本发明涉及一种sod提取工艺，具体是一种木瓜sod的提取及纯化方法。
背景技术：
超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，sod)是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充sod具有抗衰老的特殊效果。外源sod一旦进入人体内，进入血液，进入微循环，就能有效地保护机体细胞里的脂质、蛋白质、dna、细胞膜等生命物质，使它们免受人体内多余的超氧阴离子自由基和羟自由基的破坏，增强机体细胞和各种重要器官的免疫功能，对治疗自身免疫性疾病，病毒性疾病，心血管疾病，如各种炎症、高血压、血栓病、糖尿病、风湿关节炎、红斑狼疮和癌症等，有特殊功效，对辐射有防护作用。所以，sod被称为是21世纪最有开发前途的药用酶。
由于动物性sod的排他性、不易常温保存、艾滋病等血液病毒的交叉感染及其它潜在危险，所以国际卫生组织呼吁：立刻停止动物性sod的使用，因此我们更倾向与从植物及其果实中提取sod，其中木瓜中含有较为丰富的sod，是一种理想的sod提取原料。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种木瓜sod的提取及纯化方法。
本发明的具体技术方案为：
一种木瓜sod的提取及纯化方法，包括以下步骤：
（1）、将木瓜榨取的原汁经螺旋蒸发仪进行减压浓缩后形成浸膏，然后加入乙醇进行醇沉处理；
（2）、将醇沉处理后经过滤得到的析出物按照1：1的料液比加入ph7.850mmol/l磷酸盐缓冲液，放在0-4℃环境中浸提3h；
（3）、将滤液放入高速离心机中以12000rpm、4℃高速冷冻离心20min后，即得粗酶液；
（4）、向一定体积的粗酶液中加入中性盐至40%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后放入离心机中以40℃、5000r/min离心15min去除沉淀，上清液留样，透析，测酶活和蛋白含量；
（5）、继续向上清液中加入中性盐至90%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后再放入离心机中以40℃、5000r/min离心15min，去上清收集沉淀，即为纯化sod，将纯化sod取样溶于磷酸盐缓冲液中，透析，测酶活和蛋白含量。
在步骤（1）中，醇沉液的含醇量为50-60%，醇沉温度为60℃。
在步骤（2）和（5）中，所述磷酸缓冲液采用磷酸钾缓冲液或磷酸钠缓冲液。
在步骤（2）中，浸提时采用3-4层纱布过滤。
在步骤（5）中，所述中性盐采用硫酸按、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠中的任意一种。
本发明通过对木瓜榨取的原汁依次进行浓缩、醇沉、浸提、冷冻离心处理之后得到粗酶液，然后再将粗酶液采用盐析法的方式进行进一步纯化，由此得到木瓜纯化sod。本方法操作简单，可控性好，重复性好，可以进行规模化生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明。下述实施例仅为本发明的典型实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
实施例一：
本发明的木瓜sod的提取及纯化方法，包括以下步骤：
（1）、将木瓜榨取的原汁经螺旋蒸发仪进行减压浓缩后形成浸膏，然后加入乙醇进行醇沉处理，醇沉液的含醇量为50%，醇沉温度为60℃；
（2）、将醇沉处理后经过滤得到的析出物按照1：1的料液比加入ph7.850mmol/l磷酸钾缓冲液，放在0-4℃环境中浸提3h，采用3层纱布过滤；
（3）、将滤液放入高速离心机中以12000rpm、4℃高速冷冻离心20min后，即得粗酶液；
（4）、向一定体积的粗酶液中加入硫酸铵至40%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后放入离心机中以40℃、5000r/min离心15min去除沉淀，上清液留样，透析，测酶活和蛋白含量；
（5）、继续向上清液中加入硫酸铵至90%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后再放入离心机中以40℃、5000r/min离心15min，去上清收集沉淀，即为纯化sod，将纯化sod取样溶于磷酸钾缓冲液中，透析，测酶活和蛋白含量。
实施例二：
本发明的木瓜sod的提取及纯化方法，包括以下步骤：
（1）、将木瓜榨取的原汁经螺旋蒸发仪进行减压浓缩后形成浸膏，然后加入乙醇进行醇沉处理，醇沉液的含醇量为60%，醇沉温度为60℃；
（2）、将醇沉处理后经过滤得到的析出物按照1：1的料液比加入ph7.850mmol/l磷酸钠缓冲液，放在0-4℃环境中浸提3h，采用4层纱布过滤；
（3）、将滤液放入高速离心机中以12000rpm、4℃高速冷冻离心20min后，即得粗酶液；
（4）、向一定体积的粗酶液中加入硫酸镁至40%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后放入离心机中以40℃、5000r/min离心15min去除沉淀，上清液留样，透析，测酶活和蛋白含量；
（5）、继续向上清液中加入硫酸镁至90%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后再放入离心机中以40℃、5000r/min离心15min，去上清收集沉淀，即为纯化sod，将纯化sod取样溶于磷酸钠缓冲液中，透析，测酶活和蛋白含量。
实施例三：
本发明的木瓜sod的提取及纯化方法，包括以下步骤：
（1）、将木瓜榨取的原汁经螺旋蒸发仪进行减压浓缩后形成浸膏，然后加入乙醇进行醇沉处理，醇沉液的含醇量为55%，醇沉温度为60℃；
（2）、将醇沉处理后经过滤得到的析出物按照1：1的料液比加入ph7.850mmol/l磷酸钾缓冲液，放在0-4℃环境中浸提3h，采用4层纱布过滤；
（3）、将滤液放入高速离心机中以12000rpm、4℃高速冷冻离心20min后，即得粗酶液；
（4）、向一定体积的粗酶液中加入硫酸钠至40%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后放入离心机中以40℃、5000r/min离心15min去除沉淀，上清液留样，透析，测酶活和蛋白含量；
（5）、继续向上清液中加入硫酸钠至90%饱和度，搅拌15min，静置30min，然后再放入离心机中以40℃、5000r/min离心15min，去上清收集沉淀，即为纯化sod，将纯化sod取样溶于磷酸钾缓冲液中，透析，测酶活和蛋白含量。