本发明涉及一种海带多糖阳离子阳离子衍生物及其制备方法，以及在延长食管癌患者生存期方面的应用。
背景技术：
多糖一类由单糖聚合而成的多聚糖，是由醛糖或酮糖通过苷链连接而成；海带多糖，狭义上讲，就是指昆布多糖。由于人们逐渐淡化"海带"与"昆布"的区别，因此叫"昆布多糖"也叫"海带多糖"。广义上讲，是指从海带中提纯的多糖成分，包括海带寡糖、褐藻糖胶、海带淀粉等。肿瘤细胞由于基因突变，能够在人体内无限繁殖。海带多糖中的褐藻糖胶，可以通过激活巨噬细胞，产生细胞毒素，抑制肿瘤细胞增殖而杀死肿瘤细胞;另外，海带多糖也可以通过抑制肿瘤血管生成而抑制肿瘤生长，也可以直接抑制肿瘤细胞生长。研究表明，海带多糖中的褐藻糖胶，可以使癌细胞的基质和同质黏附性下降，细胞分离率增强，细胞穿过基底膜能力减弱。也就是说，海带多糖可使细胞的恶性表型发生变化，使其转移能力受到抑制。除此之外，海带多糖可以增加癌细胞对化疗药物的敏感性。
近年来很多研究发现通过影响肿瘤细胞表面电荷可以改变肿瘤的生物学行为。肿瘤细胞膜电荷是否可以作为一个潜在的抗肿瘤药物作用靶标，是肿瘤研究工作者亟待探究思考的问题。
技术实现要素：
本发明的目的正是为了提供一种海带多糖阳离子衍生物及其制备方法，以及在延长食管癌患者生存期方面的应用。
本发明的目的可通过下述技术措施来实现：
本发明的海带多糖阳离子衍生物是由以下重量百分比（或份数）的原料制备而成：它是由以下重量份数的原料制备而成：海带多糖粉末90-110份，醚化剂3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵2-6份，水120-140份，氢氧化钠1-3份。
上述海带多糖阳离子衍生物的制备方法包括以下步骤：首先称取原料海带多糖粉末、醚化剂3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵、水、氢氧化钠；然后将上述原料混合并置于50℃的水浴中搅拌反应0.5小时；反应结束后，用pH 计测量反应后溶液的 pH值，同时用 1 mol/L的 HCl中和至 pH6. 5左右，最后过滤，干燥，即可得成品；具体反应式为：
上述海带多糖阳离子衍生物可作为抑制食管癌细胞增殖的食品，也可作为辅助化疗的保健品，用于延长食管癌患者的生存期和减轻化疗副作用。
本发明的有益效果如下：
本发明的海带多糖阳离子衍生物是一种阳离子化合物，可以抑制食管癌细胞增殖，延长食管癌患者的生存期，最大的好处是无化疗副作用，不会抑制骨髓细胞，不会造成患者脱发及肝肾损伤。
具体实施方式
实施例1
本发明的海带多糖阳离子衍生物是由以下重量百分比的原料制备而成：海带多糖粉末108份，醚化剂3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵4份，水138份，氢氧化钠2份。
上述海带多糖阳离子衍生物的制备方法包括以下步骤：首先称取原料海带多糖粉末108份，醚化剂3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵4份，水138份，氢氧化钠2份；然后将上述原料混合并置于50℃的水浴中搅拌反应0.5小时；反应结束后，用pH 计测量反应后溶液的 pH值，同时用 1 mol/L的 HCl中和至 pH6. 5左右，最后过滤，干燥，即可得成品。
上述海带多糖阳离子衍生物是一种阳离子化合物，具有抑制食管癌细胞增殖的效果，具体实验过程是：
1、细胞培养
EC9706食管癌细胞用含10％胎牛血清、100 mg／ml链霉素、100mg／ml青霉素的RPMI 1640培养液培养，放在37℃，5％CO：培养箱中培养至对数生长期。海带多糖阳离子衍生物浓度为100μg／mL、200μg／mL、300mμgg／mL、，每种浓度溶液10mL，0．22I．Lm滤膜过滤除菌，40C保存备用。
2、细胞生长抑制试验MTT
MTT比色法测定细胞增殖抑制率。收集对数生长期细胞接种于96孔板中，调整细胞密度为1×105个·mL-1，每孔100 μl。加药组加入以上3种不同浓度的海带多糖阳离子衍生物液，空白对照组只加培养液。每个剂量设12个平行孔，分别培养12，24和48 h，加入5 g·L-1四甲基唑氮蓝20μl,继续培养，4 h后，弃培养液，加入DMS0150μl完全显色后采用酶标仪测定各孔490nm(OD)值。按下列公式计算细胞生长抑制率(1nhibition mte，lR)。IR=(对照组OD一实验组OD)／(对照组OD一空白组OD)×100％。
不同浓度海带多糖阳离子衍生物对EC9706细胞增殖的影响见下表，MTT比色法显示，对照组细胞呈现正常的生长周期，不同浓度的海带多糖阳离子衍生物随着浓度增加与对照组相比较有明显差异，具体数据见表1。
实施例2
本发明的海带多糖阳离子衍生物，它是由以下重量百分比的原料制备而成，海带多糖粉末91份，醚化剂3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵2份，水123份，氢氧化钠1份，其制备方法如实施例1。
海带多糖阳离子衍生物可作为辅助化疗的保健品，用于延长食管癌患者的生存期和减轻化疗副作用，其实验过程是：将中晚期食管癌患者40例随机分为两组，对照组20例给予常规化学治疗，观察组20例给予化疗辅以海带多糖阳离子衍生物治疗。观察记录两组患者的生存期和毒副作用情况。结果观察组的生存期显著长于对照组（P＜0.05）。观察组患者的消化道毒性症状得到显著改善，对照组无明显改善，两组比较差异有统计学意义（P ＜０.05）。骨髓抑制情况：治疗组无一例患者出现明显的骨髓抑制现象，而对照组有13例出现明显的骨髓抑制现象，并以白细胞及血红蛋白下降为甚，两组比较差异有统计学意义（P ＜0.05）。生存情况：观察组中位生存期18个月，对照组11个月，观察组中经生存期显著长于对照组（P＜0.05），两组生存率比较差异有统计学意义，其结果见表2。
实施例3
本发明的海带多糖阳离子衍生物，它是由以下重量百分比的原料制备而成，海带多糖粉末100份，醚化剂3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵2份，水123份，氢氧化钠1份，其制备方法如实施例1。
将中晚期食管癌放疗后患者80例随机分为两组，对照组40例放疗后给予常规治疗，观察组40例给常规治疗（因各种原因放弃医院治疗）辅以海带多糖阳离子衍生物治疗，患者每日每次口服海带多糖阳离子衍生物0.5g,bid。观察记录两组患者的生存期和毒副作用情况。结果观察组的生存期显著长于对照组（P＜0.05）。 ２组比较差异有统计学意义（P ＜0.05），其结果见表3。
表1不同浓度海带多糖阳离子衍生物对EC9706细胞增殖的影响（,n=6）
表2两组患者生存情况分析40例（%）
表3两组放疗后患者生存情况分析80例（%）