双呋喃酮基联苯胺衍生物及其在制备抗肿瘤药物中的应用的制作方法

本发明涉及含2(5H)-呋喃酮结构单元的抗肿瘤活性化合物制备技术领域，具体涉及一类双呋喃酮基联苯胺衍生物及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术：

许多联苯类化合物具有抗菌、抗癌等生物活性，使联苯结构单元在药物分子的设计与合成中最近越来越受到重视。许多含有的2(5H)-呋喃酮结构单元的天然产物具有抗肿瘤、抗菌等生物活性，基于简单2(5H)-呋喃酮类中间体利用简洁的反应合成新的具有抗肿瘤活性化合物，寻找和开发高效低毒的抗肿瘤药物，一直是药物化学家们的努力目标。

但是，目前仅有极少的文献报道将2(5H)-呋喃酮结构与联苯结构同时构建于潜在生物活性分子中的研究(Guerrero,M.D.；Aquino,M.；Bruno,I.；Terencio,M.C.；Paya,M.；Riccio,R.；Gomez-Paloma,L.J.Med.Chem.2007,50,2176；关丽涛,莫广珍,吴彦城,梁欣榆,罗俏芳,汪朝阳,有机化学,2015,35,1081；叶斌,莫广珍,关丽涛,吴彦城,陈任宏,汪朝阳,有机化学,2015,35,2420)，并且报道其生物活性的更少。

鉴于此，本申请以3,4-二卤-5-取代-2(5H)-呋喃酮、联苯胺等为原料，通过简单易行的Michael加成-消除反应，首次合成了系列具有一定抗肿瘤活性的双呋喃酮基联苯胺衍生物，这类新化合物的抗肿瘤活性未见报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一类双呋喃酮基联苯胺衍生物及其在抗肿瘤药物中的应用。

本发明双呋喃酮基联苯胺衍生物，具有如下结构式：

式Ⅰ中，X为卤素Br或Cl；R¹为C₁-C₃烷基或乙酰基。

进一步地，所述双呋喃酮基联苯胺衍生物通过Michael加成-消除反应合成，反应式如下：

进一步地，所述反应的温度为65～85℃，反应时间为24～48小时。

所述的双呋喃酮基联苯胺衍生物应用于制备抗肿瘤药物。

进一步地，所述的肿瘤包括脑胶质瘤、食管癌、乳腺癌、肝癌或鼻咽癌。

进一步地，所述抗肿瘤药物由所述的双呋喃酮基联苯胺衍生物以及药学上可接受的辅助剂组成。

进一步地，所述抗肿瘤药物为片剂、丸剂、胶囊剂、悬浮剂、乳剂或注射剂。

进一步地，所述抗肿瘤药物的给药途径包括口服、静脉、肌肉或皮肤给药。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果

本发明的双呋喃酮基联苯胺衍生物对脑胶质瘤、食管癌、乳腺癌、肝癌及鼻咽癌等肿瘤细胞有明显的抑制作用，特别是对脑胶质瘤细胞C6和乳腺癌细胞MCF-7具有很强的抑制活性，IC₅₀值分别可达12.1±0.9μM和20.1±1.9μM。

具体实施方式

以下结合实例对本发明的具体实施作进一步说明，但本发明的实施和保护范围不限于此。

本发明实施例中双呋喃酮基联苯胺衍生物通过Michael加成-消除反应合成，反应式如下：

实施例1

化合物1的合成

如反应式Ⅱ，将1.50mol 5-甲氧基-3,4-二溴-2(5H)-呋喃酮和0.50mol联苯胺加入到4mL四氢呋喃中，再加入6当量的碱KF，N₂保护下85℃反应回流36小时；反应完毕，用饱和食盐水和二氯甲烷处理，得到的有机层用蒸馏水洗涤、干燥后，减压旋干溶剂，残余物经柱层析分离，得到目标化合物1，其结构式与表征如下：

淡黄色粘稠固体,60.9％；UV-vis(CH₂Cl₂)λ_max:323.0nm；¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz),δ:3.31(s,6H,2CH₃),6.29(s,2H,2CH),7.60(d,J＝8.0Hz,4H,ArH),7.68(d,J＝8.0Hz,4H,ArH),9.79(s,2H,2NH)；¹³C NMR(DMSO-d₆,100MHz),δ:55.3,76.5,99.6,124.2,127.0,136.3,137.3,157.4,167.8；IR(film),ν,cm^-1:3265(N-H伸缩振动),3049(不饱和C-H伸缩振动),2938,2855(饱和C-H伸缩振动),1742(C＝O伸缩振动),1641(C＝C伸缩振动),1607,1503,1447,1395(苯环骨架伸缩振动),1319(C-N伸缩振动),1244,1192,1128(C-O-C伸缩振动),953(C-O-C弯曲振动),822(苯环对二取代),515(C-Br伸缩振动)；Calcd for C₂₂H₁₇Br₂N₂O₆^-([M-H]^-),m/z:564.94(100.0％),Found:564.91(100.0％)；Anal.Calcd for C₂₂H₁₈Br₂N₂O₆:C,46.67；H,3.20；N,4.95,Found:C,46.76；H,3.11；N,4.94。

实施例2

化合物2的合成

如反应式Ⅱ，将1.50mol 5-甲氧基-3,4-二氯-2(5H)-呋喃酮和0.50mol联苯胺加入到4mL四氢呋喃中，再加入6当量的碱KF，N₂保护下75℃反应回流36小时；反应完毕，用饱和食盐水和二氯甲烷处理，得到的有机层用蒸馏水洗涤、干燥后，减压旋干溶剂，残余物经柱层析分离，得到目标化合物2，其结构式与表征如下：

淡黄色粘稠固体,50.9％；UV-vis(CH₂Cl₂)λ_max:320.0nm；¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz),δ:3.36(s,6H,2CH₃),6.30(s,2H,2CH),7.31(d,J＝8.0Hz,4H,ArH'),7.71(d,J＝8.0Hz,4H,ArH),9.92(s,2H,2NH)；¹³C NMR(DMSO-d₆,100MHz),δ:55.4,88.9,98.7,123.7,127.0,136.2,137.3,154.2,167.3；IR(film),ν,cm^-1:3265(N-H伸缩振动),3049(不饱和C-H伸缩振动),2930,2855(饱和C-H伸缩振动),1753(C＝O伸缩振动),1649(C＝C伸缩振动),1607,1503,1420(苯环骨架伸缩振动),1319(C-N伸缩振动),1256,1192,1132(C-O-C伸缩振动),957(C-O-C弯曲振动),818(苯环对二取代),743(C-Cl伸缩振动)；Calcd for C₂₂H₁₇Cl₂N₂O₆^-([M-H]^-),m/z:475.05(100.0％),Found:474.96(100.0％)；Anal.Calcd for C₂₂H₁₈Cl₂N₂O₆:C,55.36；H,3.80；N,5.87,Found:C,55.33；H,3.92；N,5.68。

实施例3

化合物3的合成

如反应式Ⅱ，将1.50mol 5-乙氧基-3,4-二溴-2(5H)-呋喃酮和0.50mol联苯胺加入到4mL四氢呋喃中，再加入6当量的碱KF，N₂保护下75℃反应回流48小时；反应完毕，用饱和食盐水和二氯甲烷处理，得到的有机层用蒸馏水洗涤、干燥后，减压旋干溶剂，残余物经柱层析分离，得到目标化合物3，其结构式与表征如下：

淡黄色粘稠固体,53.4％；UV-vis(CH₂Cl₂)λ_max:320.0nm；¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz),δ:0.97(t,J＝8.0Hz,6H,2CH₃),3.49-3.71(m,4H,2CH₂),6.34(s,2H,2CH),7.33(d,J＝8.0Hz,4H,ArH),7.70(d,J＝8.0Hz,4H,ArH),9.75(s,2H,2NH)；¹³C NMR(DMSO-d₆,100MHz),δ:14.7,64.3,76.0,98.5,123.9,126.5,135.9,137.0,157.6,167.3；IR(film),ν,cm^-1:3265(N-H伸缩振动),3042(不饱和C-H伸缩振动),2930,2855(饱和C-H伸缩振动),1749(C＝O伸缩振动),1641(C＝C伸缩振动),1607,1503,1423(苯环骨架伸缩振动),1319(C-N伸缩振动),1244,1192,1117(C-O-C伸缩振动),953(C-O-C弯曲振动),818(苯环对二取代),515(C-Br伸缩振动)；Calcd for C₂₄H₂₁Br₂N₂O₆^-([M-H]^-),m/z:592.97(100.0％),Found:593.00(100.0％)；Anal.Calcd for C₂₄H₂₂Br₂N₂O₆:C,48.51；H,3.73；N,4.71,Found:C,48.53；H,3.81；N,4.60。

实施例4

化合物4的合成

如反应式Ⅱ，将1.50mol 5-乙氧基-3,4-二氯-2(5H)-呋喃酮和0.50mol联苯胺加入到4mL四氢呋喃中，再加入6当量的碱KF，N₂保护下65℃反应回流24小时；反应完毕，用饱和食盐水和二氯甲烷处理，得到的有机层用蒸馏水洗涤、干燥后，减压旋干溶剂，残余物经柱层析分离，得到目标化合物4，其结构式与表征如下：

淡黄色粘稠固体,42.7％；UV-vis(CH₂Cl₂)λ_max:319.0nm；¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz),δ:0.99(t,J＝8.0Hz,6H,2CH₃),3.53-3.72(m,4H,2CH₂),6.31(s,2H,2CH),7.27(d,J＝8.0Hz,4H,ArH),7.67(d,J＝8.0Hz,4H,ArH),9.82(s,2H,2NH)；¹³C NMR(DMSO-d₆,100MHz),δ:15.2,64.9,88.7,98.1,123.9,127.0,136.2,137.5,154.8,167.3；IR(film),ν,cm^-1:3265(N-H伸缩振动),3042(不饱和C-H伸缩振动),2930,2855(饱和C-H伸缩振动),1753(C＝O伸缩振动),1645(C＝C伸缩振动),1607,1503,1423(苯环骨架伸缩振动),1319(C-N伸缩振动),1260,1196,1140(C-O-C伸缩振动),961(C-O-C弯曲振动),818(苯环对二取代),746(C-Cl伸缩振动)；Calcd for C₂₄H₂₁Cl₂N₂O₆^-([M-H]^-),m/z:503.08(100.0％),Found:503.00(100.0％)；Anal.Calcd for C₂₄H₂₂Cl₂N₂O₆:C,57.04；H,4.39；N,5.54,Found:C,57.15；H,4.40；N,5.42。

实施例5

化合物的合成

如反应式Ⅱ，将1.50mol 5-乙酰氧基-3,4-二溴-2(5H)-呋喃酮和0.50mol联苯胺加入到4mL四氢呋喃中，再加入6当量的碱KF，N₂保护下65℃反应回流24小时；反应完毕，用饱和食盐水和二氯甲烷处理，得到的有机层用蒸馏水洗涤、干燥后，减压旋干溶剂，残余物经柱层析分离，得到目标化合物5，其结构式与表征如下：

黄色粘稠固体,47.9％；UV-vis(CH₂Cl₂)λ_max:320.0nm；¹H NMR(DMSO-d₆,400MHz),δ:1.91(s,6H,2CH₃),7.14(s,2H,2CH),7.30(d,J＝8.0Hz,4H,ArH),7.69(d,J＝8.0Hz,4H,ArH),10.02(s,2H,2NH)；¹³C NMR(DMSO-d₆,100MHz),δ:20.5,75.3,90.1,124.9,127.2,136.7,136.8,157.9,167.6,169.1；IR(film),ν,cm^-1:3356(N-H伸缩振动),3042(不饱和C-H伸缩振动),2959,2930,2855(饱和C-H伸缩振动),1765(C＝O伸缩振动),1641(C＝C伸缩振动),1607,1506,1466(苯环骨架伸缩振动),1319(C-N伸缩振动),1260,1188,1045(C-O-C伸缩振动),953(C-O-C弯曲振动),818(苯环对二取代),515(C-Br伸缩振动)；Calcd for C₂₄H₁₇Br₂N₂O₈^-([M-H]^-),m/z:620.93(100.0％),Found:620.79(100.0％)；Anal.Calcd for C₂₄H₁₈Br₂N₂O₈:C,46.33；H,2.92；N,4.50,Found:C,46.40；H,2.95；N,4.41。

实施例6

抗肿瘤活性的测试

应用MTT法测试化合物1～5及阳性对照药物顺铂对几种肿瘤的半数抑制率(IC₅₀)，测试结果如表1所示。

表1化合物1～5及顺铂的抗肿瘤活性

由表1可知，化合物1～5对几种肿瘤细胞显示出明显的抑制活性，尤其是对脑胶质瘤细胞C6具有良好的抑制活性。其中，化合物5对脑胶质瘤细胞C6的抑制活性优于阳性对照药物顺铂，对乳腺癌MCF-7的抑制活性是阳性对照药物顺铂的4倍左右，但是对正常细胞HaCaT的毒性却远小于顺铂。