合物2)合成方法同化合物1结构确证数据如下：mp182-184℃.hrms:m/z553.1464[m+h]+.1hnmr(400mhz,dmso)δ10.37(s,1h),8.43(d,j＝2.2hz,1h),8.39(s,1h),8.28(d,j＝2.0hz,1h),8.10(dd,j＝8.5,2.1hz,1h),7.97(d,j＝2.2hz,1h),7.84–7.74(m,3h),7.64–7.54(m,1h),7.45(d,j＝1.3hz,1h),7.23(td,j＝8.5,2.0hz,1h),6.24(t,j＝1.9hz,1h),4.22(t,j＝6.9hz,2h),4.03(t,j＝6.9hz,2h),3.68(s,3h),2.26(p,j＝6.9hz,2h).13cnmr(100mhz,dmso)δ165.6(dd,j＝11.1,252.3hz),160.7,159.8(dd,j＝13.4,256.0hz),158.0,148.7,147.8,142.8,139.1,135.2,134.2,132.8,132.3(d,j＝11.4hz),130.3,128.9,128.6,125.5(dd,j＝14.4,3.5hz),123.5,122.5,120.3,112.4(dd,j＝21.9,3.3hz),106.3(d,j＝26.2hz),105.6,54.0,49.0,44.4,30.0.实施例3n-(5-(3-(3-咪唑基丙基)-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-6-基)-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟苯磺酰胺(化合物3)合成方法同化合物1结构确证数据如下：mp191-193℃.hrms:m/z553.1474[m+h]+.1hnmr(400mhz,dmso)δ8.40(d,j＝2.3hz,1h),8.38(s,1h),8.28(d,j＝2.1hz,1h),8.10(dd,j＝8.5,2.2hz,1h),7.95(d,j＝2.3hz,1h),7.83–7.71(m,3h),7.61–7.52(m,1h),7.26(s,1h),7.22(td,j＝8.6,2.2hz,1h),6.93(s,1h),4.08(t,j＝7.1hz,2h),4.02(t,j＝6.9hz,2h),3.68(s,3h),2.30–2.13(m,2h).13cnmr(100mhz,dmso)δ165.4(dd,j＝10.9,251.7hz),160.7,159.8(d,j＝10.5,253.5hz),158.0,148.5,147.8,142.3,137.6,135.4,133.6,132.8,132.3(d,j＝11.2hz),128.9,128.6,128.5,125.7(dd,j＝14.6,2.9hz),123.5,122.5,121.0,119.8,112.3(dd,j＝21.9,3.3hz),106.3(t,j＝26.5hz),53.9,44.2,44.1,30.6.实施例4n-(5-(3-(3-(2-氧代-吡啶基)丙基)-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-6-基)-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟苯磺酰胺(化合物4)合成方法同化合物1结构确证数据如下：mp118-120℃.hrms:m/z580.1477[m+h]+.1hnmr(400mhz,dmso)δ10.39(s,1h),8.46(s,1h),8.42(d,j＝2.2hz,1h),8.28(d,j＝1.9hz,1h),8.10(dd,j＝8.5,2.1hz,1h),7.96(d,j＝2.2hz,1h),7.83–7.75(m,2h),7.73(dd,j＝6.7,1.5hz,1h),7.63–7.54(m,1h),7.40(ddd,j＝8.8,6.6,1.9hz,1h),7.22(td,j＝8.6,1.9hz,1h),6.38(d,j＝9.0hz,1h),6.22(t,j＝6.2hz,1h),4.06(t,j＝6.8hz,2h),3.98(t,j＝7.1hz,2h),3.68(s,3h),2.19–2.05(m,2h).13cnmr(100mhz,dmso)δ165.6(dd,j＝11.8,252.6hz),162.8,161.9,160.6,159.8(d,j＝13.9,252.3hz),158.0,148.6,147.8,142.7,140.3,139.4,135.2,134.1,132.7,132.3(d,j＝11.0hz),128.9,128.6,125.5(dd,j＝3.7,14.1hz),123.5,122.5,120.3,120.1,112.3(dd,j＝3.5,22.2hz),106.3(t,j＝26.1hz),105.9,53.9,46.5,44.3,29.1.实施例5n-(5-(3-(4-吗啉基-4-氧代正丁基)-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-6-基)-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟苯磺酰胺(化合物5)合成方法同化合物1结构确证数据如下：mp113-115℃.hrms:m/z600.1741[m+h]+.1hnmr(400mhz,dmso)δ10.36(s,1h),8.43(d,j＝2.3hz,1h),8.39(s,1h),8.28(d,j＝2.1hz,1h),8.10(dd,j＝8.5,2.2hz,1h),7.96(d,j＝2.3hz,1h),7.83–7.73(m,2h),7.64–7.54(m,1h),7.22(td,j＝8.4,2.0hz,1h),4.04(t,j＝6.8hz,2h),3.68(s,3h),3.60–3.53(m,2h),3.53–3.48(m,2h),3.41(dd,j＝11.4,4.9hz,4h),2.41(t,j＝7.2hz,2h),1.98(p,j＝7.0hz,2h).13cnmr(100mhz,dmso)δ170.4,165.6(dd,j＝11.5,252.4hz),160.6,159.8(dd,j＝13.6,256.3hz),158.0,148.7,147.8,142.8,135.2,134.1,132.7,132.3(d,j＝11.0hz),128.9,128.6,125.4(dd,j＝14.6,3.4hz),123.6,122.5,120.3,112.3(dd,j＝22.3,3.2hz),106.3(t,j＝25.8hz),55.4,53.9,46.3,45.8,41.9,29.5.实施例6n-(5-(3-(5-吗啉基-5-氧代正丁基)-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-6-基)-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟苯磺酰胺(化合物6)合成方法同化合物1结构确证数据如下：mp136-138℃.hrms:m/z614.1896[m+h]+.1hnmr(400mhz,dmso)δ10.36(s,1h),8.44(s,1h),8.43(d,j＝2.2hz,1h),8.28(d,j＝1.8hz,1h),8.10(dd,j＝8.5,2.0hz,1h),7.97(d,j＝2.1hz,1h),7.85–7.73(m,2h),7.65–7.52(m,1h),7.31–7.15(m,1h),4.03(t,j＝6.8hz,2h),3.68(s,3h),3.52(m,4h),3.42(m,4h),2.36(t,j＝7.3hz,2h),1.81–1.66(m,2h),1.54(dd,j＝14.7,7.5hz,2h).13cnmr(100mhz,dmso)δ171.0,165.6(dd,j＝12.5,252.6hz),160.5,159.8(dd,j＝14.6,255.9hz),158.0,148.7,147.8,142.8,135.3,134.1,132.8,132.3(d,j＝10.6hz),128.9,128.6,125.4(dd,j＝14.4,3.8hz),123.5,122.4,120.3,112.3(dd,j＝22.1,3.3hz),106.2(t,j＝26.0hz),53.9,46.3,45.8,41.9,31.9,28.8,22.1.活性测试实施例1体外抗肿瘤实验取对数生长期的肿瘤细胞，吸除旧培养基，pbs洗一遍吸除干净，1ml胰酶消化1min左右(根据细胞瓶大小适当调整)，加入到提前准备好的3-5ml的新鲜培养基中，吹打均匀后，取少量于血球计数板上计数，以1×104个/ml密度接种于96孔板中，5％co2，37℃孵育过夜(12h-16h)。吸去旧培养基，每孔加入含有各浓度药物的新鲜培养基100μl，使作用终浓度为100、50、25、10、5、2.5、1nm，每种样品设五个复孔，同时设阴性对照和阳性对照，5％co2，37℃孵育48小时。每孔加入10μlmtt溶液(5mg/ml，即0.5％mtt)，继续培养4h。终止培养，2000rpm，4℃，离心5分钟，小心吸去孔内培养液。每孔加入100μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。用酶标仪于495nm处测量od值，按如下公式计算不同浓度下的细胞增殖抑制率(inhibitionrate，ir％)：ir％＝(对照od－样品od)/(对照od-空白od)×100％通过计算获得化合物的ic50(单位μm)值活性测试实施例2激酶抑制活性实验1)按照布置每孔加入1μl10x化合物(待测化合物或各种激酶的阳性对照物)溶液，全抑制对照及零抑制对照孔加入1μl反应液。2)按照布置每孔加入4μl2.5x激酶溶液。全抑制对照孔加入4μl反应液。3)将检测板1000rpm离心以混匀。4)将4xatp溶液与4x底物溶液等体积混合，得到2xatp-底物溶液。5)按照布置每孔加入5μl上述2xatp-底物溶液。6)将检测板1000rpm离心以混匀。7)将检测板置于30℃反应1小时。8)每孔加入10μlkinasegloplus或adp-glo反应试剂，27℃放置20分钟。9)每孔加入20μlkinasedetection试剂，27℃放置30分钟。10)envision读取荧光数值。prism5.0分析原始数据。计算所测化合物的激酶抑制率。激酶抑制系率＝(化合物孔荧光值-零对照孔荧光值)/(全抑制对照孔荧光值-零对照孔荧光值)×100％将细胞活性表现最好的化合物1，测试了pi3k4种亚型的ic50值，单位nm化合物pi3kαpi3kβpi3kγpi3kδ化合物18.523782.8225.9活性测试实施例3对正常细胞的毒性试验采用huvec(人脐静脉内皮细胞)，测试了化合物1的对该正常细胞的ic50为8.91μm，与肿瘤细胞相比，对正常细胞的毒性降低了89倍。通过细胞和激酶测试实验结果表明，本发明的化合物具有很好的抗肿瘤活性，特别是该化合物在细胞水平和分子水平均达到了纳摩尔，并且毒性较小，具有很好的开发前景。当前第1页12